1、实验五 肠道杆菌 Content?示教：?主要肠道杆菌，大肠埃希菌、痢疾志贺菌、伤寒沙门菌及变形杆菌的形态、染色性?主要肠道杆菌的培养特性：SS平板/EMB平板?主要肠道杆菌的生化反应：双糖、尿素分解反应?操作：操作：?肥达反应?粪便肠道致病菌的分离和鉴定?甘露醇发酵实验结果观察?药敏试验结果观察?录像：录像：厌氧菌 肠道杆菌的分类 肠杆菌科 志贺菌属 埃希菌属 沙门菌属 克雷伯菌属 变形杆菌属 ETEC,EIEC,EPEC,EHEC,EAEC 痢疾、福氏、鲍氏、宋内 伤寒，副伤寒，猪霍乱，肠炎 肠道杆菌的基本特征?形态结构相似?培养要求不高?生化反应活跃?抗原结构复杂?抵抗力不强?易发生变异
2、 肥达试验肥达试验 原理：用已知伤寒沙门菌 O、H抗原，以及引起副伤寒甲、乙杆菌H抗原的诊断菌液与受检血清作定量凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。用途：辅助诊断伤寒，副伤寒 肥达试验?原理：伤寒沙门菌菌体O 抗原 伤寒沙门菌鞭毛抗原 甲型副伤寒沙门菌鞭毛H抗原 肖氏沙门菌鞭毛抗原 已知抗原 病人血清中的未知抗体 凝集 微量板 1 2 3 4 5 6 7 8 伤寒伤寒O 0.2ml 0.2ml 伤寒伤寒H 0.2ml 0.2ml 副甲副甲H 0.2ml 0.2ml 副乙副乙H 0.2ml 0.2ml 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280
3、 生理盐水 Ag 测 Ab 已知 未知未知 滴度 病人1：10血清 血清1：20 0.2ml 4 第一列小孔 0.8 ml 吸管吹打3次 1.6ml 生理盐水0.8 ml 混匀 0.8ml 混匀 1：40 0.2ml 4 第二列小孔 生理盐水 0.8 ml 0.8ml 混匀 生理盐水0.8 ml 1：80 Ag加样方向 1.稀释Ab 2.加Ag 3.45孵育孵育30 4.结果观察 粪便标本肠道致病菌鉴别流程 标本 鉴别培养基（SS培养基）生化反应（双糖管）血清学鉴定 SS SS 平板挑取可疑菌落2 2个 (无色,透明,小菌落)接种双糖管 培养,观察 SS平板 分离肠道病原菌的强选择培养基 成分
4、：?基础培养基、乳糖、枸橼酸钠、硫代硫酸钠、枸橼酸铁、胆盐、煌绿、中性红（pH6.8-8.0，红橙黄）作用：?乳糖，中性红：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色。?胆盐、枸橼酸钠、煌绿：抑制肠道非致病菌如E.coli的生长，对肠道致病菌抑制作用弱。可增加标本接种量以提高肠道病原菌分离率。?病原菌:小,无色,透明?非致病菌:大,红色 EMB平板 病原菌:透明,无色 非致病菌:紫黑色 双糖管 发酵乳糖 H2S试验 发酵葡萄糖(产酸产气)及动力 上层：乳糖,Fe2+固体 下层：葡萄糖 半固体 指示剂:酚红（pH6.8-8.4,黄 红）致病菌红色致病菌
5、红色 非致病菌黄色非致病菌黄色 观察：乳糖 葡萄糖 动力 硫化氢 尿素酶 大肠埃希菌 +-痢疾志贺菌 +-伤寒沙门菌 +/-副伤寒沙门菌 +-变形杆菌 +红红色色 黄色 双糖管结果观察 黄色 黄色 可疑肠道致病菌 大肠埃希菌 肥达试验?原理：伤寒沙门菌菌体O 抗原 伤寒沙门菌鞭毛抗原 甲型副伤寒沙门菌鞭毛H抗原 肖氏沙门菌鞭毛抗原 已知抗原 病人血清中的未知抗体 凝集 肥达试验结果分析（1）?凝集程度：（）上层液澄清，细菌全部凝集于孔底（）上层液基本透明，细菌大部分（75）凝集于孔底（）上层液半透明，细菌在孔底有明显凝集（）上层液混浊，孔底有少量凝集（）不凝集，同于对照?书写报告：反应的最高稀释度为凝集效价 肥达试验结果分析（2）?凝集效价凝集效价：伤寒沙门菌O 1：80，H 1：160 副伤寒沙门菌H 1：80?动态观察：双份血清，效价 4倍?O与H抗体的诊断意义：OIgM,HIgG?O、H抗体均高：肠热症?O、H抗体均低：未患病?O抗体不高，H抗体高：回忆反应，预防接种?O抗体高，H抗体不高：感染早期，交叉反应 The End Thanks
