1、项目检测肿瘤标志物检测一、概 述肿瘤概述肿瘤：肿瘤：生物机体内由遗传性发生改变并具有相对自主生长能力的细胞所构成的新生组织，统称为肿瘤。肿瘤的种类肿瘤的种类:l良性肿瘤l恶性肿瘤肿瘤现况l根据WHO资料，全球范围内恶性肿瘤是人类仅次于心脑血管病的第二大死亡原因，占总死亡人数的22%，并逐年增加。l2013年肿瘤年报，中国年新发癌症病例数309万例，按照平均寿命74岁计算，人一生中患恶性肿瘤的几率是22%。l2013年肿瘤年报显示，从发病率来看，肺癌、乳腺癌、胃癌、肝癌、食管癌、结直肠癌、宫颈癌是我国常见的恶性肿瘤。从死亡率来看，肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌是主要的肿瘤死因
2、。中国肿瘤发病率和死亡率总体情况总体肿瘤发病率和死亡率较高：总体肿瘤发病率和死亡率较高：l肿瘤发病率：每10万人中有286人患癌；人一生中患癌症的概率为22%l肿瘤死亡率：每10万人有181人患癌死亡；人一生中患癌症死亡的概率为13%患癌人群中，因患癌而死亡的概率高达患癌人群中，因患癌而死亡的概率高达63%前10位恶性肿瘤发病构成2013肿瘤登记年报前10位恶性肿瘤死亡构成2011肿瘤登记年报肿瘤防治原则恶性肿瘤的防治原则：恶性肿瘤的防治原则：l早期发现l早期诊断l早期治疗世界卫生组织（世界卫生组织（WHO）指出：）指出：若能早期诊断并及时治疗，若能早期诊断并及时治疗，90%95%的肿瘤是可以
3、治愈的。的肿瘤是可以治愈的。放射免疫学杂志 2005年第18卷第4期原发性肝癌诊断中铁蛋白可以作为AFP的补充指标，尤其在血清AFP呈阴性的疑诊者，铁蛋白测定是不可缺少的一个补充检查项目。肿瘤标志物更适用于高危人群及年龄40岁以上群体的肿瘤筛查，特别是对于发生率高的肿瘤，有肿瘤家族史以及有症状的患者，对早期发现、早期诊断、早期治疗有重要的意义比表面积大，目标物结合充分CYFRA2101 细胞角蛋白19片段采用管式或微粒子发光，测定快速、准确；如何提高肿瘤的检出率？其他恶性肿瘤也有一定的阳性率，如肺癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌、肝脏、子宫颈癌等。糖类抗原19-9（CA19-9）自主研发高性能发光底
4、物-金刚烷磷酸酯类CA50是一种广谱肿瘤标志物，在胰腺、胆囊、肝、胃、结直肠、膀胱、子宫等多种恶性肿瘤中均有不同程度的升高。CA50在胰腺癌和胆囊癌阳性检出率最高，可达94.中国肿瘤发病率和死亡率总体情况良性乳腺疾病中检测到HER2轻微过表达，可增加患者患浸润性乳腺癌的风险。肿瘤标志物联合检测优于单项检测人表皮生长因子受体2（HER2）暂未开展肝癌、肺癌、胆管癌、胰头癌、淋巴瘤、白血病、泌尿系肿瘤、脑肿瘤、鼻咽癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、多发性骨髓瘤、非何杰金氏病等SF升高。1998-2001年期间，经病理证实1013例肝癌患者，AFP阳性率仅68.肿瘤检测手段l影像学检测影像学检测 通过通过
5、X线、线、B超、超、CT、核磁共振成像等手段。通常发现时肿瘤基本已经、核磁共振成像等手段。通常发现时肿瘤基本已经错过治疗的最佳时机。错过治疗的最佳时机。l肿瘤标志物检测肿瘤标志物检测 简单易行，选择合适的肿瘤标志物便于早期发现。l病理切片检测（金标准）病理切片检测（金标准）病理切片结果出来时肿瘤已经到了中晚期病理切片结果出来时肿瘤已经到了中晚期。肿瘤重量 1g 10 1mg1061g109 10-100g1010-11 1kg1012临床前期，可持续数月至数年肿瘤细胞数免疫学方法影像学方法晚期早期的诊断阈值 肿瘤标志物检测技术肿瘤标志物检测技术几乎是迄今为止早期发现无症状微灶肿瘤的唯一途径。可
6、先于X线、超声、CT、MRI 或 PET-CT 等物理检查发现肿瘤。肿瘤的发展过程肿瘤标志物u 肿瘤标志物（肿瘤标志物（Tumor Marker，TM）是指在肿瘤的发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身所产生的或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的，反映肿瘤存在和生长的一类物质，包括蛋白质、激素、酶（同工酶）及癌基因产物等。u 肿瘤标志物的作用：肿瘤标志物的作用：l肿瘤早期筛查l肿瘤的诊断和鉴别诊断l肿瘤预后评估和分期l肿瘤疗效及复发监测l肿块良恶性状况鉴别诊断理想的肿瘤标志物 l灵敏度100%；l特异性100%；l器官特异性；l与肿瘤的大小或分期有关；l与预后有关；l监测肿瘤的复发目前的肿瘤标志物均未
7、达到上述要求，但如正确合理使用，仍有很目前的肿瘤标志物均未达到上述要求，但如正确合理使用，仍有很大临床价值，关键是要正确评价肿瘤标志物检测的临床意义。大临床价值，关键是要正确评价肿瘤标志物检测的临床意义。常见肿瘤标志物AFP 甲胎蛋白CEA 癌胚抗原Ferritin 铁蛋白CA125 肿瘤相关抗原CA125CA199 肿瘤相关抗原CA199CA153 肿瘤相关抗原CA153CA724 肿瘤相关抗原CA724CA242 肿瘤相关抗原CA242CA50 肿瘤相关抗原CA50CYFRA2101 细胞角蛋白19片段NSE 神经元特意性烯醇化酶PSA 前列腺特异抗原fPSA 游离前列腺特异抗原甲胎蛋白（
8、AFP）临床意义临床意义AFP是原发性肝癌的最佳肿瘤标志物，是原发性肝癌的最佳肿瘤标志物，80%AFP400ng/ml，近，近20%AFP正常；正常；内胚层癌、畸胎瘤、睾丸癌、卵巢癌、胃癌与其伴肝转移者内胚层癌、畸胎瘤、睾丸癌、卵巢癌、胃癌与其伴肝转移者AFP可升可升高。高。病毒性肝炎、肝硬化绝大部分病毒性肝炎、肝硬化绝大部分AFP0.25多为良性疾病，fPSA/PSA0.16高度提示前列腺癌。神经特异性烯醇化酶（NSE）临床意义临床意义:lNSE是小细胞肺癌（是小细胞肺癌（SCLC）首选肿瘤标志物，诊断阳性率为）首选肿瘤标志物，诊断阳性率为91%。l与CYFRA21-1联合检测，将会显著提高
9、肺癌的检出率；l有助于鉴别大、小细胞性肺癌；l对疗效有很好的指导意义；l是神经母细胞瘤的标志物；l可提示用于神经内分泌肿瘤的诊断及治疗检测，如胰岛细胞瘤、嗜细胞瘤、甲状腺瘤等。NSE主要来源于神经细胞核神经内分泌细胞，以及这些细胞引发的肿瘤细胞中。铁蛋白（Ferritin）铁蛋白由人体网状内皮细胞分泌，人体内的2/3的铁在肝、脾、骨髓和肠黏膜细胞中，某些肿瘤细胞也可合成并释放铁蛋白。临床意义：临床意义：l原发性肝癌诊断中铁蛋白可以作为原发性肝癌诊断中铁蛋白可以作为AFP的补充指标，尤其在血清的补充指标，尤其在血清AFP呈阴性的呈阴性的疑诊者，铁蛋白测定是不可缺少的一个补充检查项目。疑诊者，铁蛋
10、白测定是不可缺少的一个补充检查项目。l肝癌、肺癌、胆管癌、胰头癌、淋巴瘤、白血病、泌尿系肿瘤、脑肿瘤、鼻咽癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、多发性骨髓瘤、非何杰金氏病等SF升高。l原发性肝癌，76%的肝转移病人铁蛋白含量高于400g/L，铁蛋白与AFP联合检测可使阳性率达到90%以上。糖类抗原125（CA125）CA125 是一种高分子量糖蛋白，存在于胎儿的体腔上皮来源的组织中，包括腹膜、胸膜和心包膜。正常人输卵管、子宫内膜和子宫颈内膜均有表达。临床意义：临床意义：lCA125是卵巢癌首选肿瘤标志物，诊断的灵敏度为是卵巢癌首选肿瘤标志物，诊断的灵敏度为79%，特异性，特异性82%；l治疗有效的患者C
11、A125下降，复发CA125升高先于临床症状的出现，CA125是判断卵巢癌疗效和复发的良好指标；l其他非卵巢恶性肿瘤也有一定的阳性率，如生殖系统肿瘤、消化道肿瘤、肺癌、乳腺癌等（广谱）；l良性妇科疾病和胸、腹水也不同程度的升高，但阳性率较低；l早期妊娠，CA125也有升高。糖类抗原15-3（CA15-3）CA15-3是分子量为400KD的上皮粘蛋白，主要来源于腺体细胞。临床意义：临床意义：lCA15-3是乳腺癌首选肿瘤标志物，是乳腺癌首选肿瘤标志物，原发乳腺癌患者CA15-3升高，乳腺癌初期的敏感性60%，乳腺癌晚期的敏感性80%；lCA15-3适用于乳腺癌的辅助诊断，连续检测可用于II期和I
12、II期乳腺癌肿瘤复发的早期诊断，转移性乳腺癌的疗效监测；l其他恶性肿瘤也有一定的阳性率，如肺癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌、肝脏、子宫颈癌等。l某些子宫内膜癌患者的CA15-3升高，提示预后不佳，特别是血清CA15-3和CA125同时增高。糖类抗原19-9（CA19-9）临床意义：临床意义：lCA19-9可作为胰腺癌、胆囊癌、胃癌等恶性肿瘤的辅助诊断指标，监测病情可作为胰腺癌、胆囊癌、胃癌等恶性肿瘤的辅助诊断指标，监测病情变化和复发；变化和复发；l胰腺癌、胆囊癌CA19-9明显升高，尤其胰腺癌晚期的阳性率可达75%，是重要的辅助诊断指标；l胃癌、结直肠癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌等患者CA19-
13、9也有不同程度升高。CA19-9在胃癌、结直肠癌、肝癌的阳性率分别为：50%、60%、65%；l某些消化道炎症CA19-9也有不同程度的升高，如：急性胰腺炎、胆囊炎、胆汁淤积性胆管炎、肝炎、肝硬化等。CA19-9是一种与胃肠道癌相关的糖类抗原，胎儿的胰腺、胆囊、肝脏、肠等组织表达，成年人肺、肝脏、胰腺等组织也有低浓度的表达。糖类抗原72-4（CA72-4）临床意义临床意义:lCA72-4是胃癌首选肿瘤标志物，对胃癌具有较高特异性，在转移是胃癌首选肿瘤标志物，对胃癌具有较高特异性，在转移性胃癌患者中阳性率更高；性胃癌患者中阳性率更高；l胃癌检测CA72-4较CEA和CA19-9有更高的敏感性；C
14、A72-4、CA19-9和CEA联合测定诊断胃癌符合率为86.2%；lCA72-4用于胃癌预后判断和疗效观察；lCA72-4升高还可见于乳腺癌、结直肠癌人表皮生长因子受体2（HER2）暂未开展暂未开展人表皮生长因子受体2（HER2）是由原癌基因ERBB2编码，通过参与多种信号途径调控细胞的分裂、分化和血管表达。临床意义：lHER2 是乳腺癌的新型肿瘤标志物，可有效评估乳腺癌的预后，并指导乳腺癌是乳腺癌的新型肿瘤标志物，可有效评估乳腺癌的预后，并指导乳腺癌的治疗。的治疗。lHER 2在10%-25%的乳腺癌患者中过表达，预示了患者有更高的复发风险及更短的存活率。HER2是乳腺癌复发和生存期长短的
15、独立预后因子。l良性乳腺疾病中检测到HER2轻微过表达，可增加患者患浸润性乳腺癌的风险。lHER2 过表达乳腺癌患者，推荐使用基因靶向药物，如赫赛汀。糖类抗原50（CA50）暂未开展暂未开展CA50是广泛存在胰腺、胆囊、肝、胃、结直肠、膀胱、子宫等，是一种最常用的的糖类抗原肿瘤标志物之一。临床意义：临床意义：lCA50是是胰腺癌和胆囊癌首选肿瘤标志物之一，可用于胰腺癌、胆囊癌的早是是胰腺癌和胆囊癌首选肿瘤标志物之一，可用于胰腺癌、胆囊癌的早期诊断、疗效和复发转移的监测。期诊断、疗效和复发转移的监测。lCA50是一种广谱肿瘤标志物，在胰腺、胆囊、肝、胃、结直肠、膀胱、子宫等多种恶性肿瘤中均有不同
16、程度的升高。lCA50在胰腺癌和胆囊癌阳性检出率最高，可达94.4%，其它恶性肿瘤肝癌、卵巢癌、子宫癌、胃癌、结直肠癌中亦有一定的阳性检出率。l淋巴增生性恶性病变也可见CA50增高。l炎症如急慢性胰腺炎、结肠炎、肝炎、胆囊炎也有CA50的增高，而炎症消退后CA50降低。肿瘤标志物临床应用原则l肿瘤标志物联合检测l动态随访肿瘤标志物的浓度值l与其他临床诊断方法相结合如影像学、内窥镜以及病理检查等。肿瘤标志物检测应遵循以下原则：肿瘤标志物检测应遵循以下原则：二、肿瘤标志物的联合诊断肿瘤标志物联合检测l同一肿瘤可含有一种或多种肿瘤标志物l不同肿瘤或同种肿瘤的不同组织类型可有共同的肿瘤标志物，也有不同
17、的肿瘤标志物l使用联合检测可提高灵敏度和特异性AFP：1967年开始用于肝CA诊断；公认的早期诊断原发肝癌的指标。上海东方肝胆外科医院统计：1998-2001年期间，经病理证实1013例肝癌患者，AFP阳性率仅68.8%。如何提高肿瘤的检出率？如何提高肿瘤的检出率？来源：肿瘤与肿瘤标志物研究中证据的思考 医学与哲学 2009年2月 第30卷第2期前10位恶性肿瘤发病构成易于结合相与游离相分离间接化学发光（酶促化学发光）2013年肿瘤年报显示，从发病率来看，肺癌、乳腺癌、胃癌、肝癌、食管癌、结直肠癌、宫颈癌是我国常见的恶性肿瘤。高灵敏性、特异性和稳定性定量检测的标准曲线存储在试剂条形码中，可在2
18、-4周内直接使用。CA72-4用于胃癌预后判断和疗效观察；根据WHO资料，全球范围内恶性肿瘤是人类仅次于心脑血管病的第二大死亡原因，占总死亡人数的22%，并逐年增加。前10位恶性肿瘤死亡构成管式化学发光免疫技术是理想的肿瘤标志物体外诊断技术HER2是乳腺癌复发和生存期长短的独立预后因子。通常发现时肿瘤基本已经错过治疗的最佳时机。人表皮生长因子受体2（HER2）是由原癌基因ERBB2编码，通过参与多种信号途径调控细胞的分裂、分化和血管表达。治疗有效的患者CA125下降，复发CA125升高先于临床症状的出现，CA125是判断卵巢癌疗效和复发的良好指标；某些子宫内膜癌患者的CA15-3升高，提示预后
19、不佳，特别是血清CA15-3和CA125同时增高。三、肿瘤标志物的检测技术CA72-4升高还可见于乳腺癌、结直肠癌对于消化系统肿瘤，四项目联合检出率明显提高，大大降低了漏检率。糖类抗原19-9（CA19-9）总体肿瘤发病率和死亡率较高：吖啶酯标记:西门子Siemens Centaur XP CP来源：CEA、NSE、CYFRA211联合检测在肺癌诊断中的价值中国肿瘤2005年第14卷肿瘤标志物在肺癌检测中的应用肿瘤标志物在肺癌检测中的应用吸烟铀、镭肺部慢性病家族遗传NSE、CYFRA211、CEANSE、CYFRA211、CEANSE、CYFRA211、CEANSE、CYFRA211、CEAN
20、SE、CYFRA211、CEA肿瘤标志物小细胞肺癌检测中的应用来源：肺癌诊断技术研究进展重庆工学院学报 第22卷 第一期肿瘤标志物在胃癌检测中的应用血清中CEA、CA19-9、CA50、CA72-4、CA24-2在胃癌检测中的灵敏度与特异性来源：血清肿瘤标志物单项及联合检测的临床意义临床内科杂志2007年8月第24卷第8期 胃癌诊断标志物研究新进展 医学综述 2008年5月第14卷第10期肿瘤标志物联合诊断在胃癌检测中的灵敏度及特异性CA724是早期诊断胃癌复发的重要手段是早期诊断胃癌复发的重要手段 CA724是胃癌最有价值的标志物是胃癌最有价值的标志物肿瘤标志物在胃癌检测中的应用慢性萎缩性胃
21、炎CEA+CA19-9+CA72-4胃息肉残胃良性胃溃疡恶性贫血肿瘤标志物在胰腺癌检测中的应用来源：肿瘤标志物CA19-9、CA242、CEA 和CA125联合检测在胰腺癌诊断中的意义肝胆胰外科杂志 第21卷第2期，2009年3月有多篇报道称，CA242的特异性高于CA199。四种标志物联合诊断，是诊断胰腺癌早期而有效的方法。肿瘤标志物在结直肠癌检测中的应用两者联合检测时，阳性率提高两者联合检测时，阳性率提高至至84.8%来源：结、直肠癌患者血清CEA、CA242联检的临床意义 放射免疫学杂志 2005年第18卷第4期来源：血清肿瘤标记物测定在结直肠癌中的意义肿瘤标志物在结直肠癌检测中的应用来
22、源：CEA、CA19-9、CA24-2、CA72-4在大肠癌中的应用价值探讨放射免疫杂志2005年第18卷第2期肿瘤标志物在结直肠癌检测中的应用慢性炎症家族遗传大肠腺瘤息肉CEA、CA24-2、CA199、CA724来源：血清CA-724、CA-199、CEA及CA-50 联检对消化系统肿瘤的临床应用价值分析放射免疫杂志2005年第18卷第2期对于消化系统肿瘤，四项目联合检出率明显提高，大大降低了漏检率。对于消化系统肿瘤，建议联检：对于消化系统肿瘤，建议联检：CA724、CA199、CA50、CEA、CA242消化系统肿瘤筛查肿瘤标志物在卵巢癌检测中的应用来源：血清CA125、CA724、和C
23、A199联合检测对卵巢癌的诊断价值临床和实验医学杂志 2007年11月第6卷第11期来源：联合检测血清J6!#和J6&!$T 对卵巢癌诊断的价值 海南医学 2005年第16卷第7期前10位恶性肿瘤死亡构成肿瘤标志物联合诊断在胃癌检测中的灵敏度及特异性原则上肿瘤检测项目越多越好。其他非卵巢恶性肿瘤也有一定的阳性率，如生殖系统肿瘤、消化道肿瘤、肺癌、乳腺癌等（广谱）；正常人吸烟者CEA升高。三、肿瘤标志物的检测技术肝癌、肺癌、胆管癌、胰头癌、淋巴瘤、白血病、泌尿系肿瘤、脑肿瘤、鼻咽癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、多发性骨髓瘤、非何杰金氏病等SF升高。几种标记免疫技术灵敏度的比较易于结合相与游离相分离人
24、表皮生长因子受体2（HER2）暂未开展测定方法应灵敏、特异性高、重复性好。鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统放射免疫分析技术（RIA）是将放射性同位素测量的高灵敏度、精确性和抗原抗体反应的特异性相结合，在体外进行微量分析的一种检测技术。其他恶性肿瘤也有一定的阳性率，如肺癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌、肝脏、子宫颈癌等。腺癌敏感，其次是鳞癌和低分化癌，分化程度越高阳性率越高；CA50是是胰腺癌和胆囊癌首选肿瘤标志物之一，可用于胰腺癌、胆囊癌的早期诊断、疗效和复发转移的监测。来源：肿瘤与肿瘤标志物研究中证据的思考 医学与哲学 2009年2月 第30卷第2期前列腺特异性抗原（PSA）肿瘤标志物的联合检测
25、项目总 结l肿瘤标志物联合检测优于单项检测l肿瘤标志物联合检测可提高灵敏度和特异性l遴选出对某一肿瘤适用的“联合诊断肿瘤标志物群”，可提高诊断效率，降低费用肿瘤标志物在肿瘤筛查的应用l对于肿瘤标志物呈阳性并非一定就是癌症，检测呈阴性也对于肿瘤标志物呈阳性并非一定就是癌症，检测呈阴性也不一定就能排除癌症，因而肿瘤标志物检测对健康人群筛不一定就能排除癌症，因而肿瘤标志物检测对健康人群筛查作用有限查作用有限l肿瘤标志物更适用于高危人群及年龄肿瘤标志物更适用于高危人群及年龄40岁以上群体的肿瘤岁以上群体的肿瘤筛查，特别是对于发生率筛查，特别是对于发生率高的肿瘤，有肿瘤家族史以及有有肿瘤家族史以及有症状
26、的患者，对早期发现、早期诊断、症状的患者，对早期发现、早期诊断、早期治疗有重要的早期治疗有重要的意义意义肿瘤标志物体检套餐配置体检套餐配置的原则体检套餐配置的原则l科学性：合理利用各种肿瘤标志物的优势，联合检测达到理想科学性：合理利用各种肿瘤标志物的优势，联合检测达到理想的检测效果。的检测效果。测定方法应灵敏、特异性高、重复性好。测定方法应灵敏、特异性高、重复性好。原则上肿瘤检测项目越多越好。原则上肿瘤检测项目越多越好。l筛查费用经济、合理。即根据不同的体检套餐价格来配置肿瘤筛查费用经济、合理。即根据不同的体检套餐价格来配置肿瘤筛查项目。筛查项目。三、肿瘤标志物的检测技术临床肿瘤标志物的检测方
27、法l放射免疫分析法放射免疫分析法l荧光免疫分析法荧光免疫分析法l酶联免疫分析法酶联免疫分析法l胶体金层析免疫分析法胶体金层析免疫分析法l化学发光免疫分析法化学发光免疫分析法l蛋白芯片蛋白芯片基于免疫分析基于免疫分析免疫分析免疫反应免疫反应:抗原进入机体，刺激机体的免疫系统，使之产生免疫应答，这抗原进入机体，刺激机体的免疫系统，使之产生免疫应答，这种反应叫免疫反应。免疫应答应答包括对抗原物质的感应、反应、种反应叫免疫反应。免疫应答应答包括对抗原物质的感应、反应、效应三个连续的阶段。效应三个连续的阶段。免疫分析（免疫分析（I Immunoassaymmunoassay，IAIA）:在临床检验中在临
28、床检验中,体外模拟抗体抗原的免疫反应，根据抗原与其配体外模拟抗体抗原的免疫反应，根据抗原与其配对抗体能够发生特异反应对抗体能够发生特异反应,用已知的抗原或抗体检测分析液中的抗用已知的抗原或抗体检测分析液中的抗体或抗原。体或抗原。l高特异性高特异性 l高亲和性高亲和性 放免放免酶免酶免发光发光60年代年代70年代年代90年代年代免疫分析技术的发展免疫分析技术介绍l化学发光免疫分析技术（化学发光免疫分析技术（CLIA）是将化学发光体系与免疫反应相结）是将化学发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。l放射免疫分
29、析技术（放射免疫分析技术（RIA）是将放射性同位素测量的高灵敏度、精确）是将放射性同位素测量的高灵敏度、精确性和抗原抗体反应的特异性相结合，在体外进行微量分析的一种检测性和抗原抗体反应的特异性相结合，在体外进行微量分析的一种检测技术。技术。l酶联免疫标记分析技术（酶联免疫标记分析技术（EIA）是用酶标记的抗体或抗原，将抗原抗）是用酶标记的抗体或抗原，将抗原抗体反应的特异性和酶催化底物反应的高效性和专一性结合起来，并通体反应的特异性和酶催化底物反应的高效性和专一性结合起来，并通过酶与底物产生颜色，测定光吸收的一种免疫检测技术。过酶与底物产生颜色，测定光吸收的一种免疫检测技术。l时间分辨荧光免疫分
30、析技术（时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）是目前最常用的免疫荧光分析方法。它是利用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。l免疫胶体金分析技术免疫胶体金分析技术是以胶体金作为示踪标记物或显色剂，以膜为载体，利用抗体抗原免疫反应，通过层析过程达到在体外进行微量分析的一种技术。l蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术是将多种抗体或抗原高密度排列在固定支持物表面上，使样品中的目的蛋白（如抗原）特异性地与之结合，通过微加工技术和微电子技术在固体芯片表面构建微型生物化学分析系统，对目的
31、蛋白进行定性、定量检测。免疫分析技术介绍几种标记免疫技术灵敏度的比较酶标荧光放免发光灵敏度(mol/L)10-1810-1510-1210-9几种标记免疫技术线性范围的比较酶标荧光放免发光线性范围105104103102几种标记免疫试剂的有效期比较酶标荧光放免发光有效期（月）1815129630免疫分析技术的优缺点l化学发光免疫分析因为具有灵敏度高、测定范围宽、使用范围广、检测快速简便，易自动化，并在测试中不使用有害试剂，无放射污染等特点，因此是目前最理想的体外诊断技术之一。l化学发光免疫分析1980s进入体外诊断领域，第一台全自动检测仪1993年诞生。化学发光免疫分析技术包被抗原包被抗原待测
32、抗体待测抗体酶标记的抗体酶标记的抗体发光底物发光底物光子计数光子计数（酶免检测颜色变（酶免检测颜色变化，采用分光光度化，采用分光光度计计数）计计数）PMT高速放大信高速放大信号后读数！号后读数！化学发光免疫分析原理化学发光按化学反应类型分为：化学发光按化学反应类型分为：u直接化学发光（非酶促化学发光）直接化学发光（非酶促化学发光）l吖啶酯系统l鲁米诺系统u间接化学发光（酶促化学发光）间接化学发光（酶促化学发光）l辣根过氧化物酶鲁米诺系统（HRP系统）l碱性磷酸酶金刚烷系统（AP系统）u其它其它l电化学发光化学发光的检测类型CH3C=OORN+OH-H+H2O2+H2O+ROH光子+CO2+CH
33、3C=OORNHOCH3C=OORNHOOCH3ONCH3ONC=OO吖啶酯化学发光系统吖啶酯化学发光系统吖啶酯化学发光系统吖啶酯标记吖啶酯标记:西门子Siemens Centaur XP CP 雅培Abbott Architect i2000 鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统H2O2+NH2OONHNHN2OH-HRPNH2CO2-CO2-+Photon(425nm)ROHROH NSRBOHOH增强剂（Enhancer）鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作辣根过氧化物酶的底物 鲁米诺化学发光系统鲁米诺直接标记鲁米诺直接标记：索林DiaSoin Li
34、aison 新产业 HRP-鲁米诺标记：鲁米诺标记：源德、科美、安图金刚烷作为碱性磷酸酶的底物+*光子(477nm)APOOOCH3OPO32-O-OOOCH3OO-OOCH3 金钢烷（发光底物）及其衍生物的增敏化学发光系统金钢烷（发光底物）及其衍生物的增敏化学发光系统碱性磷酸酶化学发光系统碱性磷酸酶（碱性磷酸酶（AP）系统）系统：贝克曼：Access 1、Access 2，DXI600、DXI800 西门子：Immulite1000,Immulite 2000 达成生物：AULIA200 第一代：第一代：鲁米诺及其衍生物 第二代：第二代：l直接标记：直接标记：吖叮酯标记l间接标记：间接标记：
35、碱性磷酸酶-金刚烷系统l电化学发光：电化学发光：三联砒啶钌化学发光的发展史国际主流免疫诊断公司均采用第二代化学发光标记物：国际主流免疫诊断公司均采用第二代化学发光标记物：吖啶酯（雅培、碱性磷酸酶吖啶酯（雅培、碱性磷酸酶-金刚烷（贝克曼、西门子）、三金刚烷（贝克曼、西门子）、三联砒啶钌（罗氏）联砒啶钌（罗氏）化学发光检测方式l随机处理模式 管式化学发光管式化学发光l批处理模式 板式化学发光板式化学发光l采用管式或微粒子发光，测定快速、准确；l可以随到随测，适用于医院急诊；l定量检测的标准曲线存储在试剂条形码中，可在2-4周内直接使用。国外厂家是管式化学发光系统管式化学发光l适合流行病调查、疾病预
36、防与控制、体检中心，以及医院血站等大样本检测项目的使用（比如HIV、TP、HCV和乙肝两对半等）；l通常采用96孔白色不透明微孔板进行包被，不方便随到随测和医院急诊；l对于定量检测需要做标准曲线。国内厂家主要是板式化学发光系统板式化学发光管式化学发光 vs 板式化学发光结 论管式化学发光免疫技术管式化学发光免疫技术是理想的肿瘤标志物体外诊断技术l高灵敏性、特异性和稳定性高灵敏性、特异性和稳定性l宽线性范围宽线性范围l使用范围广使用范围广 l高通量和高度自动化高通量和高度自动化l无放射性危险无放射性危险国际主流化学发光的技术标准l反应方式反应方式 免疫反应l测量方式测量方式 光子计数l分离方式分
37、离方式 磁颗粒l标记方式标记方式 碱性磷酸酶金刚烷系统 吖啶酯系统l操作方式操作方式 自动化 单管测试 四、产品介绍公司产品国内首台达到国际主流免疫公司技术平台全自动化学发光仪产品介绍试剂试剂测定仪测定仪AULIA200全自动化学发光测定系统全自动化学发光测定系统AULIA200全自动化学发光测定仪l肿瘤标志物类l甲状腺功能类l性腺激素类l糖尿病类l血清病毒类产品优势免疫反应免疫反应 项目定制模式，采用一步法、二步法项目定制模式，采用一步法、二步法l抗原、抗体特异性结合 l减少反应步骤，缩短反应时间磁微粒分离免疫分析技术磁微粒分离免疫分析技术l比表面积大，目标物结合充分l易于结合相与游离相分离l具有超顺磁性和磁场响应性l加快检测速度，提高检测精度自主研发高性能发光底物自主研发高性能发光底物-金刚烷磷酸酯类金刚烷磷酸酯类l反应快速进入平台期，加入发光底物1s即可测量，极大提高反应速度l平台期持久稳定，发光强度在30分钟内维持不变，测量结果可靠光子测量光子测量AULIA200全自动化学发光测定仪71l涡旋混匀技术l余管探测自动清除 l内置式条形码自动识别系统l器具有自我维护和保养功能，操作简单，维护方便l三针设计，分别加样本、试剂、底物l独立的样本针清洗管路，杜绝交叉污染l每个模块都是独立设计，保证仪器各功能的独立和完整性，利于测试和维护。谢谢观看！
