1、目的要求 病毒性肝炎免疫学特征、免疫学检测方法和意义 肿瘤标志物的检测特征及其意义 自身免疫性疾病的特点和主要指标 酶联免疫吸附试验的原理，方法酶免疫组化技术概念、过程及应用。沉淀试验、凝集试验和标记技术原理细胞因子的检测及临床应用T细胞和B细胞免疫缺陷病检测方法移植排斥反应的免疫学监测外周血单个核细胞的分离方法；细胞表面标志检测临床免疫学实验诊断 实验诊断学 临床免疫学实验诊断3临床免疫学实验诊断 概述 感染性疾病免疫学诊断 肿瘤免疫学诊断 免疫增殖和免疫缺陷病诊断 超敏反应性疾病免疫学诊断 自身免疫性疾病诊断 移植免疫学 临床免疫学检验的自动化临床免疫学与免疫检验 免疫检验可分为两部分：一
2、部分为利用免疫检测原理与技术检测免疫活性细胞、抗原、抗体、补体、细胞因子、细胞粘附分子等免疫相关物质；另一部分是利用免疫检测原理与技术检测体液中微量物质如激素、酶、血浆微量蛋白、血液药物浓度、微量元素等。免疫学技术发展史年代年代学者学者贡献贡献18941894J.BordetJ.Bordet补体与溶菌活性补体与溶菌活性18961896H.Durham,M.von GruberH.Durham,M.von Gruber特异凝集反应特异凝集反应18961896G.Widal,A.SicadG.Widal,A.Sicad肥达试验肥达试验18971897R.KrausR.Kraus沉淀试验沉淀试验19
3、001900J.Bordet,O.GengouJ.Bordet,O.Gengou补体结合反应补体结合反应19001900K.LandsteinerK.Landsteiner人类人类ABOABO血型及其抗体血型及其抗体19061906A.WassermannA.Wassermann梅毒补体结合反应梅毒补体结合反应19351935M.Heidelberger,F.KendallM.Heidelberger,F.Kendall纯化抗体纯化抗体,定量沉淀反应定量沉淀反应19411941A.CoonsA.Coons免疫荧光标记免疫荧光标记19461946J.OudinJ.Oudin凝胶内沉淀反应凝胶内沉
4、淀反应19481948O.Ouchterlony,S.ElekO.Ouchterlony,S.Elek双扩散沉淀反应双扩散沉淀反应19531953P.Grabar,C.WilliamsP.Grabar,C.Williams免疫电泳分析免疫电泳分析,Ig,Ig多样性多样性19601960R.Yallow,S.BersonR.Yallow,S.Berson放射免疫标记放射免疫标记19661966S.Avrames,J.Uriel,et alS.Avrames,J.Uriel,et al酶标免疫技术酶标免疫技术19751975G.Kohler,C.MilsteinG.Kohler,C.Milstei
5、n杂交瘤技术与单克隆抗体杂交瘤技术与单克隆抗体发展进程的主要阶段 自然的肉眼观察的抗原抗体反应（沉淀反应、凝集反应）加速的肉眼观察的抗原抗体反应（电泳技术、分离技术）标记性免疫技术提高抗原抗体反应的特异性、敏感性 半自动、自动化检验仪器与免疫反应原理结合，加快了反应过程 标记技术、单克隆技术、高智能自动化技术的最佳组合免疫检验涉及的主要技术放射免疫技术放射免疫技术 化学发光免疫技术化学发光免疫技术荧光免疫技术荧光免疫技术 流式细胞免疫技术流式细胞免疫技术酶联免疫技术酶联免疫技术 免疫印迹技术免疫印迹技术透透/散射免疫技术散射免疫技术 单克隆抗体技术单克隆抗体技术8概述：凝集反应9单向琼脂扩散试
6、验10测吸光度测吸光度计算抗原计算抗原或抗体的或抗体的含量含量抗体抗体抗原抗原免疫复合物的免疫复合物的浓度与透射光浓度与透射光的衰减呈正相的衰减呈正相关关免疫比浊法原理11概念：用荧光素、酶、同位素等标记抗体或抗原用以测定相应抗原或抗体的技术。免疫荧光技术、酶免疫技术、放射免疫检测技术等。特点：敏感、特异、快速，能定性、定量、定位。概述：标记免疫技术12免疫荧光技术13 酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法)14斑点金免疫渗滤试验ADCB阴性（未怀孕）阴性（未怀孕）加尿样加尿样除去滤器除去滤器加胶体金标记抗体加胶体金标记抗体加洗涤液加洗涤液化学发光/电化学发光技术16免疫印迹法图解免疫印迹法图
7、解SDS裂解裂解病毒病毒聚丙酰胺凝胶电泳聚丙酰胺凝胶电泳-+95 68 45 12KD电转印至电转印至NC膜上膜上置待测血清中，漂洗；置待测血清中，漂洗；加酶标抗抗体，漂洗；加酶标抗抗体，漂洗；加底物加底物 显色显色120 41 24KD临床应用18一 感染性疾病免疫学诊断（一）病毒性肝炎（二）细菌感染（三）病毒感染（四）真菌感染（五）寄生虫感染（六）其他19肝炎 甲型肝炎乙型肝炎 丙型肝炎丁型肝炎 戊型肝炎20甲型肝炎免疫学检测 抗体检测IgM型：常用IgM抗体捕捉ELISA检测法IgG型：双份血清，用于流行病学调查、既往感染或疫苗效果评价 抗原检测ELISA夹心法难以常规开展21实验室检查
8、蛋白质代谢功能检查胆红素代谢检查常用的血清酶及同工酶检查肝纤维化常用标志物检测22HBsAgHBeAg抗抗-HBs抗抗-HBe抗抗-HBc结果分析结果分析+-HBVHBV感染或无症状携带者感染或无症状携带者+-急性或慢性乙型肝炎，或无症状急性或慢性乙型肝炎，或无症状携带者携带者+-+急性或慢性乙型肝炎（传染性强，急性或慢性乙型肝炎（传染性强，“大三阳大三阳”）+-+急性感染趋向恢复（急性感染趋向恢复（“小三阳小三阳”）-+既往感染恢复期既往感染恢复期-+-既往感染恢复期既往感染恢复期-+既往感染或既往感染或“窗口期窗口期”-+-既往感染或接种过疫苗既往感染或接种过疫苗 乙型肝炎病毒抗原抗体系统
9、检测结果分析23丙型肝炎免疫学检测 免疫学：筛选试验 ELISA、放射免疫法抗HCV IgG或IgM。抗HCV IgM早期诊断。确证 免疫印迹法24丁型肝炎免疫学检测1）HDV抗原 2）抗HDV IgM 3）抗HDV 25戊型肝炎免疫学检测抗体检测抗体检测IgM型：诊断指标，ELISA法IgG型：双份血清，流行病学调查、既往感染或疫苗接种效果评价病毒抗原病毒抗原26（二）细菌感染免疫学诊断人感染病原体产生特异性抗体可持续一段时间，现症诊断，疾病追溯。1.血清抗链球菌溶血素“O”试验：A链 近期感染，活动性风湿热、风湿性关节炎、心肌炎、急性肾小球肾炎、急性上呼吸道感染、皮肤和软组织的感染等27（
10、二）细菌感染免疫学诊断2.伤寒副伤寒沙门菌IgM抗体：ELISA法阴性或滴度1:20；IgM抗体早期诊断价值。3.伤寒副伤寒沙门菌可溶性抗原测定：乳胶凝集法为阴性。确诊伤寒沙门菌感染。4.结核分枝杆菌抗体测定：胶体金或ELISA法检测抗体阴性。结核分枝杆菌感染。28（三）病毒感染免疫学诊断 TORCH：弓形虫，风疹病毒，巨细胞病毒，单纯疱疹病毒型抗体检测 早孕时胎儿先天性风疹感染，新生儿致残致畸率可达80，损害五官神经系统 IgM抗体出现均应做咨询。IgG抗体应注意滴度变化，滴度低且无变化为既往感染，双份血清滴度升高4倍以上。29（三）病毒感染免疫学诊断 单纯疱疹病毒（型和型）致畸性、影响新生
11、儿神经系统发育，IgM和IgG抗体的检测，IgM型为近期感染，IgG型多为既往感染。巨细胞病毒CMV造成神经系统及智力的障碍。EIA法测IgM了解近期感染，IgG流行病学调查。30（三）病毒感染免疫学诊断3嗜异性凝集传染性单核细胞增多症EB病毒感染：感染后2周抗体效价达高峰，常1：56；3个月后消失；效价上升4倍以上；更有诊断价值。4严重急性呼吸综合征病毒抗体SARS冠状病毒。抗体阳性表明感染过，阴性到阳性血清转化，或急性期到恢复期抗体效价增高4倍以上，表明有近期感染。（三）病毒感染免疫学诊断32（四）真菌感染免疫学诊断 意义有限33（五）寄生虫感染免疫学诊断弓形虫抗体囊虫抗体测定：人和猪共患
12、的寄生虫病。4参考值ELISA法：血清低于1：64为阴性；脑脊液低于1：8为阴性间接血凝法：血清低于1：128为阴性；脑脊液低于1：8为阴性。4临床意义IgG阳性见于囊虫病，可用作流行病学调查。34（六）其他感染免疫学诊断性传播疾病：衣原体、支原体、梅毒螺旋体、淋球菌、HIV引起。1 衣原体抗体测定沙眼衣原体(CT)是引起性传播疾病常见的病原体之一。IgM阳性提示近期有CT感染，有利于早期诊断；IgG在发病后68周出现，持续时间较长；提示曾有过CT感染35（六）其他感染免疫学诊断2 支原体血清学检测：肺炎支原体、解脲人原体、人型支原体和生殖道支原体。单份血清效价1：64128者或双份血清有4倍
13、以上增长者，有诊断意义。3 梅毒螺旋体抗体测定梅毒螺旋体反应素试验敏感性高；定性试验阳性的情况下，必须进行确诊试验，若阳性可确诊梅毒。4 淋球菌血清学测定36二 肿瘤免疫学诊断 血清肿瘤标志物检测 细胞表面肿瘤标志物检测 患者免疫功能状态评估 临床意义：早期诊断和发现肿瘤；提示肿瘤发生的部位和组织来源；判别肿瘤恶性程度；监测临床治疗效果；监测肿瘤复发。3738肿瘤标志物肿瘤组织产生的、可反映肿瘤自身存在的化学物质。大分子蛋白质(包括肽类、激素和酶)，小分子脂类和氨基酸衍生物。39肿瘤标志物 标志物的多样性同一肿瘤可有多种标志物。联合检测 标志物定位相对特异性同一标志物在多种肿瘤中存在。标志物在
14、某些良性疾病中，一过性升高。（动态诊断）标志物的多变性随病情发展而升高 随治疗见效而下降 随复发转移再升高（动态随访）40肿瘤标志物 细胞肿瘤标志物：位于细胞中的物质或抗原，如激素受体、白血病表型、分子基因等。体液肿瘤标志物：病理情况下，浓度增加时可在血液、尿液或其他体液中测得的物质，如AFP、CA19-9、CEA、CA15-3等。41肿瘤标志物 酶类 激素类 癌胚抗原类 糖类抗原42肿瘤标志物ROC曲线假阴性率是指将患者错误地判定为无病的比例（即1-灵敏度）。假阳性率1特异度。43血清肿瘤标志物检测甲胎蛋白属肿瘤胚胎蛋白。胚胎期 AFP由卵黄囊和肝脏产生，成人肝脏只产生微量 AFP。肝细胞癌
15、、卵黄囊瘤、胚胎性癌的肿瘤标志。妊娠/良性肝病44血清肿瘤标志物检测 CEA：胃肠道恶性肿瘤、乳腺癌、肺癌等 广谱 诊断、监测、预后、疗效评价 大分子糖蛋白，属肿瘤胚胎蛋白。胚胎期由肝、胃肠及胰合成。肠癌、胃癌、肺癌、胰腺癌等都可见血清CEA水平升高。作为消化道癌瘤的标志。45血清肿瘤标志物检测 PSA：前列腺癌/前列腺增生 监测疗效、判断预后 50岁以上男性每年普查1次46血清肿瘤标志物检测 PAP前列腺酸性磷酸酶：前列腺癌诊断、疗效、预后监测酸性磷酸酶可来自正常前列腺细胞，亦可来自癌细胞。血清前列腺酸性磷酸酶(PSAP)的监测在早期前列腺癌的诊断、前列腺癌病情的监测、鉴别诊断方面都有帮助。
16、47 同功酶类肿瘤标志物，小细胞肺癌、神经母细胞瘤和神经内分泌肿瘤及脑损伤时升高。待测标本绝对禁止溶血。NSE高预示生存期短，下降是疗效良好标志。48 肺癌：NSE、CYFRA21-1、CEA 乳腺癌：CA153、CEA 肝癌：AFP、AFU、CEA、AKP同工酶 胰腺癌：CA242、CA199、CA50 卵巢癌：CA125、CEA、CA199、HCG 联合应用可大大提高检出的灵敏度49血清肿瘤标志物检测 糖类抗原标志物是由肿瘤细胞分泌的或者是肿瘤细胞表面的抗原。针对这些抗原的单克隆抗体已成为临床上较为有用的肿瘤标志物，比天然分泌的标志物（如酶和激素）更敏感。50血清肿瘤标志物检测 糖链抗原C
17、A19-9：消化道恶性肿瘤 胰腺癌、肝胆系统癌、胃癌和大肠癌，特别是胰腺癌。糖链抗原CA125：卵巢癌 是卵巢癌和子宫内膜癌的肿瘤标志物51血清肿瘤标志物检测 糖链抗原CA50：胰腺癌、结肠直肠癌、胃癌。非特异性广谱肿瘤标志物。糖链抗原CA15-3：乳腺癌诊断、术后监测乳腺癌患者30-50%增高，转移者增高达80%；52血清肿瘤标志物检测 方法：酶免、荧光、放射 意义：早期诊断、鉴别良性恶性、发生部位和程度、监测疗效、预防复发53血清肿瘤标志物检测 方法：荧光 放射54细胞表面肿瘤标志物检测 免疫组化、流式细胞术55患者免疫状态评估 T细胞及亚群 NK细胞吞噬细胞功能 抗体、补体、细胞因子水平
18、56三 免疫增殖和免疫缺陷病诊断 免疫器官、免疫组织、免疫细胞异常增殖引起的机体病理损伤。淋巴系统异常增殖所引起的疾病。先天遗传因素或后天因素造成的免疫系统发育、分化、代谢或相互调节的不同环节发生障碍，导致免疫功能低下或缺失，临床表现以感染为主的一组综合征。57单克隆免疫球蛋白病诊断 对免疫球蛋白异常增殖病的检测，其目的是早期发现疾病、监控病情和判断预后。58单克隆免疫球蛋白病诊断 血清蛋白区带电泳 免疫电泳 免疫固定电泳 血清免疫球蛋白定量 免疫球蛋白轻链型筛选 本周蛋白检测 冷球蛋白检测59血清蛋白区带电泳 测定M蛋白的一种定性实验，常采用醋酸纤维素膜和琼脂糖电泳两种方法。M蛋白在电泳时出
19、现于区带中，不同类型的M蛋白的电泳后所处位置略有不同 60血清免疫球蛋白定量病人病人 IgG IgA IgG IgA IgM IgM KAP KAP LAM LAM K/L K/L（g/l)g/l)姓名姓名 8 815 0.8515 0.853.0 0.53.0 0.52.5 1.722.5 1.723.83 0.813.83 0.811.92 1.471.92 1.472.952.95A A 46.246.2 0.23 0.17 0.26 16.80 0.23 0.17 0.26 16.80 0.020.02B 7.36 0.31 B 7.36 0.31 26.9026.90 5.11 1.
20、02 5.11 1.02 5.015.01 C 1.78 C 1.78 49.5049.50 0.17 18.20 0.18 0.17 18.20 0.18 101.11101.11D 2.77 0.23 0.22 0.72 0.95 D 2.77 0.23 0.22 0.72 0.95 0.760.76E 4.91 0.34 0.29 1.02 2.00 E 4.91 0.34 0.29 1.02 2.00 0.510.51F 38.70 1.93 2.00 7.34 4.08 1.80F 38.70 1.93 2.00 7.34 4.08 1.8061肾损伤型 特点：选择性蛋白丢失总蛋白和
21、白蛋白均严重降低2-球蛋白显著升高-球蛋白降低/正常/升高-球蛋白正常/降低常见于肾病综合征62肝损伤型 特点：白蛋白、1、2、-球蛋白合成减少，-球蛋白合成增加。总蛋白降低/正常白蛋白严重降低1-球蛋白、2-球蛋白、-球蛋白降低-球蛋白升高常见于重症肝炎、肝硬化、肝癌63急性感染与应激状态 特点：1糖蛋白等急性时相反应蛋白增加。Alb减少或正常，1、2-球蛋白增高，-球蛋白增高不明显，当炎症转为慢性时，可明显增加。64慢性炎症型 特点：-球蛋白显著升高总蛋白降低/正常/升高白蛋白降低1-球蛋白、2-球蛋白升高-球蛋白升高/降低-球蛋白显著升高 常见慢性感染、风湿病及其它自身免疫病65低蛋白血
22、症型 特点：总蛋白和白蛋白明显减低1-球蛋白正常/升高2-球蛋白正常/降低-球蛋白降低-球蛋白正常/降低常见于营养不良、吸收不良、非选择性蛋白丢失66单克隆高-球蛋白血症型 特点：2、或区出现单克隆条带，正常免疫球蛋白带减弱或消失。见于良、恶性M蛋白病、多发性骨髓瘤、重链病、轻链病、半分子病、淋巴瘤、某些白血病。67免疫缺陷病实验诊断 B细胞缺陷病检测血清Ig测定同种血型凝集素的测定：ABO血型抗体特异性抗体产生能力测定噬菌体试验B细胞表面膜Ig检测-免疫组化CD抗原检测68免疫缺陷病实验诊断 T细胞缺陷病的检测皮肤试验：迟发型超敏反应DTH能力T细胞及其亚群检测：CD标记T细胞功能检测：PH
23、A刺激淋巴细胞增殖转化结核菌素试验69MTT比色 MTT是一种噻唑盐，胞内线粒体琥珀酸脱氢酶底物反应后呈蓝黑色甲潜颗粒+盐酸异丙醇溶（570nm）。70免疫缺陷病实验诊断 吞噬细胞缺陷病检测白细胞计数趋化功能检测吞噬和杀伤试验NBT还原试验黏附分子检测71免疫缺陷病实验诊断 补体系统缺陷病检测：C1INH 基因诊断72免疫缺陷病实验诊断 HIV检测 病毒标志检测：分离病毒组分 免疫标志检测 非特异性检测：T细胞亚群等73免疫缺陷病实验诊断74免疫缺陷病实验诊断7576a 强阳性对照（强阳性对照（HIV-1和和HIV-2）b 弱阳性对照（弱阳性对照（HIV-1）c 阴性对照阴性对照d 典型的典型
24、的HIV-2血清阳性反应血清阳性反应77初筛检测阳性标本初筛检测阳性标本两种初筛试剂两种初筛试剂阴性报告阴性报告阴性报告阴性报告阴性反应阴性反应一阴一阳一阴一阳阳性反应阳性反应免疫印迹法免疫印迹法WB-1/2WB-1/2混合型混合型复核复核报告报告HIV-2HIV-2血清学血清学阳性反应阳性反应,必要时测核酸必要时测核酸阴性反应阴性反应可疑反应可疑反应HIV-2 阳性反应阳性反应免疫印迹法免疫印迹法WB-2WB-2阴性报告阴性报告出现出现gp36gp36阴性反应阴性反应可疑反应可疑反应HIV-1 阳性报告阳性报告HIV-1 阳性反应阳性反应每三个月随访一次，共两次，仍属可疑，判为阴性每三个月随
25、访一次，共两次，仍属可疑，判为阴性HIV抗体抗体确认实验流程图确认实验流程图78CD4+T细胞绝对数量79体液免疫检测 1.单向免疫扩散(SRID).2.透射比浊、散射比浊.3.ELISA，RIA(IgD,IgE).4.免疫电泳.80细胞免疫检测 1.皮肤试验 2.T细胞及其亚群的检测 3.E玫瑰花结试验 4.T细胞体外免疫功能检测（1）淋巴细胞增殖反应试验（2）T细胞分泌产物功能的检测81四 超敏反应性疾病免疫学诊断82I型超敏反应检验：血清IgE检测 血清总IgE测定：标记技术ELISA放射免疫吸附试验化学发光法 IgE升高：过敏性哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎、IgE骨髓瘤等 超敏反应Ig
26、E升高83I型超敏反应检验：血清IgE检测 血清特异性IgE检测：针对特异性变应原的IgE84II型超敏反应的检验：Coombs试验自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合征、药物免疫性溶血性贫血、新生儿溶血病、系统性红斑狼疮、类风湿、恶性肿瘤。正常红细胞(rh阳性的o型红细胞)85II型超敏反应的检验：免疫组化技术 1、特异性强 抗原与抗体之间的结合具有高度特异性，因此，免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示。2、敏感性高 ABC法或SP法的出现，使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合。3、定位准确、形态与功能相结合 通过抗原抗体反应及呈色反应，可准确定位，进行形态与
27、功能相结合的研究。86型超敏反应的检验：CIC检测 循环免疫复合物检测 PEG比浊法：选择性沉淀免疫复合物。简便敏感、特异性差、影响因素多。87型超敏反应的检验：CIC检测 循环免疫复合物检测 C1q固相法：C1q重链CH2补体结合点 抗C3-CIC-ELISA：胶固素结合试验：单克隆RF固相抑制试验：88型超敏反应的检验 组织固定免疫复合物检测 免疫组化技术 抗人IgG、抗人C389IV型超敏反应的检验 结核菌素实验（皮内试验）结核菌素皮试OT、PPD“+”感染过结核“-”可基本排除结核假阴性：播散性结核、麻疹、淋巴瘤、细胞免疫功能缺陷假阳性：非典型分枝杆菌90五 自身免疫性疾病诊断 机体免
28、疫系统对自身成分发生免疫应答而导致的疾病状态 自身免疫应答过分强烈，导致自身组织器官损伤或功能障碍 自身抗体/自身反应性T细胞91自身免疫病的基本特征 高效价自身抗体和/或自身反应性T细胞 组织器官损伤、功能障碍 可复制出病理模型 病情转归与自身免疫应答强度相关 反复发作慢性迁延，糖皮质激素可缓解 病因不清，女性易患，遗传倾向92自身免疫性疾病诊断 自身抗体检测-抗核抗体 自身抗体检测-类风湿因子 淋巴细胞检测 狼疮细胞试验 免疫复合物、补体检测 细胞因子检测93自身抗体检测-抗核抗体 自身抗体检测方法：间接免疫荧光法、ELISA、RIA、免疫印迹法 抗各种核成分的抗体 IgG为主 SLE等多
29、种自身免疫病94自身抗体检测-抗核抗体 抗DNA抗体：天然/双链、变性/单链 间接免疫荧光法 ELISA RIA95自身抗体检测-抗核抗体 抗ENA抗体：盐水可提取性核抗原的抗体。是抗小分子细胞核核糖核蛋白（snRNPs）和小分子细胞浆核糖核蛋白（scRNPs）的自身抗体，不含组蛋白。抗原进行SDS-PAGE96自身抗体检测-抗核抗体 抗ENA抗体：抗u1RNP：混合结缔组织病MCTD抗Sm、Rib：SLE抗SS-A、SS-B：干燥综合征SS抗Scl-70：硬皮病PSS抗Jo-1：多发性肌炎/皮肌炎 PM/DM97自身抗体检测-类风湿因子 抗变性IgG Fc自身抗体。并非RA特异抗体 ELIS
30、A 约90%（RA）患者RF阳性。IgA-RF与骨质破坏有关，早期IgA-RF升高常提示病情严重，预后不良；IgE-RF升高时已属晚期。冷球蛋白血症、进行性全身性硬化症、干燥综合征、SLE等患者都有较高阳性率；血管炎、肝病、慢性感染也可出现RF。98淋巴细胞亚群 单克隆抗体将外周淋巴器官或外周血中T细胞分为CD4+和CD8+两个主要亚群。每个亚群按表面标志和功能分为不同亚群。Th1和Th2亚群 应用Th细胞克隆培养技术和细胞因子产生的不同，CD4阳性细胞群分为Th1和Th2。Th1细胞合成IL-2/3、IFN-、TNF-和GM-CSF，Th2合成TNF-、IL-3/4/5/6/10/13、GM
31、-CSF。99混合淋巴细胞反应 自身混合淋巴细胞反应：外周血B细胞和单核细胞等非T细胞在体外培养时能诱导某些自身T细胞发生增殖反应，称为自身混合淋巴细胞反应。这一部分T细胞称为自身反应性T细胞。100免疫复合物、补体检测 CIC增加，补体消耗，动态变化 总补体CH50：50%溶血试验即求得能使50%致敏羊红细胞发生溶血的最小量血清，然后计算出每毫升血清中补体含量。以补体量作为横坐标，溶血百分数作为纵坐标，50%溶血周围近似直线。单一补体浓度 疾病进展、疗效101细胞因子检测 Th1、Th2平衡失调 细胞因子是一类在细胞间传递信息、具有免疫调节和效应功能的蛋白质或多肽。淋巴因子、单核因子、各种生
32、长因子等。作用：参与免疫应答与免疫调节;刺激造血功能。102ANA的检测方法间接免疫荧光法103检测方案104检测方法 同ANAnELISA105检测方法-免疫印迹法106检测方法-RIA法计数器所测量放射性同位素的强度，用得较多的标记化合物是14C、3H、125I、131I。107类风湿因子测定方法 胶乳凝集试验 速率散射浊度法 ELISA法108六 移植免疫学109预防排斥反应的免疫学措施 移植物预处理 组织配型 交叉配合试验 免疫抑制 免疫耐受110移植物预处理 灌洗：清除免疫细胞 加入单克隆抗体、补体 放射线照射111组织配型 组织相容性程度越高，存活几率越大 ABO血型必须相同或相容
33、 HLA相容：HLA-A、HLA-B、HLA-DR 造血干洗胞移植：必须配合 心肾肠移植：HLA-DR 肝肺移植：主要ABO112HLA113HLA配型114HLA配型Immunology,2nd edition.115HLA分型结果116HLA配型Immunology,2nd edition.117交叉配合试验 淋巴细胞毒交叉配合试验，lymphocyte cytotoxicity crossmatching：检测受者体内抗供者淋巴细胞的细胞毒性抗体。118预防免疫排斥措施 1、寻求与受者MHC相配的供者组织或器官 2、移植后的免疫监护 3、正确合理选用免疫抑制疗法 4、诱导对移植抗原的特异
34、性耐受119预防免疫排斥措施120免疫抑制 全身淋巴组织照射选择性淋巴组织照射：免疫抑制剂：化学性 硫唑嘌呤+皮质类固醇 环孢素A+皮质类固醇121免疫抑制 生物性免疫抑制剂融合蛋白：生物性免疫抑制剂反义寡核苷酸Immunology,2nd edition.122免疫抑制 天然药物 雷公藤、冬虫夏草等123预防免疫排斥措施 诱导对移植抗原的特异性耐受 对供者抗原的特异性无应答 不用药、不感染、不排斥1 多次输血2 转基因（MHC）3 微嵌合124移植排斥反应的免疫学监测 并无理想的免疫学实验能准确监测排斥反应及移植物功能丧失 一 供者特异性免疫反应监测 二 非供者特异性免疫学指标监测125七
35、临床免疫学检验的自动化 早期如免疫扩散、免疫电泳、血凝试验、补体结合等 70年代初，开始有自动检测系统，激光光源，固定波长，灵敏度低，23小时 70年代未，速率比浊，几十秒 自动化免疫分析系统飞速发展免疫化学可以纳入临床化学检验范畴 基础是抗原抗体的结合，高特异性；利用标记技术而将信号放大，高灵敏度126七 临床免疫学检验的自动化免疫比浊分析技术 化学发光、电发光分析技术 荧光免疫分析技术 放射免疫分析技术 酶免疫分析技术 流式细胞术127免疫比浊 利用抗原抗体结合后溶液的浊度变化而检测的一种方法 准确快速，已成为免疫诊断技术中重要的检测手段 比浊法与比色法128预反应阶段5ul样本抗原过剩区
36、阈值信号反 应 阶 段45ul样本7.5秒2分钟6分钟（2+4分钟）定时散射比浊反应曲线图定时散射比浊反应曲线图抗原不过量抗原过量129免疫透射比浊 基本原理：检测信号是通过溶液的光，测量角度与正前方夹角为0，保持抗体过量，形成可溶性AG-AB复合物，使介质浊度发生改变。实验要求：选择亲和力高的抗体，抗原抗体复合物要大、数量要多，反应时间充分。130单色器透射比浊计散射散射比浊计比浊计散射比浊和透射比浊的区别示意图透射光透射光散射光散射光散射光散射光131胶乳浊度测定法132自动免疫浊度分析仪 校准程序，使仪器处于正常的工作状态 定标程序，保证检测结果的准确性 自动控制，保证实施实验条件中的抗
37、原抗体反应体系要求 自动系统，障碍的检测和预警。133自动化免疫仪器种类 免疫比浊分析技术化学发光、电发光分析技术化学发光、电发光分析技术 荧光免疫分析技术 放射免疫分析技术 酶免疫分析技术 流式细胞术134化学发光自动免疫分析 化学发光是指在化学反应过程中产生光的发射现象 基本原理：标记在抗原或抗体上的发光物质在碱性介质中氧化时产生激发态中间体，中间体回基态产生辐射，多余能量发射光子，产生发光现象，对光信号进行接收转化，可得检测物浓度135化学发光自动免疫分析类型 电化学发光免疫分析（ECLIA）电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，包括电化学和化学发光，应用“亲和素-生物素”放大系统，
38、灵敏度大大提高 双抗体夹心法136双抗体夹心形成生物素与亲和素结合磁珠吸引吸附电极表面启动电化学反应撤消磁场冲洗磁珠137临床应用 激素 肿瘤标记物 内分泌功能 传染性疾病 其它如VB12、叶酸、铁蛋白、肌钙蛋白、肌红蛋白、酶、脂肪酸、维生素和药物等多种检测项目。138自动化免疫仪器种类（应用技术）免疫比浊分析技术 化学发光、电发光分析技术荧光免疫分析技术荧光免疫分析技术 放射免疫分析技术 酶免疫分析技术 流式细胞术139荧光免疫自动化 利用荧光物质标记抗原抗体的检测方法 免疫反应、荧光及计算机技术联合应用 时间分辨荧光免疫和荧光偏振免疫经单一平面的蓝偏振经单一平面的蓝偏振光照射后，吸收光能光
39、照射后，吸收光能跃入激发态，随后回跃入激发态，随后回复至基态，并发出单复至基态，并发出单一平面的偏振荧光。一平面的偏振荧光。140荧光免疫自动化 时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）：AG-AB结合，荧光物质（镧氏元素铕螯合物）发长寿命荧光，利用延迟时间来消除非特异性的荧光干扰。141荧光免疫自动化 荧光偏振免疫测定：以小分子物质与大分子物质的旋转差异而使它们对偏振光的吸收不同为依据检测小分子药物142自动化免疫仪器种类（应用技术）免疫比浊分析技术 化学发光、电发光分析技术 荧光免疫分析技术 放射免疫分析技术 酶免疫分析技术流式细胞术流式细胞术143流式细胞仪 流式细胞仪（FCM）是以激光为光源
40、，检测生物学颗粒理化性质的仪器 生物学颗粒包括免疫复合物、DNA、RNA、蛋白质、病毒颗粒、脂质体、细胞器、细胞、染色体、真核细胞等 理化性质则为细胞大小、形状、胞浆颗粒、DNA含量、酶活性等144流式细胞仪 FCM综合了激光技术、电子技术、流体力学、细胞化学及计算机技术，广泛应用于细胞生物学、免疫学、肿瘤学、血液学、病理学、遗传学、临床检验学等145思考题 分析自身免疫性疾病的特征 如何确定候选肿瘤标志物的检测参考值 设计实验证实某血清蛋白质与移植排斥有关 病毒性肝炎的免疫学检测和分子生物学检测特点 HIV感染的监测147临床免疫学实验诊断 概述 感染性疾病免疫学诊断 肿瘤免疫学诊断 免疫增殖和免疫缺陷病诊断 超敏反应性疾病免疫学诊断 自身免疫性疾病诊断 移植免疫学 临床免疫学检验的自动化
