1、六原则六原则避免杂菌污染避免杂菌污染不同期不同标本不同期不同标本用抗生素以前用抗生素以前采集病变明显部位采集病变明显部位运送注意保存运送注意保存标本必须新鲜标本必须新鲜第一节第一节 概概 述述l认真核对：认真核对：l了解诊断：了解诊断：l联系临床联系临床：（一）临床标本的采集：（一）临床标本的采集：肠道、痰、口咽含涑液、血液、脑脊肠道、痰、口咽含涑液、血液、脑脊液、骨髓、粪便、尿液、胸腹水等、液、骨髓、粪便、尿液、胸腹水等、1.细菌学检验单细菌学检验单l2.2.标本容器：无菌容器标本容器：无菌容器l3.3.采集时间、部位：采集时间、部位：l4.4.无菌操作：对无菌或有菌标本不同处理无菌操作：对
2、无菌或有菌标本不同处理（二）临床标本的送检（二）临床标本的送检l1.1.送检时间、方法：及时送检、低温或保温保存送检时间、方法：及时送检、低温或保温保存l2.2.常规性细菌培养标本：应保存常规性细菌培养标本：应保存4 4摄氏度摄氏度l3.3.厌氧菌培养的标本：厌氧保存厌氧菌培养的标本：厌氧保存l4.4.低温敏感的细菌（奈瑟菌，流感嗜血杆菌）应低温敏感的细菌（奈瑟菌，流感嗜血杆菌）应立即处理立即处理l5.5.任何临床标本。应专人运送、注意防护任何临床标本。应专人运送、注意防护l 6.6.了解标本的来源和临床信息了解标本的来源和临床信息（三）临床标本的处理（三）临床标本的处理 原则：立即接种、适宜
3、培养原则：立即接种、适宜培养 1.组织：切碎组织：切碎 2.体液：离心体液：离心 3.棉拭子：取多个标本棉拭子：取多个标本 4.粪便：先观察，再取材粪便：先观察，再取材 5.痰：先观察，再取材痰：先观察，再取材 6.厌氧培养标本：早接种，厌氧培养厌氧培养标本：早接种，厌氧培养 7.血液：立即接种血液：立即接种二、细菌学检验的基本程序二、细菌学检验的基本程序（一）培养基的选择原则（一）培养基的选择原则（二）细菌检验的基本流程（二）细菌检验的基本流程（三）诊断试验的选择（三）诊断试验的选择选择合适的培基养和培养方法EBEB血平板血平板(BA)(BA)SSSSMAC/MAC/EMBEMB巧克力培巧克
4、力培养基养基(CA)(CA)奈瑟奈瑟菌选菌选择培择培养基养基新耶新耶尔森尔森培养培养基基沙沙保保培培养养备注备注血液血液骨髓骨髓+可同时做厌氧、需氧培养，可同时做厌氧、需氧培养，做菌计做菌计尿液尿液+做菌计、需要时做厌氧做菌计、需要时做厌氧粪粪/肛拭肛拭+弧菌培养选用碱性蛋白胨弧菌培养选用碱性蛋白胨水和水和TCBSTCBS培养基培养基痰痰/咽拭咽拭+直接涂片镜检直接涂片镜检脓液脓液分泌物分泌物+直接涂片镜检、可同时做直接涂片镜检、可同时做厌氧、需氧培养厌氧、需氧培养 生殖道生殖道标本标本+可直接涂片镜检可直接涂片镜检眼耳口鼻眼耳口鼻标本标本+直接涂片镜检直接涂片镜检体液体液+直接涂片镜检，可同
5、时做直接涂片镜检，可同时做厌氧、需氧培养厌氧、需氧培养 临床标本的检验程序临床标本的检验程序 标本 直接检查直接检查 分离培养：选择培养基分离培养：选择培养基 BA，SS，MAC 可疑菌落可疑菌落 药物敏感试验药物敏感试验 鉴定鉴定 生化，血清学鉴定，补充试验生化，血清学鉴定，补充试验诊断试验选择原则 1.选择最有鉴定价值的试验选择最有鉴定价值的试验 2.选择简易、快速、方便的试验选择简易、快速、方便的试验 3.综合考虑试验的敏感性和特异性综合考虑试验的敏感性和特异性三、细菌学鉴定的方法 1.细菌的形态学检验细菌的形态学检验 2.生物化学试验生物化学试验 3.血清学试验血清学试验 4.抑菌试验
6、抑菌试验 5.分子生物学检测分子生物学检测 6.噬菌体分型试验噬菌体分型试验 7.动物实验动物实验四、细菌学检验报告原则 1.初步报告初步报告 2.细菌鉴定细菌鉴定 3.药敏试验药敏试验（一）血液中常见病原体l确诊菌血症和败血症确诊菌血症和败血症l金黄色葡萄球菌见疖、痈、脓肿引起的败血症金黄色葡萄球菌见疖、痈、脓肿引起的败血症l革兰阴性菌见尿路、胆道、胃肠道引起的败血症革兰阴性菌见尿路、胆道、胃肠道引起的败血症l草绿色链球菌引起亚急性心内膜炎草绿色链球菌引起亚急性心内膜炎l铜绿、金葡引起烧伤后败血症铜绿、金葡引起烧伤后败血症第二节 临床常见标本的细菌学检验l（一）血液中常见病原体（见表（一）血
7、液中常见病原体（见表18-218-2）确诊菌血症和败血症确诊菌血症和败血症金黄色葡萄球菌见疖、痈、脓肿引起的败血症金黄色葡萄球菌见疖、痈、脓肿引起的败血症革兰阴性菌见尿路、胆道、胃肠道引起的败血症革兰阴性菌见尿路、胆道、胃肠道引起的败血症草绿色链球菌引起亚急性心内膜炎草绿色链球菌引起亚急性心内膜炎铜绿、金葡引起烧伤后败血症铜绿、金葡引起烧伤后败血症一、血液及骨髓标本的细菌学检验一、血液及骨髓标本的细菌学检验（三）细菌学检验1.检验程序：检验程序：2.检验方法l普通培养普通培养：分别做厌氧和需氧培养：分别做厌氧和需氧培养l阳性表现阳性表现：均匀浑浊，革兰阴性菌均匀浑浊，革兰阴性菌 浑浊有绿色，肺
8、炎链球菌浑浊有绿色，肺炎链球菌 表面有菌膜有绿色荧光，铜绿假单胞菌表面有菌膜有绿色荧光，铜绿假单胞菌 下面沉淀，链球菌下面沉淀，链球菌 溶血，溶血性链球菌溶血，溶血性链球菌 浑浊有胶胨，葡萄球菌浑浊有胶胨，葡萄球菌 灰白色菌膜，枯草芽孢杆菌灰白色菌膜，枯草芽孢杆菌l涂片革兰染色镜检涂片革兰染色镜检，直接药敏、分离培养，直接药敏、分离培养l报告临床报告临床l阴性结果阴性结果7 7天报告天报告 l特殊培养特殊培养 脑膜炎奈瑟菌培养：脑膜炎奈瑟菌培养：3737加加5-10%CO5-10%CO2 2 伤寒或其它沙门菌：接种葡萄糖胆汁肉汤或胆盐肉汤伤寒或其它沙门菌：接种葡萄糖胆汁肉汤或胆盐肉汤 草绿色链
9、球菌：胰酶酪蛋白大豆肉汤，同时做需要、草绿色链球菌：胰酶酪蛋白大豆肉汤，同时做需要、COCO2 2和厌氧培养和厌氧培养 L L型细菌：高渗液体培养基，型细菌：高渗液体培养基，“油煎蛋油煎蛋”菌落菌落 厌氧培养：厌氧培养：真菌培养真菌培养：二、脑脊液标本的细菌学检验（二）标本采集（二）标本采集 医师以最严格的无菌技术做腰椎穿刺。医师以最严格的无菌技术做腰椎穿刺。气温较低时，应保温送检或床边接种后，气温较低时，应保温送检或床边接种后，立即孵育立即孵育 （一）脑脊液中常见病原体（表（一）脑脊液中常见病原体（表18-318-3）（三）细菌学检验2.2.检验方法检验方法 -脑脊液外观脑脊液外观：结核性膜
10、炎常为毛玻璃样。：结核性膜炎常为毛玻璃样。其它细菌引起化脓性脑膜炎，脑脊液都明显浑浊。其它细菌引起化脓性脑膜炎，脑脊液都明显浑浊。-涂片镜检涂片镜检：混浊或脓样脑脊液可直接涂片：混浊或脓样脑脊液可直接涂片,革兰染色，镜检。无色透明的脑脊液革兰染色，镜检。无色透明的脑脊液,应以应以3000r/min3000r/min离心离心10-1510-15分钟分钟,取沉淀物涂片取沉淀物涂片,革革兰染色镜检，根据染色反应及形态特征，可兰染色镜检，根据染色反应及形态特征，可初步提出感染细菌的种类。初步提出感染细菌的种类。1.检验程序：见表检验程序：见表18-3注意增菌培养注意增菌培养（3）分离培养 用接种环挑取
11、混浊脑脊液或离心沉淀物，用接种环挑取混浊脑脊液或离心沉淀物，分别接种于分别接种于BABA或或CACA平皿上，置平皿上，置35355%CO25%CO2环境中培养环境中培养18-2418-24小时，检视有无细菌生小时，检视有无细菌生长。根据菌落特点及染色后镜检的特征，长。根据菌落特点及染色后镜检的特征，初步判断细菌种类，并进一步做生化鉴定初步判断细菌种类，并进一步做生化鉴定及血清学检查加以鉴定，并作出报告。及血清学检查加以鉴定，并作出报告。3.结果报告 细菌性脑膜炎的病原学诊断细菌性脑膜炎的病原学诊断 鉴别诊断病毒性脑膜炎鉴别诊断病毒性脑膜炎（一）尿液标本中常见的细菌（一）尿液标本中常见的细菌 革
12、兰阳性细菌革兰阳性细菌 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、酿脓链球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、酿脓链球菌、肠球菌、厌氧链球菌、结核分支杆菌肠球菌、厌氧链球菌、结核分支杆菌 革兰阴性细菌革兰阴性细菌 淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌 大肠埃希菌、变形杆菌、伤寒及副伤寒沙门菌、大肠埃希菌、变形杆菌、伤寒及副伤寒沙门菌、肺炎克雷白菌、产气肠杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷白菌、产气肠杆菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌、沙雷菌、厌氧菌不动杆菌、沙雷菌、厌氧菌 其它其它 支原体、衣原体、念珠菌支原体、衣原体、念珠菌三、三、尿液的标本的细菌学检验尿液的标本的细菌学检验（二）标本采集l标本采集：标本采集：一般培养采用清洁一般培
13、养采用清洁中段尿中段尿。采样前，用肥皂。采样前，用肥皂水或清水清洗外阴，排出尿液前段需丢弃，中水或清水清洗外阴，排出尿液前段需丢弃，中段和后段尿液段和后段尿液10-20ml10-20ml盛装于无菌的容器。盛装于无菌的容器。肾盂尿采集法肾盂尿采集法 膀胱穿刺尿采集法膀胱穿刺尿采集法 结核菌涂片或培养用结核菌涂片或培养用2424小时尿取沉淀。小时尿取沉淀。(三）细菌学检验l1.1.检验程序：见图检验程序：见图18-418-42.检验方法：检验方法：直接镜检直接镜检 -离心沉淀涂片革兰染色离心沉淀涂片革兰染色 -淋球菌镜检淋球菌镜检 假丝酵母镜检假丝酵母镜检 结核分枝杆菌镜检结核分枝杆菌镜检检测方法
14、和报告l分离培养分离培养 -普通培养：普通培养：-淋球菌培养：淋球菌培养：-厌氧菌培养：厌氧菌培养：-真菌培养：真菌培养：检测方法和报告l菌落计数菌落计数 倾注平皿法：倾注平皿法：尿液稀释成尿液稀释成1 1：1010、1 1：100100、1 1：10001000，取此液取此液1ml1ml放入直径放入直径9cm9cm灭菌平皿内，同时加入已熔化并灭菌平皿内，同时加入已熔化并冷至冷至5050的培养基与尿混合，待凝固后置的培养基与尿混合，待凝固后置35 35 培养。培养。定量接种环涂抹法：使用定量接种环涂抹法：使用 1ul1ul的定量接种环沾满尿液，的定量接种环沾满尿液，在分离培养基分离培养。生长的
15、菌落数乘以在分离培养基分离培养。生长的菌落数乘以 10001000，等于，等于每毫升尿中的菌数。每毫升尿中的菌数。l报告：报告：革兰阴性菌革兰阴性菌10105 5cfu/mlcfu/ml，革兰阳性菌革兰阳性菌10104 4cfu/mlcfu/ml有临床意义有临床意义 阴性报告为阴性报告为“48h48h培养无菌生长培养无菌生长”四 粪便标本的细菌学检验（一）粪便中常见病原体（一）粪便中常见病原体 正常人的肠道内存在大量正常菌群正常人的肠道内存在大量正常菌群 粪便中常见病原体见表粪便中常见病原体见表18-518-5（二）标本的采集（二）标本的采集 自然排便法：挑取脓血、黏液的粪便自然排便法：挑取脓
16、血、黏液的粪便2-2-3g3g于无菌的纸盒中，或放置于增菌液中于无菌的纸盒中，或放置于增菌液中送检送检 直肠肛拭子法：直接送检或放入运送培直肠肛拭子法：直接送检或放入运送培养基中送检养基中送检（三）细菌学检验1.检验程序检验程序2.检验方法针对特殊细菌，如霍乱弧菌、结核、真菌等针对特殊细菌，如霍乱弧菌、结核、真菌等 -霍乱弧菌：鱼群样排列的革兰阴性菌，动力阳性霍乱弧菌：鱼群样排列的革兰阴性菌，动力阳性 -葡萄球菌：金葡菌引起的假膜性肠炎葡萄球菌：金葡菌引起的假膜性肠炎 -结核分枝杆菌：结核分枝杆菌：-艰难梭菌：革兰阳性粗大杆菌，无荚膜、有芽孢艰难梭菌：革兰阳性粗大杆菌，无荚膜、有芽孢 -空肠弯
17、曲杆菌：细小、弧形、空肠弯曲杆菌：细小、弧形、S S形或螺旋形革兰阴性形或螺旋形革兰阴性（1）直接镜检）直接镜检 （2 2）分离培养）分离培养 -沙门菌及志贺菌沙门菌及志贺菌：增菌培养或直接接种于：增菌培养或直接接种于SSSS和和MACMAC、CBCB，3718-24h3718-24h培养，挑取可疑菌落接种培养，挑取可疑菌落接种KIA/MIUKIA/MIU，进一步，进一步做生化和血清凝集试验做生化和血清凝集试验 -霍乱弧菌霍乱弧菌：碱性蛋白胨水：碱性蛋白胨水3737增菌增菌6h6h，挑取菌膜接种，挑取菌膜接种TCBSTCBS平板，平板，3737培养培养16-20h16-20h，挑选可疑菌落氧化
18、酶阳，挑选可疑菌落氧化酶阳性，多价性，多价“O”O”诊断血清凝集试验诊断血清凝集试验 -大肠杆菌培养大肠杆菌培养：挑取脓血、黏液的粪便接种于：挑取脓血、黏液的粪便接种于MACMAC或或EMBEMB，3737培养培养18-24h18-24h，挑取可疑菌落接种，挑取可疑菌落接种KIA/MIUKIA/MIU，进一步做生化和血清凝集试验进一步做生化和血清凝集试验 -金黄色葡萄球菌培养金黄色葡萄球菌培养：接种于高盐甘露醇琼脂，：接种于高盐甘露醇琼脂，3737培养培养18-2418-24小时小时 -副溶血弧菌培养副溶血弧菌培养：增菌后接种与弧菌选择性培养基与：增菌后接种与弧菌选择性培养基与SSSS培养基。
19、培养基。3.结果报告（1 1）涂片镜检）涂片镜检（2 2）分离培养）分离培养 检测引起腹泻、食物中毒的肠道菌致病检测引起腹泻、食物中毒的肠道菌致病菌菌 检测肠道正常菌群，预防菌群失调检测肠道正常菌群，预防菌群失调（3 3）阴性结果：未检出）阴性结果：未检出*菌菌五、（痰）呼吸道标本（一）痰液中常见病原体（见表（一）痰液中常见病原体（见表18-618-6）呼吸道标本有正常菌群呼吸道标本有正常菌群 用于检测呼吸系统，鼻咽部的感染。用于检测呼吸系统，鼻咽部的感染。与临床联系，找到病原菌与临床联系，找到病原菌（二）标本采集：标本采集：咽拭子采集法：咽拭子采集法：自然咯痰法：自然咯痰法：小儿取痰法：小儿
20、取痰法：气管镜采集法：气管镜采集法：胃内采痰法：胃内采痰法：气管穿刺法：气管穿刺法：（三）细菌学检验1.检验程序检验程序2.检验方法检验方法 显微镜检查显微镜检查 直接镜检：观察痰液质量直接镜检：观察痰液质量 染色镜检：观察细菌或分枝杆菌染色镜检：观察细菌或分枝杆菌分离培养 培养前处理：培养前处理：均质化：均质化：净化：净化：普通培养：接种于普通培养：接种于BABA，10%CO10%CO2 23737培培养养18-2418-24小时，挑取可疑菌落涂片、染小时，挑取可疑菌落涂片、染色，进一步做生化鉴定。色，进一步做生化鉴定。结核杆菌培养：结核杆菌培养：分离培养 厌氧菌培养：接种两个厌氧菌培养：接
21、种两个BABA，同时做厌氧与，同时做厌氧与需氧培养需氧培养 真菌培养：接种真菌培养：接种SASA，3737或或2222培养培养4848小小时时 白喉棒状杆菌：接种亚碲酸盐培养基上，白喉棒状杆菌：接种亚碲酸盐培养基上，3737培养培养4848小时，典型菌落做生化、毒力小时，典型菌落做生化、毒力试验试验 百日咳鲍特菌：接种百日咳鲍特菌：接种BGBG培养基，培养基，3737培养培养2-52-5天，挑取可疑菌落涂片、血清学试验天，挑取可疑菌落涂片、血清学试验六、脓液及创伤分泌物（二）标本采集（二）标本采集 封闭性脓肿：注射器抽取封闭性脓肿：注射器抽取 开放性脓肿：开放性脓肿：烧伤创面：烧伤创面：（一）
22、脓液中常见病原体见表（一）脓液中常见病原体见表18-7（三）细菌学检验2.2.检验方法检验方法（1 1）涂片镜检：）涂片镜检：革兰染色镜检革兰染色镜检 放线菌挑取硫磺颗粒镜检放线菌挑取硫磺颗粒镜检1.1.检验程序检验程序（见表（见表18-7）（2 2）分离培养）分离培养 -普通细菌培养普通细菌培养：分别接种于：分别接种于BABA或或EMBEMB平皿上，平皿上，置置3737培养培养18-2418-24小时，检视有无细菌生长。根小时，检视有无细菌生长。根据菌落特点及染色镜检特征，初步判断细菌种据菌落特点及染色镜检特征，初步判断细菌种类，并进一步做生化鉴定类，并进一步做生化鉴定 -厌氧培养厌氧培养：疑似炭疽芽孢杆菌：接种：疑似炭疽芽孢杆菌：接种BABA，或，或增菌后增菌后80208020分钟加热后移种分钟加热后移种BABA，3737培养培养18-2418-24小时，挑取可疑菌落染色镜检，并进一步小时，挑取可疑菌落染色镜检，并进一步做生化试验、动物试验。做生化试验、动物试验。3.结果报告（1 1）初步报告）初步报告（2 2）分离培养鉴定）分离培养鉴定（3 3）4848小时无细菌生长小时无细菌生长谢谢！谢谢谢！谢！
