1、抗核抗体检测抗核抗体检测及其临床意义及其临床意义宁波市李惠利医院宁波市李惠利医院 张瑾张瑾 风湿免疫性疾病诊断方法风湿免疫性疾病诊断方法v症状、体征症状、体征v自身抗体自身抗体v影像学检查影像学检查v病理病理风湿免疫性疾病相关自身抗体风湿免疫性疾病相关自身抗体v抗核抗体谱（抗核抗体谱（ANAsANAs）v类风湿关节炎相关抗体类风湿关节炎相关抗体(RF,(RF,抗抗CCPCCP等等)v抗中性粒细胞胞浆抗体（抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCAANCA）v抗自身免疫性肌炎谱抗自身免疫性肌炎谱v自身免疫性肝病相关抗体谱自身免疫性肝病相关抗体谱v抗磷脂抗体谱抗磷脂抗体谱抗核抗体谱检测的意义抗核抗体谱检测的意
2、义v有助于弥漫性结缔组织病弥漫性结缔组织病的分类和诊断 抗Sm抗体是SLE的标记抗体；抗Scl-70抗体是SSc的标记抗体；抗Jo-1抗体是PM/DM的标记抗体；v观察疾病活动度和治疗反应 抗dsDNA抗体v研究发病机理 抗核小体抗体、抗dsDNA抗体v基本概念基本概念vANA荧光核型荧光核型vANAs中的常见抗体中的常见抗体抗核抗体抗核抗体v自身抗体自身抗体：指抗自身组织、器官、细胞及其成分的抗体vANAANA：指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体。ANA存在一个谱。vANAANA新概念新概念：抗核酸(Nucleic acid)和核蛋白(Nucleoprotein)抗体总称v某
3、些核抗原成分在核仁和 胞浆内比核质内更丰富 (如SSA/RO,Jo-1,rRNP等)ANAANA检测方法检测方法-IIF-IIF法法ANAANA滴度滴度ANAANA核型核型ANAANA滴度的意义滴度的意义v结缔组织病的粗筛（1:160）v阳性标本还需进一步识别v感染、肿瘤及5%正常人可出现低滴度阳性vANA阴性基本可以除外SLEvANA滴度与疾病活动性无明确相关性荧光显微镜下荧光显微镜下ANAANA的染色型别的染色型别v均质型（均质型（H H）v核膜型（核膜型（M)M)v斑点型（斑点型（S S）v核仁型（核仁型（N N）v着丝点型（着丝点型（ACAACA）v胞浆型（胞浆型（C C）v混合型混合
4、型 均均 质质 型型 (H)v抗抗组蛋白组蛋白v抗抗ds/ssDNAds/ssDNAv抗抗核小体核小体v主要出现在主要出现在SLESLE中中均均 质质 型型 (H)核膜核膜 型型(M)v主要与抗主要与抗dsDNAdsDNA有关有关与与抗原底物片固定方法和备制过程抗原底物片固定方法和备制过程有关有关出现在出现在SLESLE中中v部分与抗核包膜蛋白有关部分与抗核包膜蛋白有关抗板层素抗板层素抗抗gp210gp210 出现在出现在PBCPBC中中核膜核膜 型型(M)v与抗与抗ENAENA成分有关成分有关 抗抗SmSm 抗抗RNPRNP 抗抗SS-ASS-A 抗抗SS-BSS-Bv出现在出现在SLESL
5、E、MCTDMCTD、pSSpSS、SScSSc、PM/DMPM/DM等等 斑斑 点点 型型 (S)斑斑 点点 型型 (S)v与抗与抗核仁蛋白核仁蛋白有关有关 抗抗Scl-70Scl-70 抗抗RNARNA多聚酶多聚酶I I 抗抗PM-SclPM-Sclv出现在出现在SScSSc中中核核 仁仁 型型 (N)核核 仁仁 型型 (N)v与抗与抗着丝点着丝点染色质有关染色质有关 存在于有丝分裂期存在于有丝分裂期v出现在出现在SScSSc、CRESTCREST综合征等综合征等中中着着 丝丝 点点 型型(ACA)着着 丝丝 点点 型型(ACA)v与抗与抗胞浆成分胞浆成分有关有关v抗抗核糖体核糖体P P蛋
6、白（蛋白（rRNPrRNP）：出现在：出现在SLESLE中中v抗抗合成酶合成酶：Jo-1Jo-1、PL-12PL-12、PL-7PL-7、OJOJ、EJEJv抗抗信号识别颗粒（信号识别颗粒（SRP)SRP)v抗抗线粒体线粒体：出现在：出现在PBCPBC中中v抗高尔基体抗高尔基体v抗溶酶体抗溶酶体v等等等等 胞胞 浆浆 型型(C)见于见于PM/DMPM/DM 胞胞 浆浆 型型 (C)ANAANA荧光核型小结荧光核型小结v均质型（均质型（H H）：）：像大饼，像大饼，SLESLE相关相关v核膜型（核膜型（M)M)：像圈圈，像圈圈，SLESLE相关相关v斑点型（斑点型（S S）：）：像藕片，抗像藕片
7、，抗ENAENAv核仁型（核仁型（N N）：）：像纽扣，像纽扣，SDSD相关相关v着丝点型（着丝点型（ACAACA）：）：像满天星，抗像满天星，抗ACAACAv胞浆型（胞浆型（C C）：）：像空心大饼像空心大饼,SLE PM/DM PBC,SLE PM/DM PBC相关相关v混合型：混合型：稀释后检测有助于区分稀释后检测有助于区分抗核抗体谱抗核抗体谱（ANAs）ANAsANAs抗核不溶成分抗核不溶成分抗核可溶成分抗核可溶成分（抗（抗ENA）抗染色体抗染色体DNADNA蛋白蛋白抗核仁抗体抗核仁抗体 抗抗DNADNA抗体抗体 抗核小体抗体抗核小体抗体 抗组蛋白抗组蛋白 H1,H2A,H2B,H3,
8、H4 抗抗Sm,USm,U1 1RNP,SSA,SSBRNP,SSA,SSB抗抗Scl-70,Jo-1Scl-70,Jo-1,PM-1,PM-1抗抗rRNPrRNP,PCNA,PCNA.dsDNAdsDNAssDNAssDNA抗着丝点抗体抗着丝点抗体（ACA)ACA)抗抗5sRNA5sRNA抗抗dsDNA检测方法检测方法v以以短膜虫短膜虫或或马疫锥虫马疫锥虫为底物的间接免疫荧光法为底物的间接免疫荧光法(IIF)：1:5v短膜虫或马疫锥虫的动基体短膜虫或马疫锥虫的动基体 内含有内含有天然纯天然纯dsDNA，未经，未经 人工处理，不含人工处理，不含组蛋白与组蛋白与 ssDNA，抗原性纯一特异。抗原
9、性纯一特异。v优点：优点：特异性好特异性好 抗抗dsDNA检测方法检测方法v酶联免疫吸附法（酶联免疫吸附法（ELISA）:100IU/ml100IU/ml 优点优点：敏感性最高敏感性最高 缺点：缺点：过于敏感，同时可能检测到过于敏感，同时可能检测到ssDNA抗体抗体和和低亲和力低亲和力dsDNA抗体抗体,而而 这两种致病力均不强这两种致病力均不强 v放射免疫法放射免疫法(Farr):20%优点：优点：对对高亲和度高亲和度DNA抗体抗体的检测优于的检测优于CL-IIF 缺点：缺点：具有放射性，对技术人员身体造成一定影响具有放射性，对技术人员身体造成一定影响v蛋白印迹法（蛋白印迹法（WBWB）缺点
10、：缺点：dsDNAdsDNA抗原在纯化包备过程中可变性解链，变成抗原在纯化包备过程中可变性解链，变成ssDNA,ssDNA,导致假阳性结果导致假阳性结果v不同方法检测不同方法检测SLE患者抗患者抗dsDNA抗体的结果：抗体的结果：everything is possible v至少用两种方法做（报告结果时注明方法学）至少用两种方法做（报告结果时注明方法学）,互为补充。互为补充。如：如：IIF法法+ELISA法法 抗抗dsDNAdsDNA抗体临床意义抗体临床意义vSLE 的血清特异性抗体的血清特异性抗体v多有致病性（多有致病性（IgG型），与亲和力（高）有关型），与亲和力（高）有关v与与LN与与
11、SLE疾病活动性相关，活动期达疾病活动性相关，活动期达90 可用于可用于SLE 疾病活动期判断药物疗效观察疾病活动期判断药物疗效观察v与与SLE急性皮疹急性皮疹、血管炎、浆膜腔炎、白细胞、血管炎、浆膜腔炎、白细胞减少等有关减少等有关抗组蛋白抗体（AHA）（酶联免疫吸附法X2SD)v可出现于多种结缔组织病，可出现于多种结缔组织病，不具有诊断特异性不具有诊断特异性vSLE：50%活动期活动期SLE 可达可达90.2%与与LN相关相关，与与SLE疾病活动性疾病活动性存在一定意义的存在一定意义的相关相关性性v药物性狼疮（药物性狼疮（DIL）：）：90%如：异烟肼、苯妥因钠、青霉胺、雌激素等如：异烟肼、
12、苯妥因钠、青霉胺、雌激素等 仅有仅有AHA而无其他而无其他ANA，强烈支持，强烈支持DILv其他结缔组织病：其他结缔组织病：23-30%如：如：RA、PBC、SSc等等 核小体是真核细胞染色质的基核小体是真核细胞染色质的基本复制单位，由组蛋白与本复制单位，由组蛋白与DNA组成。组成。参与参与SLE发病机制：发病机制：多克隆多克隆B细胞活化剂细胞活化剂产生产生ANuA，先于其他，先于其他ANA促进抗促进抗dsDNA与与AHA形成形成参与参与LN的发生的发生 抗核小体抗体（ANuA）抗核小体抗体临床意义vSLE标记性标记性/高特异性自身抗体高特异性自身抗体 敏感性：敏感性：58%-66%（优于抗（
13、优于抗dsDNA及抗及抗Sm）特异性：特异性：98%-100%（与抗（与抗dsDNA相当）相当）v用于用于SLE的早期诊断的早期诊断 ANuA 的产生早于抗dsDNA、AHA 抗dsDNA阴性者有1/41/2 ANuA阳性v与与LN相关，用于相关，用于SLE疾病活动性监测疾病活动性监测ANuA、抗dsDNA、AHA联合检测意义抗抗ENAENA抗体抗体 extractable nuclear antigen v可提取性核抗原可提取性核抗原v成分：成分：核酸与核蛋白，不含染色质成分核酸与核蛋白，不含染色质成分v功能：参与细胞内功能：参与细胞内DNA复制、复制、RNA转录、蛋白翻译转录、蛋白翻译 合
14、成合成v来源：无种属差异，有组织不均一性来源：无种属差异，有组织不均一性v理化特性：对理化特性：对温度温度和和RNA酶酶敏感敏感（U1RNP、SS-A）v意义：抗意义：抗ENA抗体是抗体是ANAs中中范围最广范围最广、最为重要最为重要的的 一簇抗体，与一簇抗体，与疾病活动性大多无相关疾病活动性大多无相关 抗抗ENAENA抗体检测方法抗体检测方法v免疫双扩散法免疫双扩散法(ID)v对流免疫电泳法对流免疫电泳法(CIE)v免疫印迹法免疫印迹法(IBT)v酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法(ELISA)v蛋白芯片（蛋白芯片（Protein chip）38KD29KD28KD16.5KD15KD13.5KD
15、无 风 湿 病 相 关 抗 体SmR id、抗 体 阳 性红 斑 狼 疮 病 人 血 清86KD73KD60KD52KD45KD38KD32KD29KD28KD17.5KD16.5KD15KD13.5KD 抗抗SmSm抗体与抗抗体与抗U1RNPU1RNP抗体抗体v靶抗原靶抗原：位于位于细胞核内细胞核内的一组含尿嘧啶丰富的核糖核的一组含尿嘧啶丰富的核糖核蛋白，蛋白，Sm和和U1RNP是同一分子复合物中的不是同一分子复合物中的不同位点同位点抗抗SmSm抗体与抗抗体与抗U1RNPU1RNP抗体抗体v抗抗Sm：SLE的的标记性抗体标记性抗体，是前瞻性及回顾性诊断的指标。，是前瞻性及回顾性诊断的指标。阳
16、性率低：阳性率低：SLE（30%）v抗抗U1RNP：多种：多种CTD均可出现，与手指肿胀、雷诺现象、肌均可出现，与手指肿胀、雷诺现象、肌炎、指端硬化等相关，但肾炎发生率低。炎、指端硬化等相关，但肾炎发生率低。阳性率：阳性率：40-60%，其中，其中SLE(30-40%),SSc(14%),pSS(12%),PM/DM(15%)v高滴度抗高滴度抗U1RNP+抗抗Sm-MCTDv抗抗U1RNP+抗抗Sm+SLEv抗抗U1RNP-抗抗Sm+实验室误差实验室误差?U1RNP丢失丢失?抗抗rRNPrRNP抗体抗体v靶抗原：靶抗原：胞浆胞浆中中60S核糖体大亚基上的磷酸化蛋白核糖体大亚基上的磷酸化蛋白 抗
17、抗rRNPrRNP抗体抗体vSLE的的高度特异性抗体高度特异性抗体，与，与SLE脑病脑病相关相关v常在常在SLE活动期活动期存在存在,但不会随病情的缓解立但不会随病情的缓解立即消失即消失,可持续可持续1-2年后才转阴。年后才转阴。v阳性率：阳性率：24%v可出现在可出现在SLE 早期早期（ANA及抗及抗dsDNA阴性）阴性）抗抗SSASSA与抗与抗SSBSSB抗体抗体v靶抗原：位于同一小分子核糖核蛋白上的相邻结构靶抗原：位于同一小分子核糖核蛋白上的相邻结构 在不同的细胞周期，在细胞内的定位不同在不同的细胞周期，在细胞内的定位不同 （细胞核内和胞浆中细胞核内和胞浆中均可存在）均可存在）vpSS的
18、的SS-A存在于存在于细胞核细胞核内内 SLE的的SS-A存在于存在于胞浆胞浆中中 SS-B主要位于主要位于细胞核细胞核内内45KD 47KD48KD抗抗SSASSA与抗与抗SSBSSB抗体抗体v抗抗SS-A：结缔组织病中出现结缔组织病中出现频率最高频率最高的抗体（的抗体（60 -75%），见于），见于pSS（75%）SLE（25%）RA（10%）SSc（24%）PBC（20%）等）等v抗抗SSB：常与抗：常与抗SSA相伴出现，诊断相伴出现，诊断pSS更特异更特异，见于，见于 pSS（40%）、）、SLE（10%）v临床意义：与新生儿狼疮和先天性心脏传导阻滞、临床意义：与新生儿狼疮和先天性心脏
19、传导阻滞、平平 滑肌受累滑肌受累、光过敏、血管炎、光过敏、血管炎、皮损皮损、紫癜、紫癜、淋巴结肿大、淋巴结肿大、WBC减少有关减少有关vANA阴性的阴性的SCLE：常为抗：常为抗SSA 抗体阳性。抗体阳性。抗抗Jo-1Jo-1抗体抗体(抗抗PL-1PL-1抗体抗体)v靶抗原：组氨酸tRNA合成酶 胞浆中的磷酸蛋白抗抗Jo-1Jo-1抗体抗体(抗抗PL-1PL-1抗体抗体)vPM/DM的的标记抗体标记抗体，阳性率，阳性率20-30%v抗体效价与抗体效价与疾病活动性疾病活动性相关相关v抗抗Jo-1抗体综合征抗体综合征：急性发热：急性发热,对称性关节炎对称性关节炎,技工手技工手,雷诺现象雷诺现象,肌
20、炎（相对轻）肌炎（相对轻）,肺间质病变肺间质病变 v其他抗合成酶抗体：抗其他抗合成酶抗体：抗PL-7PL-7、抗抗PL-12PL-12、抗抗OJOJ、抗抗EJEJ抗抗ScL-70ScL-70抗体抗体v靶抗原：靶抗原：DNA拓朴异构酶拓朴异构酶I的降解产物的降解产物 主要存在主要存在核仁核仁中中vSSc的的标记抗体，标记抗体，阳性率阳性率20-30%v多见于多见于dSSc，病情进展快，提示，病情进展快，提示预后不良预后不良v与与ILD、弥漫性皮肤硬化弥漫性皮肤硬化有关，而有关，而PAH少见少见v主要靶抗原：着丝点蛋白主要靶抗原：着丝点蛋白-Bv多见于多见于ISSc，病程缓慢，提示，病程缓慢，提示
21、预后较好预后较好vCREST综合征综合征：软组织钙化（：软组织钙化（C）,雷诺现象（雷诺现象（R）,食道功食道功能障碍（能障碍（E）,指端硬化（指端硬化（S）,毛细血管扩张（毛细血管扩张（T），但），但并非并非标记抗体标记抗体，也见于孤立性雷诺现象，也见于孤立性雷诺现象、SS、PBC、AIH等v国外文献：与国外文献：与PAH相关，而相关，而ILD少见少见 中国人群：中国人群：未发现与未发现与PAH相关相关，但但ILD少见少见白伊娜，王迁等.中国系统性硬化症患者硬皮病相关自身抗体的检测及其临床意义.中华微生物学和免疫学杂志.2011（5）:452-455.抗着丝点抗体抗着丝点抗体(ACA)Tak
22、e Home MassageTake Home MassagevANA荧光核型对抗体性质范围有一定提示作荧光核型对抗体性质范围有一定提示作用，用，尤其尤其在靶抗原阴性时。在靶抗原阴性时。vANA阴性而靶抗原阳性主要见于抗阴性而靶抗原阳性主要见于抗胞浆成分胞浆成分抗体，如：抗体，如：SS-A、Jo-1、rRNP、线粒体等。、线粒体等。v抗抗核仁核仁型抗体常与型抗体常与SSc有关。有关。v抗抗均质均质型或型或核膜核膜型抗体常与型抗体常与SLE有关。有关。Take Home MassageTake Home Massagev抗抗dsDNA：SLE特异性抗体特异性抗体，与，与LN及疾病活动度及疾病活动
23、度 有关，至少有关，至少两种方法两种方法联合检测（如：联合检测（如：IIF法法+ELISA法）。法）。v抗核小体抗核小体、抗组蛋白抗组蛋白、抗抗dsDNA三抗体阳性者强烈三抗体阳性者强烈 提示增殖性提示增殖性LN。v与疾病活动性相关的抗体：与疾病活动性相关的抗体：抗抗dsDNA、抗核小体、抗核小体、抗组蛋白、抗抗组蛋白、抗Jo-1、抗、抗rRNPv与预后相关的抗体：与预后相关的抗体：抗抗Scl-70（差）、（差）、ACA（好）（好）案例1v女性，34岁v游走性多关节痛，雷诺现象半年vRF 56U/L；抗CCP抗体阴性；vANA 1：320v胸部CT：轻度肺间质病变v诊断？治疗？（核仁型）UCT
24、D ILD 发展为 SSc可能性大Pred+CTX案例2v男性，50岁v双腕关节炎、雷诺现象半年vANA全套：阴性；抗CCP、RF：阴性v胸部CT：轻度肺间质病变 右腕关节MRI：骨髓水肿和滑膜炎v诊断？复查：ANA阴性，抗Jo-1弱阳性诊断：抗Jo-1抗体综合征Pred+T案例3v女性 32岁 手指关节痛2月 v ANA（+）S1:80 抗SSA（+）135 抗Ro52（+）110v三大常规正常；ESR CRP 正常；补体正常；RF 87IU/ml；v诊断？治疗？CTD SLE待随诊，重用HCQ案例4v女性，40岁v4年前多浆膜腔积液、低补体血症、ANA 1：320、抗SS-A+、抗SS-B
25、+，诊断为“系统性红斑狼疮可能性大”，予“pred+CTX”治疗好转后“pred 10mg qod +HCQ”维持。v15天前新发面部皮疹（丘疹鳞屑型）、脱发；v尿常规：PRO 阴性；尿四蛋白：轻度增高；v补体下降（C3 50mg/dl C4 7.4mg/dl）；v抗dsDNA（IF）1：320 抗核小体+抗组蛋白+；v诊断？治疗？SLE，SLEDAI 8分，pred1mg/kg/day+CTX案例5v女，28岁，面部红斑，尿蛋白（+）；vANA 1:1280H；抗dsDNA（IF/ELISA）：1:40/800；C3 40mg/dl C4 6mg/dl；v诊断？治疗？v治疗半年后蛋白尿（+）；v ANA1:320H；抗dsDNA（IF/ELISA）：1:20/400；C3 66mg/dl C4 8mg/dl；v治疗？v治疗1年后蛋白尿（-）；vANA1:160H；抗dsDNA（IF/ELISA）：阴性/250；C3 86mg/dl C4 12mg/dl；v治疗？
