1、2.2 动物细胞工程2.2.1 动物细胞培养和核移植技术一、动物细胞培养n动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中让这些细胞生长和增值。那么，动物细胞培养的过程是怎样的呢？培养时又需要哪些条件呢？一、动物细胞培养n动物细胞培养的过程取组织块剪碎组织用酶，处理组织细胞悬浮液原代培养传代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶，使之分散成单个细胞用培养液稀释制成细胞悬浮液一、动物细胞培养n动物细胞培养的过程取样组织剪碎组织酶处理组织制成悬浮液原代培养n定义：动物组织经酶解消化后的初次培养。n细胞贴壁：悬液中分散的细胞贴附在瓶
2、壁上。n接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象一、动物细胞培养n动物细胞培养的过程取样组织剪碎组织酶处理组织制成悬浮液原代培养传代培养n贴壁细胞重新用胰蛋白酶处理，然后分瓶培养，让细胞继续增殖。1.一般传至10代后就不易传下去了。2.一般来说，10-50代时增殖逐渐减慢，以至于完全停止，这部分细胞核型可能会发生变化。3.目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。4.如若继续传代培养，少数细胞由于发生突变获得不死性，朝着癌细胞的方向发展。一、动物细胞培养n动物细胞培养的条件无菌无毒的环境营养温度和pH气体环境一、动物细胞培养
3、n动物细胞培养的条件无菌无毒的环境n首先，保证被培养的细胞处于无菌、无毒的环境，即对培养液、培养用具进行无菌处理。n通常在培养液中添加一定量的抗生素，防止污染。n此外，定期更换培养液，清除代谢产物，防止有害代谢产物积累对细胞自身造成危害。一、动物细胞培养n动物细胞培养的条件无菌无毒的环境营养n细胞体外培养所需营养物质与体内基本相同n合成培养基（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等）按所需种类和数量严格配置，并加血清、血浆等天然成分。一、动物细胞培养n动物细胞培养的条件无菌无毒的环境营养温度和pHn一般与动物体温相近36.5 0.5为宜n多数细胞生存的pH为7.2-7.4一、动物细胞培养n
4、动物细胞培养的条件无菌无毒的环境营养温度和pH气体环境nO2和CO2，维持细胞代谢和pHn混合气体培养箱95%空气加5%CO2一、动物细胞培养n动物细胞培养技术的应用提取免疫活性物质，病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等基因工程的受体细胞检测有毒物质，判断某物质的毒性培养正常细胞或病变细胞，用于生理、病理、药理研究二、动物体细胞核移植技术和克隆动物植物细胞动物细胞植物细胞全能性组织培养植物体？二、动物体细胞核移植技术和克隆动物n体细胞核移植（nuclear transfer）是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。
5、哺乳动物核移植胚胎细胞核移植（容易）体细胞核移植（较难）二、动物体细胞核移植技术和克隆动物n体细胞核移植的过程详见教材48页图2-21 体细胞核移植过程流程图1、为何要对M中期的次级卵母细胞去核？2、为何将供体细胞而不是供体细胞的核注入去核卵母细胞？3、诱导两细胞融合的方法是什么？4、激活受体细胞的方法是什么？二、动物体细胞核移植技术和克隆动物n体细胞核移植技术的应用前景畜牧业医药卫生其他领域二、动物体细胞核移植技术和克隆动物n体细胞核移植技术的应用前景畜牧业n加速家畜遗传改良，促进优良畜群繁育n保护濒危物种，增加濒危物种存活数量二、动物体细胞核移植技术和克隆动物n体细胞核移植技术的应用前景畜
6、牧业医药卫生n转基因克隆动物可作为生物反应器，生产要用蛋白；n转基因克隆动物细胞、组织、器官可作为异种移植的供体；n人的核移植胚胎干细胞经诱导分化，形成相应的组织、器官，用于组织器官移植二、动物体细胞核移植技术和克隆动物n体细胞核移植技术的应用前景畜牧业医药卫生其他领域n克隆动物和克隆细胞，可使人类更深入地了解胚胎发育及衰老过程；n用克隆动物做疾病模型，能使人们更好的追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病。二、动物体细胞核移植技术和克隆动物n体细胞核移植技术存在的问题成功率低n产下的克隆动物占移植克隆胚胎的比率平均不到10%。二、动物体细胞核移植技术和克隆动物n体细胞核移植技术存在的问题成功率低技术环节有待改进健康问题二、动物体细胞核移植技术和克隆动物n体细胞核移植技术存在的问题成功率低技术环节有待改进健康问题遗传和生理缺陷n体型过大、异常肥胖、发育困难、脏器缺陷、免疫失调等二、动物体细胞核移植技术和克隆动物n体细胞核移植技术存在的问题成功率低技术环节有待改进健康问题遗传和生理缺陷安全性问题存在争议
