1、病理学技术（中级）专业知识精讲班六、组织的透明和透明剂【掌握】（5）松油醇（6）丁香油【熟练掌握】（1）透明和透明剂（2）二甲苯（3）氯仿（4）香柏油（7）冬清油【熟练掌握】（1）透明和透明剂组织在无水乙醇内完全脱水后，置入石蜡前，用能与脱水剂及熔化的石蜡都能混溶的透明剂（如二甲苯）处理，透明剂能把组织内的脱水剂置换出来，组织全部为透明剂所填充，这时组织在光线下完全呈半透明状，称为组织透明。六、组织的透明和透明剂【熟练掌握】（1）透明和透明剂组织脱水后，因为脱水剂无水乙醇不能与熔化的石蜡相互混溶，石蜡不能把组织内的脱水剂置换出来，而熔化的石蜡也不可能渗入组织，因此，必须要用一种过渡的溶剂，即既
2、能与脱水剂无水乙醇相混溶而置换组织内的脱水剂，又能与熔化的石蜡相混溶，最后又被熔化的石蜡取代，这种过渡溶剂即透明剂。六、组织的透明和透明剂【掌握】（5）松油醇 紫丁香合成油的混合异构体，折光率1.48；不易使组织收缩及硬化，与酒精可混融；松油醇浸入212h后，更换新松油醇放置过夜。用苯漂洗30min洗去松油醇，而后进行浸蜡；用负压浸蜡法，让挥发的气泡升起，再浸蜡到预定时间即可包埋；六、组织的透明和透明剂【掌握】（6）丁香油 透明快，可从70%95%的酒精开始使用；浸泡时间长可使组织变脆，一般少用；对火棉胶有可溶性；可使阿尼林染料退色，一般少用。六、组织的透明和透明剂【熟练掌握】（2）二甲苯 最
3、普遍使用的透明剂；。无色透明气液体，有特殊刺激性气味，折光率为1.497，易燃烧，长期接触时对黏膜有刺激作用；不溶于水，但能与无水乙醇、丙酮混合，又能溶解石蜡和树脂；透明力强，作用快；六、组织的透明和透明剂【熟练掌握】（2）二甲苯 一般组织透明时间3060分钟，肾穿等小块组织为1525分钟。不会使苯胺染料退色，能溶解加拿大树胶，但不能溶解火棉胶。缺点：对组织的收缩性强，透明时间过长，可使组织变硬变脆，影响切片六、组织的透明和透明剂【熟练掌握】（3）氯仿 三氯甲烷，沸点6162，折光率为1.45；特殊气味，不易燃烧，有麻醉性，长期暴露于日光中易被氧化分解为极毒的光气；透明作用弱，透明时间长，对组
4、织收缩作用很小，不易使组织变硬变脆，多用于大块组织的透明；易蒸发，不易在石蜡内残留；缺点：不易观察组织的透明状态，难以判定组织的透明程度。六、组织的透明和透明剂【熟练掌握】（4）香柏油 折光率为1.51，能溶于酒精，是酒精脱水后的良好透明剂 对组织的收缩和硬化程度小，对组织的损害最小；透明时间长，多用于染色后的透明，一般不用于组织块的透明；对致密纤维或硬组织（如皮肤、子宫、肌肉和肌腱）的透明效果较好；香柏油的精制品常用作显微镜镜油。六、组织的透明和透明剂【熟练掌握】（7）冬清油 折光率1.4831.510 可用作骨组织石蜡切片的透明剂，常用冬青油和苯甲酸甲酯（5：3）的混合液进行透明六、组织的
5、透明和透明剂组织处理过程中，透明剂的作用是:（）A透明和硬化作用B透明和置换酒精作用C透明和软化组织作用D透明和固定作用E脱酒精和溶解石蜡作用【答案】E【解析】透明剂既可与脱水剂相溶又可与包埋剂相溶，起到媒介桥梁作用12高频考题高频考题下面哪种透明剂进行组织透明后，需用苯漂洗去除，然后进行浸蜡？（）A.水杨酸甲酯B.二甲苯C.香柏油D.氯仿E.松油醇【答案】E二甲苯是常用的常规透明剂，其折光指数为:（）A1.50B1.20C1.0D1.70E2.0【答案】A14高频考题高频考题对组织处理过程中，对二甲苯的描述错误的是（）。A.容易使组织变硬变脆B.二甲苯是常用的常规透明剂C.对组织的收缩性强D
6、.用二甲苯进行组织透明时间越长效果越好E.也常用于切片染色后的透明【答案】D高频考题氯仿作为组织处理过程中的透明剂，其特点是（）。A.主要用于小块组织透明B.透明能力强于二甲苯C.氯仿不易挥发D.透明能力不及二甲苯E.氯仿极易使组织变硬变脆【答案】D【解析】比二甲苯挥发快，渗透力较弱，对材料收缩也较小，能与酒精混合又能溶解石蜡。但能破坏染色。使用氯仿应逐渐增加浓度至纯氯仿高频考题既是组织处理过程中的透明剂，其精制品又常用作显微镜镜油的是（）。A.水杨酸甲酯和苯胺油B.二甲苯C.香柏油D.氯仿E.松油醇【答案】C高频考题下面的组织透明剂一般少用，而且能使阿尼林染料退色的是（）。A.水杨酸甲酯B.
7、丁香油C.香柏油D.氯仿E.松油醇【答案】B七、组织的包埋【熟练掌握】包埋的作用：意义、目的包埋，是把组织包埋于具有一定硬度的介质内才可借切片机切成菲薄的切片，然后才能进行染色、观察。组织在脱水、透明后，继续把组织浸透在一种介质内，这种介质必须是在常温下具有一定硬度的固体物质，当介质填充进组织内的空隙后，最后借一种工具把组织包埋起来，使之成为内外硬度一样的组织块。七、组织的包埋组织浸透和包埋介质有：石蜡、碳蜡（聚二乙醇）、明胶、火棉胶、环氧树脂等。常规病理制片，采用石蜡，故组织浸透称为组织浸蜡，组织包埋称为石蜡包埋。火棉胶浸透和包埋多用于制作眼球和肺脏等有空洞的组织。电镜标本组织切片，采用环氧
8、树脂浸透和包埋。超薄切片技术中，目前常用的包埋剂是:（）A.环氧树脂 B.石蜡 C.火棉胶 D.碳蜡 E.明胶【答案】A21高频考题八、组织切片法【了解】塑料切片法：应用超薄切片法：应用【掌握】火棉胶切片法：应用、切片机、注意事项大组织石蜡切片法：应用振动切片法：应用【熟练掌握】石蜡切片法：原理、一般切片厚度、常用切片机和切片刀、切片刀放置倾角、切片注意事项、适用范围冰冻切片法：原理、应用、种类、OCT的作用八、组织切片法【了解】塑料切片法的应用 切片方法与常规切片方法相同。可同时进行光镜和电镜检测，定位准确。切片厚度可达0.52m（半薄切片）。主要用于免疫电镜的超薄切片前定位。包埋前染色的标
9、本，切半薄切片后不需染色，直接在相差显微镜下观察。免疫反应部位呈黑点状，定位后进一步做超薄切片，可明显提高免疫电镜阳性检出率。八、组织切片法【了解】超薄切片法的应用用于电镜标本的制备。常用的超薄切片厚度是50nm。八、组织切片法【掌握】火棉胶切片法：应用适用于大块或较坚硬的组织，常用于眼球、内耳、肌腱、脱钙骨、软骨成骨、膜内成骨和神经组织的许多特殊染色方法法制片过程不经过加温包埋，故减少了组织收缩缺点：制片时间长，切片厚，操作复杂。八、组织切片法【掌握】火棉胶切片法：切片机 多为滑动式切片机，有斜面式和垂直式两种，一般很少用于连续切片，多用于进行眼球、内耳、脊髓和脑的切片，这种切片较厚，可达2
10、050m。使用滑动式切片机，切片前应检查切片机情况，保证刀片锋利，无缺口，胶块硬度也应合适。切片刀与滑行轨道的角度以2040为好，组织较硬者，角度要小。清除角（刀刃与胶块平面的夹角）为46。切连续切片时，切好的胶片应先放在70%或80%的酒精中，而不是立即贴在载玻片上。八、组织切片法【掌握】火棉胶切片法：注意事项 用火棉胶包埋的组织块，在切片前后均应保存在70%酒精中，防止火棉胶继续挥发，影响硬度。切片时也应随时用70%或80%酒精涂在火棉胶组织块和切片刀上，保持一定的湿度和硬度。在支持器上固定火棉胶组织块的方法是用乙醚先溶解组织块的底部，而后用8%的液体火棉胶粘贴组织块八、组织切片法【掌握】
11、大组织石蜡切片法：应用 可观察完整的组织病变情况，以及保持结构上的连续性。有时在病理诊断上有重要的意义。因为有些病变在肉眼无法分辨正常组织和病变组织的界限，尤其像甲状腺组织肿瘤，观察有无包膜浸润或包膜是否完整，如不用大组织块，则必须将一完整肿瘤的断面分成若干小组织块，如果包埋不当或切面不正，则无法全面观察病变组织的分布情况而影响诊断。八、组织切片法【掌握】振动切片法：应用用震动切片机，可把新鲜组织（不固定、不冰冻）切成厚20100m的切片。可用漂染法在反应板进行免疫组织化学染色，而后在解剖显微镜下检出免疫反应阳性部位。经修整组织，进行后固定，再按电镜样本制备、脱水、包埋、超薄切片和染色观察。可
12、较好地保存组织内脂溶性物质和细胞膜抗原，用于显示神经系统抗原分布。这种切片法尤其适用于免疫电镜观察。八、组织切片法【熟练掌握】石蜡切片法：原理：组织经石蜡包埋后制成的蜡块，用切片机制成切片的过程称为石蜡切片法。石蜡切片法是以石蜡作包埋剂，用旋转切片机将材料切成薄片，经一系列处理制成永久制片的方法。一般切片厚度：一般切46m的切片，特殊情况可切12m。要观察病变的连续性可制作连续切片。八、组织切片法【熟练掌握】石蜡切片法：切片机：按基本运行方式分为旋转式切片机，摆动式切片机，雪橇式切片机，滑动式切片机等，最常见的是旋转式切片机。切片刀分两类：可重复使用的通常称切片刀，B、C型刀用于石蜡切片法。一
13、次性的称一次性刀片，分窄型、宽型，长度为80mm，宽度为8mm及10mm。切片刀放置倾角：以2030为好，倾角过大切片上卷，不能连在一起，过小则切片皱起。八、组织切片法【熟练掌握】石蜡切片法：切片注意事项1、切片前要把切片机上有关的各螺旋拧紧，如没有拧紧或包埋的组织蜡块过硬，切片时就会出现跳刀，使蜡片成一截厚一截薄，甚至切不出完整的蜡片。2、切片的厚度应为34m，对一些组织如淋巴结、鼻咽和扁桃体，切片的厚度应为23m，脂肪等组织要切厚一些，厚度为56m。3、如用金属框包埋的组织蜡块，必须把四边修整平行，否则在切片时就会切出弯曲的组织蜡片带。八、组织切片法【熟练掌握】石蜡切片法：切片注意事项4、
14、切片用毛笔应选用松软毛的水彩画笔，清扫切片刀上的蜡屑时应顺着刀背往刀锋扫，避免刀锋切割笔毛，损坏刀锋。5、切片时转动切片手轮或推拉切片刀的动作要轻，用力均匀。若用力太猛和速度太快，将会引起切片压缩，也易导致轮转式切片机齿轮的磨损。6、切片时室温不宜过高，一般先把组织蜡块面朝下放在冰块上冷冻数分钟后才切开，可切出较薄的切片。八、组织切片法【熟练掌握】石蜡切片法：切片注意事项7、若天气太冷，切片时组织蜡片容易碎裂，对着组织蜡块面呵一口气后进行切片，可改善组织蜡片容易碎裂的情况，但所切出的第一、二张组织蜡片厚度会比原来设定的切片厚度稍厚一些，因此，前一、二张切出的组织蜡片不要。八、组织切片法【熟练掌
15、握】石蜡切片法：切片注意事项8、切片刀是否锋利，是能否切出薄而平整组织蜡片的关键。切片刀锋利时，切出的组织蜡片平整没有皱折和收缩。切片刀经过切片后，刀锋不再十分锋利时，切出的组织蜡片会有些皱折，但没有收缩，皱折可以在摊片时打开。如果刀锋不再锋利时，切出的组织蜡片较厚，既有皱折也有收缩，这时应该更换刀锋。八、组织切片法【熟练掌握】石蜡切片法：切片注意事项9、切出的切片有两面，一面朝下紧贴切片刀，反光（光面），另一面向上，不反光。摊片时，应将光面朝下放入水中，否则切片容易产生皱折和气泡。10、理想的切片应做到切片完整、较薄和均匀、无皱折、无刀痕、贴片恰当。11、每切完一个组织蜡块，应将切片刀上的组
16、织碎屑扫干净，避免污染下一例标本。切片的组织污染会导致误诊的严重后果，应特别小心。八、组织切片法【熟练掌握】石蜡切片法：切片注意事项12、用旧刀锋修切出蜡块的组织面，再用新刀锋切片，可节省刀片，但会增加切片操作的时间。13、切片后的组织蜡块在归档保存之前要用70左右的熔化石蜡将蜡块的切面封上一层蜡膜，蜡膜应该与蜡块完全融合一起，以利于组织蜡块长时间保存，否则暴露在外的组织容易受潮、长霉或被虫蛀八、组织切片法【熟练掌握】石蜡切片法：适用范围八、组织切片法【熟练掌握】冰冻切片法：原理在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法八、组织切片法【熟练掌握】冰冻切片法：应用、种类应用：对临床
17、手术病人的术中快速病理诊断尤其具有重要意义。冰冻切片制作时不经各级酒精的脱水，二甲苯的透明过程，因此对脂肪和类脂的保存较好，在进行脂肪染色和神经组织髓鞘的染色常用。种类：直接冰冻切片法、明胶冰冻切片法八、组织切片法【熟练掌握】冰冻切片法：OCT的作用OCT(optim alcutting tem perature)包埋剂是一种聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物，广泛用于免疫组化实验室中，用其包埋组织速冻后与组织固定成形，增加组织的连续性，减少皱折及碎裂，有利于保存其组织结构完整性，便于其形态结构的分析。又因OCT混合物为水溶性，故在漂片时可溶于水，所以在以后的染色中不会增加背景染色。高频考题石蜡
18、切片法一般常规切片厚度为A12m B68mC1m以下 D46mE8m以上【答案】D高频考题转式切片机切取组织，由下向上切，为得到完整切片，防止组织出现刀纹裂缝，应该将（）。A.皮肤组织的表皮部分向下，胃肠组织的浆膜面向上B.皮肤组织的表皮部分向上，胃肠组织的浆膜面向上C.皮肤组织的表皮部分向下，胃肠组织的浆膜面向下D.皮肤组织的表皮部分向上，胃肠组织的浆膜面向下E.皮肤组织，胃肠组织哪面向上下都可以【答案】B高频考题影响切片的质量因素中不包括（）。A.组织固定不及时B.取材时组织块的大、固定液不足C.切片时环境的温度D.组织块的陈旧、腐败、干枯E.以上各项均包括【答案】E高频考题制作冷冻切片使
19、用OCT包埋剂的目的是：（）A进行固定 B加强透明C加强染色D支持硬化E防止脱片【答案】D高频考题（共用备选答案）A.超薄切片B.冷冻切片法C.震动切片D.火棉胶切片法E.石蜡切片法缺点是制片过程很容易造成组织内抗原性的丧失（E）在进行脂肪染色和神经组织髓鞘染色中常用（B）最适合用于免疫电镜观察（C）用于电镜标本制备（A）保存组织内脂溶性物质和细胞膜抗原效果好，用于显示神经系统抗原分布（C）高频考题【解析】A.超薄切片：由于电镜产生的电子束穿透能力很弱，必须把标本切成厚度小于0.1um以下的薄片才能适用，这种薄片称为超薄切片。B.冷冻切片法：用于快速诊断；因制片时不经酒精、二甲苯处理，故对脂肪
20、和类脂保存较好，常用于脂肪染色和神经组织髓鞘的染色。C.震动切片：组织不冰冻，无冰晶形成和组织抗原破坏，在免疫组化染色前避免了组织脱水、透明、包埋等步骤对抗原的损害，能较好地保留组织内脂溶性物质和细胞膜抗原，主要用于显示神经系统抗原分布研究，尤其适用于免疫电镜观察。高频考题【解析】D.火棉胶切片法：优点：包埋不用二甲苯及石蜡，不经高温，可避免组织收缩及变脆，适用于精细材料（脑）的切片、大块组织、多空洞组织（脑、眼球）、硬度较高组织（骨、肌腱）、较大结构（如眼球、睾丸等）。缺点：不能遇水，包埋时间久，不易制成连片，切片较厚。E.石蜡切片法：优点：组织结构保存良好，能切连续薄片，组织结构清晰，抗原
21、定位准确。缺点：制片过程中要经过有机溶剂处理，组织内抗原活性失去较多。【掌握】生物染料：发色团、助色团染料的分类：天然染料、合成染料、酸性染料、碱性染料九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】染料作用原理：物理作用、化学作用细胞染色的一般原理：蛋白质的染色原理、核酸的染色原理细胞质的染色原理：胞浆的主要成分、胞浆电荷与染料着色细胞膜的染色原理：成分、带电荷与染料染色HE染色的原理：细胞核染色的原理、细胞质染色的原理、HE染色中二甲苯、乙醇和水洗的作用、HE染色中分化与蓝化的作用、石蜡切片和HE染色的质量标准九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法未经染色的组织切片和细胞涂片不能
22、直接在光学显微镜下观察，即使是显微镜有足够的分辨率和合适的放大倍数。通过染色使标本的各个部分对染色剂显示不同的颜色，增大了各部分结构折射率的差别，从而提高了标本各部分在光学显微镜下的分辨率。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法 染料从来源上可分为天然染料（如苏木精、卡红、巴西木精）和人工合成染料；从化学组成上分为无机染料和有机染料。常用的染料主要是人工合成的煤焦油染料。这些有机化合物必须自身具有颜色，同时与被染物质分子间有一定的亲和力方能称为染料。染料的颜色和与被染物分子间的亲和力是由染料的分子结构决定的。在染料分子中有使其产生颜色的“发色团”，和使染料颜色加深的并与被染物物之间产生亲和
23、力的“助色团”。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【掌握】生物染料：发色团使有机分子产生颜色的含有不饱和键的基团称为“发色团”，也称生色团。将发色团引入分子之后可使有机化合物选择性吸收光谱向长波长移动，即从肉眼不可见的紫外光区移向可见光区，从而使分子显色。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【掌握】生物染料：助色团能够使染料分子颜色加深，极性加大，并与被染物质分子间形成亲和力的基团称为“助色团”。作用：1、使染料分子与被染物质分子间产生亲和力是助色团最主要的作用。2、助色团使染料分子色度加深。3、助色团使染料分子极性增强，易离子化。离子化可以与碱或酸成盐，易溶于水并电离成正负离子
24、，促进染料与被染物分子间的结合。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【掌握】染料的分类：天然染料是从动植物组织中提取出来的一类染料，如：苏木精南美洲的一种苏木的干枝中提取出来 胭脂红（又称卡红）从昆虫胭脂虫的组织中提取出来 靛青 地衣红 番红花九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【掌握】染料的分类：合成染料从煤焦油中提取苯的衍生物。常见的有：亚硝基染料类：发色团为亚硝基。萘酚绿-B 硝基染料类：发色团为硝基。苦味酸，萘酚黄-S、马汀黄、分散橙-25、分散红13 偶氮染料：发色团为偶氮基。偶氮红、偶氮焰红、刚果红、丽春红、萘红、比布列西猩红、波尔多红、锥红、偶氮蓝、红光酸性蓝、维多利
25、亚绿-G、詹那斯绿-B、红光酸性橙、橙黄-G、桔豆，印度黄酸性间胺黄，俾士麦棕、苯红紫-4B、苏丹-、苏丹黑-B、苏丹棕、油红-O。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【掌握】染料的分类：合成染料 重氮盐类：重氮盐 坚牢红-B盐、四重氮盐坚牢蓝-B盐、四氮唑盐硝基四氮唑蓝（NBT）等。醌亚胺染料：两个发色团：亚胺基、醌基。中性红、麦答刺红、甲苯胺蓝、美蓝、倍酸青蓝、天青石蓝、尼罗蓝、萘酚蓝、硫堇、亚甲绿、沙黄、亚甲紫、焦油紫、天青等 苯甲烷类染料：发色团为醌基。碱性品红、苯胺兰、二甲苯蓝、依思明蓝、亮绿、碘绿、黄色浅绿-SF、孔雀绿、甲基绿、结晶紫、霍夫曼紫、乙基紫、龙胆紫、甲基紫等。九
26、、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【掌握】染料的分类：合成染料叮类染料：发色团为醌基。伊红-Y、伊红-B、吡罗红、焰红、赤鲜红（藻红）、玫瑰红-B（罗丹明-B）、吖啶红、吖啶橙、吖啶黄等。蒽醌染料：发色团为醌基。茜素红、胭脂红酸（天然染料）、茜素绿、苏丹紫、茜素蓝等。噻唑类染料：发色团为胺基、偶氮基。噻唑黄G、达旦黄（钛黄）、樱草黄等。喹啉类染料：发色团为醌型结构喹啉环。花青素。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【掌握】染料的分类：酸性染料指含有酸性助色团、刚果红、水溶性苯胺兰、甲基蓝、坚牢绿与碱作用成盐，其水溶液电离出的有色离子为阴离子的染料。多作为胞浆染色剂。苦味酸、伊红、酸
27、性品红-FC、橙黄-G。伊红-Y：酸性助色团为羟基，与NaOH作用成钠盐。电离后有色离子为阴离子。橙黄-G：酸性助色团为黄酸基和羟基，与Na2CO3作用后只有黄酸基成钠盐。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【掌握】染料的分类：碱性染料色碱。含有碱性助色团，其水溶液不一定显碱性，而是与酸能成盐，电离后有色离子为阳离子，这类染料一般能溶于水和乙醇。多作为胞核染色剂。苏木红（天然染料）、中性红、美蓝、甲基绿、孔雀绿、沙黄、甲苯胺蓝、尼罗蓝（耐尔蓝）等。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法酸性染料有时为弱酸强碱盐（色酸为弱酸与强碱作用成盐），溶于
28、水后发生水解反应使溶液呈碱性，但它们却属于酸性染料；碱性染料有时为弱碱强酸盐（色碱为弱碱与强酸成盐），溶于水后发生水解反应使溶液呈酸性但它们确实属于碱性染料。所以不能以染料的水溶液的酸碱性来判断一种应以在水溶液中电离情况做标准，色离子为阴离子的为酸性染料，色离子为阳离子的为碱性染料。【熟练掌握】染料作用原理：物理作用1、毛细现象：组织有许多的微孔，就可借助毛细管作用与染料接触，这相当于混合，结合的不牢，不能称为染色。但染色过程它是第一步。2、吸附作用：一种物质从它的周围把另一种物质的分子、原子、离子集中在界面上的过程叫吸附作用。吸附物并不透进吸附剂内部。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方
29、法【熟练掌握】染料作用原理：物理作用物理吸附范德华力，作用弱、吸附为多分子层、无选择性。吸附热小，吸附速度快。多在低温下进行吸附。化学吸附形成化学键的结果。作用力强，是单分子层吸附、有选择性、吸附热大、吸附速度慢。多在较高的温度下进行。3、吸收作用：吸附质进入了吸附剂的内部并均匀地分布在其中。吸附和吸收统称为吸着。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】染料作用原理：物理作用4、分子间的作用力：范德华力。分类：取向力：极性分子是一个偶极子，在电场中它的阳极和阴极会分别指向电场的阴极和阳极。这种现象叫极性分子的取向极化。极性分子具有永久偶极，当两个极性分子靠近时，它们的异极相吸，同
30、极相斥，使之在空间形成定向排列，这一过程称为取向。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】染料作用原理：物理作用由于极性分子间取向而产生的永久偶极间的静电引力称为取向力。极性分子在取向的同时也会发生变形极化，使原来的偶极增加，使分子间作用力增加。分子的极性（偶极矩）愈大，取向力愈大；温度愈高，取向力愈小；分子间距离越大，取向力迅速降低。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】染料作用原理：物理作用诱导力：当极性分子与非极性分子靠近时，如果非极性分子与极性分子带正电的一端相接近，非极性分子中的电子云会被吸引而变形（极化）。结果使非极性分子中的正负电荷重心发生相对位移，
31、产生诱导偶极。极性分子的永久偶极和非极性分子的诱导偶极之间的相互作用力，叫诱导力。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】染料作用原理：物理作用色散力：在两个非极性分子之间，取向力和诱导力是不能直接产生的。但是，由于分子中的电子不断运动和原子核的不断振动，会使电子云和原子核之间产生瞬时相对位移，是非极性分子中的正负电荷重心不重合，产生瞬时偶极。这些瞬时偶极就会使相邻分子的瞬时偶极产生取向极化，于是在异极之间产生吸引力，这种非极性分子间由于瞬时偶极的作用而引起的分子间的吸引力叫做色散力。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】染料作用原理：物理作用色散力的大小和相互作
32、用的分子的变形性有关，变形性越大，色散力越强；分子的质量越大，包含的电子越多，变形越容易，色散力就越强。在非极性分子之间只有色散力；在极性分子和非极性分子之间既有色散力又有诱导力；在极性分子之间则有色散力、诱导力、取向力三种力。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】染料作用原理：化学作用1、化学物质的特性基团组织和细胞内化学物质的分子内含有酸性、碱性和两性基团。酸性基团：羟基、巯基、羧基、一价磷酸基 碱性基团：氨基、亚氨基、二甲氨基、胍基、脲基、脒基、咪唑基、嘌呤碱基、嘧啶碱基 两性基团：蛋白质含氨基和羧基九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】染料作用原理：化学
33、作用2、细胞内化学物质与染料的结合方式一定条件下，被染物质的分子以这些基团与染料分子的助色团发生化学结合而染色。结合方式主要有：离子键：成盐反应：盐在水溶液中电离成正负离子；离子交换 共价键：可使被染物质分子与染料分子发生很牢固的结合 氢键：九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】细胞染色的一般原理：蛋白质的染色原理蛋白质分子中的氨基酸残基含有酸性基团或碱性基团，它可以与染料分子以离子键、氢键或配价键结合。蛋白质的两性电离受环境的pH值影响，若pH值等电点（PI），蛋白质此时带负电，有利于碱性染料以离子键相结合。反之pH值PI，蛋白质带正电荷，可与酸性染料相结合。九、染色的原理、
34、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】细胞染色的一般原理：核酸的染色原理DNA双螺旋结构中，两条核酸链上的磷酸基向外，并电离为负离子使DNA双螺旋的外侧带负电荷，因此容易和带正电荷的碱性染料以及媒染染料以离子键或氢键相结合。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】细胞染色的一般原理：核酸的染色原理1、核仁的染色：核仁的主要成分是蛋白质，其中组蛋白相当多。组蛋白是一种碱性蛋白，核酸RNA的磷酸基电离后带负电荷，但由于组蛋白含量高，电离后使核仁带正电，易与带负电荷的酸性染料色阴离子以离子键相结合。实际上并非所有的细胞核上都带正电荷，例如神经细胞的核仁则具有两重性，即可为酸性染料染色，
35、又可与碱性染料结合。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】细胞染色的一般原理：核酸的染色原理2、染色体的染色：染色体的主要化学成分为呈酸性的DNA、RNA和酸性蛋白以及呈碱性的组蛋白。染色体的PI值约3.33.6，而染色体的环境pH值在7.57.8，染色体成酸式电离，带负电。因此染色体中存在着DNA、RNA的磷酸根负离子和酸性蛋白的负离子，易被电离后色离子带正电的碱性染料染色。如苏木精、甲基绿、吡罗红、碱性荧光染料、吖啶橙等染色。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】细胞染色的一般原理：核酸的染色原理核蛋白分子与染料以离子键、氢键结合；DNA水解后，脱氧核糖分子
36、中的的醛基还可以与无色品红试剂（schiff试剂）反应呈红色。3、核质的染色：核质的主要化学成分为碱性蛋白质，电离后带正电荷，易与电离后带负电荷的酸性染料结合。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】细胞质的染色原理：胞浆的主要成分胞浆的主要化学成分是蛋白质，其次是RNA和脂蛋白等，多为两性化合物。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】细胞质的染色原理：胞浆电荷与染料着色胞浆的PI值约4.75.0。胞浆的染色与pH值密切相关。胞浆pH=PI，胞浆呈兼性离子对外不显电性，此时酸性染料和碱性染料均很难使胞浆染色。胞浆pH=6.76.8PI，呈酸式电离，成为带负电荷的阴
37、离子，可被碱性染料染色，与胞核同时染色，胞核和胞浆难以区分。胞浆pH4.7PI，呈碱式电离，带正电荷，可被带负电的酸性染料色阴离子染色，与胞核分开。胞浆pH3.3（染色体的PI），染色体和胞浆均呈碱式电离，此时胞浆、胞核和染色体分不开。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】细胞质的染色原理：胞浆电荷与染料着色因此，染色时pH值=3.64.7，此时胞核带负电荷为碱性染料染色，胞浆带正电荷为酸性染料染色。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法3.65.04.7胞浆染色体【熟练掌握】细胞膜的染色原理：成分、带电荷与染料染色成分：主要为类脂（胆固醇、磷脂、糖脂）和蛋白质，形成流动镶
38、嵌脂质双层结构。带电荷与染料染色：膜的外表面分布有糖脂、磷脂、蛋白质分子，含较多的极性基团如-O-、-S-、-COO-等负电基团，和氨基、二甲氨基等正电基团。负电基团占优势，总结果使细胞膜外表面带负电，易被碱性染料染色。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】HE染色的原理：细胞核染色的原理细胞核内的染色质只要是去氧核醣核酸（DNA），DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】HE染色的原理：细胞质染
39、色的原理细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与pH值有密切关系，需将pH值调到胞浆等电点以下、胞核等电点以上，胞浆带正电荷，就可以被带负电荷（阴离子）的染料染色。伊红-Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。伊红是细胞浆的良好染料。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】HE染色的原理：HE染色中二甲苯、乙醇和水洗的作用1、二甲苯的作用：石蜡切片的常规染色必须先用二甲苯脱去切片中的石蜡，其作用是
40、二甲苯可以溶解切片中的石蜡，以使染料易于进入细胞和组织，因为石蜡的存在妨碍水和染料进入细胞。染色后二甲苯起透明切片的作用，以利于光线的透过。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】HE染色的原理：HE染色中二甲苯、乙醇和水洗的作用2、乙醇的作用：酒精用于苏木精染色前由高浓度向低浓度逐渐下降处理切片，是为了洗脱用于脱蜡的二甲苯，使水能进入细胞和组织中，因为纯酒精可以和二甲苯互溶，二甲苯经过二次纯酒精的洗涤完全被除去，再经过95%、80%酒精使水分逐渐进入切片，以免引起细胞形态结构的人工改变。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】HE染色的原理：HE染色中二甲苯、乙醇
41、和水洗的作用伊红染色以后的酒精由低浓度80%、90%、95%酒精向100%酒精逐渐过度是为了逐渐脱去组织中的水洗，为二甲苯进入细胞创造条件，这时必须彻底脱水，否则二甲苯不能进入细胞，组织切片透明度达不到光学显微镜观察时透光度的要求，在显微镜下不能显示清晰的细胞和组织结构。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】HE染色的原理：HE染色中二甲苯、乙醇和水洗的作用3、水洗的作用：在脱蜡经酒精处理之后，用水洗切片，是切片中进入水，才能使苏木精染液进入细胞核中，使细胞核染色。染色之后的水洗作用是为洗去未与切片结合的染液。分化以后的水洗则是为了除去分化液和脱下的染料，终止分化作用。在伊红染
42、色之后也可以用水洗去未结合的染液，以防止大量伊红染液进入脱水的酒精中。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】HE染色的原理：HE染色中分化与蓝化的作用1、分化作用：苏木精染色之后，用水洗去未结合在切片中的染液，但是在细胞核中结合过多的染液和细胞浆中吸附的染料必须用分化液1%盐酸酒精脱去，才能保证细胞核和细胞浆染色的分明，把这个过程称为染色的分化作用。但因酸能破坏苏木精的醌型结构，使色素与组织解离，分化不可过度。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】HE染色的原理：HE染色中分化与蓝化的作用2、蓝化作用：分化之后苏木精在酸性条件下处于红色离子状态，在碱性条件下则处
43、于蓝色离子状态，而呈蓝色。所以分化之后用水洗除去酸而终止分化，再用弱碱性水使苏木精染上的细胞核变成蓝色，称为蓝化作用。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法【熟练掌握】HE染色的原理：石蜡切片和HE染色的质量标准1、切片完整，厚度46m，薄厚均匀，无褶无刀痕2、染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。九、染色的原理、生物染料和常规HE染色方法高频考题助色团的最主要作用是使染料分子：（）A.极性增强 B.变色 C.颜色加深 D.与被染分子间产生亲和力 E.变为碱性【答案】D【解析】助色团的最主要作用是使染料分子与被染分子间产生亲和力89高频考题属于非核染色剂的染料的是：（）A.苏木素B.
44、伊红C.甲紫D.甲基绿E.中性红【答案】B【解析】伊红用于细胞浆染色90HE染色细胞核染成蓝色是由于：（）A.细胞核内的DNA两条链的磷酸基向外，带正电荷，呈酸性，与带负电荷的苏木精碱性染料结合而被染色B.细胞核内的DNA两条链的磷酸基向外，带负电荷，呈碱性，与带正电荷的苏木精酸性染料结合而被染色C.细胞核内的DNA两条链的磷酸基向内，带负电荷，呈酸性，与带正电荷的苏木精碱性染料结合而被染色D.细胞核内的DNA两条链的磷酸基向外，带正电荷，呈碱性，与带负电荷的苏木精酸性染料结合而被染色E.细胞核内的DNA两条链的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，与带正电荷的苏木精碱性染料结合而被染色【答案】E91
45、高频考题高频考题HE染色中二甲苯和乙醇的作用错误的是：（）A.二甲苯溶解切片中的石蜡，使染料易于进入细胞和组织B.染色后二甲苯起透明切片的作用，利于光线的透过C.乙醇用于苏木精染色前是为了洗脱用于脱蜡的二甲苯D.伊红染色后乙醇是为了脱去组织中的水E.组织切片透明度与脱水是否彻底无关系【答案】E92高频考题关于水洗的作用错误的是：（）A.脱蜡经乙醇处理后，水洗切片能使苏木精进入胞核内B.脱蜡经乙醇处理后，水洗切片能使伊红进入胞质内C.染色之后水洗作用是去除未结合的染液D.分化以后水洗是为了除去分化液和脱下的染料E.伊红染色后水洗是防止未结合染液进入脱水的乙醇中【答案】B93高频考题染色过程中，错
46、误的是：（）A.一般情况下在新配的苏木精液中只需染1分钟左右B.根据染片的多少，逐步把时间缩短C.苏木精染色后，不在水中和盐酸乙醇停留过长D.切片分化程度应在镜下观察E.分化过度，应水洗后重新染色，再水洗分化【答案】B94高频考题细胞质的染色与pH的关系不正确的是：（）A.pH调到蛋白质等电点6.76.8时，胞核易染色B.pH调到蛋白质等电点4.75.0时，酸性染料不易染色C.pH调到蛋白质等电点6.76.8时，胞质易染色D.pH调到蛋白质等电点4.75.0时，碱性染料不易染色E.pH调到蛋白质等电点6.76.8时，胞核不易染色【答案】E95高频考题下列哪种物质不能在蓝化作用中使用？（）A.稀
47、氨水B.弱碱性水C.自来水D.弱酸性水E.温水【答案】D【解析】弱酸性水不能在蓝化作用中使用。96高频考题染色过程中关于脱蜡的描述不正确的是：（）A.组织切片脱蜡要彻底B.石蜡切片必须经过脱蜡后才能染色C.二甲苯的新鲜与否不影响脱蜡的效果D.脱蜡前切片经过烘烤E.脱蜡主要取决于二甲苯的温度和时间【答案】C97高频考题下列常规石蜡切片和HE染色的质量标准规定不包括:()A.染色核质分明，红蓝适度B.形状规则，切片完整C.无褶无刀痕D.薄厚均匀，厚度46mE.透明洁净，封裱美观【答案】B【解析】常规石蜡切片和HE染色的质量标准（全国统一评定标准）规定包括：切片完整，厚度46m，薄厚均匀，无褶无刀痕
48、；染色核质分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观，而不包括形状的要求。9899十 显微镜及摄影技术【掌握】显微镜光学原理：折射与折射率、透镜的性能、影响成像的因素显微镜的重要技术参数：数值孔径、分辨率、放大率、焦深、视场直经、覆盖差、工作距离显微镜的光学附件：物镜及种类、目镜、聚光镜显微镜的照明装置：透射式照明、落射式照明显微镜的光轴调节：光源灯丝调节、聚光镜的中心调节【掌握】显微镜的种类：明视野显微镜应用、暗视野显微镜应 用、相差显微镜应用、微分干涉显微镜应用、荧光显 微镜应用、偏光显微镜应用、倒置显微镜应用、体视 显微镜应用、激光共聚焦显微镜应用十 显微镜及摄影技术101十 显微镜及摄影技术【
49、掌握】显微镜光学原理：折射与折射率光线在均匀的各向同性介质中，两点之间以直线传播，当通过不同密度介质的透明物体时，由于光在不同介质的传播速度不同，则发生折射现象。当与透明物面不垂直的光线由空气射入透明物体（如玻璃）时，光线在其界面改变了方向，并和法线构成折射角，入射角的正弦值与折射角的正弦值的比值叫做介质的“绝对折射率”，简称“折射率”。它表示光在介质中传播时，介质对光的一种特征。102十 显微镜及摄影技术【掌握】显微镜光学原理：透镜的性能透镜是组成显微镜光学系统的最基本的光学元件，物镜、目镜及聚光镜等部件均由单个和多个透镜组成。当一束平行于光轴的光线通过凸透镜后相交于一点，这个点称“焦点”，
50、通过交点并垂直光轴的平面，称“焦平面”。光线通过凹透镜后，成正立虚像，而凸透镜则成正立实像。实像可在屏幕上显现出来，而虚像不能。103十 显微镜及摄影技术【掌握】显微镜光学原理：影响成像的因素相差由于客观条件，任何光学系统都不能生成理论上理想的像，各种相差的存在影响了成像质量。1、色差色差是透镜成像的一个严重缺陷，发生在多色光为光源的情况下，单色光不产生色差。白光由红橙黄绿青蓝紫七种组成，各种光的波长不同，所以在通过透镜时的折射率也不同，这样物方一个点，在像方则可能形成一个色斑色差一般有位置色差，放大率色差。位置色差使像在任何位置观察，都带有色斑或晕环，使像模糊不清。而放大率色差使像带有彩色边
