1、1 什么是质粒1.1 定义和命名质粒是染色体以外能自主复制的遗传因子，不具有胞外期，对寄主细胞来说是非必需的，符合这三条标准的染色体外DNA或RNA分子都可以称为质粒。狭义的质粒一般是指细菌染色体外的环状DNA分子。质粒的命名：一个小写字母 p 加 2-3 个大写字母和数字，如 pJP4，pDTG1。2 质粒的复制、分配和不相容性2.1 复制(Replication)质粒的复制起始和拷贝数是由质粒DNA序列控制的。质粒分子中为质粒复制所必需的最小区段称为基本复制子，它由两部分组成，一是复制原点(ori)，二是调节复制起始的基因（编码蛋白质或RNA)。图图2-10 阿特拉津氯水解酶基因阿特拉津氯
2、水解酶基因atzA的定位的定位7 质粒测序和基因注释(annotation)质粒测序：用鸟枪克隆法，将纯化的质粒用超声波打碎，用琼脂糖凝胶电泳分离 1-kb片段，补平片段末端，与平末端pUC18连接，电转化 E.coli DH5，筛选有插入片段的转化子，测定克隆片段的序列，根据测序结果拼接质粒序列，空缺部分用PCR方法补齐并测序。质粒基因注释：向GenBank注册质粒序列，报告每个编码序列（CDS，或称ORF）的基因名称、位置、功能和翻译产物。图图2-21 瞬时表达载体瞬时表达载体pMSG图图2-22 制备等基因表达的制备等基因表达的 Flp-InTM 寄主细胞系寄主细胞系(invitrogen 公司公司)图图2-23 制备制备 Flp-InTM 表达细胞系表达细胞系(invitrogen 公司公司)
