1、药物分析药物分析Pharmaceutical Analysis第六章第六章 芳酸类非甾体抗炎芳酸类非甾体抗炎药物的分析药物的分析第六章第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析芳酸类非甾体抗炎药物的分析v非甾体抗炎药（非甾体抗炎药（Nosteroidal Antiinflammatory Drugs，NSAIDs）是）是一类不含有甾体骨架的抗炎药，多数具有芳酸基一类不含有甾体骨架的抗炎药，多数具有芳酸基本结构。本结构。v本章主要讲芳酸类本章主要讲芳酸类NSAIDs，同时讲一下尼美利，同时讲一下尼美利舒和对乙酰氨基酚。舒和对乙酰氨基酚。甾体结构：甾体结构：第一节第一节 典型芳酸类非甾体抗炎药物的结构与性
2、质典型芳酸类非甾体抗炎药物的结构与性质v 一、典型药物与结构特点一、典型药物与结构特点OOHORR(水杨酸类)OHOHO(水杨酸)(Salicylic Acid)OOHOCH3O(阿司匹林)(Aspirin)OOHOOOH(双水杨酯)(Salsalate)FFOHOHO(二氟尼柳)(Difunisal)第一节第一节:结构与性质结构与性质OHNOCH3CH3甲芬那酸HMefenamic AcidOHNORH邻氨基苯甲酸类酸性酸性酸性酸性光谱特性光谱特性第一节第一节:结构与性质结构与性质NROORH邻氨基苯乙酸类NNaOOClClH双氯芬酸钠Diclofenac Sodium酸性酸性酸性酸性光谱特
3、性光谱特性基团特性基团特性第一节第一节:结构与性质结构与性质RRCH3HOO芳基丙酸类CH3HOOCH3CH3布洛芬IbuprofenCH3HOOO酮洛芬KetoprofenCH3HOOOCH3萘普生Naproxen酸性酸性第一节第一节:结构与性质结构与性质NOOH3CHOCH3ClO吲哚美辛 IndometacinNRRCH3OHO吲哚乙酸类酸性酸性光谱特性光谱特性第一节第一节:结构与性质结构与性质NSOHCH3NROOOH苯并噻嗪甲酸类NSOHCH3NOONOH吡罗昔康 PiroxicamNSOHCH3NOOOSNCH3H美洛昔康 Meloxicam水解水解光谱特性光谱特性第一节第一节:结
4、构与性质结构与性质NO2HNSCH3OOO尼美利舒 NimesulideHONCH3OH对乙酰胺基酚 Paracetamol其它非甾体类抗炎药其它非甾体类抗炎药水解水解光谱特性光谱特性第二节第二节 鉴别试验鉴别试验v 依据药物理化性质，可展开一系列鉴别方法依据药物理化性质，可展开一系列鉴别方法OHOHOOOOFeOH+FeCl3+H2O+3HCl紫堇色一、与三氯化铁反应显色一、与三氯化铁反应显色阿司匹林：紫堇色阿司匹林：紫堇色双水杨酯：紫色双水杨酯：紫色二氟尼柳：深紫色二氟尼柳：深紫色均通过产生水杨酸与三氯化铁反应显色均通过产生水杨酸与三氯化铁反应显色水杨醛反水杨醛反应应第二节第二节:鉴别试验
5、鉴别试验v 对乙酰胺基酚与三氯化铁对乙酰胺基酚与三氯化铁显蓝紫色显蓝紫色HONCH3OH对乙酰胺基酚 ParacetamolFeCl3+Fe1/3ONCH3OH+HCl蓝紫色NSOHCH3NOONOH吡罗昔康 PiroxicamNSOHCH3NOOOSNCH3H美洛昔康 Meloxicam显玫瑰红色显玫瑰红色显淡紫色显淡紫色酚羟基反酚羟基反应应第二节第二节:鉴别试验鉴别试验二、缩合反应显色二、缩合反应显色CH3HOOO酮洛芬+NHNO2NO2NH2CH3HOONNO2NNO2橙红色H2SO4-H2OH二苯甲酮结构二苯甲酮结构第二节第二节:鉴别试验鉴别试验v三、重氮化三、重氮化-偶合反应偶合反应
6、 对乙酰氨基酚具有潜在芳伯氨基，在酸性条件下反应可对乙酰氨基酚具有潜在芳伯氨基，在酸性条件下反应可生成对氨基酚，再与亚硝酸钠进行重氮化反应，之后再与碱生成对氨基酚，再与亚硝酸钠进行重氮化反应，之后再与碱性性-萘酚偶合生成红色偶氮化合物。萘酚偶合生成红色偶氮化合物。NHCOCH3HO+HCl+H2ONH2HOHCl+CH3COOHN2ClHO+2H2ONH2HOHClHNO2+N2ClHO+OHNaOHOHNNOH红色偶氮化合物水解反应水解反应产生芳伯产生芳伯胺胺芳伯胺重氮化芳伯胺重氮化偶合反应偶合反应重氮化重氮化-偶合反应偶合反应OCOCH3COONHCOCH3+3H2OHCl贝诺酯HONH2
7、HCl+OHCOOHNaNO2,2HClHON2+Cl-OHNaOHOHNNOH橙红色第二节第二节:鉴别试验鉴别试验四、四、氧化反应氧化反应甲芬那酸H2SO4深蓝色(O)K2Cr2O7并产生绿色荧光随即变为棕绿色第二节第二节:鉴别试验鉴别试验五、五、水解反应水解反应COOHOCOCH3Na2CO3COONaOHCH3COONa+CO2+H2SO4COOHOHH2SO4CH3COOH第二节第二节:鉴别试验鉴别试验阿司匹林阿司匹林白色水杨酸白色水杨酸醋酸气味醋酸气味第二节第二节:鉴别试验鉴别试验六、特征元素反应六、特征元素反应 分子中含有氯、硫等元素可以转化为氯化物或硫分子中含有氯、硫等元素可以转
8、化为氯化物或硫化物进而进行鉴别。化物进而进行鉴别。七、光谱法七、光谱法 1、UV 2、IRIR：阿司匹林-COOH-OH-COOHPh-C邻位取代Ph第二节第二节:鉴别试验鉴别试验N-HO-HN-HPh:C=C芳胺酚第二节第二节:鉴别试验鉴别试验第二节第二节:鉴别试验鉴别试验八、色谱法八、色谱法供试品保留时间供试品保留时间对照品保留时间对照品保留时间第三节第三节 特殊杂质及其检查法特殊杂质及其检查法一、阿司匹林和双水杨酯生产工艺ONaCO2加压，ONaCOONaOHCOOHH+COOHOCOCH3(CH3CO)2OH2SO4,7075 C。ASAOH-CO2副产物水杨酸COOHOOOH双水杨酯
9、COOHOHCOOHOHHOOOCOOHOOHOOHCOOHCOOHHOOOCOOHHOCOOHOO+COOHOOOCOOH-+HPLC法法淡黄、淡黄、红棕、红棕、深棕色深棕色第三节第三节:特殊杂质及其检查法特殊杂质及其检查法第三节第三节:特殊杂质及其检查法特殊杂质及其检查法其它有关物质其它有关物质OH(CH3CO)2OOCOCH3+OCOCH3COOHOCOCH3COO+OHCOOHOHCOO醋酸苯酯水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯HPLC法法二、甲芬那酸中二、甲芬那酸中2,32,3二甲基苯胺的检查二甲基苯胺的检查第三节第三节:特殊杂质及其检查法特殊杂质及其检查法甲芬那酸ClCOOHH3CCH3NH
10、2NHCOOHH3CCH3+CuGC法法三、二氟尼柳中有关物质的检查FFNH2FFCOCH3FFOCOCH3FFOHFFOHCOOHFF+Cu偶联乙酰化(CH3CO)2O,AlCl3氧化H2O2水解OH/H-+羧化CO2,CH3ONaTLCHPLC所谓物质所谓物质A和物质和物质B的检查是的检查是采用采用自身对照法自身对照法进行检查的进行检查的相同药物相同药物,不同浓度不同浓度,相互比较相互比较,主点主点限限量量第三节第三节:特殊杂质及其检查法特殊杂质及其检查法四、萘普生的有关物质检查四、萘普生的有关物质检查MeOMeOCH3O酰化羧化MeOOHCH3COOH催化氢化MeOCH3COOH2-萘甲
11、醚6-甲氧基-2-萘乙酮2-羟基-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸萘普生色谱条件色谱条件杂质限量杂质限量第三节第三节:特殊杂质及其检查法特殊杂质及其检查法五、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺五、对乙酰氨基酚中氨基酚和对氯苯乙酰胺第三节第三节:特殊杂质及其检查法特殊杂质及其检查法HPLCClNO2NH2HOHONO2HONHCOCH3水解还原酰化ClNHCOCH3一、酸碱滴定法一、酸碱滴定法(Acid-base titration method)苯甲酸苯甲酸pKa 4.20水杨酸水杨酸pKa 2.98酸性较强酸性较强COHOHO羧酸邻位羧酸邻位-OH-OH，吸电子基团，使酸性增加；，吸电子基团
12、，使酸性增加；分子内氢键，更增加了其极性分子内氢键，更增加了其极性直接滴定：Aspirin、丙磺舒丙磺舒(Ch.P.BP.JP等等)苯甲酸苯甲酸(Ch.P等等)均均采用本法。采用本法。第四节第四节 含量测定含量测定1.1.直接滴定法直接滴定法中性乙醇COOHOCOCH3NaOH20以下COONaOCOCH3H2O乙醇乙醇作用：溶解作用：溶解ASAASA；防止；防止ASAASA在水溶在水溶 液中滴定过程易水解液中滴定过程易水解中性乙醇：中性乙醇：对指示剂对指示剂(酚酞酚酞)而言为中性，而言为中性，可消除滴定误差可消除滴定误差 pKa 36 的药物溶于中性醇的药物溶于中性醇,可可直接用直接用NaO
13、H滴定滴定 pKa 69 的药物要用的药物要用非水溶液滴定法非水溶液滴定法第四节第四节:含量测定含量测定NSOHCH3NOOOSNCH3H美洛昔康 Meloxicam本品在甲醇、乙醇及水中极微溶或者几本品在甲醇、乙醇及水中极微溶或者几乎不溶，在丙酮中微溶。所以乎不溶，在丙酮中微溶。所以Chp使用使用定量过量的氢氧化钠滴定液定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后，再溶解后，再用盐酸滴定液回滴剩余的氢氧化钠。用盐酸滴定液回滴剩余的氢氧化钠。烯醇式烯醇式结构结构:酸酸性性为什么氢氧为什么氢氧化钠能溶解化钠能溶解之？之？第四节第四节:含量测定含量测定2.2.水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法(Residual
14、titration after hydrolysis)OCOCH3COOH2NaOHH2OOHCOONaCH3COONa2NaOH H2SO4 Na2SO4 2H2O 取本品约取本品约1.5g，精密称定，准确加，精密称定，准确加NaOH液液(0.5mol/L)50.0ml，缓缓煮沸缓缓煮沸10min，放冷，以酚酞为指示剂，用，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液液(0.25mol/L)滴定滴定剩余剩余的的NaOH，并将滴定结果用，并将滴定结果用空白试验空白试验校正。每校正。每1ml的的NaOH液液(0.5ml/L)相当于相当于45.04mg的的C9H8O4。USP32-NF27第四节第四节:含
15、量测定含量测定含量%=(V0-V)FTW 100%T=0.5 12180.16=45.04(mg/ml)滴定度滴定度滴定度滴定度浓度浓度待测物反应待测物反应系数系数滴定液物反滴定液物反应系数应系数滴定液物摩滴定液物摩而质量而质量空白反应体空白反应体积积样品测定消样品测定消耗体积耗体积样品称重量样品称重量第四节第四节:含量测定含量测定3.两步滴定法两步滴定法(Two-step titration)Aspirin片HOCCOOHCH2COOHCH2COOH枸橼酸枸橼酸Citric acidHOCHCOOHCHCOOHHO酒石酸酒石酸Trataric acid水解产物水解产物水杨酸水杨酸SAHAc第
16、四节第四节:含量测定含量测定第一步：NaOH滴定所有的酸：滴定所有的酸：ASA，CA，TA，SA，HAc第二步：水解后剩余滴定水解后剩余滴定 取本品取本品1010片，精密称定，研细，精密称取适量片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于阿司约相当于阿司匹林匹林0.3g)0.3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇，置锥形瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示剂显中性对酚酞指示剂显中性)20ml)20ml，振摇使振摇使ASAASA溶解，加酚酞指示液溶解，加酚酞指示液3 3滴，滴，滴加滴加NaOHNaOH液液(0.1mol/L)(0.1mol/L)至至显粉红色，显粉红色，再精密加再精密加NaOHNaOH液液(0.1m
17、ol/L)40ml(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热，置水浴上加热15min15min，并时时振摇，迅速放冷至室温，并时时振摇，迅速放冷至室温，用用H H2 2SOSO4 4液液(0.05mol/L)(0.05mol/L)滴定滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。，并将滴定的结果用空白试验校正。每每1ml1ml的的NaOHNaOH液液(0.1mol/L)(0.1mol/L)相当于相当于18.02mg18.02mg的的C C9 9H H8 8OO4 4。COONaOCOCH3NaOHCOONaOHNaAc H2O2NaOH H2SO4 Na2SO4 2H2O第四节第四节:含量测定含量测定标
18、示量%=WW标示量100%(V0-V)FT空白空白消耗消耗样测样测消耗消耗校正校正因数因数滴定滴定度度片剂片剂规格规格第四节第四节:含量测定含量测定游离SA偏高游离SA偏高时结果偏高时结果偏高不能完全排出干扰不能完全排出干扰缺点优点操作简便操作简便水杨酸干扰少水杨酸干扰少结果准确，避免游结果准确，避免游离SA及片剂中稳定离SA及片剂中稳定直接滴定法水解后剩余滴定法两步滴定法二、非水溶液滴定法二、非水溶液滴定法吡罗昔康第四节第四节:含量测定含量测定三、三、UVUV法法1.直接直接UV法法2.离子交换离子交换-UV法法氯贝丁酯在氯贝丁酯在226nm226nm的波长处有最大吸收，但的波长处有最大吸收
19、，但对氯酚对氯酚等等有关物质亦有吸收，干扰有关物质亦有吸收，干扰UVUV法的测定。根据氯贝丁酯法的测定。根据氯贝丁酯为酯结构，不能发生电离，而有关物质可为酯结构，不能发生电离，而有关物质可发生酸性解发生酸性解离离的性质差异，采用阴离子交换色谱分离后，采用的性质差异，采用阴离子交换色谱分离后，采用UVUV法测定。法测定。标示量%=AsCRDWWAR标示量100%第四节第四节:含量测定含量测定3.CPC-UV法法(Column Partition Chromatography)利用固定相酸碱性的不同酸碱性的不同进行分离利用药物和固定相起化学反应而进行分离利用生成离子对离子对进行层析分离单纯靠选择流
20、动相进行分离200300mm60mm4mm22mm层析柱玻棉压榨棒350mm21mm担体：硅藻土：硅藻土(Celite 545)(Celite 545)固定相：一定：一定pHpH的缓冲水溶液的缓冲水溶液流动相：与水不相混溶的有机：与水不相混溶的有机溶剂溶剂(洗脱前必须先用水饱和洗脱前必须先用水饱和)第四节第四节:含量测定含量测定例：例：ASA测定供试液制备洗脱洗脱 ：5,25mlCHCl3 相继洗脱，弃去相继洗脱，弃去CHCl3；用用10ml冰冰HAc-CHCl3(150)洗脱洗脱，再用，再用85ml冰冰HAc-CHCl3(1100)洗脱，收集洗脱液并冰洗脱，收集洗脱液并冰HAc-CHCl3(
21、1100)稀释至稀释至100ml。测定：280nm 空白：CHCl3NaHCONaHCO3 3使使ASA和和SA成盐成盐保留于柱上保留于柱上 用用CHClCHCl3 3洗脱的目的洗脱的目的：去除中性或碱性杂质去除中性或碱性杂质冰冰HAcHAc酸化的目的酸化的目的：使使ASAASA游离游离，易被，易被 CHCl3洗脱洗脱第四节第四节:含量测定含量测定CRAR阿司匹林(mg)=Ax供试品吸光度供试品吸光度对照品吸光度对照品吸光度对照品浓度对照品浓度例子例子第四节第四节:含量测定含量测定四、四、HPLCHPLC标示量%=CRAxARDWW标示量100%对照对照品浓品浓度度供试供试品峰品峰面积面积对照对照品峰品峰面积面积第四节第四节:含量测定含量测定样品内标方法血清中ASA和SA苯苯甲甲酸酸高高氯氯酸酸沉沉淀淀蛋蛋白白尿中丙磺舒依依他他尼尼酸酸C C8 8固固相相萃萃取取血浆中布洛芬肉肉桂桂酸酸甲甲醇醇沉沉淀淀蛋蛋白白血浆中二氟尼柳 对对羟羟基基联联苯苯大大孔孔树树脂脂固固相相萃萃取取样品分析方法，方法验证及样品的处理样品分析方法，方法验证及样品的处理第五节第五节:体内药物分析体内药物分析
