1、MICM 检测在恶性血液病中的运用背景介绍血液病是原发于造血系统的疾病，或影响造血系统伴发血液异常改变，以贫血、出血、发热为特征的疾病。出血性疾病贫血症白细胞疾病常见血液病造血系统恶性肿瘤恶性血液病类型MICM?FAB形态学诊断(Morphology)：包括血液和骨髓形态学及组织化学染色。?免疫学检查(Immunology)?遗传学检查(Cytogenetics)?分子生物学检查(Molecular)检测方法检测方法一、形态学一、形态学是诊断的基础，任何淋巴造血系统增生性是诊断的基础，任何淋巴造血系统增生性疾病的诊断都离不开形态学诊断。形态学诊断技术包括?细胞学：外周血、骨髓涂片?组织学：骨髓
2、活检、血凝块?外周血涂片检测（血液病血常规）：用来观察外周血细胞形态、数量。是对血液分析仪检测的血常规的镜下检测补充。?检测内容包括：白细胞如粒细胞、单核细胞、淋巴细胞；红细胞；血小板。?骨髓涂片检测：?1、骨髓增生程度，G:E，骨髓小粒及脂肪油滴有无及分度。?2、粒细胞系统、红细胞系统、淋巴细胞系统、单核细胞系统、巨核细胞系统、浆细胞系统以及其他细胞（网状细胞、内皮细胞、纤维细胞、成骨细胞、破骨细胞、组织嗜碱细胞、退化细胞等）的形态及比例。血小板的情况。?3、骨髓小粒?4、有无转移瘤和寄生虫。骨髓病理检测：在高倍镜下观察骨髓的组织结构和各成分的分布及相互关系。骨髓活检和骨髓骨髓活检和骨髓/血
3、涂片血涂片骨髓/血涂片?骨髓涂片细胞细微结构清楚评估红系、粒系增生情况及幼稚细胞比例具有优势?骨髓纤维化、细胞致密可干抽?可做组织化学染色（如铁染）?对缺铁性贫血、慢性疾病引起的贫血、巨幼细胞性贫血、和急性白血病的诊断尤其有帮助。骨髓活检?骨髓活检显示骨髓的组织结构和各成分的分布及相互关系，对巨核细胞的评估具有优势?不存在干抽和骨髓稀释?可做免疫组织化学染色?对再生障碍性贫血、低增生性白血病、淋巴瘤、转移癌、骨髓增生性肿瘤的诊断具有重要价值骨髓涂片看细胞、骨髓活检看结构，相互补充相互验证相互补充相互验证不能相互替代?血凝块：废物利用、骨髓活检的补充血凝块：废物利用、骨髓活检的补充骨髓活检常见问
4、题骨髓活检常见问题?标本取材条件：要求穿刺 1 cm以上骨髓组织?诊断不明确：取材部位是否有病灶?保存液：10%福尔马林固定二、细胞组织化学染色?以形态学为基础，运用化学或生物化学技术研究细胞内化学成分的分布及变化的检测方法。对某些血液病的诊断、鉴别诊断、疗效、判断预后有一定的意义。?常用的细胞化学染色有：?1、过氧化酶又称髓过氧化酶(Myeloperoxidase，MPO 或POX)：阳性为棕黑色。用于急性白血病的鉴别：急性粒细胞白血病为阳性，其中M3 为强阳性，急性单核细胞白血病为弱阳性，急性淋巴细胞白血病为阴性。?2、非特异性酯酶（NSE）：包括中性非特异性酯酶（-NAE，棕黑色）、酸性
5、非特异性酯酶（A-NAE，棕红色），碱性非特异性酯酶（-NBE，棕红色）。?意义：急性单核细胞白血病强阳性，且能被氟化钠抑制。急性粒细胞白血病弱阳性或阴性，不被氟化钠抑制。?3、特异性酯酶（SE）：阳性红宝石色颗粒。?意义：急性粒细胞白血病阳性或强阳性。急性单核细胞白血病阴性。慢粒急粒变阳性增强。?4、苏丹黑B染色（SBB）：阳性为黑色。?意义：和POX基本一样。?5、中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）：阳性为灰黑色或黑色。计算阳性率和积分值：?阳性率：计数100 个中性杆状核和分叶核粒细胞，观察其阳性细胞的个数，即为阳性率。(正常值40%)阳性指数：（+）1+（+）2+（+）3+（+）4 的总和
6、。（正常值40-80 分）意义：升高见于严重感染，类白，急淋，骨纤，真红，再障，ITP,淋巴瘤等。降低见于慢粒，急性粒细胞白血病，PNH。故可用于慢粒和类白、骨纤；再障和PNH；急粒和急淋的鉴别。?6、糖原染色（PAS）：?阳性为红色。可以计算阳性率和阳性指数。?意义：（1）正常情况下，红细胞系统的原、?幼红细胞和成熟红细胞；粒细胞系统的原粒细胞、?原单核细胞和大多数淋巴细胞为阴性反应。自早幼粒?阶段以后的粒细胞和幼单核细胞可呈弱阳性反应。?（2）急淋、红白血病、戈谢病的原始细胞呈强阳性反应或阳性反应；缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍、MDS 亦可呈阳性反应；急性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、良
7、性淋巴细胞增多症、尼曼-皮克细胞呈阴性反应或弱阳性反应。巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、再生障碍性贫血等幼红细胞为阴性反应。偶有个别幼红细胞呈阳性反应。?（3）帮助鉴别不典型巨核细胞和霍奇金细胞，巨核细胞呈强阳性反应；霍奇金细胞呈弱阳性或阴性反应。?（4）帮助鉴别白血病细胞和腺癌骨髓转移的腺癌细胞，腺癌细胞呈阳性反应。?7、酸性磷酸酶染色（ACP）：阳性酶活性部位出现红色沉淀，胞核为蓝色。?意义：1、鉴别戈谢细胞和尼曼-匹克细胞，前者阳性，后者为阴性。?2、多毛细胞白血病为阳性反应，且耐 L-酒石酸的抑制作用。淋巴肉瘤细胞和慢性淋巴细胞白血病的淋巴细胞，酸性磷酸酶染色也呈阳性反应，但此酸可被L-酒
8、石酸抑制。?3、T淋巴细胞呈阳性反应，而 B淋巴细胞为阴性反应。?8、铁染色（Fe染色）：阳性为淡绿色。?细胞内铁观察有核红细胞；?细胞外铁观察骨髓小粒及网状细胞。?意义：?（1）铁低见于缺铁性贫血；?（2）铁高见于再生障碍性贫血、巨幼红细胞性贫血、白血病、感染和多次输血病人；?（3）环形铁粒幼细胞（RS），环铁大于15%，见于RAS。铁粒幼红细胞定义铁粒幼红细胞定义三、免疫分型应用：1、确定系来源：利用不同系有特定的抗原表达可以确定髓系/B系/T/NK 系/组织细胞和树突状细胞。?2、确定细胞分化阶段：不同发育阶段细胞，其抗原表达不同。?3、预后判断：有些抗原表达和淋巴瘤/白血病预后相关，如
9、白血病患者有CD7+与CD34+共表达，示预后不好。?4、治疗方法选择-治疗靶向?5、疗效判断、复发监测?所以我们可以用于血液疾病的诊断如白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、MDS 等；以及一些疾病的鉴别诊断如再障、ITP、MPD。运用于微小残留病灶的监测等。常用的方法：流式细胞术和细胞免疫组织化学染色法。白血病分类中免疫分型的应用与意义意义常用的抗原：?1、白血病系列分化抗原T淋巴细胞白血病：CD3、CD5、CD7。B淋巴细胞白血病：CD10、CD19、CD22。NK 淋巴细胞白血病：CD16、CD56、CD57。髓系白血病：CD13、CD14、CD33、MPO（髓过氧化物酶）。红白血病：GlyA
10、（血型糖蛋白A）。巨核细胞白血病：CD41、CD42、CD61。?2.白血病系列非特异性抗原CD34、HLA DR为早期细胞抗原，无系列特异性，可与CD38 联合运用于免疫分型。一般而言，干/祖细胞CD34、HLA DR、CD38，原始细胞CD34、HLA DR、CD38，而幼稚细胞（如早幼粒细胞）CD34、HLA DR、CD38。?3、白细胞共同抗原CD45 为白细胞共同抗原，其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早期造血细胞（blasts）依次减弱。红细胞（中，晚幼红细胞，成熟红细胞）不表达CD45。用SSC/CD45 PerCP双参数分析可十分容易鉴别骨髓和血液中的原始或成熟细胞
11、。AML：?1、M0：其特征为T、B细胞标记的阴性（即CD19、CD20、CD22 与CD3、CD5、CD7、CD10）。作为干、祖细胞标记的 CD34、CD38 和HLA-DR 均为阳性，具有特征性的TdT 标记应有至少30%的原始细胞会呈阳性表达。而髓系特征不能过多，通常是 CD13、CD33、CD117 中的任何一项呈阳性表达；CD68、MPO 大多阴性。若髓系有两个以上标记呈阳性，应考虑未成熟的急性髓细胞白血病。?2、M1：M1 与M0 相似不易区分，M1 一般CD13、CD33、HLA-DR，但CD34 表达少于M0，可能表达部分CD15。?3、M2：M0 与M1 的主要区别是成熟度
12、增加，CD15 较M1 较显著，CD34 弱于M1，CD13 有时表达强于CD33，多数病例HLA DR（-）。?4、M3：高颗粒性，多数情况HLA DR（-）或表达减少，CD34 少于M2、一般CD13 弱（），可有CD2 表达。?5、M4 与M5：两型表型相似，但M4较M5 表达更多的CD34（），重要的表型为CD13、CD33、HLA DR、CD14 和CD15，CD33 可表达强于CD13；CD33（）、CD13（）、CD34（）很可能为M5，但只出现在少数病人中，部分M5 可见CD56（）。?6、M6：M6 较少见且特征不明显，一般HLA DR，CD34、CD13、CD33 阳性。?
13、7、M7：巨核细胞白血病，在AML 中少于1。一般CD61（Gpa）和/或CD41（Gpb-a）阳性，而注意由于血小板粘附造成的假阳性以及一些不明原因出现的假阴性。这时候可以借助于小巨核酶标（CD41 免疫组织化学染色）ALL：?WHO 分型分为B祖细胞型，CD10 或CD10，前B细胞型，B细胞型，T细胞型。?1、B祖细胞型ALL：FAB 标准的L1 或L2，一般TdT(+)HLA-DR(+)，CD19(+)，此型又分为2个亚型，CD10 和CD10，前者预后好，多数病例CD24，CD34，CD20 表达随成熟度增加而增加。?2、前B细胞型ALL：一般为CD19，CD24，HLA DR，胞浆CD22，CD10，TdT 随CD20 变化，CD34 多为阴性。
