1、非小细胞肺癌患者EGFR基因检测文档ppt 97%的基因突变互相排斥的基因突变互相排斥单个突变数ALKAKTBRAFEGFRHER2KRASMEK1METNRASPIK3CAALK(38)X1211AKT(1)XBRAF(9)X1EGFR(89)X13HER2(3)XKRAS(114)X11MEK1(2)X11MET AMP(3)XNRAS(2)XPIK3CA(6)XKris MG.et al.ASCO 2011,Abstract#CRA7506.3高加索人腺癌各基因构成比图4中国人肺腺癌各基因构成比图关于关于“驱动基因驱动基因”近50%NSCLC驱动基因已经被发现双基因同时突变罕见对已知的靶
2、点，已有很多上市或在研的药物驱动基因突变状态与人种、性别、病理类型、吸烟状况等有关，不同类型用药不同。NSCLC基因检测的意义基因检测决定了分子靶向治疗基因检测决定了分子靶向治疗2011年我国制定了年我国制定了:中国非小细胞肺癌患者表皮生长因子中国非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变检测专家共识受体基因突变检测专家共识EGFR基因突变检测的临床意义EGFR-TKI一线治疗必须进行EGFR基因突变的检测，国内外均推荐EGFR基因突变阳性的NSCLC给予EGFR-TKI一线治疗优势人群不代表个体：尽管在女性、亚裔、不吸烟或少吸烟、腺癌EGFR基因突变发生频率较高，但在鳞癌、腺鳞癌，甚至SCLC
3、中也可检测到EGFR基因突变。EGFR基因突变检测的临床意义EGFR突变不同类型疗效也不一样，19-del较L858R疗效好,检测的必要性EGFR基因突变检测的临床意义化疗能改变EGFR突变状态264例一线化疗的bIV期NSCLC患者的血DNA标本，EGFR突变率在化疗后显著降低（23.1%对34.5%，P1毫升。如需长途运输，加入乙醇浸泡60分钟以上。为符合托运要求，可付运前可离心后倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，确保3天内到达。EGFR检测方法目前公认有两种：测序法和ARMS法（等位基因特异PCR+荧光探针）EGFR检测方法测序法ARMS法敏感度1030%(变异
4、)10.1%(变异)发现突变已知和未知已知石蜡包埋组织成功率低高假阳性（交叉污染）多少假阴性多少检测流程复杂漫长，污染多简单快速仪器成本高低试剂成本低略高 EGFR检测方法北京协和张静报道：82例NSCLC直接测序法中24例无结果，ARMS法均有结果，且16例检测到变异 中华病理学杂志，2008,37（5）有结果变异率测序法70.7%（58/82例）43.1%(25/58例）ARMS法100%（82/82例）51.2%(42/82例）国内EGFR基因突变率支气管镜、穿刺活检标本：可得肿瘤DNA量少且片段化，获得较可靠检测结果，有时DNA量少。驱动基因突变状态与人种、性别、病理类型、吸烟状况等有
5、关，不同类型用药不同。支气管镜、穿刺活检标本：可得肿瘤DNA量少且片段化，获得较可靠检测结果，有时DNA量少。优势人群不代表个体：尽管在女性、亚裔、不吸烟或少吸烟、腺癌EGFR基因突变发生频率较高，但在鳞癌、腺鳞癌，甚至SCLC中也可检测到EGFR基因突变。驱动基因突变状态与人种、性别、病理类型、吸烟状况等有关，不同类型用药不同。2006;119(10):2353-8.胸膜活检组织EGFR突变状况北京协和张静报道：82例NSCLC理想的标本，需保证200400个肿瘤细胞（文献报道大于100个即可）2006;29(4):373-9.送检前可倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运
6、输，确保样本在3天内到达。如需长途运输，加入乙醇浸泡60分钟以上。目前公认有两种：测序法和ARMS法（等位基因特异PCR+荧光探针）Br J Cancer.在去除上清液后，将剩余沉淀物室温1000g转速离心10min，包裹细胞沉淀，常规固定、包埋并切片（具体同胸膜转移灶标本），为待检测的胸液沉淀；2006;29(4):373-9.胸膜转移和胸水的对比研究EGFR基因突变检测的临床意义2006;29(4):373-9.关于胸水EGFR突变的检测Cancer Sci.2006;97(7):642-8.Int J Cancer.2006;119(10):2353-8.Chang Gung Med J
7、.2006;29(4):373-9.Br J Cancer.2006;95(10):1390-5.J Cancer Res Clin Oncol.2010;136(9):1341-7.国内外胸水标本国内外胸水标本EGFR检测的研究检测的研究作者作者 国家国家/地区地区 病例数病例数EGFR突变率突变率（%）Kimura H日本2433%Soh J日本6126%Hung MS台湾2941%Kimura H日本4325.6%Jian G中国 3228.1%用胸水检测肿瘤用胸水检测肿瘤EGFR突变需要敏感方法突变需要敏感方法用胸水中细胞及无细胞液均可检测用胸水中细胞及无细胞液均可检测EGFR突变，且
8、检突变，且检出率基本相同出率基本相同目前缺少胸水与肿瘤组织直接对比（配对样本检测）目前缺少胸水与肿瘤组织直接对比（配对样本检测）数据，故对其敏感度与特异性尚无结论数据，故对其敏感度与特异性尚无结论胸膜转移和胸水的对比研究本研究的目的：探索胸腔积液与胸膜转移灶EGFR突变检测的一致性，从而判断当存在胸膜转移灶时，胸液EGFR基因突变状态检测的价值。收集2011年4月-2012年12月间就诊于上海长海医院呼吸科符合入组条件患者的胸液标本及相应的胸膜转移病灶组织，共35对样本。研究步骤胸膜转移灶样本采集电子胸腔镜在局麻下进行胸腔镜检查术镜下见病灶后以活检4-6块组织，10%中性福尔马林固定，后包埋成
9、蜡块每例蜡块切取10-12片5m 厚连续切片，切片在37烘箱内烤片3h后常温保存研究步骤胸腔积液样本采集胸腔积液样本采集每例患者同时收集胸水100-200ml，常温静置30min后取上清15ml，-80保存，为待检测的胸液上清；在去除上清液后，将剩余沉淀物室温1000g转速离心10min，包裹细胞沉淀，常规固定、包埋并切片（具体同胸膜转移灶标本），为待检测的胸液沉淀；每例蜡块切取10-12片5m 厚连续切片，切片在37烘箱内烤片3h后常温保存。胸膜活检组织EGFR突变状况病人数EGFR突变 突变率%P男性18633.30.094女性171164.7有吸烟史101100.007无吸烟史25166
10、4胸液沉淀与相应胸膜转移灶胸液沉淀与相应胸膜转移灶EGFREGFR突变的比较突变的比较 胸膜组织胸膜组织EGFR突变突变胸液沉淀胸液沉淀EGFR突变突变+-合计+12416-2810合计合计141226符合率为符合率为73.1%胸液上清与相应胸膜转移灶胸液上清与相应胸膜转移灶EGFREGFR突变的比较突变的比较胸膜组织胸膜组织EGFR突变突变胸液上清胸液上清EGFR突变突变+-合计合计+14216-31619合计合计171835符合率为符合率为85.7%胸液上清与相应沉淀胸液上清与相应沉淀EGFREGFR突变的比较突变的比较胸液沉淀胸液沉淀EGFR突变突变胸液上清胸液上清EGFR突变突变+-合
11、计合计+12113-4913合计合计161026 符合率为符合率为80.8%外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，虽然DNA片段化，但仍获得可靠检测结果-使用受限用胸水检测肿瘤EGFR突变需要敏感方法支气管镜、穿刺活检标本：可得肿瘤DNA量少且片段化，获得较可靠检测结果，有时DNA量少。每例蜡块切取10-12片5m 厚连续切片，切片在37烘箱内烤片3h后常温保存。化疗能改变EGFR突变状态支气管镜、穿刺活检标本：可得肿瘤DNA量少且片段化，获得较可靠检测结果，有时DNA量少。胸膜转移和胸水的对比研究国内EGFR基因突变率在去除上清液后，将剩余沉淀物室温1000g转速离心10min，包裹细胞沉淀，常
12、规固定、包埋并切片（具体同胸膜转移灶标本），为待检测的胸液沉淀；胸膜活检组织EGFR突变状况每例蜡块切取10-12片5m 厚连续切片，切片在37烘箱内烤片3h后常温保存2006;119(10):2353-8.国内EGFR基因突变率每例患者同时收集胸水100-200ml，常温静置30min后取上清15ml，-80保存，为待检测的胸液上清；2006;29(4):373-9.2006;119(10):2353-8.Int J Cancer.淋巴结标本也可淋巴结标本中EGFR突变能否反映原发灶中EGFR状态？Br J Cancer.驱动基因突变状态与人种、性别、病理类型、吸烟状况等有关，不同类型用药不
13、同。MET AMP(3)关于胸水EGFR突变的检测中华病理学杂志，2008,37（5）本研究的目的：探索胸腔积液与胸膜转移灶EGFR突变检测的一致性，从而判断当存在胸膜转移灶时，胸液EGFR基因突变状态检测的价值。用胸水中细胞及无细胞液均可检测EGFR突变，且检出率基本相同97%的基因突变互相排斥镜下见病灶后以活检4-6块组织，10%中性福尔马林固定，后包埋成蜡块Int J Cancer.每例患者同时收集胸水100-200ml，常温静置30min后取上清15ml，-80保存，为待检测的胸液上清；33%(1/3)中国非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变检测专家共识中华病理学杂志，2008,3
14、7（5）EGFR检测方法送检前可倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，确保样本在3天内到达。镜下见病灶后以活检4-6块组织，10%中性福尔马林固定，后包埋成蜡块每例患者同时收集胸水100-200ml，常温静置30min后取上清15ml，-80保存，为待检测的胸液上清；支气管镜、穿刺活检标本：可得肿瘤DNA量少且片段化，获得较可靠检测结果，有时DNA量少。国内EGFR基因突变率每例蜡块切取10-12片5m 厚连续切片，切片在37烘箱内烤片3h后常温保存。55份有结果的标本中，29份EGFR突变阳性，突变率55.高加索人腺癌各基因构成比图提示检测更有必要，决定TKI一线治疗的
15、时机镜下见病灶后以活检4-6块组织，10%中性福尔马林固定，后包埋成蜡块100%（1/1）基因检测决定了分子靶向治疗7%（58/82例）Chang Gung Med J.MET AMP(3)外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，虽然DNA片段化，但仍获得可靠检测结果-使用受限EGFR突变不同类型疗效也不一样，19-del较L858R疗效好,检测的必要性在去除上清液后，将剩余沉淀物室温1000g转速离心10min，包裹细胞沉淀，常规固定、包埋并切片（具体同胸膜转移灶标本），为待检测的胸液沉淀；33%，不同标本检出率97%的基因突变互相排斥68%(17/25)Chang Gung Med J.近50%
16、NSCLC驱动基因已经被发现在去除上清液后，将剩余沉淀物室温1000g转速离心10min，包裹细胞沉淀，常规固定、包埋并切片（具体同胸膜转移灶标本），为待检测的胸液沉淀；胸水可以做前景很好关于胸水EGFR突变的检测送检前可倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，确保样本在3天内到达。胸液上清与相应胸膜转移灶EGFR突变的比较新鲜组织（手术、穿刺、支纤镜下活检样本等）Br J Cancer.全国检测情况(基康+迪安)2006;119(10):2353-8.目前公认有两种：测序法和ARMS法（等位基因特异PCR+荧光探针）近50%NSCLC驱动基因已经被发现2006;29(4):373-9.中华病理学杂志，2008,37（5）Chang Gung Med J.在去除上清液后，将剩余沉淀物室温1000g转速离心10min，包裹细胞沉淀，常规固定、包埋并切片（具体同胸膜转移灶标本），为待检测的胸液沉淀；胸液上清与相应胸膜转移灶EGFR突变的比较关于胸水EGFR突变的检测淋巴结标本也可淋巴结标本中EGFR突变能否反映原发灶中EGFR状态？2006;29(4):373-9.国内外胸水标本EGFR检测的研究Int J Cancer.EGFR基因突变检测的临床意义驱动基因突变状态与人种、性别、病理类型、吸烟状况等有关，不同类型用药不同。2011年我国制定了:谢谢观看！
