1、并非所有暴露并非所有暴露个体均患病个体均患病 环境因素与遗传因素共同作用环境因素与遗传因素共同作用食管癌食管癌遗传因素和表观遗传因素遗传因素和表观遗传因素亚硝胺类化合物亚硝胺类化合物吸烟、饮酒吸烟、饮酒营养缺乏营养缺乏霉菌感染霉菌感染冀医四院冀医四院传统的多途径多步骤的基因突变引起肿瘤的观点日传统的多途径多步骤的基因突变引起肿瘤的观点日益受到挑战，目前众多的研究者认为，肿瘤最早的益受到挑战，目前众多的研究者认为，肿瘤最早的发生可能源于干细胞阶段的表观遗传学改变，表观发生可能源于干细胞阶段的表观遗传学改变，表观遗传学的改变可能发生的更早些。遗传学的改变可能发生的更早些。RNARNA干扰干扰 表观
2、遗传学表观遗传学DNADNA甲基化甲基化组蛋白修饰组蛋白修饰染色体重塑染色体重塑冀医四院冀医四院DNA DNA 甲基化是在甲基化是在DNADNA甲基转移酶的作用下甲基转移酶的作用下,以以S-S-腺苷甲硫氨酸腺苷甲硫氨酸为甲基供体为甲基供体,将甲基基团转移到胞嘧啶第将甲基基团转移到胞嘧啶第5 5位碳原子上位碳原子上,从而从而转变成转变成5-5-甲基胞嘧啶（甲基胞嘧啶（5-mC5-mC）。）。基因启动子区域的基因启动子区域的CpG CpG 岛正常状态下不发生甲基化，一旦由岛正常状态下不发生甲基化，一旦由于某种原因而发生甲基化就会导致基因转录沉寂，使重要基于某种原因而发生甲基化就会导致基因转录沉寂，
3、使重要基因如抑癌基因、修复基因等丧失功能，有可能导致肿瘤发生。因如抑癌基因、修复基因等丧失功能，有可能导致肿瘤发生。冀医四院冀医四院冀医四院冀医四院 头颈部鳞癌、胃癌及头颈部鳞癌、胃癌及胰腺癌细胞株中胰腺癌细胞株中TRTR基因甲基因甲基化与其表达降低有关。基化与其表达降低有关。对非小细胞肺癌、前列腺癌的研究显示，对非小细胞肺癌、前列腺癌的研究显示，TRTR基基因的表达缺失与其甲基化之间存在高度相关性。因的表达缺失与其甲基化之间存在高度相关性。小细胞肺癌中小细胞肺癌中TRTR和和表达缺失与基因甲基化无关。表达缺失与基因甲基化无关。冀医四院冀医四院研究目的 本研究应用甲基化特异性本研究应用甲基化特
4、异性PCRPCR反应反应(MSP)(MSP)和和RT-PCRRT-PCR技技术检测食管鳞状细胞癌组织中术检测食管鳞状细胞癌组织中TGF-TGF-受体受体、基因基因(TR(TR、)启动子区甲基化状态和启动子区甲基化状态和mRNAmRNA表达水平，并表达水平，并结合临床资料探讨其与临床病理资料的关系，为确定结合临床资料探讨其与临床病理资料的关系，为确定TRTR、甲基化与甲基化与ESCCESCC发生发展之间的关系提供理论发生发展之间的关系提供理论依据。依据。冀医四院冀医四院6565例贲例贲门癌组门癌组织、织、5959例相应例相应癌旁组癌旁组织织性别：男性性别：男性5151例，女性例，女性1414例例
5、TNMTNM分期：分期：、期期3737例，例，、期期2828例例 病理分级：高、中分化组病理分级：高、中分化组5555例，低分化组例，低分化组1010例例 年龄：范围在年龄：范围在26-7426-74岁，中位年龄岁，中位年龄57.457.4岁岁冀医四院冀医四院 基因CpG 状态 引物序列（53）退火温度()产物大小(bp)TR UCAACCCTCCAAAACTAACAACTAAACAA 60 147TGTTGGTTTTTGGTTATGTTTTATGTTTTTT MACCCTCCGAAACTAACGACTAAACGA 52 142CGGTTTTTGGTTACGTTTTACGTTTTT TR UT
6、TGAAAGTTGGTTAAAGTTTTTGGA 55 123AAACAAAACCTCTCTCCACCCA MGAAAGTCGGTTAAAGTTTTCGGAACAAAACCTCTCTCCGCCCG 53119冀医四院冀医四院TR和TR基因MSP引物 Methylation analysis of TRand TR in tumor tissue(T)and corresponding normal tissues(N).u:indicates the presence of unmethylated genes;m:indicates the presence of methylated ge
7、nes.Cases 1:tumor-specific methylation;Case 2:the tumor is fully methylated,whereas the corresponding normal tissue has a very faint band demonstrating methylation;Case 3:both of tumor and corresponding normal tissue unmethylated.case 1 case 2 case 3冀医四院冀医四院 TRTR TRTR case 1 case 2 case 3Unmethylate
8、dMethylated原始序列：原始序列：GGGGAGCGTGGGGCGTGGCCAGAAACCGG GGGGAGCGTGGGGCGTGGCCAGAAACCGG 非甲基化序列：非甲基化序列：AAAAAACAAAAAACA ATAAAACTAAAACA ATAACCAAAAACCTAACCAAAAACCA AA A甲基化序列：甲基化序列：AAAAAACAAAAAACG GTAAAACTAAAACG GTAACCAAAAACCTAACCAAAAACCG GA A冀医四院冀医四院UnmethylatedTRMethylatedTR原始序列：原始序列：TCGGGCGGAGAGAGGTCCTGCTCGG
9、GCGGAGAGAGGTCCTGC非甲基化序列：非甲基化序列：T TT TGGGGGGT TGGAGAGAGGTTTTGTGGAGAGAGGTTTTGT甲基化序列：甲基化序列：T TC CGGGGGGC CGGAGAGAGGTTTTGTGGAGAGAGGTTTTGTFrequency of TR,gene methylation in ESCC and adjacent non-cancerous tissuesGeneMethylation ratio 2 Ptumor tissueadjacent non-cancerous tissueTR52.3%（34/65）40.7%(24/59)
10、1.6800.195TR70.8%(46/65)47.5%(28/59)6.984 0.008冀医四院冀医四院TR和TR基因MSP引物CGGTTTTTGGTTACGTTTTACGTTTTTUnmethylatedThe relationship between TR,gene methylation and clinical data in ESCC头颈部鳞癌、胃癌及胰腺癌细胞株中TR基因甲基化与其表达降低有关。UnmethylatedThanks for your attention!147CAACCCTCCAAAACTAACAACTAAACAATR和TR基因MSP引物GAAAGTCGGTT
11、AAAGTTTTCGGA传统的多途径多步骤的基因突变引起肿瘤的观点日益受到挑战，目前众多的研究者认为，肿瘤最早的发生可能源于干细胞阶段的表观遗传学改变，表观遗传学的改变可能发生的更早些。adjacent non-cancerous tissueWell-moderatelyWell-moderately部分肿瘤组织可能由于基因启动子区甲基化程度不足以抑制转录而导致了发生甲基化的组织其mRNA表达仍可为阳性。Non-cancerous tissueThe relationship between methylation and mRNA expression of TRand CAACCCTCC
12、AAAACTAACAACTAAACAAmethylation The relationship between TR,gene methylation and clinical data in ESCCGroup TR TRNMU2PMU2PESCC6534314619Age6037172028960281711 1.3930.2381810 1.0000.317GenderMale5126253516Female1486 0.1670.683113 0.1540.694Clinical stage+3721162710+281315 0.6820.409199 0.2020.653Diffe
13、rential degreeWell-moderately5530254015Poorly1046 0.2530.61564 0.1900.663冀医四院冀医四院 Frequency of TR,gene methylation in common in ESCC and adjacent non-cancerous tissueGroup TR and geneSimultaneousmethylationNon-simultaneousmethylation2Ptumor tissue31(47.7%)343.8210.051Non-cancerous tissue18(30.5%)41冀
14、医四院冀医四院The relationship between TR,gene methylation in common and clinical dates in ESCCGroup TR and gene SimultaneousmethylationNon-simultaneousmethylation2PDifferential degreeWell-moderately28270.7630.382Poorly37Clinical stage+19180.4610.497+1216冀医四院冀医四院 目前认为目前认为DNADNA甲基化主要在转录水平抑甲基化主要在转录水平抑制基因的表达，
15、制基因的表达，TGF-TGF-受体受体、基基因的甲基化对其因的甲基化对其mRNAmRNA的表达是否有影的表达是否有影响呢？响呢？冀医四院冀医四院 基因 引物序列（53）退火温度 ()产物大小 (bp)TR GGAGAAGAAGTTGCTGTTAAG 57 419 ATGGTATCTGTGGCTGAATC TR CAACATCAACCACAACACAGAG 54 248 CCGTCTTCCGCTCCTCAG GAPDH GGGAAACTGTGGCGTGAT 60 342 GTGGTCGTTGAGGGCAATTR和TR基因 RT-PCR引物冀医四院冀医四院 RT-PCR analysis of T
16、R ma:100bp DNA marker;1,3,5,6:positive mRNA expression;2,4:negative mRNA expression冀医四院冀医四院 RT-PCR analysis of TR ma:100bp DNA marker;1,3,5,6:positive mRNA expression;2,4:negative mRNA expressionThe expression of TR,mRNA in ESCC tumor and adjacent non-cancerous tissuesGeneTumor tissueadjacent non-ca
17、ncerous tissuetPTR0.770.170.990.31-3.3930.001TR0.890.301.100.29-2.3580.022冀医四院冀医四院GeneESCCtPMethylatedUnmethylatedTR0.740.180.810.15-1.2870.206TR0.860.330.950.20-0.9220.362The relationship between methylation and mRNA expression of TRand 冀医四院冀医四院 本研究结果显示食管鳞癌组织中本研究结果显示食管鳞癌组织中TRTR的甲的甲基化率高于癌旁组织，其基化率高于癌
18、旁组织，其mRNAmRNA的表达量也明的表达量也明显低于癌旁组织，但是发生甲基化的癌组织显低于癌旁组织，但是发生甲基化的癌组织与未发生甲基化的癌组织相比，其与未发生甲基化的癌组织相比，其mRNAmRNA表达表达虽然降低，但却无统计学差异。虽然降低，但却无统计学差异。冀医四院冀医四院部分肿瘤组织可能由于基因启动子区甲基化部分肿瘤组织可能由于基因启动子区甲基化程度不足以抑制转录而导致了发生甲基化的程度不足以抑制转录而导致了发生甲基化的组织其组织其mRNAmRNA表达仍可为阳性。表达仍可为阳性。1除了甲基化外，可能还有其他使该基因表达除了甲基化外，可能还有其他使该基因表达下调的遗传学和表观遗传学改变
19、，如基因突下调的遗传学和表观遗传学改变，如基因突变、组蛋白乙酰化等。变、组蛋白乙酰化等。2结结 论论结 论 TRTR基因基因mRNAmRNA表达异常可能与食管鳞癌的发生有关表达异常可能与食管鳞癌的发生有关,但其甲基化可能在食管鳞癌的发生发展中不起主要作但其甲基化可能在食管鳞癌的发生发展中不起主要作用。用。TRTR基因的甲基化和蛋白表达异常可能与食管鳞癌基因的甲基化和蛋白表达异常可能与食管鳞癌的发生有关，但其甲基化有可能不是导致其蛋白表达的发生有关，但其甲基化有可能不是导致其蛋白表达异常的主要原因。异常的主要原因。冀医四院冀医四院UnmethylatedRT-PCR analysis of TR
20、RT-PCR analysis of TRUnmethylated对非小细胞肺癌、前列腺癌的研究显示，TR基因的表达缺失与其甲基化之间存在高度相关性。小细胞肺癌中TR和表达缺失与基因甲基化无关。Frequency of TR,gene methylation in ESCC and adjacent non-cancerous tissuesCases 1:tumor-specific methylation;Case 2:the tumor is fully methylated,whereas the corresponding normal tissue has a very faint
21、 band demonstrating methylation;Case 3:both of tumor and corresponding normal tissue unmethylated.UnmethylatedTR和TR基因MSP引物RT-PCR analysis of TR部分肿瘤组织可能由于基因启动子区甲基化程度不足以抑制转录而导致了发生甲基化的组织其mRNA表达仍可为阳性。GAAAGTCGGTTAAAGTTTTCGGAGTGGTCGTTGAGGGCAATCGGTTTTTGGTTACGTTTTACGTTTTTTTGAAAGTTGGTTAAAGTTTTTGGADifferentia
22、l degree部分肿瘤组织可能由于基因启动子区甲基化程度不足以抑制转录而导致了发生甲基化的组织其mRNA表达仍可为阳性。ATGGTATCTGTGGCTGAATC部分肿瘤组织可能由于基因启动子区甲基化程度不足以抑制转录而导致了发生甲基化的组织其mRNA表达仍可为阳性。传统的多途径多步骤的基因突变引起肿瘤的观点日传统的多途径多步骤的基因突变引起肿瘤的观点日益受到挑战，目前众多的研究者认为，肿瘤最早的益受到挑战，目前众多的研究者认为，肿瘤最早的发生可能源于干细胞阶段的表观遗传学改变，表观发生可能源于干细胞阶段的表观遗传学改变，表观遗传学的改变可能发生的更早些。遗传学的改变可能发生的更早些。RNAR
23、NA干扰干扰 表观遗传学表观遗传学DNADNA甲基化甲基化组蛋白修饰组蛋白修饰染色体重塑染色体重塑冀医四院冀医四院 头颈部鳞癌、胃癌及头颈部鳞癌、胃癌及胰腺癌细胞株中胰腺癌细胞株中TRTR基因甲基因甲基化与其表达降低有关。基化与其表达降低有关。对非小细胞肺癌、前列腺癌的研究显示，对非小细胞肺癌、前列腺癌的研究显示，TRTR基基因的表达缺失与其甲基化之间存在高度相关性。因的表达缺失与其甲基化之间存在高度相关性。小细胞肺癌中小细胞肺癌中TRTR和和表达缺失与基因甲基化无关。表达缺失与基因甲基化无关。冀医四院冀医四院UnmethylatedMethylated原始序列：原始序列：GGGGAGCGTG
24、GGGCGTGGCCAGAAACCGG GGGGAGCGTGGGGCGTGGCCAGAAACCGG 非甲基化序列：非甲基化序列：AAAAAACAAAAAACA ATAAAACTAAAACA ATAACCAAAAACCTAACCAAAAACCA AA A甲基化序列：甲基化序列：AAAAAACAAAAAACG GTAAAACTAAAACG GTAACCAAAAACCTAACCAAAAACCG GA A冀医四院冀医四院UnmethylatedTRMethylatedTR原始序列：原始序列：TCGGGCGGAGAGAGGTCCTGCTCGGGCGGAGAGAGGTCCTGC非甲基化序列：非甲基化序列：
25、T TT TGGGGGGT TGGAGAGAGGTTTTGTGGAGAGAGGTTTTGT甲基化序列：甲基化序列：T TC CGGGGGGC CGGAGAGAGGTTTTGTGGAGAGAGGTTTTGT 目前认为目前认为DNADNA甲基化主要在转录水平抑甲基化主要在转录水平抑制基因的表达，制基因的表达，TGF-TGF-受体受体、基基因的甲基化对其因的甲基化对其mRNAmRNA的表达是否有影的表达是否有影响呢？响呢？冀医四院冀医四院GeneESCCtPMethylatedUnmethylatedTR0.740.180.810.15-1.2870.206TR0.860.330.950.20-0.
26、9220.362The relationship between methylation and mRNA expression of TRand 冀医四院冀医四院CGGTTTTTGGTTACGTTTTACGTTTTTTTGAAAGTTGGTTAAAGTTTTTGGASimultaneousClinical stage原始序列：GGGGAGCGTGGGGCGTGGCCAGAAACCGGCAACCCTCCAAAACTAACAACTAAACAAGAAAGTCGGTTAAAGTTTTCGGAThe relationship between TR,gene methylation and clinic
27、al data in ESCCWell-moderatelyGAAAGTCGGTTAAAGTTTTCGGATR原始序列：TCGGGCGGAGAGAGGTCCTGC部分肿瘤组织可能由于基因启动子区甲基化程度不足以抑制转录而导致了发生甲基化的组织其mRNA表达仍可为阳性。对非小细胞肺癌、前列腺癌的研究显示，TR基因的表达缺失与其甲基化之间存在高度相关性。甲基化序列：TCGGGCGGAGAGAGGTTTTGTTumor tissueGGAGAAGAAGTTGCTGTTAAGGTGGTCGTTGAGGGCAATThe relationship between methylation and mRNA
28、expression of TRand 传统的多途径多步骤的基因突变引起肿瘤的观点日益受到挑战，目前众多的研究者认为，肿瘤最早的发生可能源于干细胞阶段的表观遗传学改变，表观遗传学的改变可能发生的更早些。UnmethylatedDifferential degreeCAACCCTCCAAAACTAACAACTAAACAART-PCR analysis of TRRT-PCR analysis of TRGAAAGTCGGTTAAAGTTTTCGGATR和TR基因 RT-PCR引物Thanks for your attention!The relationship between TR,gene
29、methylation in common and clinical dates in ESCCmethylationGAAAGTCGGTTAAAGTTTTCGGACCGTCTTCCGCTCCTCAGClinical stage原始序列：GGGGAGCGTGGGGCGTGGCCAGAAACCGG头颈部鳞癌、胃癌及胰腺癌细胞株中TR基因甲基化与其表达降低有关。TNM分期：、期37例，、期28例The relationship between TR,gene methylation in common and clinical dates in ESCC目前认为DNA甲基化主要在转录水平抑制基因的
30、表达，TGF-受体、基因的甲基化对其mRNA的表达是否有影响呢？TNM分期：、期37例，、期28例Tumor tissueTR and geneWell-moderatelyRT-PCR analysis of TR传统的多途径多步骤的基因突变引起肿瘤的观点日益受到挑战，目前众多的研究者认为，肿瘤最早的发生可能源于干细胞阶段的表观遗传学改变，表观遗传学的改变可能发生的更早些。ma:100bp DNA marker;1,3,5,6:positive mRNA expression;2,4:negative mRNA expression原始序列：GGGGAGCGTGGGGCGTGGCCAGAAA
31、CCGGCAACCCTCCAAAACTAACAACTAAACAA部分肿瘤组织可能由于基因启动子区甲基化程度不足以抑制转录而导致了发生甲基化的组织其mRNA表达仍可为阳性。Thanks for your attention!GAAAGTCGGTTAAAGTTTTCGGATNM分期：、期37例，、期28例The relationship between TR,gene methylation and clinical data in ESCCUnmethylatedGAAAGTCGGTTAAAGTTTTCGGAThe expression of TR,mRNA in ESCC tumor and
32、adjacent non-cancerous tissuesTR对非小细胞肺癌、前列腺癌的研究显示，TR基因的表达缺失与其甲基化之间存在高度相关性。UnmethylatedUnmethylatedadjacent non-cancerous tissueTR和TR基因MSP引物CAACCCTCCAAAACTAACAACTAAACAATGTTGGTTTTTGGTTATGTTTTATGTTTTTT342非甲基化序列：AAAAAACATAAAACATAACCAAAAACCAART-PCR analysis of TRMethylation ratioThe relationship between
33、TR,gene methylation in common and clinical dates in ESCCThe relationship between methylation and mRNA expression of TRand ACAAAACCTCTCTCCGCCCG非甲基化序列：AAAAAACATAAAACATAACCAAAAACCAA123DNA 甲基化是在DNA甲基转移酶的作用下,以S-腺苷甲硫氨酸为甲基供体,将甲基基团转移到胞嘧啶第5位碳原子上,从而转变成5-甲基胞嘧啶（5-mC）。TRmethylationtumor tissueThanks for your att
34、ention!部分肿瘤组织可能由于基因启动子区甲基化程度不足以抑制转录而导致了发生甲基化的组织其mRNA表达仍可为阳性。UnmethylatedRT-PCR analysis of TRCases 1:tumor-specific methylation;Case 2:the tumor is fully methylated,whereas the corresponding normal tissue has a very faint band demonstrating methylation;Case 3:both of tumor and corresponding normal t
35、issue unmethylated.Frequency of TR,gene methylation in ESCC and adjacent non-cancerous tissuesUnmethylatedACAAAACCTCTCTCCGCCCGUnmethylatedThe relationship between TR,gene methylation in common and clinical dates in ESCCUnmethylated部分肿瘤组织可能由于基因启动子区甲基化程度不足以抑制转录而导致了发生甲基化的组织其mRNA表达仍可为阳性。TR and gene目前认为D
36、NA甲基化主要在转录水平抑制基因的表达，TGF-受体、基因的甲基化对其mRNA的表达是否有影响呢？Simultaneous对非小细胞肺癌、前列腺癌的研究显示，TR基因的表达缺失与其甲基化之间存在高度相关性。原始序列：TCGGGCGGAGAGAGGTCCTGC部分肿瘤组织可能由于基因启动子区甲基化程度不足以抑制转录而导致了发生甲基化的组织其mRNA表达仍可为阳性。目前认为DNA甲基化主要在转录水平抑制基因的表达，TGF-受体、基因的甲基化对其mRNA的表达是否有影响呢？The relationship between TR,gene methylation in common and clinical dates in ESCC非甲基化序列：AAAAAACATAAAACATAACCAAAAACCAA部分肿瘤组织可能由于基因启动子区甲基化程度不足以抑制转录而导致了发生甲基化的组织其mRNA表达仍可为阳性。TNM分期：、期37例，、期28例RT-PCR analysis of TRWell-moderatelyRT-PCR analysis of TRThe relationship between methylation and mRNA expression of TRand
