1、1第四章第四章 药物定量分析与分析方法验证药物定量分析与分析方法验证2本章主要内容:本章主要内容:第一节第一节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法 一、概述一、概述 二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法 三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点第三节第三节 药品分析方法验证药品分析方法验证3本章主要学习目的:本章主要学习目的:1.熟悉不经有机破坏的分析方法;熟悉不经有机破坏的分析方法;2.熟悉经有机破坏的分析方法;熟悉经有机破坏的分析方法;3.掌握氧瓶燃烧法;掌握氧瓶燃烧法;4.掌握测定方法的效能指标。掌握
2、测定方法的效能指标。4目的目的:使待测药物或待测元素转化为适宜的测定方使待测药物或待测元素转化为适宜的测定方式式,从而利于分析测定。从而利于分析测定。优点优点:增加测定的专属性和灵敏度。增加测定的专属性和灵敏度。第一节第一节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法 样品种类:样品种类:1.1.含卤素元素(含卤素元素(F F、ClCl、BrBr、I I)2.2.含金属元素(含金属元素(CaCa、FeFe、HgHg、ZnZn、SnSn 、Bi)Bi)3.3.含含N N、P P、S S 等元素等元素 5 (一)含卤素有机药物(一)含卤素有机药物 系指药物分子结构中所含卤素直接与芳环系指药物
3、分子结构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者,而不包括某些有机药物的卤或脂肪链相连者,而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐。酸盐或氢卤酸盐。结构特点:结构特点:CX一、概一、概 述述第一节第一节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法6卤原子的活泼性卤原子的活泼性1 1、卤原子与碳原子直接相连,卤原卤原子与碳原子直接相连,卤原子的活泼性和它直接相连的烃基的结子的活泼性和它直接相连的烃基的结构有很大关系构有很大关系.7(1)乙烯型卤和芳卤)乙烯型卤和芳卤 不活泼不活泼CH2CH XX(2)烯丙型卤和苄卤)烯丙型卤和苄卤 活泼活泼CH2XCH2CH CH2X(3)卤代烷型)卤代烷型 介于
4、两者之间介于两者之间CH2CH(CH2)nX n282.分子中所含卤原子的个数分子中所含卤原子的个数 分子中所含卤原子的个数越多,活泼性越强,特分子中所含卤原子的个数越多,活泼性越强,特别是同一碳上含多个卤原子或一个苯环上含多个卤原别是同一碳上含多个卤原子或一个苯环上含多个卤原子时,活泼性增强更加明显。子时,活泼性增强更加明显。3.卤素的种类卤素的种类I、Br、Cl、F9CCH3OHCH3CCl3CCl3Cl3C三氯叔丁醇三氯叔丁醇六氯对二甲苯六氯对二甲苯常见的含卤素有机药物常见的含卤素有机药物10COOHIIINHCOCH3CH3CONH泛影酸泛影酸11(二)含金属有机药物(二)含金属有机药
5、物 含金属的有机药物:含金属的有机药物:金属原子不与碳原子直接相金属原子不与碳原子直接相连,通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物连,通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物。如如酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸亚铁酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸亚铁 有机金属药物:有机金属药物:金属原子直接与碳原子以共价键相金属原子直接与碳原子以共价键相连,连,结合比较牢固结合比较牢固。如如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利12CCHOCHOOOCOOSbSbOOCOOOCHOCHC2K+3H2O酒石酸锑钾酒石酸锑钾13CCHCCOOOFeOMg(C17H35COO)2硬脂酸镁硬脂酸镁富马酸亚铁富马
6、酸亚铁14CH2OHCHOHCHOCHOCHOCOO-SbOHOSbO-OCHCHCHCCHOOCH2-OOHOHONa39H2O葡萄糖酸锑钠葡萄糖酸锑钠15含金属或卤素有机药物定量分析含金属或卤素有机药物定量分析前的处理方法有两大类:前的处理方法有两大类:1.1.不经有机破坏的分析方法不经有机破坏的分析方法(3(3种方法种方法)直接测定法直接测定法;经水解后测定法经水解后测定法;经还原后测经还原后测定法;定法;2.2.经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法(2(2种方法种方法)湿法破坏湿法破坏(硝酸硝酸-高氯酸法高氯酸法;硝酸硝酸-硫酸法硫酸法;硫硫酸酸-硫酸盐法等硫酸盐法等););干法破
7、坏干法破坏。16二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法(一)(一)直接测定法直接测定法 适用于金属原子不直接与碳原子相连适用于金属原子不直接与碳原子相连的含金属有机药物或某些的含金属有机药物或某些CM键键结合不牢结合不牢固固的有机金属药物的有机金属药物,在水溶液中在水溶液中可电离可电离。本法主要适用于含金属有机药物或结合不牢固本法主要适用于含金属有机药物或结合不牢固的含卤素等药物的分析。的含卤素等药物的分析。17(1 1)金属离子不直接与碳原子相连)金属离子不直接与碳原子相连 例如:乳酸钙例如:乳酸钙 0.3g+0.3g+水水100ml 100ml 放冷放冷+NaOH+NaOH
8、15ml 15ml EDTAEDTA钠盐滴定钠盐滴定 钙紫红素指示剂钙紫红素指示剂 (紫紫纯蓝纯蓝)指示剂指示剂+碱碱指示剂指示剂-钙钙加热加热(一)(一)直接测定法直接测定法18(2 2)适用于适用于C-M(C-M(金属原子直接与碳原金属原子直接与碳原子相连)键结合不牢固的有机金属药物子相连)键结合不牢固的有机金属药物,在水溶液中可以电离。在水溶液中可以电离。例如:例如:富马酸亚铁富马酸亚铁溶于热硫酸,同时分解释溶于热硫酸,同时分解释放出亚铁离子,可选用铈量法进行测定。放出亚铁离子,可选用铈量法进行测定。19例例1 富马酸亚铁的含量测定富马酸亚铁的含量测定 取本品约取本品约0.3g,精密称定
9、,精密称定,加稀硫酸加稀硫酸 15ml,加热溶解后,加热溶解后,放冷,加新沸过的冷水放冷,加新沸过的冷水50ml与邻二氮菲指示液与邻二氮菲指示液2 滴,立即用滴,立即用硫酸铈硫酸铈滴滴定液定液(0.1mol/L)滴定,并将滴定的结果用空白滴定,并将滴定的结果用空白试验校正。每试验校正。每1ml硫酸铈滴定液硫酸铈滴定液(0.1mol/L)相当相当于于16.99mg。C4H2FeO420原理原理Fe2+Ce4+Ce3+Fe2+NN3Fe2+e NN3Fe3+红色红色浅蓝色浅蓝色OCCHOFeHCCOOOOCCHOHCCO+Fe2+21 例例2 葡萄糖酸锑钠葡萄糖酸锑钠的的测定测定 ChP(2000
10、)取本品约取本品约0.3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加,精密称定,置具塞锥形瓶中,加水水100ml、盐酸、盐酸15ml与碘化钾试液与碘化钾试液10ml,密塞、振摇,密塞、振摇后,在暗处静置后,在暗处静置10min,用硫代硫酸钠滴定液,用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定,至近终点时,加淀粉指示液,继续滴滴定,至近终点时,加淀粉指示液,继续滴定至蓝色消失,并将滴定的结果用空白试验校正。每定至蓝色消失,并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的硫代硫酸钠滴定液的硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于相当于6.088mg的的Sb。K2ISbKI2Sb23H56423222OSNaNaI2O
11、SNa2I221.1.碱水解测定法碱水解测定法 将含卤素的有机药物溶于适当溶剂(如乙将含卤素的有机药物溶于适当溶剂(如乙醇)中醇)中,加氢氧化钠加氢氧化钠溶液或溶液或硝酸银硝酸银溶液后溶液后,加热回加热回流使其水解流使其水解,将有机结合的卤素将有机结合的卤素,经水解作用转变经水解作用转变为无机的卤素离子为无机的卤素离子,然后选用然后选用间接银量法间接银量法进行测进行测定。定。(二)(二)经水解后测定法经水解后测定法23 原理原理 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解,三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解,氯元素全部转变成氯元素全部转变成氯化钠氯化钠,然后用剩余滴定法,即于,然后用剩余滴定法
12、,即于水解液中加硝酸酸化,再加入定量过量的硝酸银滴定水解液中加硝酸酸化,再加入定量过量的硝酸银滴定液,使液,使Cl-生成生成AgCl沉淀,过量的硝酸银,以沉淀,过量的硝酸银,以Fe3+为指为指示剂,用硫氰酸铵液回滴定。示剂,用硫氰酸铵液回滴定。例例1 三氯叔丁醇的测定三氯叔丁醇的测定 24例例1 三氯叔丁醇三氯叔丁醇CCl3C(CH3)2 OH +NaOH (CH3)2 CO+NaCl+HCOONa NaCl+AgNO3 AgCl+NaNO3 AgNO3+NH4SCN AgSCN+NH4NO3Fe3+为指示剂为指示剂:淡红棕色淡红棕色Fe3+SCN Fe(SCN)2+定量过量定量过量25 2
13、2、酸水解后测定法、酸水解后测定法 硬脂酸镁与硬脂酸镁与定量硫酸定量硫酸共沸、水解生成硬共沸、水解生成硬脂酸和硫酸镁脂酸和硫酸镁,剩余的酸剩余的酸以氢氧化钠滴定。以氢氧化钠滴定。Mg(C17H35COO)2+H2SO4 MgSO4+2 C17HCOOH H2SO4+NaOH Na2SO4+H2O 26(三)经还原后测定法(三)经还原后测定法 卤素结合于芳环上卤素结合于芳环上,由于分子碘的结由于分子碘的结合较合较牢固牢固,需在碱性溶液中加还原剂(如锌需在碱性溶液中加还原剂(如锌粉)粉),加热回流加热回流,使使碳碳-碘键断裂碘键断裂,形成无机形成无机碘化物后测定。碘化物后测定。27例例1 泛影酸的
14、测定泛影酸的测定 ChP(2005)取本品约取本品约0.4g,精密称定,精密称定,加氢氧化钠溶加氢氧化钠溶液液30ml与锌粉与锌粉1.0g,加热回流,加热回流30min,放冷,放冷,冷凝管用少量水洗涤,滤过,烧瓶与滤器用水冷凝管用少量水洗涤,滤过,烧瓶与滤器用水洗涤洗涤3次,每次次,每次15ml,洗液与滤液合并,加冰,洗液与滤液合并,加冰醋酸醋酸5ml与曙红钠指示液与曙红钠指示液5滴,用硝酸银滴定液滴,用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于相当于20.46mg的的C11H9 I 3N2O4。28COOHINHCOCH3IIH3
15、COCHN+11NaOH +Zn回流回流COONaN H2 H2N+3NaI +2CH3COONa+2Na2ZnO2 +H2O29三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法 适用于金属原子与碳原子适用于金属原子与碳原子结合牢固的有机金属药结合牢固的有机金属药物物。(一)(一)湿法破坏湿法破坏 本法主要使用硫酸作为分解剂,常加入氧化剂作为本法主要使用硫酸作为分解剂,常加入氧化剂作为辅助分解剂。根据分解剂组合形式的不同,湿法破坏辅助分解剂。根据分解剂组合形式的不同,湿法破坏法分为若干种,如硫酸硝酸法、硫酸法分为若干种,如硫酸硝酸法、硫酸-高氯酸法、高氯酸法、硫酸硫酸盐法硫酸硫酸盐法、硝酸高锰
16、酸钾法等。硝酸高锰酸钾法等。301 湿法破坏法湿法破坏法 硝酸硝酸-高氯酸法高氯酸法 破坏力强,不适于含氮杂环破坏力强,不适于含氮杂环.(.(高价态高价态)硝酸硝酸-硫酸法硫酸法 适于大多数有机物质破坏适于大多数有机物质破坏(高价态高价态)不适于含碱土金属的药物不适于含碱土金属的药物(M+(M+硫酸反应硫酸反应)硫酸硫酸-硫酸盐法硫酸盐法(如凯式定氮法如凯式定氮法)常用于含砷、锑有机药物常用于含砷、锑有机药物(低价态低价态)31(二)(二)干法破坏干法破坏 适用于湿法不易破坏完全的有机物以及某些适用于湿法不易破坏完全的有机物以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。不适用于含易不能用硫酸进行破坏的
17、有机药物。不适用于含易挥发性金属(如汞、砷等)有机药物的破坏。挥发性金属(如汞、砷等)有机药物的破坏。这里分为:这里分为:a.高温高温灼烧法灼烧法 b.氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法32 适用于含氮杂环适用于含氮杂环+含碱土金属药物。含碱土金属药物。不适于汞、砷的测定。不适于汞、砷的测定。1.1.高温灼烧法高温灼烧法 将有机物灼烧灰化,使有机结构分解而待测将有机物灼烧灰化,使有机结构分解而待测元素转化为无机元素或可溶性无机盐,以供分析。元素转化为无机元素或可溶性无机盐,以供分析。常加无水碳酸钠或轻质氧化镁等辅助灰化。常加无水碳酸钠或轻质氧化镁等辅助灰化。湿法破坏不完全的药物湿法破坏不完全的药物332 2
18、、氧瓶燃烧法、氧瓶燃烧法p84p84 将有机药物放入充满氧气的密闭烧瓶中进将有机药物放入充满氧气的密闭烧瓶中进行燃烧行燃烧,使有机结构部分彻底分解为使有机结构部分彻底分解为二氧化碳和水二氧化碳和水,而待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的而待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物,被收于氧化物,被收于适当吸收液适当吸收液中中,然后根据欲测物质然后根据欲测物质的性质的性质,采用适当分析方法进行鉴别、检查或含量采用适当分析方法进行鉴别、检查或含量测定。测定。原理:原理:34NaClHClOClCNaOH2 溶液点燃 适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析。适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药
19、物的分析。本法特点是简便、快速、破坏完全,尤其适用于本法特点是简便、快速、破坏完全,尤其适用于微量样品的分析。微量样品的分析。35 (1)仪器装置)仪器装置 燃烧瓶为燃烧瓶为500、1000或或2000ml无色、无色、磨口、厚壁、磨口、厚壁、硬质硬质玻璃锥型瓶;瓶塞玻璃锥型瓶;瓶塞空心,底部熔封铂丝一根,下端呈螺空心,底部熔封铂丝一根,下端呈螺旋状或网状旋状或网状,长度约为瓶身的长度约为瓶身的2/32/3。36图图2 氧瓶燃烧装置与样品包装操作图氧瓶燃烧装置与样品包装操作图37 A.作用:作用:吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮
20、、硒等,定量地吸收并转变种价态的卤素、硫、氮、硒等,定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态。为一定的便于测定的价态。(2)吸收液的选择)吸收液的选择38B.吸收液的选择吸收液的选择样品样品吸收液吸收液产物吸收前状态产物吸收前状态含含F含含Cl含含Br含含I水水水-NaOH水水-NaOH-SO2水水-NaOH-SO2水水-NaOH+溴溴-醋酸醋酸HF HCl HBr+Br2 BrHI+HIO3+HIOI-HI+HIO3+HIOHIO339(3)样品制备)样品制备 A.固体样品固体样品 无灰滤纸无灰滤纸 B.液体样品液体样品 纸袋纸袋 C.软膏类样品:将适量样品置不含被测成软膏类样品:将适量样品置
21、不含被测成分的蜡油纸中包裹严密,外层再用无灰滤纸包分的蜡油纸中包裹严密,外层再用无灰滤纸包裹。裹。40 在燃烧瓶内加入规定的在燃烧瓶内加入规定的吸收液吸收液,并将瓶口用水,并将瓶口用水湿润;小心急速湿润;小心急速通氧气通氧气约约1分钟,立即用表面皿覆盖分钟,立即用表面皿覆盖瓶口,备用;瓶口,备用;点燃点燃包有供试品的滤纸包或纸袋尾部,包有供试品的滤纸包或纸袋尾部,迅速放入燃烧瓶中,按紧瓶塞,加水少量封闭瓶口,迅速放入燃烧瓶中,按紧瓶塞,加水少量封闭瓶口,俟燃烧完毕(应无黑色碎片),俟燃烧完毕(应无黑色碎片),充分振摇充分振摇,使生成的,使生成的烟雾完全吸入吸收液中,放置烟雾完全吸入吸收液中,放
22、置15min,用水少量冲洗,用水少量冲洗瓶塞及铂丝,合并洗液及吸收液,同法另做空白试验。瓶塞及铂丝,合并洗液及吸收液,同法另做空白试验。然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测定。测定。(4)操作方法)操作方法41 充氧气要充分充氧气要充分 使样品燃烧完全使样品燃烧完全,一般急速通氧气一般急速通氧气1212分分钟钟,燃烧完全时没有黑色炭化物。燃烧完全时没有黑色炭化物。防护措施防护措施:戴防护眼睛;瓶外包湿毛巾戴防护眼睛;瓶外包湿毛巾防爆防爆 样品燃烧时样品燃烧时,温度很高温度很高,燃烧瓶内压力很大燃烧瓶内压力很大,有有爆炸的可能性爆炸的可能
23、性,必须采取防护措施。必须采取防护措施。42 吸收完全吸收完全一般振摇一般振摇30,30,燃烧瓶看不到烟雾。燃烧瓶看不到烟雾。ClCl、F F白色烟雾白色烟雾 BrBr棕色棕色 I I紫色紫色43例例 碘苯酯的含量测定碘苯酯的含量测定 ChP(2005)原理原理 碘苯酯系有机碘化物,用碘苯酯系有机碘化物,用氧瓶燃烧分解氧瓶燃烧分解,转变为转变为碘化物,继而氧化为游离的碘,并被定量地吸收于碘化物,继而氧化为游离的碘,并被定量地吸收于吸收吸收液液中,和氢氧化钠反应,生成碘化物与碘酸盐,加入中,和氢氧化钠反应,生成碘化物与碘酸盐,加入溴溴-醋酸醋酸溶液,溶液,使全部转变为碘酸盐使全部转变为碘酸盐,过
24、量的溴以,过量的溴以甲酸甲酸及及通空气去除。加入碘化钾,使与碘酸盐反应析出通空气去除。加入碘化钾,使与碘酸盐反应析出游离碘,游离碘,用硫代硫酸钠液滴定,碘与淀粉结合所显的蓝色消失即用硫代硫酸钠液滴定,碘与淀粉结合所显的蓝色消失即为终点为终点。44实例实例-碘苯酯的含量测定碘苯酯的含量测定C(CH2)8COOC2H5CH3I 淀粉作指示剂 终点:蓝色消失 样品 0.02mol/L Na2S2O3 O2/Pt 燃烧 NaOH-H2O 吸收 Br2-HAc 甲酸 空气 KI 45溴溴-醋酸醋酸的作用:将碘化物全部转为碘酸盐。的作用:将碘化物全部转为碘酸盐。甲酸甲酸的作用:除去过量的溴的作用:除去过量
25、的溴22COHBrHCOOHBr461.氧瓶燃烧法中的装置有氧瓶燃烧法中的装置有A.磨口硬质玻璃锥形瓶磨口硬质玻璃锥形瓶B.磨口软质玻璃锥形瓶磨口软质玻璃锥形瓶C.铂丝铂丝D.铁丝铁丝E.铝丝铝丝472.氧瓶燃烧法测定含氧瓶燃烧法测定含氯氯有机药物时所用的吸有机药物时所用的吸收液多数为收液多数为 A.H2O2溶液溶液 B.H2O2NaOH溶液溶液 C.水水NaOH溶液溶液 D硫酸肼饱和液硫酸肼饱和液 E.NaOH硫酸肼饱和液硫酸肼饱和液48第二节 定量分析方法的特点 容量分析法(也称滴定法)容量分析法(也称滴定法):是将已知浓度:是将已知浓度的滴定液(标准物质溶液)由滴定管滴加到被测的滴定液(
26、标准物质溶液)由滴定管滴加到被测药物反应完全(通过适当方法指示),然后根据药物反应完全(通过适当方法指示),然后根据滴定液的浓度和被消耗的体积滴定液的浓度和被消耗的体积,按化学计量关系,按化学计量关系计算出被测药物的含量。计算出被测药物的含量。一、定义一、定义49 1、滴定度、滴定度 系指每系指每1ml规定浓度的滴定液规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量所相当的被测药物的质量(用用mg表示表示)。2、滴定度、滴定度(T)的计算的计算50第三节第三节 药药品分析方法验证品分析方法验证方法验证目的方法验证目的:证明采用的方法适合于相应检测要求证明采用的方法适合于相应检测要求.1 1、研究新药时制
27、定质量标准分析方法;、研究新药时制定质量标准分析方法;2 2、药物生产方法变更、制剂组分变更、药物生产方法变更、制剂组分变更、原分析方法修订。原分析方法修订。511 1 鉴别试验。鉴别试验。需验证的分析项目:需验证的分析项目:2 2 原料药或制剂中有效成分含量测定。原料药或制剂中有效成分含量测定。3 3 杂质或制剂中其他成分(防腐剂等)的杂质或制剂中其他成分(防腐剂等)的定量测定或限度检查。定量测定或限度检查。4 4 药品溶出度、释放度等功能检查中药品溶出度、释放度等功能检查中,其溶出其溶出量的测定方法。量的测定方法。52验证的内容有验证的内容有:1.1.准确度准确度 2.2.精密度精密度 3
28、.3.专属性专属性 4.4.检测限检测限 5.5.定量限定量限 6.6.线性线性 7.7.范围范围 8.8.耐用性耐用性53 (一)(一)准确度(准确度(accuracy)准确度是指用该方法准确度是指用该方法测定的结果与真实值测定的结果与真实值或参考值接近的程度,用百分或参考值接近的程度,用百分回收率回收率表示。表示。541.含量测定方法的准确度含量测定方法的准确度 a、原料药的含量测定原料药的含量测定 用已知纯度的对照品或样品进行测定,或用本法用已知纯度的对照品或样品进行测定,或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。比较。%1
29、00AMR 回收试验 空白+已知量A的对照品(或标准品)测定,测定值为M55 b、制剂的含量测定制剂的含量测定 可用含己知量被测物的各组分混合物进行可用含己知量被测物的各组分混合物进行测定,即采用在测定,即采用在空白辅料空白辅料中加入原料药对照品中加入原料药对照品的方法。的方法。如不能得到制剂的全部组分,可向制如不能得到制剂的全部组分,可向制剂中加入已知量的被测物进行测定,或与另一剂中加入已知量的被测物进行测定,或与另一个已建立准确度的方法比较结果。个已建立准确度的方法比较结果。%100APMR562杂质定量测定的准确度杂质定量测定的准确度 可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如可向原料
30、药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如果不能得到杂质或降解产物,可用本法测定结果与另果不能得到杂质或降解产物,可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。一成熟的方法进行比较。3.数据要求 规定的范围内,至少用规定的范围内,至少用9次测定结果评价,如制备次测定结果评价,如制备三个不同浓度样品各测三次。三个不同浓度样品各测三次。57 (二)(二)精密度(精密度(precision)精密度是指在规定条件下,精密度是指在规定条件下,同一个均匀同一个均匀样品,样品,经多次取样测定所得经多次取样测定所得结果之间的接近程度结果之间的接近程度。用偏。用偏差(差(d)、标准偏差)、标准偏差(SD)、相对标准偏差相
31、对标准偏差(RSD)(变异系数,变异系数,CV)表示。)表示。58偏差(偏差(d d):测量值与平均值之差:测量值与平均值之差:xxdi标准(偏)差(标准(偏)差(SDSD或或S S):):12nxxSi相对标准(偏)差(相对标准(偏)差(RSDRSD),也称变异系数,也称变异系数(CVCV):):%100 xSRSD59 1.重复性重复性 在相同条件下,由在相同条件下,由同一个分析人员同一个分析人员测定所测定所得结果的精密度;在规定的范围内,至少用得结果的精密度;在规定的范围内,至少用9次次测定结果评价,如制备三个不同浓度样品各测测定结果评价,如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作
32、三次或把被测物浓度当作100%,至少测,至少测6次进次进行评价。行评价。60 2.中间精密度中间精密度 同一实验室,同一实验室,不同时间由不同分析人员不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。考察随机变用不同设备所得结果的精密度。考察随机变动因素的影响。变动因素为不同日期、不同动因素的影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备。分析人员、不同设备。61 3.重现性重现性 不同实验室,不同分析人员不同实验室,不同分析人员测定结果的精密测定结果的精密度。当分析方法将被法定标准采用时,应进行重度。当分析方法将被法定标准采用时,应进行重现性试验。如建立药典分析方法时通过协同检验现性试验。
33、如建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性结果,协同检验的过程、重现性结果得出重现性结果,协同检验的过程、重现性结果均应记载在起草说明中。均应记载在起草说明中。62 (三)专属性(三)专属性(specificity)指有其他成分(杂质、降解物、辅料等)可指有其他成分(杂质、降解物、辅料等)可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性,能反映该方法在有共存物时对供试物准确特性,能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力。是指该法用于而专属的测定能力。是指该法用于复杂样品分析复杂样品分析时相互干扰程度时相互干扰程度的度量。的度量。63(四)(
34、四)检测限(检测限(limit of detection,LOD)检测限系指试样中被测物能检测限系指试样中被测物能被检测被检测出的最低出的最低量。是限度试验参数,无需定量测定。量。是限度试验参数,无需定量测定。常用方法常用方法:用已知浓度被测物测定出能被可靠地检测用已知浓度被测物测定出能被可靠地检测出的最低浓度或量出的最低浓度或量.1.1.非仪器分析目视法非仪器分析目视法:64当用当用GCGC和和HPLCHPLC法时法时:一般用一般用 S/N=2 S/N=2 或或 S/N=3 S/N=3 时的相应浓时的相应浓度或量确定检测限度或量确定检测限.S/NS/N:它指音源产生最大不失真声音信号强度与:
35、它指音源产生最大不失真声音信号强度与同时发出噪音强度之间的比率称为信号噪声比同时发出噪音强度之间的比率称为信号噪声比越大越好越大越好 2.2.仪器分析时的测定方法仪器分析时的测定方法65(五)定量限(1imit of quantitation,LOQ)指样品中被测物能指样品中被测物能被定量测定被定量测定的最低量,的最低量,结果应具有一定准确度和精密度。结果应具有一定准确度和精密度。确定方法确定方法:1 1 仪器分析仪器分析 S/N=10 S/N=10 估算估算,并经配制相应浓度确认。并经配制相应浓度确认。2 2 非仪器分析目视法非仪器分析目视法 用已知浓度的被测物试验出能被准确测定的最用已知浓
36、度的被测物试验出能被准确测定的最低浓度或量。低浓度或量。66(六)(六)线性线性 在设计的范围内,测试结果与试样中被测物浓在设计的范围内,测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。度直接呈正比关系的程度。方法方法 作图法作图法 回归方程回归方程 Y=aX+b(rY=aX+b(r=1)=1)标准溶液溶液浓度应包括一定梯度的标准溶液溶液浓度应包括一定梯度的5-85-8个浓度。个浓度。标准曲线应覆盖样品可能的浓度范围。标准曲线应覆盖样品可能的浓度范围。数据要求:应列出回归方程、相关系数和线性图。数据要求:应列出回归方程、相关系数和线性图。67(七)范围(七)范围 指达到一定精密度、准确度和线性
37、的条件下,指达到一定精密度、准确度和线性的条件下,测试方法适用的测试方法适用的高低限浓度或量的区间高低限浓度或量的区间。原料和制剂含量测定范围应为测试浓度的原料和制剂含量测定范围应为测试浓度的 80%-120%;制剂含量均匀度检查范围应为测试浓度的制剂含量均匀度检查范围应为测试浓度的 70%-130%;68(八)(八)耐用性耐用性 指测定条件稍有变动时,指测定条件稍有变动时,结果不受影响的结果不受影响的承受程度承受程度,为常规检验提供依据。是衡量实验,为常规检验提供依据。是衡量实验室和工作人员之间在正常情况下实验结果重现室和工作人员之间在正常情况下实验结果重现性的尺度。性的尺度。是评价其保持不
38、受参数微小变差影响的能力是评价其保持不受参数微小变差影响的能力.69(九)应用(九)应用 P102 1 1、用于药物鉴别试验、用于药物鉴别试验 专属性专属性 耐用性耐用性 2 2、用于原料药中主成分或制剂中有效成分含量、用于原料药中主成分或制剂中有效成分含量测定方法测定方法 除不需检测限、定量限外其余除不需检测限、定量限外其余6 6项都需验证。项都需验证。3 3、原料药中杂质测定或制剂中降解产物等其他、原料药中杂质测定或制剂中降解产物等其他杂质测定方法杂质测定方法 用于定量用于定量-除检测限外其余除检测限外其余7 7项都需验证;项都需验证;用于限度检查用于限度检查-专属性专属性 耐用性耐用性
39、检测限。检测限。70 不同分析方法对验证参数的要求不同分析方法对验证参数的要求验证项目验证项目鉴鉴别别杂检杂检含量含量测定测定定定量量限量限量-+-+-+-+-+-+-+-+-+-+-+71(十)各种含量测定方法对效能指标(十)各种含量测定方法对效能指标的要求的要求 1.1.容量分析法:容量分析法:用原料药精制品用原料药精制品(含量含量99.599.5)或对照品考察方法的精密度,相对标或对照品考察方法的精密度,相对标准差一般应不大于准差一般应不大于0.20.2;进行回收率试验。;进行回收率试验。回回收率一般在收率一般在99.799.7100.3100.3之间之间。72 2.2.UV法法:用适当
40、浓度的精制品进行测定,其用适当浓度的精制品进行测定,其RSD一般不大于一般不大于1。制剂的。制剂的测定测定,回收率一般,回收率一般应在应在98102之间。之间。线性:线性:吸光度吸光度A一般在一般在0.20.7,浓度点,浓度点n5。用浓度。用浓度c对对A作线性回归处理,得一直线方作线性回归处理,得一直线方程,程,r应大于应大于0.999(n5),方程的截距应近于零。,方程的截距应近于零。73 3.HPLC法:法:要求要求RSD2,回收率回收率98102之间。之间。线性范围:用精制品配制一系列标准溶液,线性范围:用精制品配制一系列标准溶液,浓度点浓度点n应为应为57,用浓度,用浓度c对峰高对峰高
41、h或被测物或被测物的响应值之比进行回归处理,建立回归方程,的响应值之比进行回归处理,建立回归方程,r应大于应大于0.999,截距应趋于零。,截距应趋于零。专属性:要考查辅料、有关物质或降解产专属性:要考查辅料、有关物质或降解产物对主药的色谱峰是否有干扰,如有干扰应设物对主药的色谱峰是否有干扰,如有干扰应设法排除。法排除。74第四章第四章 本章作业本章作业 1、含卤素的有机药物依据其结构特点主要、含卤素的有机药物依据其结构特点主要有哪几种结构类型有哪几种结构类型,针对每种结构类型,适针对每种结构类型,适宜用那些方法进行样品前处理与含量测定?宜用那些方法进行样品前处理与含量测定?2、简述氧瓶燃烧法
42、测定药物的实验原理。、简述氧瓶燃烧法测定药物的实验原理。3、名词解释:滴定度、准确度、精密度。、名词解释:滴定度、准确度、精密度。751.精密度是指该法(精密度是指该法()A.测得的测量值与真值接近的程度测得的测量值与真值接近的程度 B.测得的测量值与回收率接近的程度测得的测量值与回收率接近的程度 C.测量的正确性测量的正确性 D.测得的一组测量值彼此符合的程度测得的一组测量值彼此符合的程度 E.对供试物准确而专属的测定能力对供试物准确而专属的测定能力 762.相对标准差表示(相对标准差表示()A.准确度B.回收率C.精密度D.纯净度E.限度773.用信噪比法表示检测限时,信噪比用信噪比法表示检测限时,信噪比一般应为(一般应为()A.1 1 B.2 1 C.3 1D.4 1 E.5 1784.药物鉴别试验所要求的效能指标为药物鉴别试验所要求的效能指标为()A.准确度B.精密度C.专属性D.检测限E.耐用性795、药物杂质限量检查所要求的效能指药物杂质限量检查所要求的效能指标为(标为()A.准确度准确度 B.精密度精密度 C.专属性专属性 D.检测限检测限 E.耐用性耐用性 本章本章结束结束