1、病原生物学教研室病原生物学教研室Department of pathogenic Biology of Gannan Medical University医学微生物学医学微生物学Medical Microbiology虫媒病毒（Arbovirus）n由节肢动物传播由节肢动物传播 (arthropod borne arboviruses)n为为RNA病毒病毒n非分类学概念非分类学概念虫媒病毒n黄病毒科黄病毒科（Flaviviridae）单正链单正链RNA，有包膜，二十面立体对称有包膜，二十面立体对称 乙型脑炎病毒、登革病毒、黄热病病毒、森林脑炎病毒乙型脑炎病毒、登革病毒、黄热病病毒、森林脑炎病毒
2、n披膜病毒科披膜病毒科（Togoviridae）单正链单正链RNA，有包膜，二十面立体对称有包膜，二十面立体对称 东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒委内瑞拉马脑炎病毒n布尼亚病毒科布尼亚病毒科（Bunyaviridae）单负链单负链RNA，有包膜，多形态有包膜，多形态 汉坦病毒、新疆出血热病毒、汉坦病毒、新疆出血热病毒、La Cross病毒病毒虫媒病毒 黄病毒科黄病毒科(黄病毒属黄病毒属)结构基因位于结构基因位于5端，端，合成聚合蛋白，在胞质内复制，内质网获合成聚合蛋白，在胞质内复制，内质网获得胞膜。得胞膜。披膜病毒科披膜病毒科(甲病毒属甲病毒属
3、)结构基因位于结构基因位于3端，端，分别合成早期蛋白与晚期蛋白，细胞膜芽分别合成早期蛋白与晚期蛋白，细胞膜芽生获胞膜。生获胞膜。虫媒病毒的基本特性n病毒呈球形，基因组为病毒呈球形，基因组为RNAn衣壳衣壳20面对称。具包膜。面对称。具包膜。n宿主广泛，节肢动物可长期储存宿主广泛，节肢动物可长期储存和传播病毒和传播病毒n症状以发热、脑炎、出血热为主症状以发热、脑炎、出血热为主n具明显的季节性及地方性具明显的季节性及地方性Life cycle of Arbovirus乙脑病毒、新疆出血热病毒等登革病毒虫媒病毒所致疾病n脑炎脑炎（encehpalitis）黄病毒科 乙型脑炎病毒、森林脑炎病毒、圣路易
4、斯脑炎病毒布尼亚病毒科 La Cross病毒 披膜病毒科 东方马脑炎病毒、西方马脑炎病 毒、委内瑞拉马脑炎病毒n出血热出血热（hemorrhagic fevers）黄病毒科 登革病毒、黄热病病毒布尼亚病毒科 汉坦病毒、新疆出血热病毒脑炎相关虫媒病毒脑炎相关虫媒病毒乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus）乙脑病毒的生物学性状n单正链单正链RNAn有包膜有包膜n二十面立体对称二十面立体对称n三种结构蛋白三种结构蛋白 E 镶嵌在包膜上的糖蛋白镶嵌在包膜上的糖蛋白 M 位于包膜的内面位于包膜的内面 C 为衣壳蛋白为衣壳蛋白n抗原性稳定抗原性稳定,仅一个血清型仅一个血清型乙
5、脑病毒的电镜照片Japanese encephalitis virusn5端帽结构端帽结构-非编码序列非编码序列-C-PrM-M-E-NS1-NS2a-NS2b-NS3-NS4a-NS4b-NS5-非编码序列非编码序列-polyA-3端端n易感动物易感动物:乳鼠乳鼠n细胞培养细胞培养:C6/36、幼猪肾原代细胞，产、幼猪肾原代细胞，产生明显的生明显的细胞病变细胞病变致病机制带毒蚊虫叮咬带毒蚊虫叮咬毛细血管内皮细胞及淋巴节内增殖毛细血管内皮细胞及淋巴节内增殖少量入血少量入血肝、脾单核巨噬细胞内肝、脾单核巨噬细胞内增殖增殖第二次病毒血症第二次病毒血症突破血脑屏障突破血脑屏障中枢神经系统广泛病变中枢
6、神经系统广泛病变顿挫感染顿挫感染第一次病毒血症第一次病毒血症流感样综合症入血入血流行病学n传染源及储存宿主传染源及储存宿主 主要传染源是家畜、家禽主要传染源是家畜、家禽 猪猪蚊蚊猪猪的传播环节的传播环节 病毒在蚊体内增殖，可终身带毒病毒在蚊体内增殖，可终身带毒n传播媒介传播媒介 三带喙库蚊三带喙库蚊、伊蚊、按蚊、伊蚊、按蚊n易感人群易感人群 人群对乙脑病毒普遍易感人群对乙脑病毒普遍易感 通常流行区以通常流行区以10岁以下的儿童发病较多岁以下的儿童发病较多 病后免疫力强而持久，罕有二次发病者病后免疫力强而持久，罕有二次发病者乙型脑炎的流行特征n乙脑仅分布在亚洲乙脑仅分布在亚洲n8090%的病例都
7、集中在的病例都集中在7、8、9三个月内三个月内n华南地区华南地区67月月，华北地区华北地区78月月，东北地东北地区区89月月，均与蚊虫密度曲线相一致均与蚊虫密度曲线相一致n乙脑呈高度散发性乙脑呈高度散发性临床特点n轻型轻型 体温通常在体温通常在3839,患者神志始终清晰，有不同程度嗜患者神志始终清晰，有不同程度嗜睡，睡，一般无抽搐，脑膜刺激不明显一般无抽搐，脑膜刺激不明显,多在一周内恢复多在一周内恢复n中型中型 体温常在体温常在40左右左右,有意识障碍如昏睡或浅昏迷，偶有抽搐有意识障碍如昏睡或浅昏迷，偶有抽搐 病程约为病程约为10天天n重型重型 体温在体温在40以上，神志昏迷，持续性抽搐以上，
8、神志昏迷，持续性抽搐,可出现呼吸衰竭可出现呼吸衰竭,恢复期常有不同程度的精神异常及瘫痪表现恢复期常有不同程度的精神异常及瘫痪表现n暴发型暴发型 有高热或超高热有高热或超高热,深昏迷并有反复强烈抽搐深昏迷并有反复强烈抽搐,可在短期内因中可在短期内因中 枢性呼吸衰竭而死亡枢性呼吸衰竭而死亡,幸存者也常有严重后遗症幸存者也常有严重后遗症免疫性n感染后感染后57天出现天出现IgMnIgG血凝抑制抗体血凝抑制抗体n中和抗体中和抗体n补体结合抗体（无保护作用）补体结合抗体（无保护作用）n免疫力稳定持久，隐性感染也可获免疫力免疫力稳定持久，隐性感染也可获免疫力实验室检查n脑脊液检查脑脊液检查 化脓性脑膜炎化
9、脓性脑膜炎IgM明显升高，结核性脑膜炎则明显升高，结核性脑膜炎则IgA、IgG升高显著，而病毒性脑膜炎在后期时升高显著，而病毒性脑膜炎在后期时IgG可有升可有升高高n病毒分离病毒分离 尸检或以延髓穿刺取脑组织制成悬液，离心后取上清尸检或以延髓穿刺取脑组织制成悬液，离心后取上清液接种乳鼠脑内或做细胞培养，可作回顾性诊断液接种乳鼠脑内或做细胞培养，可作回顾性诊断n血清学检查血清学检查 特异特异IgM检测检测（4D出现，出现，2-3W高峰）高峰）90%血清学检查nELISAELISA法法 检测血清或脑脊液中的特异性IgM抗体n二巯基乙醇（2ME）耐性试验 由于单份血清即有辅助价值，故可对乙脑进行早期
10、诊断n血凝抑制试验 测定IgM抗体及IgG抗体，双份血清效价增长4倍以上可确诊 单份血清抗体效价1:100为可疑，1:320可作诊断、1:640可确诊n中和试验 效价增长4倍以上可确诊。早期为IgM，后期为IgGn补体结合试验乙脑的预防n灭蚊防蚊灭蚊防蚊 稻田养鱼或洒药等措施控制稻田蚊虫孽生；在畜圈内稻田养鱼或洒药等措施控制稻田蚊虫孽生；在畜圈内喷洒杀虫剂喷洒杀虫剂n人群免疫人群免疫 灭活疫苗和减毒活疫苗灭活疫苗和减毒活疫苗 对象主要为流行区对象主要为流行区6个月以上个月以上10岁以下的儿童岁以下的儿童 在流行前在流行前1个月开始，间隔个月开始，间隔710天复种天复种1次，以后每次，以后每年加
11、强注射一次年加强注射一次森林脑炎病毒n生物学性状与乙脑病毒相似生物学性状与乙脑病毒相似n蜱蜱是传播媒介也是储存宿主是传播媒介也是储存宿主n在我国东北和西北林区曾有流行在我国东北和西北林区曾有流行n林区工作者应接种疫苗林区工作者应接种疫苗n病后免疫力持久病后免疫力持久出血热相关虫媒病毒n出血热出血热（hemorrhagic fevers）黄病毒科 登革病毒、黄热病病毒布尼亚病毒科 汉坦病毒、新疆出血热病毒登革病毒（dengue virus）n登革病毒登革病毒(Dengue virus)感染引起登革热感染引起登革热n该病流行于热带、亚热带地区，特别是东该病流行于热带、亚热带地区，特别是东南亚、西太
12、平洋及中南美洲南亚、西太平洋及中南美洲n我国于我国于1978年在广东佛山首次发现本病，年在广东佛山首次发现本病，以后在海南岛及广西等地均有发现以后在海南岛及广西等地均有发现生物学性状n病毒颗粒呈哑铃状（病毒颗粒呈哑铃状（70020-40nm）、）、棒状或棒状或球形（直径为球形（直径为20-50nm）n单正链单正链RNAn基因编码序列：基因编码序列：5端帽结构端帽结构-非编码序列非编码序列-AUG-C-M-E-NS1-NS2a-NS2b-NS3-NS4a-NS4b-NS5-非编码序列非编码序列n外层为两种糖蛋白组成的包膜，包膜含有型和群特外层为两种糖蛋白组成的包膜，包膜含有型和群特异性抗原异性抗
13、原，4个血清型个血清型nE是主要包膜蛋白，是主要包膜蛋白，M增强病毒的感染性增强病毒的感染性n登革病毒对寒冷的低抗力强登革病毒对寒冷的低抗力强，-70可存活可存活8年之久年之久不耐热不耐热，不耐酸、不耐醚不耐酸、不耐醚致病机制带毒蚊虫叮咬带毒蚊虫叮咬单核细胞、巨噬细单核细胞、巨噬细胞、网状内皮系统胞、网状内皮系统增殖增殖病毒血症病毒血症靶细胞为单核-巨噬细胞登革热登革热登革出血热休登革出血热休克综合症克综合症发病原理的三种假说n病毒株的毒力不同病毒株的毒力不同 型病毒引起登革出血热，其他型病毒引起登革热型病毒引起登革出血热，其他型病毒引起登革热n病毒变异病毒变异 认为病毒基因变异后导致毒力增强
14、认为病毒基因变异后导致毒力增强n二次感染学说二次感染学说 有人报告有人报告55例登革出血热患者，其中例登革出血热患者，其中51例均为二次感染例均为二次感染 抗体依赖促病毒感染作用（抗体依赖促病毒感染作用（ADE）流行病学n传染源传染源 患者和隐性感染者为主要传染源患者和隐性感染者为主要传染源 轻型患者数量为典型患者的轻型患者数量为典型患者的10倍，隐性感染者为人群的倍，隐性感染者为人群的1/3 丛林山区的猴子和城市中某些家畜可感染登革病毒丛林山区的猴子和城市中某些家畜可感染登革病毒n传播媒介传播媒介 伊蚊伊蚊 病毒在蚊体内复制，传染期长者可达病毒在蚊体内复制，传染期长者可达174174日日 是
15、病毒的储存宿主是病毒的储存宿主流行特征n地方性地方性 凡有伊蚊孳生的自然条件及人口密度高的地区凡有伊蚊孳生的自然条件及人口密度高的地区 城镇的发病率高于农村城镇的发病率高于农村n季节性季节性 发病季节与伊蚊密度、雨量相关发病季节与伊蚊密度、雨量相关 广东、广西为广东、广西为510月，海南省月，海南省310月月n突然性突然性 流行多突然发生流行多突然发生n传播迅速传播迅速 1978年年5月广东省佛山市石湾镇月广东省佛山市石湾镇，1980年年3月海南省流行月海南省流行临床表现潜伏期潜伏期58天，按世界卫生组织标准分为天，按世界卫生组织标准分为n登革热登革热 发热发热 骨、关节疼痛骨、关节疼痛 皮疹
16、皮疹 出血出血 全身中毒样症状全身中毒样症状 （轻型、典型、重型）（轻型、典型、重型）n登革出血热登革出血热 开始表现为典型登革热开始表现为典型登革热，出血倾向严重出血倾向严重 常有两个以上器官大量出血常有两个以上器官大量出血，出血量大于出血量大于100mln登革休克综合征登革休克综合征 在病程中或退热后，病情突然加重在病程中或退热后，病情突然加重 有明显出血倾向伴周围循环衰竭有明显出血倾向伴周围循环衰竭登革出血热（Dengue hemorrhagic fever）黑斑蚊皮下出血胰腺组织切片实验室检查n病毒分离病毒分离 急性期患者血清急性期患者血清 白纹伊蚊胸内（白纹伊蚊细胞株白纹伊蚊胸内（白
17、纹伊蚊细胞株C6/36）（）（13D）小白鼠脑内、猴肾细胞株小白鼠脑内、猴肾细胞株n血清学检查血清学检查 单份血清补体结合试验效价超过单份血清补体结合试验效价超过1：32 红细胞凝集抑制试验效价超过红细胞凝集抑制试验效价超过1：1280者有诊断意义者有诊断意义 双份血清恢复期抗体效价比急性期高双份血清恢复期抗体效价比急性期高4倍以上者可以确诊倍以上者可以确诊 ELISA法及斑点免疫测定法法及斑点免疫测定法检测检测IgM（D80%、610D 99%）预防n预防措施的重点在于预防措施的重点在于防蚊和灭蚊防蚊和灭蚊汉坦病毒（hantavirus）n肾综合征出血热（HFRS）及汉坦病毒肺综合征（HPS
18、）的病原n由鼠类等传播的自然疫源性急性病毒性传染病n首先由韩国李镐汪等在1978年从该国疫区捕获的黑线姬鼠肺组织中分离出，并根据分离地点称为汉滩病毒生物学性状n有包膜，包膜上有刺突有包膜，包膜上有刺突n单负链单负链RNA，分为分为L、M、S三节段三节段 大小不同，但大小不同，但3末端相同末端相同n四种病毒蛋白四种病毒蛋白 RNA多聚酶多聚酶 糖蛋白糖蛋白G1、G2 核衣壳蛋白（核衣壳蛋白（N）npH5.66.4时可凝集鹅红细胞时可凝集鹅红细胞聚聚合合酶酶G1G2N其它生物学特性n培养特性培养特性 可在人肺传代细胞（可在人肺传代细胞（A549）等中增殖等中增殖 不引起明显的细胞病变不引起明显的细
19、胞病变 在感染细胞细胞质内形成包涵体在感染细胞细胞质内形成包涵体n病毒型别病毒型别 据基因序列和抗原性可分为据基因序列和抗原性可分为14个型别个型别 我国流行的是汉坦病毒和汉城病毒我国流行的是汉坦病毒和汉城病毒n抵抗力抵抗力 对酸（对酸（pH3）和丙酮、氯仿、乙醚等脂溶剂敏感和丙酮、氯仿、乙醚等脂溶剂敏感 6060分钟可灭活病毒分钟可灭活病毒传播途径n黑线姬鼠和褐家鼠是我国各疫区黑线姬鼠和褐家鼠是我国各疫区HFRS病病毒的主要宿主动物和传染源毒的主要宿主动物和传染源n可能的途径有可能的途径有3类类5种种 动物源性传播（呼吸道、消化道动物源性传播（呼吸道、消化道、伤口）伤口）虫媒传播虫媒传播（厉
20、螨）厉螨）垂直传播垂直传播流行特点n疫源地遍及世界五大洲疫源地遍及世界五大洲n我国是我国是HFRS疫情最严重的国家疫情最严重的国家n本世纪本世纪30年代首先在黑龙江省孙吴县发现此病年代首先在黑龙江省孙吴县发现此病n80年代中期以来，年发病人数超过年代中期以来，年发病人数超过10万，病万，病死率为死率为35%，有的地区高达，有的地区高达10%n分地区性和季节性分地区性和季节性肾综合征出血热（HFRS）n潜伏期一般为两周左右，起病急，发展快潜伏期一般为两周左右，起病急，发展快n典型病例具有典型病例具有三大主症三大主症，即发热、出血和肾脏，即发热、出血和肾脏损害损害n病程分为发热期、低血压休克期、少
21、尿期、多病程分为发热期、低血压休克期、少尿期、多尿期和恢复期尿期和恢复期nHFRS的发病机理很复杂的发病机理很复杂 嗜嗜毛细血管内皮细胞及免疫细胞毛细血管内皮细胞及免疫细胞 病毒直接作用病毒直接作用、免疫病理损伤、免疫病理损伤免疫性nG1和和G2糖蛋白刺激产生中和抗体和血凝抑制糖蛋白刺激产生中和抗体和血凝抑制抗体抗体（起主要作用）起主要作用）nN蛋白刺激产生的特异性抗体蛋白刺激产生的特异性抗体n感染后感染后抗体出现早抗体出现早 12天即可检测出天即可检测出lgM抗体，第抗体，第710天达高峰天达高峰 34天可检测出天可检测出lgG抗体，第抗体，第1420天达高峰天达高峰n细胞免疫也有重要作用细
22、胞免疫也有重要作用n免疫力牢固免疫力牢固 lgG抗体在体内可持续存在抗体在体内可持续存在30余年余年 隐性感染产生的免疫力多不能持久隐性感染产生的免疫力多不能持久汉坦病毒肺综合征（HPS）n汉坦病毒属的辛诺柏病毒为病原汉坦病毒属的辛诺柏病毒为病原n以以肺组织急性出血、坏死肺组织急性出血、坏死为主为主n常引起双侧肺弥散性浸润、间质水肿常引起双侧肺弥散性浸润、间质水肿n严重时可导致呼吸衰竭严重时可导致呼吸衰竭微生物学检查n病毒分离病毒分离 病人急性期血液、尸检组织或感染动物的肺、肾等组织均可用于病人急性期血液、尸检组织或感染动物的肺、肾等组织均可用于病毒分离病毒分离 Vero-E6细胞分离培养，培
23、养细胞分离培养，培养714天后，用免疫荧光染色法检天后，用免疫荧光染色法检查细胞内是否有病毒抗原，胞浆内出现黄绿色颗粒荧光为阳性查细胞内是否有病毒抗原，胞浆内出现黄绿色颗粒荧光为阳性 取检材接种易感动物来分离病毒，常用者为小白鼠乳鼠，通过腹取检材接种易感动物来分离病毒，常用者为小白鼠乳鼠，通过腹腔或脑内接种腔或脑内接种 细胞或动物分离培养阴性者继续盲传，连续三代阴性者方能肯定细胞或动物分离培养阴性者继续盲传，连续三代阴性者方能肯定为阴性为阴性血清学检查n检测特异性检测特异性lgM 抗体抗体 抗体在发病后第抗体在发病后第12天即可检出天即可检出 急性期阳性率可达急性期阳性率可达95%以上以上 具
24、有早期诊断价值具有早期诊断价值n检测特异性检测特异性lgG抗体抗体 需检测双份血清（间隔至少一周）需检测双份血清（间隔至少一周）抗体效价抗体效价4倍升高有诊断意义倍升高有诊断意义 可用于血清流行病学调查可用于血清流行病学调查n检测血凝抑制抗体检测血凝抑制抗体 血凝抑制试验血凝抑制试验 辅助诊断和流行病学调查辅助诊断和流行病学调查预防与治疗n灭鼠、防鼠灭鼠、防鼠n注意个人防护注意个人防护n三类三类HFRS疫苗疫苗 纯化鼠脑灭活疫苗纯化鼠脑灭活疫苗 细胞培养灭活疫苗细胞培养灭活疫苗 基因工程疫苗基因工程疫苗n病毒唑有一定疗效病毒唑有一定疗效 新疆出血热病毒n属布尼亚病毒科属布尼亚病毒科n病毒结构、
25、培养特性、抵抗力与汉坦病病毒结构、培养特性、抵抗力与汉坦病毒相似毒相似n抗原性、致病性及传播方式与汉坦病毒抗原性、致病性及传播方式与汉坦病毒不同不同新疆出血热n自然疫源疾病，主要分布于有硬蜱活动的荒漠自然疫源疾病，主要分布于有硬蜱活动的荒漠和牧场和牧场n野生啮齿动物（牛、羊、马、骆驼等）是储存野生啮齿动物（牛、羊、马、骆驼等）是储存宿主宿主n传播媒介为亚洲璃眼蜱，病毒也可经卵传递传播媒介为亚洲璃眼蜱，病毒也可经卵传递n发病有明显的季节性，每年发病有明显的季节性，每年45月为流行高峰月为流行高峰n潜伏期潜伏期7天左右，临床表现为发热、全身疼痛、天左右，临床表现为发热、全身疼痛、出血及中毒症状出血及中毒症状n病后免疫力牢固病后免疫力牢固埃波拉病毒（Ebola virus）n有包膜、单股负链有包膜、单股负链RNA、螺旋对称、螺旋对称n损伤血管内皮细胞损伤血管内皮细胞n多部位出血，以胃肠道为主；可广泛组多部位出血，以胃肠道为主；可广泛组织坏死织坏死n传染性强，可经接触污染物而传播传染性强，可经接触污染物而传播n治疗艰难，可用干扰素治疗艰难，可用干扰素/康复血清康复血清
