1、1 动物实验基本技术动物实验基本技术 2 实验动物实验动物抓取与固定抓取与固定 实验动物实验动物分组与标记分组与标记 实验动物实验动物被毛去除方法被毛去除方法 实验动物实验动物给药给药 实验动物实验动物麻醉麻醉 实验动物实验动物取血取血 实验动物实验动物处死处死 动物实验基本技术动物实验基本技术 3 一、实验动物抓取与固定一、实验动物抓取与固定 目的：目的：暴露手术操作部位暴露手术操作部位 小鼠小鼠的抓取保定的抓取保定 大鼠大鼠的抓取保定的抓取保定 豚鼠的抓取保定豚鼠的抓取保定 家兔的抓取保定家兔的抓取保定 4 1.1.小鼠的抓取保定小鼠的抓取保定 抓取：抓取： 右手右手抓住鼠尾并提起，把小鼠
2、置于笼盖或其抓住鼠尾并提起，把小鼠置于笼盖或其 他粗糙面上，向后方他粗糙面上，向后方轻拉轻拉 左手左手拇指和食指捏住拇指和食指捏住其两耳和颈部皮肤其两耳和颈部皮肤 右手右手拉紧小鼠尾部，拉紧小鼠尾部，拉直拉直鼠身，鼠身， 左手左手无名指和小指压紧无名指和小指压紧尾巴和后肢，尾巴和后肢，中指和中指和 手掌心夹住手掌心夹住背部皮肤，使小鼠呈一直线背部皮肤，使小鼠呈一直线 保定：保定：四肢及门牙用棉线固定在解剖台上四肢及门牙用棉线固定在解剖台上 5 1.1.小鼠的抓取保定小鼠的抓取保定 抓取：抓取： 右手右手抓住鼠尾并提起，把小鼠置于笼盖或其抓住鼠尾并提起，把小鼠置于笼盖或其 他粗糙面上，向后方他粗
3、糙面上，向后方轻拉轻拉 左手左手拇指和食指捏住拇指和食指捏住其两耳和颈部皮肤其两耳和颈部皮肤 右手右手拉紧小鼠尾部，拉紧小鼠尾部，拉直拉直鼠身，鼠身， 左手左手无名指和小指压紧无名指和小指压紧尾巴和后肢，尾巴和后肢，中指和中指和 手掌心夹住手掌心夹住背部皮肤，使小鼠呈一直线背部皮肤，使小鼠呈一直线 保定：保定：四肢及门牙用棉线固定在解剖台上四肢及门牙用棉线固定在解剖台上 6 2.2.大鼠的抓取保定大鼠的抓取保定 抓取：抓取：基本同小鼠基本同小鼠 右手右手抓住鼠尾并提起，把大鼠置于笼盖或其抓住鼠尾并提起，把大鼠置于笼盖或其 他粗糙面上，向后方他粗糙面上，向后方轻拉轻拉 左手左手顺序顺序按卡按卡大
4、鼠背部，稍加压力向头部大鼠背部，稍加压力向头部滑滑 行行，拇指和食指捏住拇指和食指捏住其两耳和颈部皮肤其两耳和颈部皮肤 右手右手拉紧大鼠尾部，拉紧大鼠尾部，拉直拉直鼠身，鼠身， 左手左手其余三指固定其余三指固定背部皮肤在大鱼际肌上背部皮肤在大鱼际肌上 保定：保定：同小鼠同小鼠 7 3.3.豚鼠的抓取保定豚鼠的抓取保定 抓取：抓取： 左手左手轻轻轻轻扣扣、按住按住豚鼠背部，顺势抓住其肩豚鼠背部，顺势抓住其肩 胛上方皮肤，胛上方皮肤，拇指和食指环握拇指和食指环握颈部颈部 右手右手托住其臀部托住其臀部 抓取时必须快、准、稳、柔抓取时必须快、准、稳、柔 8 4.4.家兔的抓取保定家兔的抓取保定 抓取：
5、抓取： 右手右手抓住抓住颈背部皮肤，提起家兔颈背部皮肤，提起家兔 左手左手托住其臀部托住其臀部 保定：保定： 四肢和门牙固定在手术台上，其中前肢是交四肢和门牙固定在手术台上，其中前肢是交 叉固定。叉固定。 9 4.4.家兔的抓取保定家兔的抓取保定 抓取：抓取： 右手右手抓住抓住颈背部皮肤，提起家兔颈背部皮肤，提起家兔 左手左手托住其臀部托住其臀部 保定：保定： 四肢和门牙固定在手术台上，其中前肢是四肢和门牙固定在手术台上，其中前肢是交交 叉固定叉固定。 10 二、实验动物分组与标记二、实验动物分组与标记 1.分组：分组： 分组原则分组原则-随机分组随机分组 每只动物都有每只动物都有同等机会同等
6、机会被分配到各个实验组被分配到各个实验组 中去，避免人为因素对实验造成影响。中去，避免人为因素对实验造成影响。 建立对照组建立对照组 11 分组原则分组原则-随机分组随机分组(1)(1) 完全完全随机分组：随机分组： 将全部动物将全部动物编号编号 从随机数表中任取一段随机数字，给各个动从随机数表中任取一段随机数字，给各个动 物依次物依次配号配号 按所配数字的奇偶（按所配数字的奇偶（两组两组）或除以组数后的）或除以组数后的 余数（余数（两组以上两组以上）作为归入的组次）作为归入的组次分组分组 最后随机最后随机调整调整，使各组的动物数达到均等，使各组的动物数达到均等 12 完全完全随机分组随机分组
7、-如如小鼠小鼠20只，分甲、乙两组只，分甲、乙两组 小鼠小鼠编编为为1号号20号号 随机数表中取出随机数表中取出20个随机数依次分个随机数依次分配配给给120 号动物号动物 设单数为甲设单数为甲组组，双数为乙组（下表），结果，双数为乙组（下表），结果 甲组甲组9只，乙组只，乙组11只只 动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 随 机 数 03 47 43 73 86 36 96 47 36 61 68 34 30 13 70 55 74 30 77 12 组 别 甲 甲 甲 甲 乙 乙 乙 甲 乙 甲 乙 乙 乙 甲 乙
8、甲 乙 乙 甲 乙 分组原则分组原则-随机分组随机分组(1)(1) 13 完全完全随机分组随机分组-如如小鼠小鼠20只，分甲、乙两组只，分甲、乙两组 小鼠小鼠编编为为1号号20号号 随机数表中取出随机数表中取出20个随机数依次分个随机数依次分配配给给120 号动物号动物 设单数为甲设单数为甲组组，双数为乙组（表，双数为乙组（表1-3-2），结），结 果甲组果甲组9只，乙组只，乙组11只只 再查随机数表的第再查随机数表的第21个数为个数为13，将，将13111 余余2。则将乙组中的第二位（。则将乙组中的第二位（6号动物）取出号动物）取出 给甲组。若差数给甲组。若差数2，可依次法，可依次法调整调整
9、直至两组直至两组 动物数相等。动物数相等。 分组原则分组原则-随机分组随机分组(1)(1) 14 简化简化随机分组随机分组-实际工作中实际工作中 从随机数表中的任一数字开始顺序取数，把从随机数表中的任一数字开始顺序取数，把 取得的随机数除以组数，将所得余数作为这取得的随机数除以组数，将所得余数作为这 一轮一轮开始分配的组次开始分配的组次，从该组开始，从该组开始顺序分配顺序分配 一只一只 再取下一个随机数，除以组数，所得余数作再取下一个随机数，除以组数，所得余数作 为为下一轮下一轮分配开始的组次分配开始的组次，顺序分配顺序分配每组一每组一 只，直到分完为止。只，直到分完为止。 分组原则分组原则-
10、随机分组随机分组(2)(2) 15 空白对照空白对照-不加任何处理，排除动物本身的不加任何处理，排除动物本身的 影响影响 实验对照实验对照-实验条件对照实验条件对照 标准对照标准对照-标准值对照（标准值对照（阳性对照阳性对照） 自身对照自身对照-自身前后对照自身前后对照 相互对照相互对照-各实验组相互对照各实验组相互对照 建立对照组建立对照组 16 目的目的-将同种动物进行区别，以便于观察。将同种动物进行区别，以便于观察。 要求要求-编号方法不对动物生理或实验反应产编号方法不对动物生理或实验反应产 生影响，且号码清楚、易认和耐久。生影响，且号码清楚、易认和耐久。 常用方法：常用方法： 染色法染
11、色法 耳孔法耳孔法 烙印法烙印法 挂牌法挂牌法 2.2.标记编号标记编号 17 用化学药品在实验动物身体明显部位涂染，用化学药品在实验动物身体明显部位涂染， 以染色部位、颜色标记区分实验动物。以染色部位、颜色标记区分实验动物。 缺点：缺点： 长时间使用，染色剂会自行褪色，需不断补长时间使用，染色剂会自行褪色，需不断补 充和加深染色充和加深染色-慢性实验不适用慢性实验不适用 染色剂的毒性对实验动物的影响染色剂的毒性对实验动物的影响 适用动物适用动物-大、小鼠大、小鼠 染色法染色法 18 3%5%苦味酸苦味酸，染成，染成黄色黄色 0.5%中性红或品红溶液，染成红色中性红或品红溶液，染成红色 2%硝
12、酸银溶液，染成咖啡色硝酸银溶液，染成咖啡色 煤焦油酒精溶液，染成黑色煤焦油酒精溶液，染成黑色 染色法染色法-常用染色剂常用染色剂 19 单色涂染法：单色涂染法： 单一颜色的染色剂涂染单一颜色的染色剂涂染 涂染顺序：从左到右，从上到下涂染顺序：从左到右，从上到下 适用于每组实验动物不超过适用于每组实验动物不超过10只只 染色法染色法-染色方法染色方法 20 双色涂染法：双色涂染法： 两种颜色同时染色标记，一种标记为个位数，两种颜色同时染色标记，一种标记为个位数， 另一种标记为十位数另一种标记为十位数 涂染方法同单色涂染法涂染方法同单色涂染法 可标记可标记100位以内的号码位以内的号码 直接标号法
13、：直接标号法： 染色剂直接在实验动物身上编写号码染色剂直接在实验动物身上编写号码 实验动物太小或号码位数太多不适宜实验动物太小或号码位数太多不适宜 染色法染色法-染色方法染色方法 21 用用打孔机打孔机直接在实验动物的耳朵上直接在实验动物的耳朵上打孔打孔编号，编号， 根据打在动物耳朵上的部位和孔的多少来区根据打在动物耳朵上的部位和孔的多少来区 分实验动物。分实验动物。 打孔后须用消毒过的滑石粉抹在打孔局部，打孔后须用消毒过的滑石粉抹在打孔局部， 以免伤口愈合将耳孔闭合。以免伤口愈合将耳孔闭合。 也可用也可用剪刀剪刀在实验动物的耳廓上在实验动物的耳廓上剪缺口剪缺口的方的方 法来区分实验动物。法来
14、区分实验动物。 适用动物适用动物-家兔家兔 耳孔法耳孔法 22 用用打孔机打孔机直接在实验动物的耳朵上直接在实验动物的耳朵上打孔打孔编号，编号， 根据打在动物耳朵上的部位和孔的多少来区根据打在动物耳朵上的部位和孔的多少来区 分实验动物。分实验动物。 打孔后须用消毒过的滑石粉抹在打孔局部，打孔后须用消毒过的滑石粉抹在打孔局部， 以免伤口愈合将耳孔闭合。以免伤口愈合将耳孔闭合。 也可用也可用剪刀剪刀在实验动物的耳廓上在实验动物的耳廓上剪缺口剪缺口的方的方 法来区分实验动物。法来区分实验动物。 适用动物适用动物-家兔家兔 耳孔法耳孔法 23 直接把标记编号直接把标记编号烙印烙印在实验动物身上，如盖在
15、实验动物身上，如盖 印章一样，用来区别实验动物。印章一样，用来区别实验动物。 适用动物适用动物-犬犬 烙印法烙印法 24 将编好的号码烙印在金属牌上，将编好的号码烙印在金属牌上，挂挂在实验动在实验动 物颈部、耳部、肢体或笼具上，用来区别实物颈部、耳部、肢体或笼具上，用来区别实 验动物。验动物。 适用动物适用动物-犬、猴和猫犬、猴和猫 挂牌法挂牌法 25 三、实验动物被毛去除方法三、实验动物被毛去除方法 目的：目的：去除实验操作局部的被毛，可避免去除实验操作局部的被毛，可避免 影响实验操作和观察。影响实验操作和观察。 常用被毛去除方法：常用被毛去除方法： 拔毛法拔毛法 剪毛法剪毛法 剃毛法剃毛法
16、 脱毛法脱毛法 26 1.1.拔毛法拔毛法 方法：方法：固定动物后，用食指和拇指将暴露固定动物后，用食指和拇指将暴露 部位的毛拔去。部位的毛拔去。 优点：优点：刺激局部组织产生扩张血管的作用刺激局部组织产生扩张血管的作用 采用部位：采用部位：血管血管暴露，进行采血或动、静暴露，进行采血或动、静 脉穿刺，如脉穿刺，如兔耳缘静脉兔耳缘静脉、鼠尾静脉鼠尾静脉采血采血 27 2.2.剪毛法剪毛法 方法：方法：固定动物后，用水湿润局部被毛，固定动物后，用水湿润局部被毛， 绷紧局部皮肤，用剪刀紧贴皮肤表面剪去被绷紧局部皮肤，用剪刀紧贴皮肤表面剪去被 毛。毛。 采用部位：采用部位：皮肤皮肤暴露，进行手术操作
17、的需暴露，进行手术操作的需 要，如要，如兔和犬颈部兔和犬颈部手术，手术，兔胸、腹部兔胸、腹部手术手术 注意：注意： 剪毛过程中不可提起被毛剪毛过程中不可提起被毛 剪下的被毛应及时清理剪下的被毛应及时清理 28 3.3.剃毛法剃毛法 方法：方法：固定动物后，用刷子蘸温肥皂水将固定动物后，用刷子蘸温肥皂水将 局部被毛湿润，用剪毛法剪去被毛，然后用局部被毛湿润，用剪毛法剪去被毛，然后用 剃毛刀逆被毛生长方向剃去残余被毛。剃毛刀逆被毛生长方向剃去残余被毛。 采用部位：采用部位：皮肤皮肤暴露，暴露，大动物手术区域皮大动物手术区域皮 肤肤的术前准备的术前准备 注意：注意： 剃毛时必须绷紧局部皮肤剃毛时必须
18、绷紧局部皮肤 29 4.4.脱毛法脱毛法 方法：方法：剪剪去局部被毛，用镊子夹棉球或纱去局部被毛，用镊子夹棉球或纱 布蘸布蘸脱毛剂脱毛剂涂涂抹在已剪去被毛部位，抹在已剪去被毛部位，35min 后用温水后用温水洗洗去脱下的毛和脱毛剂，用干纱布去脱下的毛和脱毛剂，用干纱布 擦擦干后干后涂涂上一层油脂。上一层油脂。 采用部位：采用部位：皮肤皮肤暴露，如大动物无菌手术、暴露，如大动物无菌手术、 局部皮肤刺激性实验和局部血液循环局部皮肤刺激性实验和局部血液循环 常用脱毛剂常用脱毛剂：(鼠和兔用鼠和兔用1、2，犬用，犬用3) 配方配方1：硫化钠硫化钠8g溶于溶于100ml水中水中 配方配方2：硫化钠硫化钠
19、:肥皂粉肥皂粉:淀粉为淀粉为3:1:7，加水成糊状，加水成糊状 配方配方3：硫化钠硫化钠10g和生石灰和生石灰15g溶于溶于100ml水中水中 30 四、实验动物给药四、实验动物给药 灌胃灌胃 皮下注射皮下注射 静脉注射静脉注射 腹腔注射腹腔注射 31 1.1.灌胃灌胃 准备：准备：连接连接灌胃针灌胃针的注射器吸入待灌药液的注射器吸入待灌药液 32 1.1.灌胃灌胃 准备：准备：连接灌胃针的注射器吸入待灌药液连接灌胃针的注射器吸入待灌药液 过程：过程： 一手一手固定动物固定动物，并使体位为，并使体位为头高位头高位 一手一手持注射器持注射器，将灌胃针从动物，将灌胃针从动物口角插入口角插入， 并并
20、紧贴上腭紧贴上腭，经咽后壁经咽后壁插入至预定深度插入至预定深度 深度：深度：小鼠小鼠3cm，大鼠，大鼠5cm 灌胃量：灌胃量：小鼠小鼠0.010.03 ml/g ，大鼠，大鼠0.01 0.02 ml/g 33 1.1.灌胃灌胃 准备：准备：连接灌胃针的注射器吸入待灌药液连接灌胃针的注射器吸入待灌药液 过程：过程： 一手一手固定动物固定动物，并使体位为，并使体位为头高位头高位 一手一手持注射器持注射器，将灌胃针从动物，将灌胃针从动物口角插入口角插入， 并并紧贴上腭紧贴上腭，经咽后壁经咽后壁插入至预定深度插入至预定深度 深度：深度：小鼠小鼠3cm，大鼠，大鼠5cm 灌胃量：灌胃量：小鼠小鼠0.01
21、0.03 ml/g ，大鼠，大鼠0.01 0.02 ml/g 34 2.2.皮下注射皮下注射 准备：准备：注射器吸入待注射药液注射器吸入待注射药液 过程：过程： 局部皮肤消毒局部皮肤消毒（背部）（背部） 一手拇指和中指将背部一手拇指和中指将背部皮肤提起皮肤提起，食指轻按其皮肤，食指轻按其皮肤， 使其形成一个使其形成一个三角小窝三角小窝 一手一手持注射器持注射器从三角窝下部从三角窝下部刺入刺入皮下，轻轻皮下，轻轻摆动摆动针针 头，易摇动表明针尖在皮下，头，易摇动表明针尖在皮下，回抽回抽无血后无血后注入注入药液药液 拔针拔针时时左手左手捏住捏住针刺部位片刻，防止药液流出针刺部位片刻，防止药液流出
22、注射量：注射量：小鼠小鼠0.01ml/g ，大鼠，大鼠0.010.03 ml/g 35 3.3.静脉注射静脉注射（尾静脉尾静脉） 准备：准备： 全新全新注射器注射器吸入待注射药液吸入待注射药液 动物动物固定固定在固定器中，并露出尾巴在固定器中，并露出尾巴 用用4550的的温水浸泡温水浸泡尾部半分钟或用尾部半分钟或用 75%的的酒精棉球擦拭酒精棉球擦拭尾部，使尾部，使血管扩张血管扩张充血、充血、 表皮角质软化表皮角质软化 36 3.3.静脉注射静脉注射（尾静脉尾静脉） 准备：准备： 过程过程：(1) 一手一手拇指与食指拇指与食指捏住尾部两侧捏住尾部两侧，中指中指从下托从下托 起尾巴起尾巴，无名指
23、和小指无名指和小指夹持尾尖部夹持尾尖部 一手一手持注射器持注射器使针头与静脉平行（小于使针头与静脉平行（小于30 角）角）刺入刺入，推动推动药液无阻力、无皮丘，可药液无阻力、无皮丘，可注注 入入药液药液 注射完毕后尾部向注射侧弯曲或以消毒棉签注射完毕后尾部向注射侧弯曲或以消毒棉签 止血止血 37 3.3.静脉注射静脉注射（尾静脉尾静脉） 准备：准备： 过程过程：(1) 一手一手拇指与食指拇指与食指捏住尾部两侧捏住尾部两侧，中指中指从下托从下托 起尾巴起尾巴，无名指和小指无名指和小指夹持尾尖部夹持尾尖部 一手一手持注射器持注射器使针头与静脉平行（小于使针头与静脉平行（小于30 角）角）刺入刺入，
24、推动推动药液无阻力、无皮丘，可药液无阻力、无皮丘，可注注 入入药液药液 注射完毕后尾部向注射侧弯曲或以消毒棉签注射完毕后尾部向注射侧弯曲或以消毒棉签 止血止血 38 3.3.静脉注射静脉注射（尾静脉尾静脉） 准备：准备： 过程过程：(2) 一手一手食指与中指食指与中指从下托起尾巴从下托起尾巴，无名指和小无名指和小 指指夹持尾尖部夹持尾尖部,拇指拇指轻按尾部轻按尾部 39 3.3.静脉注射静脉注射（尾静脉尾静脉） 准备：准备： 过程：过程： 注射量：注射量：0.0050.01 ml/g 40 4.4.腹腔注射腹腔注射 准备：准备：注射器注射器吸入待注射药液吸入待注射药液 过程：过程： 一手一手固
25、定动物固定动物，腹部向上，且呈，腹部向上，且呈头低位头低位 41 4.4.腹腔注射腹腔注射 准备：准备：注射器注射器吸入待注射药液吸入待注射药液 过程：过程： 一手一手固定动物固定动物，腹部向上，且呈，腹部向上，且呈头低位头低位 局部皮肤消毒局部皮肤消毒 一手一手持注射器刺入持注射器刺入下腹部皮下，针头向前下腹部皮下，针头向前推推 进进3mm后，后，注射针头与皮肤面呈注射针头与皮肤面呈45角角 刺入刺入腹肌腹肌 42 4.4.腹腔注射腹腔注射 准备：准备：注射器注射器吸入待注射药液吸入待注射药液 过程：过程： 一手一手固定动物固定动物，腹部向上，且呈，腹部向上，且呈头低位头低位 局部皮肤消毒局
26、部皮肤消毒 一手一手持注射器刺入持注射器刺入下腹部皮下，针头向前下腹部皮下，针头向前推推 进进3mm后，后，注射针头与皮肤面呈注射针头与皮肤面呈45角角 刺入刺入腹肌腹肌 43 4.4.腹腔注射腹腔注射 准备：准备：注射器注射器吸入待注射药液吸入待注射药液 过程：过程： 一手一手固定动物固定动物，腹部向上，且呈，腹部向上，且呈头低位头低位 局部皮肤消毒局部皮肤消毒 一手一手持注射器刺入持注射器刺入下腹部皮下，针头向前下腹部皮下，针头向前推推 进进3mm后，后，注射针头与皮肤面呈注射针头与皮肤面呈45角角 刺入刺入腹肌腹肌 44 4.4.腹腔注射腹腔注射 准备：准备：注射器注射器吸入待注射药液吸
27、入待注射药液 过程：过程： 一手一手固定动物固定动物，腹部向上，且呈，腹部向上，且呈头低位头低位 局部皮肤消毒局部皮肤消毒 一手一手持注射器刺入持注射器刺入下腹部皮下，针头向前下腹部皮下，针头向前推推 进进3mm后，后，注射针头与皮肤面呈注射针头与皮肤面呈45角角 刺入刺入腹肌腹肌 注射量：注射量：0.010.02 ml/g 45 五、实验动物麻醉五、实验动物麻醉 目的：目的：消除动物在手术或实验中的疼痛，消除动物在手术或实验中的疼痛， 减少挣扎，使实验便于操作和顺利进行。减少挣扎，使实验便于操作和顺利进行。 关键：关键：选择麻醉药和麻醉方法选择麻醉药和麻醉方法 常用麻醉药的给药方法和剂量常用
28、麻醉药的给药方法和剂量(表表) 46 五、实验动物麻醉五、实验动物麻醉 麻醉药物麻醉药物 浓度浓度 动物动物 给药方法给药方法 剂量（剂量（g/kg） 维持时间（维持时间（h） 备注备注 乙醚乙醚 各种动物各种动物 持续吸入持续吸入 实验决定实验决定 戊巴比妥钠戊巴比妥钠 3% 兔、狗、猫兔、狗、猫 iv、ip 0.03 24 sc 0.05 24 2% 小鼠、大鼠小鼠、大鼠 ip 0.04 24 豚鼠豚鼠 ip 0.04 24 硫喷妥钠硫喷妥钠 5% 兔、狗、猫兔、狗、猫 iv 0.02 1530min 呼吸抑制较呼吸抑制较 严重，注射严重，注射 必须缓慢必须缓慢 ip 0.04 1530m
29、in 2% 小鼠、大鼠小鼠、大鼠 ip 0.04 1530min 氨基甲酸乙酯氨基甲酸乙酯 20% 兔、狗、猫兔、狗、猫 iv、ip 1.00 24 毒性较小，毒性较小， 安全安全 10% 小鼠、大鼠小鼠、大鼠 ip 1.00 24 豚鼠豚鼠 ip 1.00 24 蛙蛙 淋巴囊淋巴囊 2.00 24 氨基甲酸乙酯氨基甲酸乙酯 +氯醛糖氯醛糖 10% +1% 兔、猫、兔、猫、 大鼠大鼠 iv、ip 0.5 +0.05 56 安全，安全， 肌松不完全肌松不完全 47 六、实验动物取血六、实验动物取血 剪尾取血法剪尾取血法 眼眶动脉和静脉取血法眼眶动脉和静脉取血法 颈动脉及静脉、股动脉及静脉取血法颈
30、动脉及静脉、股动脉及静脉取血法 断头取血法断头取血法 48 1.1.剪尾取血法剪尾取血法 过程：过程： 动物动物固定固定并露出尾巴并露出尾巴 用用4550的的温水浸泡温水浸泡尾部半分钟或用尾部半分钟或用 75%的的酒精棉球擦拭酒精棉球擦拭尾部，使尾部，使血管扩张血管扩张充血充血 用剪刀用剪刀剪断剪断尾尖或锋利刀片尾尖或锋利刀片切割切割一段尾静脉，一段尾静脉， 即可流出。用手轻轻地即可流出。用手轻轻地从尾根部向尾尖挤捏从尾根部向尾尖挤捏， 可取到更多的血液。可取到更多的血液。 取血量：取血量：0.30.5 ml/次次 49 2.2.眼眶动脉和静脉取血法眼眶动脉和静脉取血法 过程：过程： 一手将鼠
31、一手将鼠倒置固定倒置固定，且用拇指和食指，且用拇指和食指捏紧捏紧头头 颈部皮肤，使鼠颈部皮肤，使鼠眼球突出眼球突出。 一手一手持眼科弯镊持眼科弯镊或止血钳，或止血钳，钳夹钳夹一侧眼球根一侧眼球根 部，将眼球部，将眼球摘出摘出，并用镊子头部，并用镊子头部捅破捅破眼球后眼球后 包膜，将血滴入玻璃管内，直至流血停止包膜，将血滴入玻璃管内，直至流血停止 取血量：取血量：体重体重4%5%血液量血液量 50 3.3.颈动静脉、股动静脉取血法颈动静脉、股动静脉取血法 过程：过程： 一手将鼠一手将鼠麻醉仰卧固定麻醉仰卧固定，分离分离暴露出上述血暴露出上述血 管管 一手一手持注射针持注射针沿动脉或静脉走向平行刺
32、入血沿动脉或静脉走向平行刺入血 管，抽取所需血量管，抽取所需血量 取血量：取血量： 小鼠抽血小鼠抽血0.6ml/20g 大鼠抽血大鼠抽血8ml/300g 51 4.4.断头取血法断头取血法 准备：准备：实验者带上实验者带上厚手套厚手套 过程：过程： 一手拇指和食指一手拇指和食指抓紧抓紧鼠颈部位皮肤，并将动鼠颈部位皮肤，并将动 物物头朝下头朝下 一手一手持剪刀持剪刀，剪掉剪掉鼠颈部，让血流入试管内鼠颈部，让血流入试管内 取血量：取血量： 小鼠抽血小鼠抽血0.81.2ml 大鼠抽血大鼠抽血510ml 52 七、实验动物处死和器官剖解七、实验动物处死和器官剖解 实验动物处死实验动物处死 目的：目的：
33、发扬人道主义精神，爱护和善待动发扬人道主义精神，爱护和善待动 物物-实验结束后，应让动物无痛苦地死亡或实验结束后，应让动物无痛苦地死亡或 尽量减少死亡的痛苦。尽量减少死亡的痛苦。 小鼠和大鼠的处死小鼠和大鼠的处死 实验动物器官剖解实验动物器官剖解 小鼠和大鼠器官剖解小鼠和大鼠器官剖解 53 1.小鼠和大鼠处死小鼠和大鼠处死 颈椎脱臼法颈椎脱臼法：用摄子或用左手拇指与食指用摄子或用左手拇指与食指 向下压住鼠头部枕骨处，另一只手抓住鼠尾向下压住鼠头部枕骨处，另一只手抓住鼠尾 用力向后拉，使之颈椎脱臼，鼠立即死亡。用力向后拉，使之颈椎脱臼，鼠立即死亡。 断头法：断头法：在鼠颈部用剪刀快速将鼠头剪掉，
34、在鼠颈部用剪刀快速将鼠头剪掉， 鼠因断头和大出血而死。鼠因断头和大出血而死。 打击法：打击法：用手抓住鼠尾并提起，将其头部用手抓住鼠尾并提起，将其头部 猛击地面，或用小木锤用力敲击鼠头，使鼠猛击地面，或用小木锤用力敲击鼠头，使鼠 致死。致死。 过量麻醉法：过量麻醉法：快速过量注射麻醉药（麻醉快速过量注射麻醉药（麻醉 时的时的30倍）倍） 54 2.小鼠和大鼠器官剖解小鼠和大鼠器官剖解 时间：时间：处死后应立即剖解，处死后应立即剖解，越早越好越早越好，最，最 好在处死后好在处死后23min内解剖器官。内解剖器官。 体位：体位：以以仰卧位仰卧位固定动物尸体固定动物尸体 顺序：顺序：先腹腔后胸腔，再
35、脑、脊髓、骨髓先腹腔后胸腔，再脑、脊髓、骨髓 和皮肤肌肉等和皮肤肌肉等 55 腹腔器官腹腔器官 暴露器官：暴露器官：沿腹部正中线切开腹前壁，再沿腹部正中线切开腹前壁，再 沿最低位肋骨分别向左右两侧切开侧腹壁至沿最低位肋骨分别向左右两侧切开侧腹壁至 脊柱两旁，完全暴露腹腔器官。脊柱两旁，完全暴露腹腔器官。 剖取顺序：剖取顺序：脾、肝、胃、胰、肠、肾和肾脾、肝、胃、胰、肠、肾和肾 上腺等。上腺等。 盆腔器官：盆腔器官：剥离相连的组织后，将雄性动剥离相连的组织后，将雄性动 物两侧输尿管、膀胱、睾丸、精囊腺、前列物两侧输尿管、膀胱、睾丸、精囊腺、前列 腺一同取出；雌性动物可将两侧卵巢、输卵腺一同取出；
36、雌性动物可将两侧卵巢、输卵 管、子宫角、子宫体一同取出。管、子宫角、子宫体一同取出。 56 胸腔器官胸腔器官 用镊子夹住胸骨剑突，剪断膈肌与胸骨的连用镊子夹住胸骨剑突，剪断膈肌与胸骨的连 接，提起胸骨，在胸椎两侧分别剪断左、右接，提起胸骨，在胸椎两侧分别剪断左、右 侧胸壁的肋骨，取下整个胸壁，依次取出侧胸壁的肋骨，取下整个胸壁，依次取出胸胸 腺和心脏腺和心脏。 将下颌的两下颌支内侧与舌连接的肌肉切断，将下颌的两下颌支内侧与舌连接的肌肉切断， 将咽、喉、气管、食管与周围组织分离，用将咽、喉、气管、食管与周围组织分离，用 镊子夹住气管向上提起，剪断肺与胸膜的连镊子夹住气管向上提起，剪断肺与胸膜的连
37、 接韧带，然后将接韧带，然后将咽、喉、气管、食管边同整咽、喉、气管、食管边同整 个肺个肺一并取出。一并取出。 57 颅腔及脑颅腔及脑 小动物：小动物：从从枕骨剪开枕骨剪开颅骨，小心剪去颅顶颅骨，小心剪去颅顶 骨片，暴露大脑、小脑和延髓。骨片，暴露大脑、小脑和延髓。 大动物：大动物：可用弓形锯沿眉弓至枕外隆凸上可用弓形锯沿眉弓至枕外隆凸上 0.5cm连线连线锯开锯开，用刀背轻轻将脑从颅底分，用刀背轻轻将脑从颅底分 出，依次切断各对脑神经，借脑本身重量从出，依次切断各对脑神经，借脑本身重量从 颅内脱出，再切断延髓和脊髓交界处，用尖颅内脱出，再切断延髓和脊髓交界处，用尖 小刀从蝶骨鞍槽内剥离与脑垂体
38、相连的周围小刀从蝶骨鞍槽内剥离与脑垂体相连的周围 组织，最后将整个脑和脑垂体托出。组织，最后将整个脑和脑垂体托出。 58 小鼠肿瘤的移植小鼠肿瘤的移植 一般要求：一般要求： 无菌条件无菌条件下进行，瘤块污染常是接种失败的下进行，瘤块污染常是接种失败的 主要原因。主要原因。 操作环境：操作环境：无菌室内操作无菌室内操作 实验动物：实验动物：动物处死后，须消毒动物处死后，须消毒 实验器械：实验器械：手术器械须灭菌手术器械须灭菌 接种部位：接种部位：皮下接种部位为右前肢腋下皮下接种部位为右前肢腋下 59 小鼠肿瘤的移植小鼠肿瘤的移植 瘤细胞悬液的制备：瘤细胞悬液的制备： 在无菌条件下在无菌条件下取瘤
39、块取瘤块，除去除去坏死组织，将数坏死组织，将数 个瘤块混合，个瘤块混合，剪成剪成小块小块 用玻璃组织匀浆器用玻璃组织匀浆器研磨研磨，磨匀后放入无菌容，磨匀后放入无菌容 器内，并把容器放置于冰块上器内，并把容器放置于冰块上 加生理盐水加生理盐水适量稀释适量稀释成成1:31:4的瘤细胞悬的瘤细胞悬 液（细胞数为液（细胞数为107/ml） 60 小鼠肿瘤的移植小鼠肿瘤的移植 瘤细胞悬液的接种：瘤细胞悬液的接种： 用针筒用针筒抽吸抽吸瘤细胞悬液瘤细胞悬液0.2ml，接种接种于同种异于同种异 体动物（异种移植于裸鼠）右前肢腋窝体动物（异种移植于裸鼠）右前肢腋窝皮下皮下 （接种部位皮肤应先消毒）（接种部位
40、皮肤应先消毒） 注意：注意：每次用针筒抽吸前应将瘤细胞悬液每次用针筒抽吸前应将瘤细胞悬液混混 匀匀，整个操作应在，整个操作应在30min内完成内完成 61 实验内容实验内容 分组标记：分组标记：小鼠小鼠(10只只/组组) (染色法染色法) 抓取：抓取：小鼠小鼠、大鼠大鼠(2只只/组组) 给药：给药：小鼠小鼠(灌胃、皮下注射和尾静脉注射灌胃、皮下注射和尾静脉注射)、 大鼠大鼠(灌胃、腹腔注射麻醉灌胃、腹腔注射麻醉) 固定、剪毛和取血：小鼠固定、剪毛和取血：小鼠(摘眼球取血摘眼球取血) 、大大 鼠鼠(颈部剪毛、颈动静脉分离插管取血颈部剪毛、颈动静脉分离插管取血) 处死和器官剖解：处死和器官剖解：小鼠小鼠(颈椎脱臼法颈椎脱臼法 )、大鼠大鼠 (过量麻醉法过量麻醉法 )、大鼠大鼠(器官剖解器官剖解 ) 肿瘤移植：肿瘤移植：小鼠小鼠(皮下注射皮下注射) 62 小鼠小鼠(10只只/组组) 分组、标记编号分组、标记编号(染色法染色法)、抓取、抓取 灌胃、皮下注射灌胃、皮下注射(腋下腋下)和尾静脉注射和尾静脉注射 摘眼球取血、颈椎脱臼法处死摘眼球取血、颈椎脱臼法处死 大鼠大鼠(2只只/组组) 抓取抓取 灌胃、腹腔注射麻醉和固定、颈部皮肤剪毛灌胃、腹腔注射麻醉和固定、颈部皮肤剪毛 颈动静脉分离插管取血、过量麻醉法处死，颈动静脉分离插管取血、过量麻醉法处死， 器官剖解器官剖解 实验内容实验内容
