1、第一节 沙门氏菌检验食品中肠道致病杆菌的检验食品中肠道致病杆菌的检验 沙门氏菌（Salmonella）是肠杆菌科中最复杂的菌属,1880年Eberth首先发现伤寒沙门氏菌，1885年Salmon与Smith又分离出猪霍乱沙门氏菌，以后取名Salmon氏之名为本菌属属名。已发现近2000个血清型，我国已发现近200个血清型。对人类有致病性 肠热症伤寒沙门菌，甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌 食物中毒鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌 败血症猪霍乱沙门菌最常见生物学性状形态染色 符合肠杆菌特点，革兰氏染色阴性短杆菌，无荚膜，无芽胞，多数有鞭毛(周生毛菌)，有动力（也有无动力的变种）。鼠
2、伤寒沙门菌（samonella typhimurium）沙门氏菌革兰氏染色照片培养特性EMB、SS上呈无色透明乳糖不发酵菌落沙门氏菌SS平板培养物（黑色菌落）鼠伤寒沙门鼠伤寒沙门在SS培养基上形成半透明较小菌落 在酸性条件下菌落中心产生H2S(SS培养基）生化反应乳糖（-），葡萄糖（+）/+，多数H2S+，动力+，尿素（-）抗原结构O抗原特异性低、稳定、分群（组）H抗原特异性高，不稳定，分型Vi抗原（毒力抗原）不稳定，可阻止“O”凝集 抵抗力 不强致病性与免疫性 致病物质侵袭力 菌毛吸附 型分泌系统穿入细胞，扩散 Vi抗原微荚膜（抗吞噬）内毒素外毒素个别（鼠伤寒沙门菌）产生，与ETEC肠毒素相
3、似 肠热症临床过程 潜伏期2W 发病初期：第1W（第一次菌血症）、高热、肝脾肿大、皮疹、WBS等全身中毒症状，此期血液（80%）、骨髓（90%（+）有大量细菌 发病极期：第2-4W，全身症状持续加重，此期血、骨髓中仍有菌，但粪便（60%）、尿（20%）、皮疹液中可查到细菌，由于型变态反应并发症发生，血液抗体达到阳性标准肥达反应 恢复期：第四周末，体温下降，症状消失，恢复期带菌1年（粪便仍阳性），血液抗体仍高 胃肠炎（食物中毒）潜伏期短，6-24h，起病急，病程短2-4天，发热、恶心、呕吐、腹痛、腹泻 败血症 经口感染，经肠道入血，败血症症状明显而肠道症状不明显 带菌者 健康带菌者，恢复期带菌者
4、 免疫性 肠热症，病后免疫牢固，其它可重复感染微生物学检查与防治 分离培养与鉴定标本采取:肠热症：第1-2W，血、骨髓；第2-3W，粪便、食物中毒：粪便、呕吐物、可疑食物 败血症：血 带菌者：粪便分离鉴定：增菌（血、骨髓）EMB、SS生化反应血清鉴定血清学诊断肥达反应（Widal）原理 用已知伤寒沙门氏菌O抗原及H 抗原，以及引起副伤寒的沙门氏菌H抗原与待检血清作凝集试验，测定待检血清中有无相应抗体及其效价。（TO、TH、PA、PB）方法：试管凝集法（定量）TO1：80，TH1：160，PA、PB均1：80才有意义动态观察：双份血清抗体四倍升高有诊断意义临床意义O抗体（IgM），H抗体（IgG
5、）vO、H抗体均升高，患伤寒的可能性大vO、H抗体不升高，患伤寒的可能性小v只有H升高，则可能是预防接种过或非特异性回忆反应，v只有O升高而H不高，则可能是感染早期或其他沙门菌的交叉反应。沙门氏菌主要寄生在人体、哺乳动物和家禽的肠道内，可随同粪便的排泄污染水源，食品与药品。沙门氏菌的种类繁多，有些对人有致病力，如伤寒沙门菌和副伤寒沙门氏菌；有些对动物有致病力，如鸭沙门氏菌和雏沙门氏菌；尚有一些对人和动物皆有致病力，如肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌等。它们能引起人类伤寒症、急性胃肠炎和败血症等。带有这些细菌的人与动物常可直接或间接地污染药品的生产环境、工具设备和原料辅料，以及半成品
6、和成品等。特别是用动物脏器制成的药品,污染机率较高，影响患者用药安全，并有可能通过药品的流通而传播。故将沙门氏菌，应列为某些药品的必检项目。（一）增菌培养：取供试品稀释液毫升，接种于备妥的毫升胆盐乳糖增菌液内。置培养小时，进行增菌。（二）分离培养：取上述增菌培养物，划线接种于琼脂和琼脂平板各一个（划线时，适当增加琼脂平板的涂抹量-环，可提高阳检率），置培养-小时。凡沙门氏菌，在和琼脂平板上，菌落一般无色透明或半透明，圆形，周边整齐，表面光滑湿润，在琼脂平板上中心有时呈黑褐色。如有上述疑似菌落，应选取-个分别进行纯培养，按下列方法鉴别。伤寒沙门菌在SS琼脂平板上的菌落特征伤寒沙门菌在CHROMa
7、gar显色培养基上的菌落特征伤寒沙门菌在CHROMagar显色培养基上呈紫色菌落沙门氏菌SS平板培养物（黑色菌落）沙门氏菌在BS平板上的典型菌落（产H2S菌株沙门氏菌在BS平板上的菌落（Salmonella typhimurium）（三）初步鉴别：将上述纯培养物分别穿刺并划线接种三糖铁（）琼脂，置培养小时。凡在琼脂中不分解乳糖及蔗糖（即上部斜面呈碱性，不变色），下层底部分解葡萄糖呈酸性变黄色（有气泡或无气泡），有动力或无动力，以及产生或不产生黑褐色的硫化氢反应，并经涂片染色镜检为革兰氏阴性杆菌，都应继续做生化试验和血清学检查。沙门氏菌三糖铁沙门氏菌革兰氏染色照片（四）生化试验：取上述疑似菌落的
8、纯培养物、分别接种至葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖等发酵管培养基，并接种蛋白胨水和尿素培养基，经培养-天，观察结果。沙门氏菌一般生化反应和动力检查，绝大数应为、葡萄糖，乳糖，麦芽糖，甘露醇，蔗糖，靛基质，硫化氢，尿素酶，动力。当一般生化试验符合时，应做赖氨酸脱羧酶及氰化钾试验。沙门氏菌赖氨酸脱羧酶试验，氰化钾。沙门氏菌氨基酸脱羧酶沙门氏菌蛋白胨水尿素琼脂实验出现异常,原因可能是沙门氏菌变种(五）动力试验：取上述纯培养物穿刺接种半固体培养基，于培养小时后，观察动力表现。无动力表现的培养物，应在室温（左右）保留-天后，再观察。（六）血清学检查：取上述疑似菌落的琼脂培养物少许，与沙门氏菌多价血清作玻片凝集试验，并以生理盐水作对照试验。若凝集试验为阴性反应时，应将菌苔制成浓菌液在水浴中保温分钟后再进行-多价血清凝集试验。将反应结果，结合生化试验，判定之。
