1、食物过敏的实验诊断 血清sIgE检测的现在和未来 食物过敏 Food Allergy IgE-Dependent Immune Responses 食物不耐受 Food Intolerance与食物相关的超敏反应食物过敏(食物过敏(F Food Allergyood Allergy)临床诊断 询问病史 体内试验 体外试验SPTsIgE实验诊断实验诊断 tIgE sIgE McAb PcAb问题:蛋白含量与生物活性问题:蛋白含量与生物活性血清sIgE检测的现状免疫球蛋白E(IgE)的发现 花粉过敏患者 1819年,Dr.John Bostock 输血所致过敏性哮喘 1919年,Ramirz 免疫
2、球蛋白E(IgE)1967年,Ishizaka(瑞典)和Bennich&Jonansson(美国)Fig 免疫球蛋白E(IgE)分子结构免疫球蛋白E(IgE)的体内分布 结合型IgE抗体 与嗜碱性粒细胞或肥大细胞结合 游离型IgE抗体 未与嗜碱性粒细胞或肥大细胞结合图:IgE与IgE受体结合免疫球蛋白E(IgE)的检测(1)血清(游离)IgE的检测 总IgE水平 Total IgE,tIgE 特异性IgE水平 Specific IgE,sIgE牛奶蛋白 某一蛋白 抗原表位牛奶sIgE抗体:血清tIgE水平 放射免疫吸附试验(经典)radioimmnosorbent test,RIST血清tIg
3、E水平 化学发光免疫分析(现状)chemiluminescence immunoassay CLIA 优点优点 准确;快速血清sIgE水平 放射过敏原吸附试验(经典)radioallegosorbent test,RAST血清sIgE水平 荧光酶免疫分析 immuno-CAP血清sIgE水平 荧光酶免疫分析 金标准 单种过敏原 随机组合 定量分析血清sIgE水平 斑点酶联免疫吸附试验 Dot-ELISA(膜条)多种过敏原联合测定 廉价(符合国情)组合模式(固定)血清sIgE水平 酶联免疫吸附试验 ELISA(捕获法)免疫球蛋白E(IgE)的检测(2)外周血嗜碱性粒细胞激活试验 Basophil
4、 Activation Tests,BAT 细胞表面(结合型)sIgE 体内sIgE生物学活性检测嗜硷性粒细胞激活试验(BAT)临床标本 外周抗凝血(全血)特定过敏原将外周血已致敏的嗜碱性粒细胞激活 细胞鉴定与活化状态 流式细胞仪(FCM)检测特定标志嗜硷性粒细胞激活试验(BAT)FCM anti-CD123 anti-HLA-DR anti-CD63 or CD203c嗜硷性粒细胞激活试验(BAT)激活状态 CD63+嗜硷性粒细胞激活试验(BAT)卵巢发展蛋白 蟹黄 Eri s 2Fig rEris 2和CO诱导体外嗜碱性粒细胞激活结果血清sIgE检测的未来免疫球蛋白E(IgE)的检测 存在
5、问题 科学问题 过敏原的复杂性与血清sIgE的异质性 血清sIgE含量测定与致病活性测定 技术问题 现有方法不能满足临床需要(简单、快速、通量)光激化学发光分析(LICA)发光体系 发光微球(FG)接受能量 受体微球(A)感光微球(GG)提供能量 供体微球(D)血清tIgE检测 双抗夹心-LICA 免“洗涤”高-精密度Fig 血清tIgE定量分析原理tIgE血清tIgE检测(LICA)分析性能参数 批内精密度 5.3 5.8 批间精密度 5.3 9.0血清sIgE检测 蛋清sIgE 四种过敏原 受体微球-卵类黏蛋白(Gal d 1)受体微球-卵白蛋白(Gal d 2)受体微球-卵转铁蛋白(Ga
6、l d 3)受体微球-卵溶菌酶(Gla d 4)Fig B 血清蛋清sIgE检测模式血清sIgE检测(蛋清)-LICA 分析性能参数ELISALICA血清稀释曲线血清sIgE的精准检测 分子诊断(CRD)The determination of specific IgE to different allergens is called molecular diagnosis or component-resolved diagnosis(CRD)血清sIgE抗体谱 针对每种蛋白特异性抗体(sIgE)component-resolved diagnosis(CRD)Molecular diagn
7、osis will help to increase the sensitivity of the testing and,on the other hand,provides a more-detailed patient-tailored risk profile.血清sIgE的异质性 梭子蟹 过敏原sIgE抗体异质性血清sIgE抗体谱检测 过敏原组分sIgE抗体谱 精准sIgE检测 精准脱敏治疗天然总蛋白溶液 天然单一蛋白纯品 重组单一蛋白溶液已知抗原:血清sIgE和细胞表面sIgE细胞学方法生物学活性血清sIgE生物活性检测 嗜碱性粒细胞激活试验(BAT)血清sIgE介导 嗜碱性粒细胞 KU812(KU812F)标准过敏原血清sIgE生物活性检测 采用FCM技术 检测 特定过敏原激发 血清sIgE介导 KU812细胞激活试验血清sIgE生物活性检测 抗原表位谱 生物信息学 筛选技术血清sIgE生物活性检测 血蓝蛋白表位分析