1、有害物质动物性食品中兽药残留的测定食品理化检验技术主讲教师：刘丹赤04食品中有毒有害成分的检验任务三 氟喹诺酮类药物残留的测定 4 兽药残留1 1目录页CONTENTS PAGE 氟喹诺酮类药物残留的测定2 2 5 学习目标知识目标：1.理解兽药的种类、兽药残留的概念及在动物性食品中的最高残留限量。2.了解食品中兽药残留常用的检测方法。3.掌握食品中氟喹诺酮类药物残留量的测定方法和操作要点。技能目标：1.能正确处理和准备样品。2.能用高效液相色谱仪对食品中兽药残留进行检测。6 1 兽药残留食品理化检验技术 7 v 兽药：用于预防、治疗、诊断动物疾病或者有目的地调节动物生理机能的物质（含药物饲料
2、添加剂）。8 v 兽药残留：食品动物用药后，动物产品的任何食用部分中与所有药物有关的物质的残留，包括原型药物或/和其代谢产物。v 最高残留限量：对食品动物用药后产生的允许存在于食物表面或内部的该兽药残留的最高量/浓度（以鲜重计，表示为mg/kg）。抗生素类驱肠虫药类生长促进剂类抗原虫药类灭锥虫药类镇静剂类-肾上腺素能受体阻断剂临床应用最多的一类抗菌药物，青霉素类、-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、氯霉素类等兽药残留分类兽药残留1234567 10 兽药残留的来源v 防治畜禽疾病用药v 饲料添加剂中兽药的使用v 动物性食品保鲜v 休药期过短自停止给药到动物获准屠宰或其动物性产品获准上
3、市的间隔时间 11 兽药残留的危害v 毒性：急性中毒、慢性中毒v 三致：致癌、致畸、致突变v 诱导耐药菌株：v 过敏反应v 激素样作用v 污染环境、影响生态：12 中华人民共和国农业部公告 第235号 A.不需要制定最高残留限量的药物：88 B.需要制定最高残留限量的药物：94 C.可以使用，但不得在食品中检出的药物：9 D.禁止使用，且不得在食品中检出的药物：31 D9BA C948831目的：为加强兽药残留监控工作，保证动物性食品卫生安全 13 兽药残留检测方法常用方法气相色谱法（GC）：常规分析法液相色谱法（HPLC)：常规分析法，最多采用酶联免疫法（ELISA)：选择性强、灵敏度高、简
4、单、快速仪仪器联用 GC-MS、LC-MS、TLC-MS 14 2氟喹诺酮类药物残留的检测食品理化检验技术 15 喹诺酮类药物是一类化学合成抗菌药，由于具有抗菌谱广、抗菌作用强、使用安全及易于制造等优点，发展迅速。基本母核结构：6-氟-4-喹诺酮-3-羧酸NOFCOOH 16 NOC2H5COOHFNHNNOCOOHFNHNNOC2H5COOHFNH3CNNOCOOHFNH3CNOCH3 环丙沙星 氧氟沙星常用药物结构诺氟沙星培氟杀星 17 残留危害 过敏反应 肝毒性和肾毒性 软骨损伤 潜在的致癌性 破坏消化道微生物的群落结构 耐药性 18 氟喹诺酮类药物残留 氟喹诺酮类药物在动物体内分布很广
5、，一般肝、肾组织中浓度最高，肌肉、血浆中浓度最低。组织中氟喹诺酮类残留物主要是原形药物，一般选择原形药物作为残留标示物，但恩诺沙星的残留标示物为恩诺沙星及其主要代谢产物环丙沙星。动物性食品中氟喹诺酮类药物的最高残留限量可查找农业部235号公告动物性食品中兽药最高残留限量。药物名 标志残留物 动物种类 靶组织残留限量达氟沙星Danofloxacin ADI：0-20 Danofloxacin牛/绵羊/山羊 家禽 其他动物肌肉脂肪肝肾奶 肌肉皮+脂肝肾 肌肉脂肪肝肾 20010040040030 20010040040010050200200药物名 标志残留物 动物种类 靶组织残留限量恩诺沙星En
6、rofloxacin ADI：0-2Enrofloxacin+Ciprofloxacin牛/羊 牛/羊 猪/兔 禽（产蛋鸡禁用）其他动物肌肉脂肪肝肾 奶 肌肉脂肪肝肾 肌肉皮+脂肝肾 肌肉脂肪肝肾100100300200 100 100100200300 100100200300 100100200200 21 农业部1025号公告-14-2008 动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测 高效液相色谱法农业部781号公告-6-2006 鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留量的测定 高效液相色谱法农业部1025号公告-8-2008 动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测 酶联免疫吸附法SB/T 10925-2012
7、 动物组织中氟喹诺酮类药物残留的快速筛查检测农业部783号公告-2-2006 水产品中诺氟沙星、盐酸环丙沙星、恩诺沙星残留量的测定 液相色谱法农业部1025号公告-25-2008 动物源食品中恩诺沙星残留检测 酶联免疫吸附法农业部1077号公告-7-2008 水产品中恩诺沙星、诺氟沙星和环丙沙星残留的快速筛选测定 胶体金免疫渗滤法适用于猪的肌肉、脂肪、肝脏和肾脏，鸡的肝脏和肾脏组织中达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星药物残留量检测规定了动物性食品中达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星药物残留检测的制样和高效液相色谱测定方法 23 测定原理测定原理用磷酸盐缓冲溶液提取试样中的药物，C18柱
8、净化，流动相洗脱。以磷酸-乙腈为流动相，用高效液相色谱-荧光检测法测定，外标法定量。24 仪器设备仪器设备 25 所需试剂所需试剂除特别注明者外均为分析纯试剂，水为符合GB/T 6682规定的二级水。（1）达氟沙星：含达氟沙星（C19H20FN3O3）不得少于99.0%。（2）恩诺沙星：含恩诺沙星（C19H22FN3O3）不得少于99.0%。（3）环丙沙星：含环丙沙星（C19H18FN3O3）不得少于99.0%。（4）沙拉沙星：含沙拉沙星（C20H17F2N2O3）不得少于99.0%。（5）乙腈：色谱纯。（6）甲醇。（7）三乙胺。26 所需试剂所需试剂（8）5.0mol/L氢氧化钠溶液（9）0
9、.03mol/L氢氧化钠溶液（10）0.05mol/L磷酸/三乙胺溶液（11）磷酸盐缓冲溶液（用于肌肉、脂肪组织）（12）磷酸盐溶液（用于肝脏、肾脏组织）（13）达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准储备液（14）达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准工作液 27 色谱柱进样器检测器分析步骤分析步骤样品制备称样提取净化标准曲线制备数据处理 28 样品制备样品的制备取适量新鲜或冷冻的空白或供试组织，绞碎并使均匀。样品的保存-20以下冰箱中贮存备用。29 试样制备试料的制备包括：取绞碎后的供试样品，作为供试试料；取绞碎后的空白样品，作为空白试料；取绞碎后的空白样品，添加适宜浓度的对照溶液，
10、作为空白添加试料。30 提 取取(20.05)g试料，置30mL匀浆机中，加磷酸盐缓冲溶液10.0mL，匀浆1min。匀浆液转入离心管中，中速振荡5min，离心，取上清液，待用。用磷酸盐缓冲溶液10.0mL洗刀头及匀浆杯，转入离心管，洗残渣，混匀，中速振荡5min，离心。合并两次上清液，混匀备用。31 净 化固相萃取柱先依次用甲醇、磷酸盐缓冲溶液各2mL预洗。取上清液5.0mL过柱，用水1mL淋洗，挤干。用流动相1.0mL洗脱，挤干，收集洗脱液。经滤膜过滤后作为试样溶液，供高效液相色谱法测定。32 准确量取适量达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准工作液，用流动相稀释成浓度分别为0.005
11、g/mL、0.01g/mL、0.05g/mL、0.1/mL、0.3g/mL、0.5g/mL的对照溶液，供高效液相色谱分析。标准曲线制备 33 色谱柱：C18 250mm4.6mm（i.d），粒径5m，或相当者；流动相：0.05mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙腈（82+18，v/v），使用前经微孔滤膜过滤；流速：0.8mL/min；检测波长：激发波长280nm；发射波长450nm；柱温：室温；进样量：20L。设置色谱参数 34 取试样溶液和相应的对照溶液，作单点或多点校准，按外标法以峰面积计算。对照溶液及试样溶液中达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星响应值均应在仪器检测的线性范围之内除不加试料外
12、，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。上机检测色谱峰：1-环丙沙星；2-达氟沙星；3-恩诺沙星；4-沙拉沙星。氟喹诺酮类药物対照溶液色谱图色谱峰：1-环丙沙星；2-达氟沙星；3-恩诺沙星；4-沙拉沙星。猪肝脏组织中氟喹诺酮类药物色谱图 35 式中：X试料中达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星的残留量，ng/g；A试样溶液中相应药物的峰面积；AS对照溶液中相应药物的峰面积；cS对照溶液中相应药物的浓度，ng/mL；V1提取用磷酸盐缓冲液的总体积，mL；V2过C18固相萃取柱所用备用液体积，mL；V3洗脱用流动相体积，mL；m供试试料的质量，g。结果计算结果计算计算公式132SSA cVVXAVm 36 有效数字：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。灵敏度：达氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星在鸡和猪的肌肉、脂肪、肝脏及肾脏组织中的检测限为20g/kg。准确度：本方法在20g/kg500g/kg添加浓度的回收率为60%100%。精密度：本方法的批内变异系数15%，批间变异系数20%。谢谢观看日照职业技术学院
