1、第一节第一节 概述概述抗生素的定义抗生素的定义 抗生素是细菌、放线菌和真抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。作用。NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核（6-氨基青霉烷酸）第二节第二节 内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 青霉素类青霉素类头孢菌素类头孢菌素类7654321NONHSCH2R1COOH母核（7-氨基头孢菌烷酸）RCOCONSOHNCOOHCH3CH3CH2青霉素青霉素（青霉素（青霉素G、苄青霉素）、苄青霉素）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH2氨苄西林氨苄
2、西林（氨苄青霉素）（氨苄青霉素）阿莫西林阿莫西林（羟氨苄青霉素）（羟氨苄青霉素）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素头孢氨苄头孢氨苄NONHSCH3COOHOCNH2CH2头孢拉定头孢拉定CH2NH2CONONHSCH3COOH头孢羟氨苄头孢羟氨苄NONHSCH3COOHOCNH2CH2HO头孢噻吩钠头孢噻吩钠SCH2CONONHSCH2OCOCH3COONaNSOHNCOOKCH3CH3OCCH2酸性酸性结构与性质结构与性质一、一、NaNa与碱金属与碱金属(Na+、K+)成盐
3、成盐 （一）羧基（一）羧基 易溶于水易溶于水 与有机碱与有机碱(普鲁卡因普鲁卡因)成盐成盐 难溶于水难溶于水普鲁卡因普鲁卡因青霉素青霉素C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO1234567（二）手性（二）手性C 87654321NOS(5%头孢唑啉钠溶液头孢唑啉钠溶液 1824)20D 头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 旋光性旋光性 （三）共轭体系（三）共轭体系 NSO头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 青霉素类青霉素类 母核无明显母核无明显UV 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 NOS UV青霉素钠
4、青霉素钠UV7-20（四）（四）内酰胺环内酰胺环 水溶液水溶液 不稳定不稳定 干燥纯净干燥纯净 稳定稳定 不稳定不稳定性因素性因素四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 （某些金属离子）（某些金属离子）（温度）（温度）失失效效降降解解青青霉霉素素类类酸酸、碱碱、青青霉霉素素酶酶某些氧化剂某些氧化剂例例青霉素的降解反应青霉素的降解反应青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑酰基羟胺酸酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2失效失效降解降解头孢菌素类头孢菌素类酸、碱、胺类酸、碱、
5、胺类内酰胺酶内酰胺酶 二、二、K+、Na+反应反应（一）（一）鉴别鉴别 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 +醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+焰色焰色紫色紫色 +0.1%四苯硼钠四苯硼钠+Ac白白 K+（二）呈色反应（二）呈色反应1.羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应-内酰胺类内酰胺类NaOH HClNOHH内内酰酰胺胺类类呈色呈色羟肟酸衍生物羟肟酸衍生物Fe3+/3H+NSONSCOHNHOHH2NOH HClNSCHNHOFe3+3OH+Fe3+/3（红、棕、褐）（红、棕、褐）2、与与H2SO4-HNO3反应反应亮亮黄黄红红棕棕黄黄色色头头孢孢噻噻肟肟钠钠头头孢孢噻噻吩吩钠钠头头孢孢氨氨苄苄 HNOSOH头孢菌素
6、类头孢菌素类NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH23.茚三酮反应茚三酮反应蓝蓝紫紫色色氨氨基基茚茚三三酮酮 -氨基氨基-氨基、伯胺氨基、伯胺某些羟基胺类某些羟基胺类酮式酮式烯醇式烯醇式茚三酮茚三酮茚三酮茚三酮缩合缩合蓝紫色蓝紫色+H2OCNCH2RC OH2RCHH2NCOOH2OHCCOCOCOHNH2CCOCOCOCOHCNCCOCOCOCOHCHRNCCOCOCO4.双缩脲反应双缩脲反应-内酰胺类内酰胺类 CONH紫紫内酰胺类内酰胺类碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜 （开环分解）（开环分解）2OHCONH2CuCOHNCCH3COONaCH3SNHNCH3CH3COONaCSNOHOHO
7、OCH2NH2CH2HH蓝紫色蓝紫色5.与变色酸与变色酸-硫酸反应硫酸反应活泼活泼“-CH2-”青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨苄西林氨苄西林HCHOCHSOH ”羰羰基基侧侧链链含含“（分解）（分解）变色酸变色酸显色显色NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2 变变色色酸酸阿阿莫莫西西林林HCHOSOH150（缩合）（缩合）色色褐褐SO3HSO3HHOHOSO3HSO3HHOHOOHOHHO3SHO3SCHHCHO（缩合）（缩合）6.与重氮苯磺酸反应与重氮苯磺酸反应橙橙黄黄色色重重氮氮苯苯磺磺酸酸 OHHC（偶合）（偶合）酚羟基酚羟基头孢哌酮头孢哌酮SNOHCONHCHCONHH5C
8、2OONNOCOOHCH2SNNNNCH3NClNNaO3S OH（偶合）（偶合）NNNNCH3SNOHCONHCHCONHH5C2OONNOCOOHCH2SNNNaO3S7.与铜盐反应与铜盐反应 CuSOHAc头头孢孢氨氨苄苄橄榄绿色橄榄绿色NaOH专属反应专属反应（三）沉淀反应（三）沉淀反应1.遇酸遇酸白白青青霉霉素素青青霉霉素素钠钠青青霉霉素素钾钾 H2.有机胺盐反应有机胺盐反应（1）重氮化）重氮化-偶合反应偶合反应 青青霉霉素素普普鲁鲁卡卡因因普普鲁鲁卡卡因因青青霉霉素素 H重氮化重氮化-偶合反应偶合反应红红 芳伯氨基芳伯氨基C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3
9、OCH+C2H52CH2NH2H2NCOOCH2CH2N普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素NCH2CH2OOC2C2H5N+Cl-N2C2H5COOCH2CH2NNH2HClNaNO2（2）与三硝基苯酚反应）与三硝基苯酚反应 三硝基苯酚三硝基苯酚二苄基乙二胺二苄基乙二胺苄星青霉素苄星青霉素NaOH二苄基乙二胺二苄基乙二胺三硝基苯酚三硝基苯酚H2OHOH-HCONSOHNCOOHCH3CH3CH2CH2NCH2CH2NHCH2OHNO2O2NNO2CH2NCH2CH2NHCH2光谱法光谱法（四）（四）1、UV法法A,Emin,max,%1cm1 光谱图光谱图样品、分解产物样品、分解产物
10、nm339HA 苯苯唑唑青青霉霉烯烯酸酸苯苯唑唑青青霉霉素素Cu2+头孢氨苄头孢氨苄 max=262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm=1.301.50NOCONHCH3NOSCH3CH3COONaNOCHCH3OCOCNHNCHHCCH3CH3SHCHCOOHCu2+pH3.8氯唑青霉素氯唑青霉素 341 0.682双氯青霉素双氯青霉素 342 0.653苯唑青霉素苯唑青霉素 339 1.328max%1cm1E(nm)ml/g50 2、IR法法117401815 cmVOC116901710 cmVOC-内酰胺环内酰胺环酰胺酰胺3、NMR法法 利用不同结构的原子核在利用不同
11、结构的原子核在D2O中有中有不同的不同的NMR光谱进行鉴别光谱进行鉴别JP以吸收峰频率对峰强度进行作图以吸收峰频率对峰强度进行作图 主要研究原子核的磁化性质及其在主要研究原子核的磁化性质及其在外磁场中的运动规律外磁场中的运动规律硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素NMR谱谱7-08硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素NMR色谱法色谱法（五）（五）1、TLC法法对照品对照法对照品对照法和和斑斑点点颜颜色色比比较较供供试试品品对对照照品品相相同同条条件件fR2、HPLC法法Rt比比较较供供试试品品对对照照品品相相同同条条件件 精密称取样品精密称取样品0.1009g，置，置250ml碘瓶中，碘瓶中，加水加水10ml，振摇使
12、溶解，精密加溴滴定液，振摇使溶解，精密加溴滴定液(0.1mol/L)25.0ml，再加盐酸，再加盐酸5ml，立即密塞，立即密塞并振摇并振摇1分钟，在暗处静置分钟，在暗处静置15分钟后，注意分钟后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.09863mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，消耗硫代硫酸钠滴定液续滴定至蓝色消失，消耗硫代硫酸钠滴定液(0.09863mol/L)13.80ml，并将滴定结果用空，并将滴定结果用空白试验校正，空白试验
13、消耗硫代硫酸钠滴定白试验校正，空白试验消耗硫代硫酸钠滴定液（液（0.09863mol/L）21.64ml。每。每1ml溴滴定溴滴定液液(0.1mol/L)相当于相当于13.01mg的的C12H17N2NaO3。NSOHNCOOKCH3CH3OCCH2酸性酸性结构与性质结构与性质一、一、NaNa与碱金属与碱金属(Na+、K+)成盐成盐 （一）羧基（一）羧基 易溶于水易溶于水 与有机碱与有机碱(普鲁卡因普鲁卡因)成盐成盐 难溶于水难溶于水普鲁卡因普鲁卡因青霉素青霉素C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO1234567（二）手性（二）手性C 8765432
14、1NOS(5%头孢唑啉钠溶液头孢唑啉钠溶液 1824)20D 头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 旋光性旋光性 （三）共轭体系（三）共轭体系 NSO头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 青霉素类青霉素类 母核无明显母核无明显UV 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 NOS UV青霉素钠青霉素钠UV7-20（四）（四）内酰胺环内酰胺环 水溶液水溶液 不稳定不稳定 干燥纯净干燥纯净 稳定稳定 不稳定不稳定性因素性因素四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 （某些金属离子）（某些金属离子）（温度）（温度）失失效效降降解解青青霉霉素素类类酸酸、碱
15、碱、青青霉霉素素酶酶某些氧化剂某些氧化剂例例青霉素的降解反应青霉素的降解反应青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑酰基羟胺酸酰基羟胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2失效失效降解降解头孢菌素类头孢菌素类酸、碱、胺类酸、碱、胺类内酰胺酶内酰胺酶 (头孢噻吩钠水溶液头孢噻吩钠水溶液2524h失活失活8%)二、二、K+、Na+反应反应（一）（一）鉴别鉴别 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 +醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+焰色焰色紫色紫色 +0.1%四苯硼钠四苯硼钠+Ac白白 K+（二）呈色反应（二）呈色
16、反应1.羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应-内酰胺类内酰胺类NaOH HClNOHH内内酰酰胺胺类类呈色呈色羟肟酸衍生物羟肟酸衍生物Fe3+/3H+NSONSCOHNHOHH2NOH HClNSCHNHOFe3+3OH+Fe3+/3（红、棕、褐）（红、棕、褐）例：例：ChP(2000)头孢哌酮头孢哌酮鉴别鉴别 取本品取本品10mg，加水，加水2ml与盐与盐酸羟胺溶液酸羟胺溶液取取34.8%盐酸羟胺溶盐酸羟胺溶液液1份，醋酸钠份，醋酸钠-氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液1份，份，乙醇乙醇4份份3ml，振摇溶解后，放置，振摇溶解后，放置5min，加酸性硫酸铁铵试液，加酸性硫酸铁铵试液1ml，摇匀，显红棕色。摇匀，显
17、红棕色。2、与与H2SO4-HNO3反应反应蓝绿色蓝绿色红棕红棕黄色黄色头孢噻啶头孢噻啶头孢噻吩钠头孢噻吩钠头孢氨苄头孢氨苄 HNOSOH头孢菌素类头孢菌素类NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH23.茚三酮反应茚三酮反应蓝蓝紫紫色色氨氨基基茚茚三三酮酮 -氨基、伯胺氨基、伯胺某些羟基胺类某些羟基胺类酮式酮式烯醇式烯醇式茚三酮茚三酮茚三酮茚三酮缩合缩合蓝紫色蓝紫色+H2OCNCH2RC OH2RCHH2NCOOH2OHCCOCOCOHNH2CCOCOCOCOHCNCCOCOCOCOHCHRNCCOCOCO4.双缩脲反应双缩脲反应-内酰胺类内酰胺类 CONH紫紫内酰胺类内酰胺类碱性酒石酸铜
18、碱性酒石酸铜 （开环分解）（开环分解）2OHCONH2CuCOHNCCH3COONaCH3SNHNCH3CH3COONaCSNOHOHOOCH2NH2CH2HH蓝紫色蓝紫色5.与变色酸与变色酸-硫酸反应硫酸反应活泼活泼“-CH2-”青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨苄西林氨苄西林HCHOCHSOH ”羰羰基基侧侧链链含含“（分解）（分解）变色酸变色酸显色显色 变变色色酸酸阿阿莫莫西西林林HCHOSOH150（缩合）（缩合）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2色色褐褐SO3HSO3HHOHOSO3HSO3HHOHOOHOHHO3SHO3SCHHCHO（缩合）（缩合）6.与重氮苯磺酸反应
19、与重氮苯磺酸反应橙橙黄黄色色重重氮氮苯苯磺磺酸酸 OHHC（偶合）（偶合）酚羟基酚羟基头孢哌酮头孢哌酮SNOHCONHCHCONHH5C2OONNOCOOHCH2SNNNNCH3NClNNaO3S OH（偶合）（偶合）NNNNCH3SNOHCONHCHCONHH5C2OONNOCOOHCH2SNNNaO3S7.与铜盐反应与铜盐反应 CuSOHAc头头孢孢氨氨苄苄橄榄绿色橄榄绿色NaOH专属反应专属反应（三）沉淀反应（三）沉淀反应1.遇酸遇酸白白青青霉霉素素青青霉霉素素钠钠青青霉霉素素钾钾 H2.有机胺盐反应有机胺盐反应（1）重氮化）重氮化-偶合反应偶合反应 青青霉霉素素普普鲁鲁卡卡因因普普鲁鲁
20、卡卡因因青青霉霉素素 H重氮化重氮化-偶合反应偶合反应红红 芳伯氨基芳伯氨基C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCH+C2H52CH2NH2H2NCOOCH2CH2N普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素NCH2CH2OOC2C2H5N+Cl-N2C2H5COOCH2CH2NNH2HClNaNO2（2）与三硝基苯酚反应）与三硝基苯酚反应 三硝基苯酚三硝基苯酚二苄基乙二胺二苄基乙二胺苄星青霉素苄星青霉素NaOH二苄基乙二胺二苄基乙二胺三硝基苯酚三硝基苯酚H2OHOH-HCONSOHNCOOHCH3CH3CH2CH2NCH2CH2NHCH2OHNO2O2NNO2CH
21、2NCH2CH2NHCH2光谱法光谱法（四）（四）1、UV法法A,Emin,max,%cm 光光谱谱图图样品、分解产物样品、分解产物头孢氨苄头孢氨苄 max=262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm=1.301.50苯唑青霉烯酸苯唑青霉烯酸苯唑青霉素苯唑青霉素 HCu2+nmA NOCONHCH3NOSCH3CH3COONaNOCHCH3OCOCNHNCHHCCH3CH3SHCHCOOHCu2+pH3.8氯唑青霉素氯唑青霉素 341 0.682双氯青霉素双氯青霉素 342 0.653苯唑青霉素苯唑青霉素 339 1.328max%cmE (nm)ml/g 2、IR法法11740
22、1815 cmVOC116901710 cmVOC-内酰胺环内酰胺环酰胺酰胺3、NMR法法 利用不同结构的原子核在利用不同结构的原子核在D2O中有中有不同的不同的NMR光谱进行鉴别光谱进行鉴别JP 主要研究原子核的磁化性质及其在主要研究原子核的磁化性质及其在外磁场中的运动规律外磁场中的运动规律色谱法色谱法（五）（五）1、TLC法法对照品对照法对照品对照法和斑点颜色和斑点颜色比较比较供试品供试品对照品对照品相同条件相同条件fR2、HPLC法法Rt比比较较供供试试品品对对照照品品相相同同条条件件三、三、含量测定含量测定 IINaOH头头孢孢菌菌素素族族青青霉霉素素族族（水解）（水解）H碘量法碘量法
23、（一）（一）1.原理原理水解产物水解产物 OSNaNaIOSNaI定量过量定量过量剩余剩余-内酰胺类内酰胺类ChP反应分两步进行：反应分两步进行：1.水解反应水解反应 (按化学计算量进行按化学计算量进行)2.氧化氧化-还原反应还原反应 (无固定的量关无固定的量关系，受温度、系，受温度、PH值和时间等因素值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定用标准品平行对照测定)NSCH3CH3COOHOHNRCORCOHHNCOONaCH3CH3SNCOONaI24+5H2O+2HClNaOHCCH3CH3SO3HCHNH2COOHCHNHCORCOOH2+
24、2NaCl+8HI第一步第一步第二步第二步例例注射用普鲁卡因青霉素注射用普鲁卡因青霉素 含量测定含量测定 取装量差异项下的内容物，精密称取装量差异项下的内容物，精密称取约取约0.12g，置，置100ml量瓶中，加水使溶量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置碘瓶中，加置碘瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液1ml放置放置20分钟，再加分钟，再加1mol/L盐酸溶液盐酸溶液1ml与醋酸与醋酸-醋酸钠缓冲液醋酸钠缓冲液(pH4.5)5ml，精密，精密加入碘滴定液加入碘滴定液(0.01mol/L)15ml，密塞，密塞，摇匀，在摇匀，在2025暗处
25、放置暗处放置20分钟，用分钟，用硫代硫酸钠滴定液（硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定，）滴定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定并至近终点时加淀粉指示液，继续滴定并强力振摇，至蓝色消失；另精密量取供强力振摇，至蓝色消失；另精密量取供试品溶液试品溶液5ml，置碘瓶中，加醋酸，置碘瓶中，加醋酸-醋酸醋酸钠缓冲液（钠缓冲液（pH4.5）5ml，精密加入碘滴，精密加入碘滴定液（定液（0.01mol/L）15ml，密塞，摇匀，密塞，摇匀，在暗处放置在暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定分钟，用硫代硫酸钠滴定液（液（0.01mol/L）滴定，作为空白。同时）滴定，作为空白。同时用青霉素钠对照品同法测定
26、作对照，算用青霉素钠对照品同法测定作对照，算出供试品的含量。出供试品的含量。V样空样空V样样对照液对照液+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴 V对空对空V对对2.方法方法供试液供试液+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴 空白试验空白试验A、消除样品已降解产物的干扰、消除样品已降解产物的干扰B、消除样品中其他消耗碘的杂、消除样品中其他消耗碘的杂 质的干扰质的干扰C、消除碘挥发造成的误差、消除碘挥发造成的误差 以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定空白空白样品样品I2Na2S2O3I-I2 采用标
27、准品平行对照测定采用标准品平行对照测定A、可消除温度、可消除温度、pH、操作、环、操作、环 境等条件的影响境等条件的影响B、使本法测定结果与微生物检定、使本法测定结果与微生物检定 法一致法一致3.条件条件（1）弱酸性）弱酸性 pH4.5碱碱 I2 IO3-+I-酸酸 普鲁卡因与碘在酸性条件普鲁卡因与碘在酸性条件 下会产生复盐沉淀下会产生复盐沉淀（2）温度）温度 2426温度温度38 未水解的供试品亦消耗碘未水解的供试品亦消耗碘（3）水解时间）水解时间以水解以水解20分钟后的耗碘量最大分钟后的耗碘量最大（4）反应时间）反应时间反应反应20分钟后，耗碘量随时间的分钟后，耗碘量随时间的变化较小，可减
28、小含量测定的误变化较小，可减小含量测定的误差。差。4.特点特点（1）灵敏度高）灵敏度高样品样品:碘碘 =1:8（2）反应条件、实验操作要求高）反应条件、实验操作要求高V对对、V对空对空V样样、V样空样空1份含量份含量加试剂次序、反应时间、滴定速度相同加试剂次序、反应时间、滴定速度相同4I28I-5.计算计算原料原料%WWVVVV对对照照品品）（）（含含量量样样对对对对对对空空样样样样空空 汞量法汞量法（二）（二）1.原理原理SHROH 青青霉霉素素族族（水解）（水解）HgRS）（青霉素族青霉素族ChP Hg .pH2.方法方法 总总样样VNOHgHNONaOH 醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液pH4.
29、6滴定滴定水解水解 降降空空醋醋酸酸盐盐缓缓冲冲液液VNOHg pH4.6滴定滴定样样品品 以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定例例青霉素钠青霉素钠 含量测定含量测定 取本品约取本品约50mg，精密称定，加水，精密称定，加水5ml溶解后，加溶解后，加1mol/L氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液5ml，摇匀，放置，摇匀，放置15分钟，加分钟，加1mol/L硝酸溶硝酸溶液液5ml，醋酸盐缓冲液，醋酸盐缓冲液(pH4.6)20ml及水及水20ml，摇匀，照电位滴定法，摇匀，照电位滴定法(附录附录 A),用铂电极为指示电极，汞用铂电极为指示电极，汞-硫酸亚汞电极硫酸亚汞电极为参比电极，在为参比
30、电极，在3540，用硝酸汞滴，用硝酸汞滴定液定液(0.02mol/L)缓慢滴定，缓慢滴定，（控制滴定过程约为（控制滴定过程约为15分钟），不计第分钟），不计第一个等当点，计算第二个等当点时消耗一个等当点，计算第二个等当点时消耗滴定液的量。每滴定液的量。每1ml硝酸汞滴定液硝酸汞滴定液(0.02mol/L)相当于相当于7.128mg的总青霉素的总青霉素(按按C16H17N2NaO4S计算计算)。另取本品约另取本品约0.5g，精密称定，加水，精密称定，加水与上述醋酸盐缓冲液各与上述醋酸盐缓冲液各25ml，振摇使完，振摇使完全溶解，在室温下，立即用硝酸汞滴定全溶解，在室温下，立即用硝酸汞滴定液液(0
31、.02mol/L)滴定，终点判断方法同上滴定，终点判断方法同上.每每1ml硝酸汞滴定液（硝酸汞滴定液（0.02mol/L）相当）相当于于7.128mg的降解物（按的降解物（按C16H17N2NaO4S计算）。计算）。总青霉素的百分含量与降解物的百总青霉素的百分含量与降解物的百分含量之差值即为青霉素的含量。分含量之差值即为青霉素的含量。3、讨论讨论（1）以第二次滴定突跃为终点以第二次滴定突跃为终点 电位法指示终点电位法指示终点 （2）反应摩尔比反应摩尔比 1:1（3）空白试验空白试验 消除已降解产物干扰消除已降解产物干扰（4）优点优点 不需标准品不需标准品%WFTV%WFTV%空空空空样样样样含
32、含量量4、计算计算%FTWVWV%）（含含量量空空空空样样样样 精密称取含水量为精密称取含水量为0.5%的青霉素的青霉素钠钠0.0502g，按药典方法测定总青霉素含，按药典方法测定总青霉素含量时，用去硝酸汞滴定液量时，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)6.97ml。另精密称取上述样品。另精密称取上述样品0.5013g，按药典方法测定降解物含量时，用去硝按药典方法测定降解物含量时，用去硝酸汞滴定液酸汞滴定液(0.02009mol/L)1.33ml。以干。以干燥品计算，求样品中青霉素的含量。燥品计算，求样品中青霉素的含量。例例青霉素钠青霉素钠 含量测定含量测定 .T%.%.（三）（三）1
33、、原理原理青霉噻唑酸青霉噻唑酸青霉素类青霉素类NaOH（钠盐）（钠盐）OHNaClHClNaOH （剩剩余余）-内酰胺类内酰胺类ChPNSCH3CH3COONaOHNRCONSCH3CH3COONaCHNONaORCO 定量过量定量过量NaOH2、方法方法 供供试试液液内内酰酰胺胺类类OHNaOH定量过量定量过量 HCl回滴回滴中和中和中和中和例例苯唑西林钠苯唑西林钠 含量测定含量测定 取本品约取本品约0.5g，精密称定，加新沸，精密称定，加新沸过的并用过的并用0.01mol/L氢氧化钠溶液中和至氢氧化钠溶液中和至酚酞指示液刚显红色的水酚酞指示液刚显红色的水20ml，使溶解，使溶解,再用再用0
34、.01mol/L氢氧化钠溶液中和后，精氢氧化钠溶液中和后，精密加氢氧化钠滴定液密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)25ml，摇匀，置水浴中加热摇匀，置水浴中加热20分钟，注意避免分钟，注意避免吸收空气中的二氧化碳，冷却后，加酚吸收空气中的二氧化碳，冷却后，加酚酞指示液酞指示液12滴，用盐酸滴定液滴，用盐酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空）滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每白试验校正。每1ml的氢氧化钠滴定液的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于相当于40.14mgC19H19N3O5S。%WFTVV%样样空空含量含量3、讨论讨论（1）水解前先中和溶剂和样品水解前先中和溶
35、剂和样品（2）加热时避免吸收加热时避免吸收CO2 CONaNaOHCO不能使酚酞变红不能使酚酞变红（3）空白试验校正空白试验校正(消除消除Na2CO3干扰干扰)（4）特点特点 简便快速简便快速 不适用于有残留酯的产品不适用于有残留酯的产品%.%.799100101009009863001301080136421 nmCupHA 青霉烯酸青霉烯酸青霉素族青霉素族（水解）（水解）可见可见-紫外分光光度法紫外分光光度法（四）（四）1、酸水解法（铜盐法）酸水解法（铜盐法）（1）原理）原理稳定剂稳定剂JP青霉素族青霉素族CH2COCONHHCCH3CH3CCOOHCCNHSHCONSOHNCOOHCH3
36、CH3CH2 pHACu （2）方法）方法标标样样枸枸橼橼酸酸硫硫酸酸铜铜标标准准液液供供试试液液AAnmA 320（3）特点）特点实验条件随各药物稳定性不同而定实验条件随各药物稳定性不同而定标准品对照法标准品对照法%WWAA标标准准品品含含量量样样标标标标样样 （4 4）计算）计算2、硫醇汞盐法硫醇汞盐法（1）原理）原理青青霉霉烯烯酸酸硫硫醇醇汞汞盐盐青青霉霉素素族族 HgCl（咪唑）（咪唑）nmmax 青霉素族青霉素族ChPHgClCH3CH3COONaSNHCONCH2NHCOCH3NSOHNCOONaCH3CH3OCCH2NHCOCH3 HgCl咪唑咪唑nmmax （2）方法）方法对照
37、品法对照品法%WWAA%对对照照品品样样标标标标样样 计算计算标标样样咪咪唑唑硼硼酸酸缓缓冲冲液液标标准准液液供供试试液液AAHgCl 2pH 9例例氨苄西林钠氨苄西林钠 含量测定含量测定 取本品约取本品约60mg 置置100ml量瓶中，加量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置另一，置另一100ml量瓶中，加水稀释至量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再精密量取刻度，摇匀，再精密量取5ml，置，置25ml量瓶中，加硼酸缓冲液量瓶中，加硼酸缓冲液2.5ml与醋酐的乙与醋酐的乙腈溶液（腈溶液（150）0.25ml，放置，放置5min后，后，加咪唑溶液至刻
38、度，摇匀，置加咪唑溶液至刻度，摇匀，置60水浴水浴中，加热中，加热30min，取出冷却，照分光光，取出冷却，照分光光度法（附录度法（附录 A），在），在325nm的波长的波长处测定吸收度；另取氨苄西林三水合处测定吸收度；另取氨苄西林三水合物标准品，按同法测定，计算，即得。物标准品，按同法测定，计算，即得。（3）讨论）讨论a.咪唑催化的水解产率高，硫咪唑催化的水解产率高，硫 醇汞盐稳定（醇汞盐稳定（3h）b.侧链有侧链有-NH2时，需加醋酐先时，需加醋酐先 将其乙酰化后才能发生上述将其乙酰化后才能发生上述 反应反应NSOHNCOOCH3CH3OCCH2NH2NaNSOHNCOONaCH3CH3O
39、CCH2NHCOCH3 OCHCH pH9（4）特点）特点A、简便快速、简便快速B、用标准品对照，重现性良、用标准品对照，重现性良 好，好，RSD1%3、羟肟酸比色法羟肟酸比色法USP JPFe3+/3H+红色红色-内酰胺类内酰胺类NaOH HClNOHH内内酰酰胺胺类类羟羟肟肟酸酸衍衍生生物物HPLC法法ChP 头孢菌素类头孢菌素类内标法校正因子内标法校正因子外标法外标法特点特点 快速、高效、灵敏快速、高效、灵敏 专属性强、重现性好专属性强、重现性好 一法多用（鉴别、检查、含测）一法多用（鉴别、检查、含测）哌拉西宁哌拉西宁 原料药原料药 含量测定含量测定色谱条件色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅
40、胶为填充用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇剂；以甲醇0.2mol/L磷酸二氢钠溶磷酸二氢钠溶液液10氢氧化四乙基铵溶液氢氧化四乙基铵溶液水水（400503547）用磷酸调节）用磷酸调节pH值至值至5.5为流动相。检测波长为为流动相。检测波长为254nm。第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素苷苷苷苷元元糖糖缩缩合合 氨基糖苷氨基糖苷苷元苷元氨基糖氨基糖缩合缩合 链霉素链霉素 双氢链霉素双氢链霉素新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素庆大霉素庆大霉素 巴龙霉素巴龙霉素链霉素链霉素链霉胍链霉胍+链霉糖链霉糖+N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 苷元苷元糖糖链霉双糖胺链霉双糖胺NH CNHNH2
41、HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺庆大霉素庆大霉素 糖糖 苷元苷元绛红糖胺绛红糖胺 +脱氧链霉胺脱氧链霉胺 +加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 ROC R1R2HNNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺ROC R1R
42、2HNNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3绛红糖胺绛红糖胺紫素胺紫素胺2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺庆大霉素庆大霉素C复合物复合物 庆大霉素庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素庆大霉素C2a R=CH3 R1=R2=H 庆大霉素庆大霉素C2b R=R1=H R2=CH3一、一、结构与性质结构与性质多与硫酸成盐多与硫酸成盐链霉素链霉素 3个个庆大霉素庆大霉素 5个个碱性中心碱性中心碱性碱性（一）（一）水溶性水溶性
43、溶解性溶解性（二）（二）链霉素链霉素 pH57.5庆大霉素庆大霉素 pH212 稳定稳定UV（三）（三）稳定性稳定性（四）（四）链霉素水解产物反应链霉素水解产物反应（五）（五）NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3坂口反应坂口反应N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反应糖胺反应麦芽酚反应麦芽酚反应二、二、鉴别鉴别 茚三酮反应茚三酮反应（一）（一）蓝蓝紫紫色色庆庆大大霉霉素素链链霉霉素素茚茚三三酮酮羟基胺结构羟基胺结构N-甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应（二）（二）甲甲基基葡葡萄萄糖糖胺胺庆庆大大霉霉素素链链霉霉素素水水解解 N乙酰丙酮乙酰丙酮 O
44、H-吡咯衍生物吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+红色红色（Elson-Morgan反应）反应）NHCH3NHNHNH C NH2HOOHOHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNCH3COCH3HHOCH2CHOH3(缩合缩合)323COCHCOCHCH OHHHH3CH3CCHNNCOCH3CH3COCH3CH3N红色红色对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+NCH3COCH3HHOCH2CHOH3 麦芽酚反应麦芽酚反应（三）（三）链霉糖特有反应链霉糖特有反应链链霉霉糖糖链链霉霉素素 OH麦麦芽芽酚酚紫紫红红色色 3FeH+分子重排分子重排NH C NH2HOOH
45、OHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHNHNHCH3H2O NaOHOOOHCH3OOCH3Fe3+H+OFe33+/紫红紫红麦芽酚麦芽酚链霉胍特有反应链霉胍特有反应橙红橙红羟基喹啉羟基喹啉链霉胍链霉胍链霉素链霉素次溴酸钠次溴酸钠 8OH（或或-萘酚萘酚）NOH8-8-羟基喹啉羟基喹啉坂口反应坂口反应（四）（四）-萘酚萘酚OHONBrRNHCO NH（四）（四）24SO反应反应白白 BaSOSOBaH+UV法法（五）（五）IR法法（六）（六）庆大霉素无庆大霉素无UV吸收吸收nmmax 链链霉霉素素TLC法法（七）（七）三、三、检查检查链霉素杂质链霉素杂质（一）（一）链霉
46、素链霉素B（甘露糖链霉素）（甘露糖链霉素）方法方法 TLC中的对照品法中的对照品法 （BP）1.来源来源 反应中间体反应中间体对微生物的活性无明显差异对微生物的活性无明显差异毒副作用和耐药性不同毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同发酵菌种不同工艺差别工艺差别C组分比例组分比例不一致不一致规定控制各组分的相对百分含量规定控制各组分的相对百分含量ChPUSPBPJP庆大霉素庆大霉素C组分的测定组分的测定（二）（二）.pH吲吲哚哚衍衍生生物物巯巯基基醋醋酸酸邻邻苯苯二二醛醛氨氨基基max=330nm衍生化原理衍生化原理 1.1.1-烷基硫代烷基硫代-2-烷基烷基异吲哚衍生物异吲哚衍生物RNH2+HSCH
47、2COOHOH-CHOCHONRSCH2COOHRPHPLC方法方法 2.规定规定 C1 2550%C1a 1540%C2a+C2 2050%计算计算 3.%AAAAA%ACCCCiiaa 峰面积归一化法峰面积归一化法三、三、含量测定含量测定链霉素、庆大霉素链霉素、庆大霉素微生物检定法微生物检定法 本法系利用抗生素在琼脂培养本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应平行线原理基内的扩散作用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。，以测定供试品效价的一种方法。四、血清
48、中庆大霉素的四、血清中庆大霉素的HPLC法法 血浆样品的预处理血浆样品的预处理 离子对色谱法的目的：离子对色谱法的目的：除去氨基酸、肽、胺的干扰除去氨基酸、肽、胺的干扰 选用选用OPA为荧光衍生化试剂为荧光衍生化试剂 采用柱后衍生化法采用柱后衍生化法 2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R1第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素ABCD2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R11234567891011122CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO四环素四环素（TC）tetracycline2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOCl金霉
49、素金霉素(CTC)chlortetracycline氯四环素氯四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOOH土霉素土霉素(OTC)oxytetracycline氧四环素氧四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3OH多西环素多西环素(DOTC)doxycycline脱氧土霉素脱氧土霉素美他环素美他环素（METC）metacyclineHOHCONH2OOHOHOOHN CH3 2OHCH22CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R1一、一、结构与性质结构与性质两性两性（一）（一）1.与酸、碱均能成盐与酸、碱均能成盐2.强酸或强碱中溶解度强酸或强碱中溶解度
50、 酚羟基、烯醇型羟基酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性弱酸性二甲胺基二甲胺基 弱碱性弱碱性吸湿性吸湿性（二）（二）多含结晶水多含结晶水与金属离子生成有色配位化合物与金属离子生成有色配位化合物Ca2+Mg2+Fe3+Al3+UV（三）（三）与金属离子络合与金属离子络合（四）（四）pH3 7.5 荧光荧光 HOHOCaOOOOHOHOO不稳定性不稳定性（四）（四）1.差向异构化差向异构化差差向向金金霉霉素素差差向向四四环环素素金金霉霉素素四四环环素素 pH淡黄淡黄黑黑蓝色荧光蓝色荧光OHCONH2OOHOHOOHCH3HCH32NHO差向四环素差向四环素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO
