1、Thalassemia地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一中国南方不同高发地中国南方不同高发地区人群携带率区人群携带率 1 23%研究背景研究背景中国南方中国南方和和地贫的人群携带率地贫的人群携带率珠海珠海韶关韶关广州广州汕头汕头湛江湛江广东省五个地区地中海贫血遗传流行病学调查广东省五个地区地中海贫血遗传流行病学调查西西南南东东北北中中Journal of Clinical Pathology,2004;57(5):517-22.广东省人群中广东省人群中 地贫的携带者频率地贫的携带者频率广东省人群中广东省人群中地贫的携带者频率地贫的携带者频率广东省年高风
2、险妊娠预测数据广东省年高风险妊娠预测数据（95%CI）重型或中间型重型或中间型地贫：地贫：645 （480，835）BartsBarts胎儿水肿综合征：胎儿水肿综合征：1714（1498，1945）血红蛋白（血红蛋白（HbHb）H H 病：病：1677（1467，1901）广州市主要出生缺陷的发生率广州市主要出生缺陷的发生率(1998-2001)地贫纯合子：致死性出生缺陷地贫纯合子：致死性出生缺陷重型重型 地贫地贫:胎儿水肿综合征胎儿水肿综合征 早产死胎或出生前后死亡早产死胎或出生前后死亡 可导致严重产科并发症可导致严重产科并发症 无理想治疗方法无理想治疗方法重型重型 地贫地贫 出生后出生后1
3、 1年内发病年内发病 多于未成年前因严重贫血而夭折多于未成年前因严重贫血而夭折 输血和去铁治疗可维持输血和去铁治疗可维持,代价昂贵代价昂贵研究地中海贫血的意义研究地中海贫血的意义 重症地贫患儿的出生是世界公认的公共卫生问题重症地贫患儿的出生是世界公认的公共卫生问题 通过产前诊断阻止重症患儿出生是首选预防措施通过产前诊断阻止重症患儿出生是首选预防措施 WHO优先推荐在发展中国家实施预防的遗传性疾病优先推荐在发展中国家实施预防的遗传性疾病 预防地贫是中国南方高发区减少出生缺陷的战略需求预防地贫是中国南方高发区减少出生缺陷的战略需求研究背景研究背景应用于地贫应用于地贫 控制的人群筛查策略控制的人群筛
4、查策略 基于医院水平的预防计划基于医院水平的预防计划 基于社区水平的预防计划基于社区水平的预防计划 扩展的家系筛查计划扩展的家系筛查计划中国南方地贫人群预防的首个前瞻性筛查计划中国南方地贫人群预防的首个前瞻性筛查计划 时间：时间：1993.01.01 2003.12.31 基于医院的预防计划基于医院的预防计划:广州市妇婴医院广州市妇婴医院 占广州市出生数的占广州市出生数的 1/17 策略：孕期杂合子筛查策略：孕期杂合子筛查 结合现行的孕期健康产科检查实施结合现行的孕期健康产科检查实施地贫携带者筛查及产前诊断流程地贫携带者筛查及产前诊断流程被检对象（婚前或孕中期）被检对象（婚前或孕中期）血液学分
5、析（血液学分析（MCV，Hb A2变化）变化）排除地贫排除地贫地贫携带者地贫携带者遗传咨询，配偶检查遗传咨询，配偶检查血液学分析（血液学分析（MCV Hb A2变化）变化）地贫携带者地贫携带者排除地贫排除地贫遗传咨询遗传咨询双亲基因分析双亲基因分析胎儿产前诊断胎儿产前诊断筛查结果筛查结果异常血红蛋白筛查结果异常血红蛋白筛查结果5016 80141 465 285(5.7)186(3.7)24(5.2)8(100)广州市妇婴医院广州市妇婴医院 1993-2003 1993-2003 筛查计划的结果筛查计划的结果(contd)筛查发现的阳性孕妇或阳性夫妇筛查发现的阳性孕妇或阳性夫妇 地贫地贫1 地
6、贫地贫 地贫地贫 地贫地贫 5.7%3.6%4.4%1.8%Total of 4503 couples screened 54例例Barts水肿儿和水肿儿和Hb H病病 18例重型例重型地贫地贫 2804 1783 198对对 83对对产前诊断：产前诊断：187 例例 地贫地贫 82例例 地贫地贫 广州市妇婴医院广州市妇婴医院 1993-2003 1993-2003 筛查计划的结果筛查计划的结果产前诊断结果产前诊断结果地中海贫血的产前诊断地中海贫血的产前诊断 胎儿取样技术胎儿取样技术 DNA诊断技术诊断技术 -地贫的诊断地贫的诊断 -地贫的诊断地贫的诊断羊膜穿刺羊膜穿刺 (amniocente
7、sis)抽取胎儿样品示意图抽取胎儿样品示意图DNADNA诊断技术诊断技术 多重多重PCR（multiplex PCR）等位基因特异性性寡核苷酸杂交（等位基因特异性性寡核苷酸杂交（ASO）反向点杂交反向点杂交（RDB）变性高效液相色谱（变性高效液相色谱（DHPLC）多重引物延伸多重引物延伸DHPLC（multiplex PE/DHPLC）用于用于 和和 地贫产前诊断的方法地贫产前诊断的方法 (1993-2003)(1993-2003)胎儿脐带血血红蛋白电泳图谱胎儿脐带血血红蛋白电泳图谱Patient2Patient3FetalAdultoriginA2FABartsDiagnosisPatien
8、t 1 Barts hydrops fetalisPatient 2 Hb H diseasePatient 3 thal trait本实验室应用的主要技术本实验室应用的主要技术 -50kb -10kb 0kb 10kb 20kb 30kb(-SEA)Deletion (-4.2)Deletion(-3.7)Deletion 2 1导致导致地贫的不同类型的基因缺失地贫的不同类型的基因缺失采用采用Gap-PCRGap-PCR进行进行-SEA地贫基因缺失的基因分型地贫基因缺失的基因分型-SEASEA地贫缺失的基因分型结果地贫缺失的基因分型结果三个三个地贫家庭的产前诊断结果地贫家庭的产前诊断结果与美
9、国商品化与美国商品化UBIUBI试剂盒的对比研究试剂盒的对比研究TranscriptionRNA splicingInitiator codonFrameshiftNonsense codonDouble heterozygote中国南方中国南方地贫突变的变异类型和位置地贫突变的变异类型和位置EXON 1IVS 1 EXON 2EXON 3 IVS 2 Fragment size:A=453 bp B=364 bp C=423 bp DHPLC DHPLC 分析人分析人珠蛋白基因珠蛋白基因:三个三个PCRPCR片段扩增片段扩增123ABCDHPLCDHPLC的三种的三种 操作模式操作模式 非变
10、性分析（非变性分析（50 C）双链双链DNA大小测定大小测定 半变性分析（半变性分析（52-78 C）突变鉴定突变鉴定 全变性分析（全变性分析（78-80 C）Oligo和和RNA分析分析PCRPCR产物的半变性分析产物的半变性分析（52-78 C）Wild typeMutant HeteroduplexesHomoduplexes Reference Samples PCR ProductsDHPLC DHPLC 检测检测地贫突变的结果地贫突变的结果CD2/N-29/NCD2/CD14-15CD17/NCD2/CD27-28-28/CD27-28/CD2/-98CD26/NCD27-28/N
11、-73/N-73/N-28/NFragment ACD71-72/IVS-16N/NCD41-42/IVS-16CD71-72/NIVS-16/NCD41-42/N？CD38/NCD71-72/NCD41-42/CD41-42Fragment BDHPLC DHPLC 检测检测地贫突变的结果地贫突变的结果N/NIVS-654/NIVS-654/654IVS-666/NIVS-654/666Fragment CDHPLC DHPLC 检测检测地贫突变的结果地贫突变的结果RDB analysis:application to rapid prenatal diagnosisfor eight th
12、alassaemia mutations.GenotypeFather CDs41-42(CTTT)/N MotherIVS-2-654(C T)/N FetusCDs41-42 /IVS-2-654Normal control N /N 83 83 例例 地贫高风险胎儿产前诊断结果地贫高风险胎儿产前诊断结果(contd)266 266 例高风险妊娠的产前诊断结果例高风险妊娠的产前诊断结果*Three Hb H disease involved 广东省广东省 和和地中海贫血预防模式研究地中海贫血预防模式研究 现场：广东省四会市现场：广东省四会市 时间：时间：2001.1-2005.122001
13、.1-2005.12 人口人口:40:40万万 目标目标:为制定为制定20062006年广东省全境地贫年广东省全境地贫 预防计划提供方法和经验预防计划提供方法和经验 产前遗传学的临床和公共卫生问题产前遗传学的临床和公共卫生问题(contd)结论结论 我们建立的基于医院水平的孕妇人群的筛查我们建立的基于医院水平的孕妇人群的筛查 计划可有效的降低计划可有效的降低和和地贫的出生率地贫的出生率 致谢致谢 广州市妇婴医院广州市妇婴医院 Liao Can,Li Jian,Huang Yining,Li Qiuming,Feng Qion,Zhong Huizh,Cui Yongyi,第一军医大学第一军医大学 南方医科大学南方医科大学 Zeng Rong,Mo Qiuhua,Li Liyan,Hua Liang,Zhang Jizeng,Jia Shiqi,Luo Chen 广州市市卫生局广州市市卫生局 Zhang Li2020/11/551谢谢观赏！
