1、实验实验动物的环境与设施动物的环境与设施李天明同济大学实验动物中心主要内容主要内容n 环境因素对实验动物的影响n 实验动物的生物学分类n 常规实验动物设施分类、使用和管理n 同济大学实验动物中心简介n 同济大学实验动物中心岗前培训 李天明2引言小样！你们想拿我干什么？o 设计实验的基本原则1：对照原则2：随机化原则3：条件一致性原则4：重复性原则？树鼩适宜温度：2528适宜湿度：60以上EnvironmentRoomCage 实验动物设施对环境控制的意义1.保证实验动物健康和质量标准化2.保障实验研究获得正确结果3.为动物实验工作者提供适宜的工作环境，避免伤害，确保研究的顺利进行第一节环境因素
2、对实验动物的影响11 动物对实验处理的反应：动物对实验处理的反应：R=(A+B+C)D+ER实验动物的总反应（实验结果）；A动物种的共同反应；B品种及品系特有的反应；C个体反应（个体差异）；D环境影响；E实验误差。环境因素与动物的总反应呈正相关，要尽量减少环境因素与动物的总反应呈正相关，要尽量减少D D的变化，的变化，排除实验处理以外的影响。排除实验处理以外的影响。环境因素对实验动物的影响环境因素对实验动物的影响n R=（A+B+C）D En A+B+C n 实验动物本身的反应，遗传因素起决定性作用。n D n 动物生活环境影响和实验处理影响的综合作用。第二节 影响实验动物的自然环境因素 影响
3、实验动物的自然环境因素影响实验动物的自然环境因素 o 1 环境温度环境温度o 2 相对湿度相对湿度o 3 光照光照o 4 噪声噪声o 5 空气洁净度空气洁净度o 6 通风通风o 7 人为因素人为因素152.1 环境温度环境温度需控制的最关键的环境参数高温比低温的问题更严重与推荐范围的重大偏离是首要问题日温差3温度对实验动物的影响：温度对实验动物的影响：1：新陈代谢：低温时新陈代谢增加，摄食增加2：散热：除灵长类，其他动物汗腺不发达或无汗 腺，高温时散热困难，难以维持体温恒定3：脏器重量：负相关4：生殖：高温时雄性睾丸萎缩，精子活力下降；雌性动物性周期紊乱，泌乳下降。17 喜马拉雅（Himala
4、ya）兔在20环境下饲养时，耳、尾、鼻和四肢尖端生长白毛，而饲养在10时，则生长黑毛。小鼠在21环境下每年能繁殖3代，而在13下仅能繁殖2代。（性周期）气温与体温的关系气温与体温的关系适宜温区生理调节生理调节物理调节化学调节高高体体温温低低体体温温T临界10（小鼠为例）T临界：26小鼠为例）冷死冷死热死热死舒适区舒适区等热区等热区体温恒定区体温恒定区生存区生存区 几种实验动物的体温和舒适区温度几种实验动物的体温和舒适区温度动物种类 体温 舒适区温度 小鼠 37-39 20-24 大鼠38.5-39.5 20-24 豚鼠38.2-38.9 18-22 兔37-39 16-23 犬38-39 17
5、-20 猕猴36-39 18-25 猪38-40 18-25 2.2 2.2 相对湿度相对湿度绝对湿度a：某温度下，样品空气中的水蒸气的实际含量饱和湿度b：某温度下，样品空气中所能容纳的水蒸气的最大值相对湿度c：某温度下，样品的绝对湿度与该温度下的饱和湿度的比值（和样品多少无关，能够客观衡量湿度的大小）c=（a/b）100空气中的含水量和温度有关，温度越高，能容纳的水蒸气也越多推荐湿度：4070 n 相对湿度相对湿度-偏偏高高微生物易于繁殖饲料、垫料易于霉变动物易发生传染病 n 相对湿度相对湿度-偏低使动物皮肤和黏膜发生干裂使室内灰尘飞扬，易引起动物的呼吸道疾病相对湿度低于20%时，大鼠容易发
6、生 环尾环尾症症 Ringtail24大鼠不耐低湿度，如湿度低于20%，容易发生一种表现为尾根部坏死的环尾症（ring-tail），死亡率甚高。252.3 2.3 光照光照o 光照对哺乳动物生物钟具有重要作用，光照的昼夜交替使动物体的一些活动，如血压、激素水平、体温、神经活动等都变成了一种节律。光周期光周期的控制对啮齿类动物至关重要动物设施内的光周期：12小时（明）/12小时（暗）14小时（明）/10小时（暗）一般都会有手动操作的定时器 27 持续光照可使生殖系统过度兴奋，造成连续发情。还可性成熟年龄提早。光强度随距离光源的距离增大而递减高强度会引起白化鼠的视网膜病变v工作照度150300lx
7、v动物照度1520lx（小鼠）2.4 噪声噪声p 引起动物听力性痉挛。60dbp 对生殖影响较大，如豚鼠流产。p 引起动物呼吸、心跳、血压、肾上腺皮质激素等生理指标变化。心跳、呼吸次数及血压增加，大鼠出现高血压、心脏肥大30噪声对实验动物生殖生理具有严重不良影响噪声对实验动物生殖生理具有严重不良影响噪声对实验动物的生殖生理具有严重不良影响。可使怀孕动物的妊娠过程中断；或使大鼠和小鼠雄雌双方的生育力都减退。312.52.5 空气洁净度空气洁净度 尘埃：是各种生物粒子的载体，这些生物粒子可附着在120m的尘埃上飘浮在空中 生物粒子：包括病毒、细菌、芽孢、粉螨、霉菌孢子等 清洁级以上的动物设施，都采
8、用3层过滤器过滤后的空气。32空气过滤器 初效过滤器：阻挡5微米直径以上的颗粒物。中效过滤器：阻挡15微米直径的细颗粒物，过滤效率85以上 高效过滤器：99.7阻挡0.3微米直径以上的细颗粒物。此为医学级空气（1.12亿个0.3微米的微粒大小等同于铅笔尖）氨浓度动物室中的臭气物质，对人和动物具有卫生学意义的是含氮物质分解产生的氨。在卫生管理方面，以氨的含量作为指标。高浓度的氨（200mg/m）可引起呼吸器官黏膜异常，发生流泪、咳嗽黏膜发炎、肺水肿和肺炎。SPF动物房氨浓度 14mg/m3 2.6 2.6 通风通风我们想通过通风系统达到什么目的？l可作用于动物体表皮肤的蒸发和对流散热，气流速度和
9、 散热正相关。l可调节室内温度和湿度，又可降低室内粉尘和有害气体污染，控制传染病的流行。气流布局模式 -水平层流式 -垂直层流式 -乱流式 水平层流模式图送风墙回风墙 垂直层流模式图天花板送风地面回风 乱流式模式图 送风口送风口回风口回回风风口口回回风风口口 乱流式饲养室影像资料40换气次数，洁净程度越高，要求换气次数越多。屏障环境：1020次/h 隔离环境：2050次/h.压强梯度：洁净区高于污染区。饲养间60pa走廊40pa缓冲间20pa清洗区合理组织气流和风速可调节室内温度和湿度，又可降低室内粉尘和有害气体污染，控制传染病的流行。通风系统中的两个重要参数412.7 2.7 人为因素人为因
10、素u 居住条件u 饲养技术u 工作人员的操作规范u 实验人员操作的管理43温度2024换气次数1020次/h日温差：3气流速度0.10.2m/s相对湿度4070压差强度2060pa噪声60dB落下细菌数3个/皿氨浓度14mg/m动物照度1530lx工作照度150300lx空气净化等级万级昼夜明暗交替时间12/2或10/14小时2.8动物实验设施环境指标（以屏障系统小鼠为例）动物实验设施环境指标（以屏障系统小鼠为例）第三节第三节 实验实验动物动物微生物学等级分类微生物学等级分类无菌级SPF级（无特定病原体级）清洁级普通级常用实验动物微生物学等级分类无菌级无菌级SPF级级清洁级清洁级无菌级无菌级S
11、PF级级清洁级清洁级普通级普通级小鼠大鼠豚鼠兔犬猴SPF级级清洁级清洁级普通级普通级猪3.1无菌动物与悉生动物无菌动物（Germ free animal；Gf anmial）:指通过无菌剖宫产手术或无菌胚胎移植进行无菌化获得的动物，第一代通过人工哺乳成长，利用无菌饲养方法维持于无菌隔离器，利用现有发放检测不到活的微生物或寄生虫的动物。悉生动物（Gnotobiotic animal；GN animal)：源于gf动物，在绝对屏障系统内饲育，只能从动物体内外检测到已知生物体的动物。饲养隔离器SPF级动物即无特定病原体动物（指动物体内无特定的微生物和寄生虫）是不携带潜在感染或条件致病菌，但带有非特定
12、的微生物和寄生虫的动物，要求在屏障系统内生长，国际上普遍采用的动物。3.2无特定病原体级动物（Specific Pathogen Free)无特定病原体动物的饲育通常是:先培育出无菌动物或悉生动物;然后,再将其后代转移到屏障系统设施内饲育繁殖建群。若屏障系统内有应排除的微生物或寄生虫污染动物,则须重新消毒或重建。3.3清洁级动物（clean animal;CL animal）亦称最少疾病动物Minimal Disease animal。必须是不携带主要人兽共患病原体和动物烈性传染病的病原体，又不携带对动物危害大和对科学研究干扰大的病原体。清洁动物通常来自SPF动物的后代或降级；饲育在屏障系统设
13、施中；饲育所用的垫料，饲料，饮水和用具等均应经过高压蒸汽消毒。工作人员需穿无菌服装才能进行饲育或实验操作。3.4普通级动物（conventional animal;CV animal）在开放系统的动物室内饲养，空气未经过净化，动物本身所携带的微生物状况不明确。要求不携带主要人兽共患病和动物烈性传染病病原的动物。饲育在开放环境里,使用的垫料和饲料,只消毒不灭菌;其饮水须符合城市饮用水标准。普通动物只能用于教学实验和某些科研工作的预实验。无菌操作及SPF环境设施影片第四节第四节 常规实验动物设施常规实验动物设施分类分类实验动物设施根据对饲养动物的空气净化程度分为三类。v 开放系统(open sys
14、tem)v 屏障系统(barrier system)v 隔离系统(isolation system)NOVEMBER, 杨斐4.1 开放系统开放系统普通环境普通环境n 定义定义：符合动物基本居住要求，但在硬件设符合动物基本居住要求，但在硬件设施上不能完全控制传染因子施上不能完全控制传染因子。温湿度、尘埃。温湿度、尘埃等受外界环境影响。等受外界环境影响。n 空气净化；空气净化；无无空气净化空气净化n 适用：适用：饲育普通级动物饲育普通级动物NOVEMBER, 杨斐开放系统实验室5960NOVEMBER, 杨斐4.2 屏障系统屏障系统屏障环境屏障环境n 定义：定义：通过严格控制人员、物品和环境空气
15、的通过严格控制人员、物品和环境空气的进出，形成控制微生物进入的屏障进出，形成控制微生物进入的屏障n 空气净化空气净化:空气进出经高效过滤，空气净化等级空气进出经高效过滤，空气净化等级达到达到万级万级n 适用：适用：饲育饲育SPFSPF级动物级动物和清洁级动物和清洁级动物NOVEMBER, 杨斐屏障系统照片63n 定义：定义：采用无菌隔离装置以保证与外界环境的采用无菌隔离装置以保证与外界环境的绝对隔离绝对隔离n 空气净化：空气净化：空气进出经超高效过滤，空气净化空气进出经超高效过滤，空气净化等级达到等级达到百级百级n 适用：适用：饲育无特定病原体动物，无菌动物和已饲育无特定病原体动物，无菌动物和
16、已知菌动物（悉生动物）知菌动物（悉生动物）644.3 隔离系统隔离系统隔离环境隔离环境65隔 离 系 统 照 片66NOVEMBER, 杨斐第五节 常规实验动物设施组成与布局o 常规实验动物设施的组成常规实验动物设施的组成1.1.隔离检疫室和健康动物观察室隔离检疫室和健康动物观察室2.2.饲养室饲养室3.3.各种各种实验室实验室4.4.辅助区域辅助区域NOVEMBER, 杨斐o 实验动物设施布局原则实验动物设施布局原则q 有利于防止疾病的传播、各种动物保持各自有利于防止疾病的传播、各种动物保持各自的独立性，避免相互干扰相互感染的独立性，避免相互干扰相互感染q 方便工作人员操作方便工作人员操作q
17、 能够使人员、动物、其他物品和净化能够使人员、动物、其他物品和净化空气尽空气尽可能的按可能的按“单向单向”路线移动路线移动内准备室饲养室饲养室实验室实验室饲养室检疫室饲养室饲养室饲养室饲养室女二更女一更男一更男二更缓冲缓冲高压灭菌锅传递窗清洗间风淋饲养室屏障屏障系统人流走向图系统人流走向图一楼SPF大鼠实验室动物流走向图内准备室饲养室饲养室饲养室实验室实验室检疫室饲养室饲养室饲养室饲养室饲养室女一更女二更男一更男二更缓冲缓冲风淋高压灭菌锅传递窗清洗间屏障屏障系统物流走向图系统物流走向图内准备室饲养室饲养室饲养室实验室实验室检疫室饲养室饲养室饲养室饲养室饲养室高压灭菌锅缓冲缓冲女一更女二更男一更
18、男二更风淋传递窗清洗间屏障屏障系统动物流走向图系统动物流走向图72实验动物设施内所有数据的监控o 监控内容监控内容 温度温度 湿度湿度 压差压差 人员进出情况人员进出情况 设备运转情况设备运转情况关键服务的连续性o 应急电源 -充足的发电机容量，足以维持基本的环境控制以及关键的研究设备（如样品冰柜、组织培养箱等）-自动转换及根据负载定期测试 -应考虑将几个机组的负载通过交叉来分流，以防单个机组故障关键服务的连续性o 应考虑为以下提供后背供水 -动物饮用水 -冷却塔运行o 储存至少14天的饲料和垫料供给第六节 动物设施的日常管理o 1：人员的走向o 2：物品的走向o 3：动物的走向o 4：动物尸
19、体的处理NOVEMBER, 杨斐6.1 6.1 动物设施内人员的走向动物设施内人员的走向o 屏障系统中人的移动路线屏障系统中人的移动路线(双走廊或三走廊式双走廊或三走廊式)o 人员入口人员入口（脱衣）（脱衣）一更一更（清洁）（清洁）二二更更（穿衣）（穿衣）风风淋室淋室（风淋）（风淋）清洁清洁走走廊廊 饲养室或动物饲养室或动物实验室实验室（实验）（实验）清清洁走廊洁走廊 人员出口人员出口 更衣更衣 外部区域外部区域NOVEMBER, 杨斐一更衣衣柜衣柜二更入口二更入口鞋柜鞋柜NOVEMBER, 杨斐二更衣通向一更通向一更通向风淋通向风淋通向内准备室通向内准备室NOVEMBER, 杨斐风淋 NOV
20、EMBER, 杨斐清洁走廊通向实验室通向实验室NOVEMBER, 杨斐实验室入口 压差计压差计NOVEMBER, 杨斐实验室内 NOVEMBER, 杨斐清洁走廊人员出口NOVEMBER, 杨斐6.2 6.2 动物设施内物品的走向动物设施内物品的走向清洁准备室清洁准备室 清洁物品储存清洁物品储存室室 清洁走廊清洁走廊 饲养饲养室或室或动动物实验室物实验室 清洁清洁走廊走廊 物品物品出口出口外部外部区域区域高压灭菌锅紫外传递窗物品NOVEMBER, 杨斐外准备室双扉高压灭菌器（外扉）传递窗高压喷雾器NOVEMBER, 杨斐内准备室双扉高压灭菌器（内扉）传递窗NOVEMBER, 杨斐清洁物品储藏室出
21、入口NOVEMBER, 杨斐清洁物品储存室内NOVEMBER, 杨斐清洁走廊NOVEMBER, 杨斐实验室NOVEMBER, 杨斐实验室内NOVEMBER, 杨斐清洁走廊污物出口NOVEMBER, 杨斐清洗室94物品的消毒与灭菌v 高压锅：121，0.11Mpa，30分钟 132，0.21Mpa，15分钟v 传递窗：紫外线，表面消毒，30分钟v Co60照射v 2%过氧乙酸喷雾v 高锰酸钾、福尔马林熏蒸物品进出动物房的三个原则o 原则1：物品进入动物房尽可能采取高压灭菌的方式，不能高压的物品方可使用紫外照射灭菌。o 原则2：经传递窗紫外照射进入的物品，当天必须取出。o 原则3：经高压灭菌进入的
22、物品，至多在动物房内存放7天。o 物品进出物品进出明细表明细表（物品传递窗旁），见下图物品进出物品进出明细表明细表途径途径适用物品适用物品高压灭菌121121 30min金属类：金属类：各类金属手术器械、小型仪器、容器、饲料铲等可以高压的金属制品。玻璃类：玻璃类：试管、玻片、烧杯、量筒、培养皿等可以高压的玻璃器皿。耐高压塑料制品：耐高压塑料制品：笼盒、EP管、移液枪枪头，小鼠运输盒等耐高压塑料制品。棉、纱类、纸制品：棉、纱类、纸制品：净化服、抹（拖）布、棉花、纱布、包装用纸盒、口罩、小鼠信息卡片。小鼠饲养用品：小鼠饲养用品：饮用水瓶、垫料、瓜子。传递窗过氧乙酸喷洒+紫外灯照射灭菌：紫外灯照射紫
23、外灯照射20min。紫外灯穿透力很弱，仅限于表面消毒，请尽量将物品摊开来。实验记录纸制品实验记录纸制品；不可高压的塑料和橡胶制品：不可高压的塑料和橡胶制品：文具，手套，果冻，饲料。不可高压的仪器设备：不可高压的仪器设备：天平、接线板、血糖仪、环境监测仪，酒精灯，移液枪、进口离心管等。消毒液：消毒液：酒精、84、文华、新洁尔灭。新进小鼠：新进小鼠：请用动物传递窗，过氧乙酸喷洒表面后，紫外灯照射紫外灯照射1minNOVEMBER, 杨斐6.3 6.3 动物实施内动物的走向动物实施内动物的走向o 屏障系统中动物的移动路线屏障系统中动物的移动路线(双走廊或三走廊式双走廊或三走廊式)外来动物外来动物 传
24、递窗传递窗 检疫室或健康动物检疫室或健康动物观察室观察室 清洁走廊清洁走廊 饲养室或动物实验饲养室或动物实验室室 清洁清洁走廊走廊污物出口污物出口 外部外部区域区域6.4 6.4 实验动物的居住环境实验动物的居住环境开放式笼具IVC IVC（Individually Ventilated CagesIndividually Ventilated Cages）101102IVC的特点o IVC(Individually Ventilated Cages)是独立通风笼盒的简称.它的特点是具有一定的密闭性,同时让经HEPA过滤器的洁净空气流入盒内,使盒内保持正压,减少了可能的感染来源,适合于饲养SP
25、F级动物,以及一些免疫缺陷动物6.5 6.5 实验动物的饮水实验动物的饮水实验动物的饮用水应符合卫生部门颁发的人饮用水的质量和卫生指标。实验动物饮用水应由新鲜、纯净的水源直接提供。微生物质量等级不同的动物应供应与其级别相适应的饮用水，这些饮用水通常都采用高压、过滤、酸化等灭菌处理措施。各种动物每日的饮水需要量各种动物每日的饮水需要量动 物 品 种饮水需要量小鼠（成熟龄）47ml大鼠（50g）2045ml豚鼠（成熟龄）85150ml兔（1.4-2.3kg）60140ml/kg(体重)金黄地鼠（成熟龄）812ml小型猪（成熟龄）11.9l狗（成熟龄）2535ml/kg(体重)猫（2-4kg）100
26、200ml红毛猴（成熟龄）200950ml各种饮水瓶（大、小鼠用）1061.天然饲料原料：如谷物、脱水蔬菜、草粉、鱼粉、骨粉、矿物质、酵母等2.加工饲料原料：如玉米淀粉作为饲料糖类来源，牛奶中提取酪蛋白作为蛋白质来源等3.纯化学物质：如氨基酸、必需脂肪酸等6.6 6.6 实验动物的饲料实验动物的饲料饲料的配合o 任何单一的饲料都不能满足不同动物的不同生长时期对营养的需要，因此需要进行配制，使其含有全面而均衡的各种营养素，以满足动物生长繁殖或特殊实验的需要。这种饲料叫“全价营养饲料”。实验动物饲料加工生产原料的粉碎饲料配合饲料的混合成型成品分装饲料的分类o 饲料按物理性状的分类1.颗粒料2.粉料
27、3.膨化料4.凝胶料5.液体饲料大、小鼠配合颗粒饲料颗粒饲料的优点1.加工过程中高温作用使蛋白质变性和淀粉糊化，容易消化吸收。2.加工过程中高温具有杀菌作用，使细菌数大量减少，饲料不易变质。3.加工过程中高温能灭活原料中有害物质。4.颗粒饲料便于运输、储存、饲喂。5.颗粒饲料适合于啮齿类动物啃咬习性。6.易掌握每日摄食量，不易造成浪费o 根据所含营养成分进行分类1.配合饲料2.浓缩饲料3.添加剂预混料4.代乳饲料o按所饲喂的动物种类及生理阶段进行分类1.按所饲喂的动物种类分类2.按生理阶段分类：育成料、繁殖料、维持料o按饲料的用途或功能分类1.高脂饲料2.高胆固醇饲料3.蛋白质缺乏料6.8 6
28、.8 实验动物的垫料实验动物的垫料o1.1.垫料要求垫料要求 -对动物无刺激作用或其他有毒、有害作用对动物无刺激作用或其他有毒、有害作用 -吸水性能好，并应有吸附臭气的作用吸水性能好，并应有吸附臭气的作用 -使用方便使用方便o2.2.垫料种类垫料种类木屑（粗、细），木刨花，打碎的玉米棒及秆，木屑（粗、细），木刨花，打碎的玉米棒及秆，吸水纸，棉花吸水纸，棉花 1141153.3.垫料的使用垫料的使用（1 1）需经灭菌后才能使用）需经灭菌后才能使用（2 2）根据不同要求选择使用）根据不同要求选择使用（3 3）使用后及时更换清除，频度视饲养动物数量和）使用后及时更换清除，频度视饲养动物数量和通风换气
29、条件而定通风换气条件而定第七节第七节 同济动物中心简介同济动物中心简介同济大学实验动物中心位于同济大学本部的西南角，成立于2010年，是一个集教学、科研为一体的综合性公共服务平台。同时也是上海市实验动物管理委员会的团体会员单位。中心使用面积2000，各类仪器设备500余件，设备总值达1000余万。拥有SPF大鼠笼位500个，SPF小鼠笼位接近10000个，普通级兔共有216个笼位，全部房间都有全自动温控送风系统，可满足大批科研课题需求。申请实验流程o 申请-需要到同济动物中心进行饲养试验的人员，需提前两周到动物中心填写申请表。o 审查-每周五同济动物管理委员会进行开会讨论。o 培训-讨论通过后
30、可到动物中心参与岗前培训，培训通过后方可进行实验。oQUESTION同济大学SPF级动物房操作培训李天明15900419244/ 同济大学实验动物中心基本概念o 实验动物（laboratory animal）：用于科学实验的动物。这些动物应是经人工培育、其携带微生物状况受到控制、遗传背景明确、来源清楚、符合科学实验、要配及生物制品的鉴定及其他科学研究的要求。o 无特定病原体（Specific Pathogen Free)：即无特定病原体动物（指动物体内无特定的微生物和寄生虫）是不携带潜在感染或条件致病菌，但带有非特定的微生物和寄生虫的动物，要求在屏障系统内生长，国际上普遍采用的动物。基本原则p
31、 进入SPF动物房，必需严格遵循动物中心的操作流程。p 每天每人只能进入一次SPF动物房。p 不同饲养区域、不同饲养级别的实验人员不得串流。p 门禁卡一人一张，不得擅自外借。动物中心工作人员门禁卡不外借。p 人流、物流、动物流必需分开。p 手机一律不准带入SPF动物房。p 7：00 PM 7：00 AM为动物的休息时间 禁止人员进入。以免频繁开关灯而影响动物节律。p 饲养笼盒禁止带回实验室。实验动物的福利p 合理地选择实验动物品种、数量与质量p 科学地避免或减少实验动物的不安、不适及疼痛p 请有资质的技术人员从事或指导实验动物的饲养管理工作p 3R原则3R原则Replacement（替代）是指
32、使用其他方法来代替动物而达到某一试验的目的，或者说使用没有自觉的试验材料代替以往使用神智清醒的活的脊椎动物进行试验的方法。Reduction（减少）是指在科学研究中，使用较少的动物获得同样多的试验数据或使用一定数量的动物能获得更多的试验数据的方法Refinement（优化）是指通过改进和完善实验程序，减轻活减少给动物造成的疼痛和不安，以提高动物福利的方法。美国动物福利专家提出动物应有五大自由 转身自由，舔梳自由，站起自由，卧下自由，伸腿自由。分笼o 实验动物长期在生活在高动物密度的环境内生活，饮水会变得困难、氨浓度、温湿度也会因自身产热、排泄等原因造成笼盒内环境相应的不稳定，动物经常会出现呼吸
33、困难、难产、食仔等状况，也极易感染动物传染病，如螨虫、蛲虫、小鼠肝炎、仙台病毒等等。大鼠o 根据体型大小来进行分笼：o 4只 （200g以下）o 3只 （200300g)o 2只 （300400g)o 1只 （400g以上）小鼠 o 每笼5只单一性别小鼠 每笼肥胖鼠（32g）3只o 繁育笼内交配小鼠不得超过4只，最佳交配繁殖比例：1:2o 怀孕小鼠1只一笼，小鼠出生后21天必须分笼o 分笼标签贴出后，一周内分笼，否则将进行强制分笼，雌雄分开，数量各半。实验申请、审查、预约申请o 需到动物中心SPF级动物房进行实验、饲养的人员，必须提前2周填写实验申请审查表。o 必须详细写明：是否携带有毒有害物
34、品，是否为感染性实验，实验过程的描述需尽可能的详细，包括所有将会使用到的实验耗材。如EP管、手术器械、试剂、麻醉品等。审核o 动物中心收到审查表后，在3个工作日内给予实验人员回复。o 动物中心主任审查通过后，方可进入预约环节。预约o 审核通过后，需正确填写小鼠笼位预约单。o 实验人员从实验起始日期的三个月内，必须达到预约笼位的80%。否则工作人员有权将其剩余笼位进行重新分配。o 即将超过预约笼位的，应与楼面主管沟通后，进行再一次的笼位预约。以保证实验有序进行。预约单日期课题组预约人预约笼位联系方式 实验动物的引进与代购引进o 进入到SPF动物房内的动物，首先必须是SPF级动物；来源必须是从有资
35、质的生产单位引进的。且必须提供最近3个月的健康证明。o 国内有四家生产单位的SPF级动物可以直接进入o上海中科院斯莱克实验动物有限公司o上海西普尔必凯实验动物有限公司o南京大学模式动物研究所o上海南方模式生物研究中心代购o 中心提供免费的代购服务（仅限斯莱克与必凯）：1.订购电话：65983907 戴老师2.每周二订购小鼠送到。3.周一下午3点前与动物中心取得联系。n 自行订购的小鼠必须提前一周通知，否则一律不得进入临时动物房o临时动物房位于医学类B119，是为因特殊原因不能进入SPF动物房饲养的校内课题组而开放使用的，没有特殊原因的课题组不得在临时动物房内饲养动物。o需要使用临时动物房的课题
36、组，需提前3天与本中心取得联系并填写申请表，批准通过后方能在临时动物房进行饲养、实验。o一个饲养周期不得超过3个月，超过饲养时间的动物，需到动物中心办公室重新办理申请手续，逾期不办者，动物中心有权对其动物进行安乐死。SPF级动物房人员的进出及操作流程内准备室饲养室检疫室饲养室男女二更男女一更缓冲清洗间一楼一楼SPF屏障系统人流走向图屏障系统人流走向图内准备室饲养室饲养室实验室实验室饲养室检疫室饲养室饲养室饲养室饲养室女二更女一更男一更男二更缓冲缓冲高压灭菌锅传递窗清洗间风淋饲养室二、三楼二、三楼SPF屏障系统人流走向图屏障系统人流走向图进门o 脱鞋，将自己的鞋子放在鞋柜上。o 进门，随即关门。
37、o 登记登记，来到缓冲走廊填写进房登记。并仔细阅读人员进出屏障设施标准操作流程一更室o 刷卡进入一更。o 用0.1%新洁尔灭浸泡双手30秒，擦干。二更室o 在确认一更室的门关上后，开门进入二更室。o 无菌防护，在二更室内按顺序戴好手套、口罩，穿上灭菌过的隔离衣（联体式）。门禁卡放入无菌衣右内侧口袋。穿戴完毕跨过防鼠板后穿拖鞋。o 整理装着：要求头发不能外露、口罩必须盖住鼻孔，袖口盖住手套、领口的纽扣需全部扭上等风淋室o 进入风淋前用酒精喷雾消毒手部及脱鞋底部。o 进入风淋室，随即关门，风淋自动启动（时间为20秒）。风淋过程中举起双手，叉开双腿，适当的旋转，使身体每一部分都能尽量被风淋到。o 每
38、次限进一人。每次限进一人。o 出风淋检查门是否关好出风淋检查门是否关好洁净走廊o 进入洁净走廊，随即关门。不得再经风淋间返回。o 进入洁净走廊后根据工作需要进入相关饲养间、实验室，切记随手关门，不能同时开两扇门进行操作。清扫实验室o 实验结束后，将实验动物放回原处，如笼位有变化，即时在实验动物饲养记录状况表上做好登记。o 清理房间，清扫、拖地、将废弃物装入垃圾袋，并做好相关记录。o 离开时随手关门。o 每一位实验人员都有责任，保证实验室的干净整洁。离开屏障区o 经人员出口进入缓冲间，确认门关上后，退出屏障区，随即关门。o 脱下隔离服、手套、口罩、拖鞋，扔入指定桶内。o 登记离开时间，换上自己的
39、鞋子，离开。SPF级动物房物品的进出内准备室饲养室检疫室饲养室 男女二更男女一更清洗间一楼一楼SPF屏障系统物流走向图屏障系统物流走向图缓冲一楼SPF大鼠实验室动物流走向图内准备室饲养室饲养室饲养室实验室实验室检疫室饲养室饲养室饲养室饲养室饲养室女一更女二更男一更男二更缓冲缓冲风淋高压灭菌锅传递窗清洗间二、三楼二、三楼SPF屏障系统物流走向图屏障系统物流走向图物品进出动物房的三个原则o 原则1：物品进入动物房尽可能采取高压灭菌的方式，不能高压的物品方可使用紫外照射灭菌。o 原则2：经传递窗紫外照射进入的物品，当天必须取出。o 原则3：经高压灭菌进入的物品，至多在动物房内存放7天。o 物品进出物
40、品进出明细表明细表（物品传递窗旁），见下图物品进出物品进出明细表明细表途径途径适用物品适用物品高压灭菌121121 30min金属类：金属类：各类金属手术器械、小型仪器、容器、饲料铲等可以高压的金属制品。玻璃类：玻璃类：试管、玻片、烧杯、量筒、培养皿等可以高压的玻璃器皿。耐高压塑料制品：耐高压塑料制品：笼盒、EP管、移液枪枪头，小鼠运输盒等耐高压塑料制品。棉、纱类、纸制品：棉、纱类、纸制品：净化服、抹（拖）布、棉花、纱布、包装用纸盒、口罩、小鼠信息卡片。小鼠饲养用品：小鼠饲养用品：饮用水瓶、垫料、瓜子。传递窗过氧乙酸喷洒+紫外灯照射灭菌：紫外灯照射紫外灯照射20min。紫外灯穿透力很弱，仅限于
41、表面消毒，请尽量将物品摊开来。实验记录纸制品实验记录纸制品；不可高压的塑料和橡胶制品：不可高压的塑料和橡胶制品：文具，手套，果冻，饲料。不可高压的仪器设备：不可高压的仪器设备：天平、接线板、血糖仪、环境监测仪，酒精灯，移液枪、进口离心管等。消毒液：消毒液：酒精、84、文华、新洁尔灭。新进小鼠：新进小鼠：请用动物传递窗，过氧乙酸喷洒表面后，紫外灯照射紫外灯照射1min实验物品的进出方向o 物品进入：物品进入：传递窗准备室清洁走廊动物饲养室或实验室。o 物品离开：物品离开：动物饲养室或实验室清洁走廊准备室传递窗。o 传递窗紫外照射向内传递的物品需详细登记，包括传入时间、传入物品、使用人等相关信息。
42、o 传递窗向外传递物品，从外侧取出物品后，必须将传递窗门关上，并将紫外线再次开启。细节o 需高压灭菌进入动物房的实验用品可提前一天交给动物中心办公室205，在第二天的下午就可以拿到自己实验用品。（免费）o 每个饲养间内都放有利器盒，针头、枪头等利器使用后放在利器盒内，动物中心每周统一收集处理，不得随意丢弃。SPF级动物房实验动物（生物活性物）的进出内准备室饲养室检疫室饲养室清洗间 男女二更男女一更缓冲一楼一楼SPF屏障系统动物流走向图屏障系统动物流走向图内准备室饲养室饲养室饲养室实验室实验室检疫室饲养室饲养室饲养室饲养室饲养室高压灭菌锅缓冲缓冲女一更女二更男一更男二更风淋传递窗清洗间二、三楼二
43、、三楼SPF屏障系统动物流走向图屏障系统动物流走向图实验动物（生物活性物）的进入o 动物进入动物房必须由工作人员进行操作。o 确认外包装盒完好无破损。o 通过清洗间的动物传递窗进行内外传递，并做好传递窗使用登记。o 用过氧乙酸消毒液喷洒外包装盒四周、底部o 放入传递窗，打开紫外灯照射1Min。o 待紫外灯熄灭（灭菌结束）后，从内侧取出o 建议动物进入1周后进行试验。实验动物（生物活性物）的离开p 中心提供一次性小碗或运输笼作为大小鼠转移的临时载体，请勿将饲养笼盒带回实验室。p 从内侧打开动物传递窗，将小鼠放入，确认关闭传递窗门。p 从外侧取走小鼠后，必须打开紫外灯再次消毒。饲养笼盒的管理制度1
44、：禁止将饲养笼盒带回实验室。活动物在实验室存放时间不许超过24小时。2：提供消毒处理过的类似一次性饭盒作为小鼠临时转移的载体，放置在二楼、三楼饲养间内。如有疑问或找不到情形请随时与工作人员联系。3：提供专门的运输笼盒作为大鼠临时转移的载体，在一楼的清洁级动物房内存放，需要是可找工作人员领取并做好登记，及时归还。4：提供白色的普通饲养笼盒外借服务，需要在实验室临时短期饲养的课题组，请动物中心205办公室办理租借手续，大鼠白色饲养笼盒一套押金300元，小鼠白色饲养笼盒一套押金200元，租借不收取租借费，所有押金在笼盒归还后一并退还。5：动物中心的所有工作人员（包括保安、保洁）将加强监管，对于发现将
45、饲养笼盒带回自己实验室的人员进行劝阻。每一位工作人员都有责任和义务。善意的提醒：动物中心每个楼层和出入口均安装有摄像监控装置。善意的提醒：动物中心每个楼层和出入口均安装有摄像监控装置。进口小鼠种源地健康报告审查生物净化（非JAX的进口小鼠）新引入的动物（研究人员互相交换转基因小鼠）,是小鼠感染微生物的最重要的来源！进口小鼠的隔离检疫o PI 如果自己进口小鼠，需提前跟动物房申请笼位，不允许小鼠到中心后临时通知o 按SOP接收小鼠（外包装消毒、小鼠笼盒挂标牌标明进口单位和日期等）o 专门的人员照料小鼠，对小鼠每日进行观察，如有特殊情况，及时通知兽医。o JAX进口的小鼠在检疫室饲养繁殖，F1代需
46、取一只做第三方检测，检测合格后方可进入普通饲养间饲养。检测费用由PI承担。生物净化（Rederivation）o 目的：减小或预防进口小鼠所带来的病原体感染的风险一、剖腹产对怀孕小鼠进行子宫摘除取胎，取出仔鼠进行代乳二、胚胎移植将着床前胚胎植入干净的假孕母体内，净化后小鼠的干净程度与代孕鼠及其饲养环境相同比剖腹产清除病原体更可靠降低某些感染子宫或胎盘的传染因子风险胚胎移植（Embryo transfer）将着床前胚胎植入干净的假孕母体内，净化后小鼠的干净程度与代孕鼠及其饲养环境相同 比剖腹产清除病原体更可靠 降低某些感染子宫或胎盘的传染因子风险，如Pasteurella pneumotropi
47、ca,Mycoplasma pulmonis 透明带（附植前胚胎）可以阻挡传染性因子的侵入 避免了剖腹产对怀孕时间的精确要求，因为转基因和敲除品系的怀孕期会有所不同注意事项消毒o 每周五下午 2：303：00为动物中心内部消毒时间。一切人员不得进入。传递窗的使用p传递物品必须登记。p消毒水喷洒范围完全覆盖物品表面且仔细。p传递窗外侧门一旦打开，必需用消毒水和紫外再次消毒。超净台的使用o 超净台使用前应填写使用记录。o 使用时玻璃门尽量压低，以保持台内静压，避免外界细菌、微生物等进入超净台内。o 使用完毕用酒精棉球清洁台面。o 屏障系统内无菌水使用后，确认开关是否关死。顺时针方向拧紧。o 清洁用
48、无菌水使用后，用笼盒盛装，当天必须传出SPF动物房，污水源不得在动物房内过夜。无菌水的使用o 不得随意丢弃和处理实验动物尸体。实验人员自行处死后的动物尸体，放至物品出口后，出屏障后从清洗间拿出，直接放入一楼清洗间的指定冰箱。工作人员人员在工作中发现动物尸体。工作人员把动物尸体详细信息登记在实验动物死亡状况记录表中（每个房间新增夹板），然后把尸体用密封袋包装好并且贴上标签写上此动物的详细信息（课题组、动物种类、数量、死亡等原因），一起保存在指定的冰箱中（一楼仓库专用存放实验意外死亡动物尸体冰箱）。工作人员将以邮件形式告知实验人员。实验人员自行检查或取走尸体，动物尸体只保存一周。实验动物死亡及尸体
49、的处理疾病小鼠的防治与处理传染性疾病o 鼠肝炎病毒感染o 仙台病毒感染o 蛲虫感染o 螨虫感染o。小鼠肝炎(MHV）小鼠肝炎病毒感染是有冠状病毒引起的一种病毒病，分为二大类呼吸型和肠道型,在国内仅分离到呼吸型，包括MHV-1,MHV-3,MHV-JHM。病理变化主要在肝脏有坏死点等。传播方式：空气和接触。预防：定期检测，一旦感染，群体淘汰。小鼠肝炎 仙台病毒属副粘病毒，是最难控制的病毒之一。大多数情况呈隐性感染或亚临床经过。大小鼠、仓鼠和豚鼠都易感。传播方式：空气和接触。预防：定期检测，发现病鼠，群体淘汰。仙台病毒蛲虫（pinworm）感染o 为小鼠最常见内寄生虫，一般无临床症状，严重感染会出
50、现下痢、脱肛，皮毛粗刚，便秘，肠套叠，生长缓慢等症状。o 发生于盲肠或结肠，肉眼不易见，诊断可检查肛门口，透明胶带粘取。o 传播方式：粪-口传播o 治疗：加芬苯达唑（fenbendazol）饲料，间断隔周投药的，如此循环3次，共6周直肠脱出直肠脱出小鼠蛲虫虫卵，小鼠蛲虫虫卵，400400小鼠蛲虫虫卵小鼠蛲虫虫卵螨虫（mite）感染o 鼠癣螨（Myocoptes musculinus）寄生于皮毛中，以皮脂样分泌物，皮垢为食物。完成全部生活史约需8-14天。卵经5天卵壳纵裂，孵出幼虫。o 鼠肉螨（Myobia musculi）生活周期为23天，卵在7天左右孵化，幼虫：10天，若虫：5天，成虫在24
