1、免疫学研究中 生物医学研究中心 张 述 Email: 常用的小鼠模型 C57BL/6 简要描述：最常见的实验小鼠，经常简称为B6 C57或者小鼠。性状描述：毛色为黑色，常作为“标准”的近交系。常见用途：用于多种免疫学、遗传学研究，包括移植、感染等动物 模型。常作为背景小鼠，对其进行基因敲除、转基因等遗传修 饰,从而提供标准的遗传背景。BALB/C 简要描述：是实验室常见的免疫功能不太完善的小鼠。性状描述：毛色为白色，对致癌因子敏感，卵巢、肾上腺和肺部肿瘤、白血病发生率较高。常见用途：用于生产单克隆抗体的杂交瘤的制备。免疫学研究，如移植的供受鼠等。BM12 简要描述：是C57BL/6近交系小鼠自
2、发形成的一个近交系小鼠，在MHCII 类分子中有3个氨基酸的突变。性状描述：与C57BL/6基本相同，对EAE等自身免疫性疾病具有抗性。常见用途：用于慢性排斥反应研究的供鼠。免疫学研究中常用的小鼠品系 常见的小鼠品系 ALR：与NOD小鼠具有共同祖先的小鼠，白色，两者有70%的基因组完全相同，但MHC不相同。对I型糖尿病具有很强的诱导耐受。常用于NOD的对照小鼠。杂交鼠：由两个近交系杂交获得后代，性状不稳定。小鼠遗传操作未进行彻底的小鼠。NOD：简要描述：非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠，最常见的实验小鼠，公认的自 身免疫性糖尿病（I型糖尿病）。性状描述：白色，从第9周开始，即会有胰腺炎症状，之后
3、雌鼠会有较 高的概率得I型糖尿病。常见用途：I型糖尿病遗传、发病机制研究。其它相关的自身免疫性疾病研究，如干燥综合症等。1、器官移植模型 2、自身免疫性疾病模型 3、超敏反应模型 4、肿瘤模型 免疫研究常见的小鼠动物模型 1.肾移植模型 2.异位心脏移植模型 3.小肠移植模型 4.骨髓移植模型 5.肝移植模型 6.皮肤移植模型 7.胰腺（胰岛）移植模型 8.慢性排斥（BM12）器官移植模型 1、自发型I型糖尿病动物模型 NOD小鼠 2、诱导型I型糖尿病动物模型：药物（STZ、Alloxan、环磷酰胺等）诱导破坏小鼠胰岛 3、自发型系统性红斑狼疮小鼠 BXSB 4、诱导型系统性红斑狼疮小鼠 慢性
4、移植物抗宿主 自身免疫性疾病模型 5、自发型类风湿性关节炎 SKG 小鼠 6、诱导型类风湿性关节炎 型胶原诱导关节炎大鼠模型，佐剂性关节炎(adjuvant arthritis，AA)模型，其它诱导模型 7、诱导小鼠EAE；模拟人多发性硬化症/急性播散性脑脊髓炎。髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（MOG35-55）多肽免疫；髓鞘碱性蛋白（MBP）免疫疫；髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)免疫；脊髓组织匀浆免疫等 自身免疫性疾病模型 超敏反应模型 气道高敏感反应模型：腹腔注射卵清白蛋白致敏，然后通过雾化吸入造模。皮肤过敏反应模型：皮肤过敏反应模型：过继输入抗二硝基苯酚（DNP）的IgG E单克隆抗体，使
5、小鼠被动致敏，然后以二硝基氟代苯（DNFB）刺激产生过敏反应。肿瘤模型 移植瘤实验：移植瘤实验：将人移植入BalB/C、祼鼠、C57BL/6、Rag1等小鼠体内。诱导癌诱导癌/肿瘤模型：肿瘤模型：使用二乙基亚硝胺(diethy lnitrosam ine,DEN)等诱癌剂灌胃及自由饮水，长期诱导可产生肝癌模型。1、基因敲除小鼠 2、基因敲入小鼠 3、基因捕获小鼠 4、转基因小鼠 5、条件性基因表达小鼠 6、条件性基因敲除小鼠 基因修饰小鼠 载体构建基本知识 二、pIRES2-EGFP-rtTA Advanced 构建 使用引物将 rtTA Advanced CDS 区克隆出来，然后以 XhoI
6、/BglII双酶切，将其克隆入 pIRES2-EGFP 载体的XhoI/BamHI位点中。引物序列为：rtTA_XhoI_F:ATCGCTCGAGCCGCCACCATGTCTAGACTGGACAAGAGCAAA rtTA_BglII_R:ATCGAGATCTTACTTAGTTACCCGGGGAGCATGTCA 基因表达基本知识 DNA一级结构上调控基因表达的元件（基因表达盒结构）promoter 5-UTR promoter enhancer UTR exon Poly A signaling enhancer 3-UTR Chromosome sequence 基因敲除小鼠 基因修饰ES细胞
7、的获得及囊胚注射 基因敲除小鼠 2、基因敲除纯合小鼠的获得 基因敲入小鼠 Neo r w.t allele flox allele 1 I II I II w.t.sequence Vector sequence loxP site FRT site Typing primer Typing primer exon 基因捕获小鼠 效果类似于基因敲除 MBD2基因敲除小鼠 b-geo w.t.allele 1 2 w.t.sequence Vector sequence mutant allele Typing primer Typing primer exon 1 3 b-geo 3 Sequ
8、ence not indicated targeting vector A 转基因小鼠 靶标基因表达盒DNA 条件性基因表达小鼠 PCAG loxP CAT loxP HGH PA pBR322 ori Amp Pac I pCAG-CAT-X 7100bp MBD2 cDNA 在MBD2 CDS两端PCR加入PacI酶切位点 PacI PacI PacI酶切，T4连接酶连接 PCAG CAT MBD2 loxP loxP PacI PacI A B C PCAG MBD2 loxP Pac I Pac I D E loxP CAT+Cre介导重组 Cre-loxP系统 Tet-on表达系统
9、条件性基因敲除小鼠 Cre-loxP及FLP-FRT技术 Cre、FLP是重组酶，loxP、FRT是重组位点 图1:诱导型平滑肌特异性敲除Dicer1基因的小鼠基因型。1A：Dicer1的蛋白质结构,主要包含4个结构域，任一个结构域的缺失均能导致microRNA不能成熟；1B：两侧包含loxP位点的Dicer基因结构图，两个同向loxP位于Dicer基因22号外显子的两侧，该外显子对应于前一个 RNAIII结构域。在Cre重组酶的作用，可引起该外显子的敲除。1C：他莫昔芬(tamoxifen)诱导的平滑肌特异性Cre转基因小鼠表达盒。该表达盒包含平滑肌特异性SM22启动子，tamoxifen诱导表达的Cre重组酶基因及SV40的polyA信号序列。Neo rw.t alleleflox allele 1IIIw.t.sequenceVector sequenceloxP siteFRT siteflox allele 2flox allele 3Cross with FLP miceCross with Cre miceTyping primerTyping primerexonIIIIIIIHPSE2-loxP小鼠
