1、护骨素基因启动子区护骨素基因启动子区T950-C单核单核苷酸点突变多态性与骨密度及骨苷酸点突变多态性与骨密度及骨 代谢的关系代谢的关系 武兆忠 林伟 于宪 张永健广州医学院第二附属医院核医学科 前言前言 护骨素（Osteoprotegerin，OPG）是近年来发现并克隆的三个肿瘤坏死因子受体及其配体家族新成员之一。OPG是目前已知唯一一个通过与定位于成骨细胞膜上的NF-kB受体活化剂配体（receptor activation of NF-kB ligand,RANKL）结合，从而封闭了成骨细胞诱导的破骨细胞分化成熟及其溶骨性骨吸收的可溶性饵受体。前言OPG基因启动子区序列的变化可能影响到OP
2、G基因的转录和蛋白质表达水平。因此，OPG基因是骨质疏松症的一个良好的候选基因。临床资料研究对象及入围标准：134例广州地区居住十年以上无亲缘关系的汉族妇女作为研究对象，年龄48-81岁，平均62.76岁，自然绝经时间超过5年。所有研究对象必须排除其它影响骨代谢的疾病和未有服用各种影响骨代谢药物。临床资料诊断标准：WHO骨质疏松症诊断标准,即BMD低于正常人群平均峰值2.5个标准差。分组：134例研究对象分为骨质疏松症组和对照组。其中骨质疏松症组73例，年龄49-81岁，平均64.59岁；对照组61例，年龄48-77岁，平均60.66岁。实验方法 BMD测定：双能X线吸收骨密度测量仪测定股骨髋
3、部股骨颈、Wards三角、大转子和腰椎24的BMD值（g/cm2），测量时将测量对象的出生年月日、身高和体重等参数输入计算机。实验方法 骨代谢指标测定：放射免疫分析法测实验对象外周血中降钙素、甲状旁腺素、雌激素和骨钙素水平。实验方法 外周血提取基因组DNA，PCR扩增目的片段，扩增后的片段采用Hinc II限制性内切酶消化，1.5%琼脂糖凝胶电泳确定基因型实验方法酶切位点的判断 有Hinc II酶切位点的纯合子-CC，显示129bp和126bp两条带；缺乏Hinc II酶切位点的野生型纯合子-TT，显示255一条带；杂合子-TC则显示上述三条带。结果 OPG基因启动子区T950-C基因型和等位
4、基因频率分布 基因型 等位基因 分组 例数 TT TC CC T C骨质疏松症组 73 28(0.384)39(0.534)6(0.082)95(0.651)51(0.349)绝经后正常妇女 61 29(0.475)29(0.475)3(0.049)87(0.713)35(0.287)X2=1.425，P=0.490 注明：等位基因在绝经后骨质疏松症汉族妇女群和绝经后正常妇女人群中的频率分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。结果汉族妇女与高加索人种妇女汉族妇女与高加索人种妇女OPG基因启动子区基因启动子区T950-C基因型和等位基因频率分基因型和等位基因频率分布的比较布的比较 基因
5、型基因型 等位基因等位基因 分组分组 种种 例数例数 TT TC CC T C TT TC CC T C骨质疏骨质疏 汉族汉族 73 28(0.384)39(0.534)6(0.082)95(0.651)51(0.349)73 28(0.384)39(0.534)6(0.082)95(0.651)51(0.349)松症组松症组 高加索高加索 215 46(0.214215 46(0.214）117(0.544)52(0.242)209(0.486)221(0.514)117(0.544)52(0.242)209(0.486)221(0.514)X2X2=13.010=13.010，P=P=0.
6、001 0.001 X2X2=11.854=11.854，P=P=0.0010.001绝经后正绝经后正 汉族汉族 61 29(0.475)29(0.475)3(0.049)87(0.713)35(0.287)61 29(0.475)29(0.475)3(0.049)87(0.713)35(0.287)常妇女常妇女 高加索高加索 256 53(0.244)142(0.534)61(0.229)248(0.484)264(0.516)256 53(0.244)142(0.534)61(0.229)248(0.484)264(0.516)X2X2=23.016=23.016，P=P=0.000 0.
7、000 X2X2=20.686=20.686，P=P=0.0000.000结果 骨质疏松症妇女各基因型之间BMD的比较 基因型 例数 L1 L2 L3 L4 股骨颈 wards区 大转子 TT 28 0.6640.099 0.7370.109 0.7770.114 0.8310.134 0.6960.084 0.5880.106 0.6110.071 TC 39 0.6960.068 0.7640.077 0.8140.089 0.8650.130 0.7020.085 0.5940.105 0.6140.095 CC 6 0.7170.060 0.7530.072 0.7910.082 0.
8、7640.105 0.6200.023 0.5070.068 0.5550.072 ANOVA 2.28/0.11 0.76/0.46 1.55/0.21 2.35/0.10 4.26/0.04 1.68/0.19 1.14/0.32结果 绝经后正常妇女各基因型之间BMD的比较 基因型 例数 L1 L2 L3 L4 股骨颈 wards区 大转子 TT 29 0.8780.084 0.9730.116 1.0090.106 1.0460.132 0.8060.090 0.7300.102 0.7170.087 TC 29 0.9020.108 1.0250.145 1.0700.134 1.09
9、50.129 0.8310.065 0.7600.096 0.7250.067 CC 3 0.9430.106 0.9830.126 1.1220.155 1.1060.156 0.8010.081 0.6780.083 0.6830.061 ANOVA 0.85/0.43 1.15/0.32 2.48/0.09 1.12/0.33 0.74/0.47 1.33/0.27 0.44/0.64 讨论讨论 广州地区134名绝经后汉族妇女OPG基因启动子区T950-C多态性等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。基因型频率分布与高加索人种妇女明显差异。OPG基因启动子区T950-C基因多态性频率分布存在着种族差异。OPG基因启动子区T950-C多态性不能作为预测中国汉族妇女一定发生骨质疏松症的遗传学标志。对于骨质疏松症妇女，CC基因型可预测骨质疏松症发生的程度。
