1、维生素维生素C的定量测定的定量测定 -林拱星林拱星 03081079定量测定维生素定量测定维生素C的的方法方法 一一.氧化还原法氧化还原法 1.直接碘量法直接碘量法 2.2,6-二氯酚靛酚滴定法二氯酚靛酚滴定法 二二.分光光度法分光光度法 1.紫外快速测定法紫外快速测定法 2.2,4-2.2,4-二硝基苯肼法二硝基苯肼法 3.3.高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸三三.光电比浊法光电比浊法四四.电化学法电化学法五五.荧光分析法荧光分析法 1.1.抗坏铁酸的微量荧光测定法抗坏铁酸的微量荧光测定法 2.2.抗坏铁酸总量的荧光测定抗坏铁酸总量的荧光测定 直接碘量法定量测定维
2、生素直接碘量法定量测定维生素C的原理的原理 维生素维生素c分子中含有烯二醇基，易被分子中含有烯二醇基，易被I2定量氧化定量氧化成含二酮基的脱氢维生成含二酮基的脱氢维生c，故可用直接碘量法，故可用直接碘量法测定定含量。测定定含量。从上式可以看出，在碱性条件下有利于反应向从上式可以看出，在碱性条件下有利于反应向右进行，但维生素右进行，但维生素c的还原性很强，在碱性环的还原性很强，在碱性环境中易被空气中的境中易被空气中的O2氧化，故滴定时加一些氧化，故滴定时加一些HAc使滴定在使滴定在弱酸弱酸性溶液中进行，以减少维被性溶液中进行，以减少维被空气氧化所造成的误差。空气氧化所造成的误差。2,6-二氯酚靛
3、酚滴定法定量测二氯酚靛酚滴定法定量测定定维生素维生素C的原理的原理 维生素维生素C具有很强的还原性。它可分为还具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型，还原型抗坏血酸能还原染料原性和脱氢型，还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚（二氯酚靛酚（DCPIP），本身则氧化为脱），本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中，氢型。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈红色，二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色还原后变为无色。一旦溶液中的维生素。一旦溶液中的维生素C已全已全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以，当溶液从无色变成微红色时即表红色。所以，当溶液从无色变
4、成微红色时即表示溶液中的维生素示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，此时即刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。为滴定终点。CCCCCCHOHHOHOOH OHO2NOHClClO+CCCCCCOHOHOOH OHO2NOHClClO+OH(蓝色)还原型抗坏血酸还原型抗坏血酸氧化型脱氢抗坏血酸氧化型脱氢抗坏血酸2，6二氯酚靛酚二氯酚靛酚还原型还原型2，6二氯酚靛酚二氯酚靛酚(红红 色色)HOH+(无色）NClClO紫外快速测定法定量测定维生定量测定维生素素C的原理的原理 维生素C的2，6二氯酚靛酚容量法，操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响。紫外快速测定法，是根据维生素C
5、具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差，通过查标准曲线，即可计算样品中维生素C的含量。光电比浊法的原理光电比浊法的原理 在酸性介质中,抗坏铁酸与亚硒酸(H2SeO3)能定量地进行氧化还原反应.1mol的抗铁酸能将2mol的亚硒酸还原成硒.在一定条件下,生成的元素硒在溶液中形成稳定的悬浊液.当抗铁酸的浓度在0-4mg/25-50ml的范围内,该溶液生成的浊度与抗坏铁酸的含量成正比.将试液置分光光度计上测其浊度可以定量地测定抗坏铁酸.荧光分析法的原理荧光分析法的原理 用酸洗活性炭将抗坏铁酸氧化为顺式用酸洗活性炭将抗坏铁酸氧化为顺式脱氢抗坏铁酸脱氢
6、抗坏铁酸,然后与邻苯二胺缩合成然后与邻苯二胺缩合成一种荧光性化合物一种荧光性化合物.样品中其它荧光杂样品中其它荧光杂质的干扰可以通过向氧化后的样品中质的干扰可以通过向氧化后的样品中加入硼酸加入硼酸,使脱氢抗坏铁酸形成使脱氢抗坏铁酸形成 硼酸脱硼酸脱氢抗坏铁酸的络合物氢抗坏铁酸的络合物,它不与邻二苯胺它不与邻二苯胺生成荧光化合物生成荧光化合物.这样可以测定其它荧这样可以测定其它荧光杂质的空白荧光强度而加以校正光杂质的空白荧光强度而加以校正.碘量法定量测定维生素碘量法定量测定维生素C（1）配制）配制0.05moll-1I2标准溶液标准溶液 称取称取6.5g I2和和12.5gkI,置于小研钵中置于
7、小研钵中,加水少许加水少许,研磨至全部研磨至全部溶解后移入棕色瓶中溶解后移入棕色瓶中,加水加水500ml,摇匀后避光摇匀后避光阴凉处放置过夜。阴凉处放置过夜。（2）标定）标定I2溶液浓度溶液浓度 吸取吸取25.00ml I2溶液置于溶液置于250ml锥形瓶中锥形瓶中,加水加水50ml,用标定过的用标定过的Na 2S2O3标准溶液滴定至浅黄色后标准溶液滴定至浅黄色后,加入加入0.2%淀淀粉溶液粉溶液2-4滴滴,继续用继续用Na2S2O3溶液滴定至蓝色溶液滴定至蓝色恰好退去恰好退去,根据下式计算根据下式计算I2溶液的浓度。溶液的浓度。（3）维生素）维生素c含量的测定含量的测定 准确称取约准确称取约
8、0.2g维生素维生素c,放入锥形瓶中放入锥形瓶中,加入新蒸过的蒸馏加入新蒸过的蒸馏水水50ml2 moll-1HAc使其溶解使其溶解,加淀粉指示加淀粉指示剂剂1ml,立即用立即用I2标准溶液滴定至浅蓝色标准溶液滴定至浅蓝色,按按下式计算维生素下式计算维生素c的含量的含量 c维生素C含量=c(I2)*V(I2)*M(维生素C)/S样二氯酚靛酚滴定法定量测定二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素维生素C一、试剂一、试剂 2%草酸溶液草酸溶液:草酸草酸2g溶于溶于100ml蒸馏水中。蒸馏水中。1%草酸溶液草酸溶液:草酸草酸1g溶于溶于100ml蒸馏水中。蒸馏水中。标准抗坏血酸溶液（标准抗坏血酸溶液（1mg/
9、ml）:准确称取准确称取100mg纯纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶液中，并稀释至草酸溶液中，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用前配制。藏。最好临用前配制。0.1%2,6-二氯酚靛酚溶液二氯酚靛酚溶液:250mg 2,6-二氯酚靛酚二氯酚靛酚溶于溶于150ml含有含有52mg NaHCO3的热水中，冷却后加水的热水中，冷却后加水稀释至稀释至250ml，贮于棕色瓶中冷藏（，贮于棕色瓶中冷藏（4）约可保存一）约可保存一周。每次临用时，以标准抗坏血酸溶液标定。周。每次临用时，以标准抗坏血酸溶液标定
10、。二、材料二、材料 苹果、卷心菜等。苹果、卷心菜等。三、器材三、器材 锥形瓶（锥形瓶（100ml），组织捣碎器，吸量管（），组织捣碎器，吸量管（10ml），漏），漏斗，滤纸，微量滴定管（斗，滤纸，微量滴定管（5ml），容量瓶（），容量瓶（100ml，250ml）。）。四、提取四、提取 水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后称取水纸吸干表面水分。然后称取20g，加入，加入20ml 2%草草酸，用研钵研磨，四层纱布过滤，滤液备用。纱布可酸，用研钵研磨，四层纱布过滤，滤液备用。纱布可用少量用少量2%草酸洗几次，合并滤液，滤液
11、总体积定容至草酸洗几次，合并滤液，滤液总体积定容至50ml。五、标准液滴定五、标准液滴定准确吸取标准抗坏血酸溶液准确吸取标准抗坏血酸溶液1ml置置100ml锥形瓶中，加锥形瓶中，加9ml 1%草酸，用微量滴定管以草酸，用微量滴定管以0.1%2,6-二氯酚靛酚二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并保持溶液滴定至淡红色，并保持15s不褪色，即达终点。由不褪色，即达终点。由所用染料的体积计算出所用染料的体积计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏染料相当于多少毫克抗坏血酸（取血酸（取10ml 1%草酸作空白对照，按以上方法滴草酸作空白对照，按以上方法滴定）。定）。六、样品滴定六、样品滴定 准确吸取滤液两份，每份准
12、确吸取滤液两份，每份10ml,分别放入分别放入2个锥形瓶内，个锥形瓶内，滴定方法同前。另取滴定方法同前。另取10ml 1%草酸作空白对照滴定。草酸作空白对照滴定。七、计算七、计算 式中：式中：VA为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数；为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数；VB为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数；为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数；C为样品提取液的总毫升数；为样品提取液的总毫升数；D为滴定时所取的样品提取液毫升数；为滴定时所取的样品提取液毫升数；T为为1ml染料能氧化抗坏血酸毫克数染料能氧化抗坏血酸毫克数;W为待测样品的重量（为待测样品的重量（g）。）。(-)100Cmg/1
13、00gABVVCTD W维生素 含量（样品）紫外快速测定法紫外快速测定法定量定量 测定维生素测定维生素C一、材料、仪器与试剂一、材料、仪器与试剂 （一）材料：各种水果蔬菜、果汁及饮料。（一）材料：各种水果蔬菜、果汁及饮料。（二）仪器：紫外分光光度计、离心机、分析天平、（二）仪器：紫外分光光度计、离心机、分析天平、容量瓶（容量瓶（1010ml,25mlml,25ml）、移液管（）、移液管（0.50.5mlml，1.0ml1.0ml）、吸管）、吸管、研钵。、研钵。（三）试剂（三）试剂 1 110%10%盐酸：取浓盐酸盐酸：取浓盐酸133133mlml，加水稀释至，加水稀释至500500mlml。2
14、 21%1%盐酸：取浓盐酸盐酸：取浓盐酸2222mlml，加水稀释至，加水稀释至100100mlml。3 31mol/L1mol/L氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠溶液：称取4040gNaOHgNaOH，加蒸馏水，加蒸馏水，不断搅拌至溶解，然后定容至不断搅拌至溶解，然后定容至10001000mlml。二二、操作步骤、操作步骤 （一）标准曲线的制作（一）标准曲线的制作 1 1抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸标准溶液的配制：用分析天平准确称取抗坏血酸抗坏血酸1010mgmg，加，加2 2ml 10%ml 10%盐酸，加蒸馏水定容至盐酸，加蒸馏水定容至100100mlml，混匀。此抗坏血
15、酸溶液的浓度为混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100100ugug/ml/ml。12345678标准抗坏血酸溶液标准抗坏血酸溶液加入体积（加入体积（ml）0.10.20.30.40.50.60.81.09.99.89.79.69.59.49.29.0总体积（总体积（ml）10.010.010.010.010.010.010.010.0抗坏血酸溶液浓度抗坏血酸溶液浓度（ug/ml）1.02.03.04.05.06.08.010.0蒸馏水加入体积（蒸馏水加入体积（ml）3 3消光值的测定：以蒸馏水为空的，在消光值的测定：以蒸馏水为空的，在243243nmnm处测定标准系列抗处测定标准系列抗坏血酸溶液的
16、消光值，以抗坏血酸的含量（坏血酸溶液的消光值，以抗坏血酸的含量（ugug）为横坐标，以相应）为横坐标，以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。的消光值为纵坐标作标准曲线。（二）样品的测定（二）样品的测定 1 1样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.005.00g g于研体中，加入于研体中，加入2-52-5ml 1%ml 1%盐酸，匀浆，转移到盐酸，匀浆，转移到2525mlml容量瓶中容量瓶中，稀释至刻度。若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊，稀释至刻度。若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊现象，可通过离心（现象，可通过
17、离心（1 00001 0000g,10ming,10min）来消除。）来消除。2 2样品的测定：取样品的测定：取0.1-0.20.1-0.2mlml提取液，放入盛有提取液，放入盛有0.2-0.40.2-0.4ml 10%ml 10%盐盐酸的酸的1010mlml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白，在在243243nmnm处测定其消光值。处测定其消光值。3 3待测碱处理液的制备：分别吸取待测碱处理液的制备：分别吸取0.1-0.20.1-0.2mlml提取液，提取液，2 2mlml蒸蒸馏水和馏水和0.6-0.80.6-0.8ml 1
18、mol/Lml 1mol/L氢氧化钠溶液依次放入氢氧化钠溶液依次放入1010mlml容量瓶中，混容量瓶中，混匀，匀，1515minmin后加入后加入0.6-0.80.6-0.8ml 10%ml 10%盐酸，混匀，并定容至刻度。以蒸盐酸，混匀，并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在馏水为空白。在243243nmnm处测定其消光值。处测定其消光值。4 4由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线，即可计算出样品中维生素曲线，即可计算出样品中维生素C C的含量。的含量。5 5也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液也可直接以待测碱处理液为空白，测出待测液的
19、消光值，通过查标准曲线，计算出样品的维生素的消光值，通过查标准曲线，计算出样品的维生素C C的含的含量。量。四四、计算、计算 V V总总 VcVc的含量（的含量（g/gg/g）=V1 V1W W总总 式中：式中：从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量（gg）V1 V1测消光值时吸取样品溶液的体积（测消光值时吸取样品溶液的体积（mlml）V V总总样品定容体积（样品定容体积（mlml）W W总总称样重量（称样重量（g g）关于维生素关于维生素C的常识的常识 维生素维生素C是人类营养中最重要的维生素之是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗一，缺
20、少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（坏血酸（ascorbic acid）。它对物质代谢的）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它还有调节具有重要的作用。近年来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化学致癌增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化学致癌物的阻断作用。物的阻断作用。维生素维生素C是具有是具有L系糖型的不饱和多羟基系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。柿等）中的含量更为丰富。补补维维生生素素C!要要不不就就这这样样了了 !谢谢谢谢欣欣赏赏主要参考资料主要参考资料维生素及其分析方法维生素及其分析方法 聂洪勇等著聂洪勇等著 上海：上海科学技术文献出版社上海：上海科学技术文献出版社维生素手册维生素手册 英英)J.玛克斯著；郑昌学等译玛克斯著；郑昌学等译 北京：科学普及出版社北京：科学普及出版社癌与维生素癌与维生素C (美美)鲍林鲍林,(美美)卡梅伦著；王艳茹卡梅伦著；王艳茹,王文仲译王文仲译 北京：科学普及出版社北京：科学普及出版社http:/
