1、淋球菌培养及鉴定淋球菌培养及鉴定2014-10-31什么是淋球菌？什么是淋球菌？共同点：革兰阴性球菌、单个或成双排共同点：革兰阴性球菌、单个或成双排列、无芽孢、无鞭毛、有菌毛列、无芽孢、无鞭毛、有菌毛 触酶试验（触酶试验（+）氧化酶试验（氧化酶试验（+）不同点：对糖分解能力、硝酸盐还原能不同点：对糖分解能力、硝酸盐还原能力和力和DNA合成酶合成酶 淋球菌即淋病奈瑟菌，属于奈瑟菌属。淋球菌即淋病奈瑟菌，属于奈瑟菌属。淋球菌形态淋球菌形态淋球菌，是一种革兰阴性双球菌，呈卵淋球菌，是一种革兰阴性双球菌，呈卵圆形或肾形，成对排列，直径约圆形或肾形，成对排列，直径约0608m，常位于多形核白细胞的胞浆内
2、，常位于多形核白细胞的胞浆内，慢性期则在细胞外。，慢性期则在细胞外。生长适宜温度为生长适宜温度为3738，淋菌不耐，淋菌不耐热，干燥环境存活热，干燥环境存活12小时，小时，555分钟分钟立即死亡，附着在衣裤和卧具上的淋菌立即死亡，附着在衣裤和卧具上的淋菌最多只能生存最多只能生存24小时，一般消毒剂易将小时，一般消毒剂易将其杀死。其杀死。淋球菌形态淋球菌形态致病性致病性传染方式：成人传染方式：成人 性接触性接触 初生婴儿初生婴儿 患病母亲产道感染患病母亲产道感染 致病物质：菌毛致病物质：菌毛 外膜蛋白外膜蛋白PI：中性粒细胞受损中性粒细胞受损 外膜蛋白外膜蛋白PII：黏附黏附 外膜蛋白外膜蛋白P
3、III：阻抑抗体活性阻抑抗体活性 IgA1酶酶:破坏粘膜局部抗体破坏粘膜局部抗体所致疾病所致疾病男性男性急性淋菌性前尿道炎急性淋菌性前尿道炎 女性女性淋菌性宫颈炎、尿道炎淋菌性宫颈炎、尿道炎 初生婴儿初生婴儿脓漏眼脓漏眼 发展：发展：男性男性后尿道炎、前列腺炎、精囊炎后尿道炎、前列腺炎、精囊炎、附睾炎等、附睾炎等 女性女性子宫内膜炎、输卵管炎等子宫内膜炎、输卵管炎等 后遗症：不育、不孕、异位妊娠后遗症：不育、不孕、异位妊娠淋球菌感染淋球菌感染淋病是由奈瑟淋球菌所致的泌尿生殖系淋病是由奈瑟淋球菌所致的泌尿生殖系统感染。统感染。不仅可引起男性尿道炎、女性宫颈或尿不仅可引起男性尿道炎、女性宫颈或尿道
4、炎，还可经血行播散引起菌血症。道炎，还可经血行播散引起菌血症。临床表现因感染的人群不同，部位不同临床表现因感染的人群不同，部位不同而有差别而有差别实验室鉴别淋球菌实验室鉴别淋球菌直接涂片直接涂片：取尿道或宫颈脓性分泌物涂取尿道或宫颈脓性分泌物涂片，作革兰染色，镜下可见大量多形核片，作革兰染色，镜下可见大量多形核白细胞，细胞内可见数量不等的革兰阴白细胞，细胞内可见数量不等的革兰阴性双球菌。涂片对女性检出率低，有假性双球菌。涂片对女性检出率低，有假阴性，必要时应作培养。阴性，必要时应作培养。细菌培养细菌培养：标本在选择性培养基上培养标本在选择性培养基上培养，可出现典型菌落，氧化酶试验阳性，可出现典
5、型菌落，氧化酶试验阳性，镜检可见到革兰阴性双球菌，镜检可见到革兰阴性双球菌，还还可用检测淋球菌可用检测淋球菌DNA，直接免疫荧光，直接免疫荧光试验协助确诊。试验协助确诊。淋球菌培养淋球菌培养淋球菌是淋病的病原菌，为实验室确诊淋球菌是淋病的病原菌，为实验室确诊淋病提供依据。（培养法为确诊淋病的淋病提供依据。（培养法为确诊淋病的金标准）金标准）淋球菌药敏试验，测定药物抑菌或杀菌淋球菌药敏试验，测定药物抑菌或杀菌能力，以便准确有效利用药敏进行治疗。能力，以便准确有效利用药敏进行治疗。淋球菌培养条件淋球菌培养条件淋球菌的营养要求较复杂，所用的培养淋球菌的营养要求较复杂，所用的培养基中应含有动物蛋白及细
6、菌生长所需的基中应含有动物蛋白及细菌生长所需的各种因子。目前国内常用的是血液琼脂各种因子。目前国内常用的是血液琼脂或巧克力琼脂。或巧克力琼脂。国外常用的培养基有国外常用的培养基有Thayer-Martin(T-M)培养基、培养基、NewYork City(NYC)培养基培养基和和Martin-Lewis(ML)培养基等培养基等。T-M培养基培养基T-M培养基是在培养基是在GC基础培养基中，加入血基础培养基中，加入血红蛋白红蛋白(1%)、抗生素、抗生素(万古霉素万古霉素3g/ml、粘、粘菌素菌素7.5g/ml和制霉菌素和制霉菌素12.5g/ml)和淋球菌和淋球菌增菌剂，使绝大多数杂菌被抑制而淋球
7、菌增菌剂，使绝大多数杂菌被抑制而淋球菌菌落长得较大，在乎皿中几乎呈纯培养，菌落长得较大，在乎皿中几乎呈纯培养，从而大大提高了由子宫颈、尿道，尤其是从而大大提高了由子宫颈、尿道，尤其是咽和直肠部位分离出淋菌的阳性率。咽和直肠部位分离出淋菌的阳性率。淋球菌培养条件淋球菌培养条件淋球菌对外环境变化颇为敏感，对寒冷和淋球菌对外环境变化颇为敏感，对寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养有干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养有足够的成功率，取材后应立即接种，标本足够的成功率，取材后应立即接种，标本离体时间越短越好。离体时间越短越好。培养的最适温度为培养的最适温度为3537，超过，超过38.5或低于或低于3
8、0便生长不良。因此，孵育的温便生长不良。因此，孵育的温度要恒定。度要恒定。淋球菌为需氧菌，但最初从人体分离时，淋球菌为需氧菌，但最初从人体分离时，为促进生长，需用为促进生长，需用5%二氧化碳环境培养。二氧化碳环境培养。淋球菌培养关键淋球菌培养关键取材部位准确取材部位准确女性病人标本：取宫颈内膜分泌物女性病人标本：取宫颈内膜分泌物 男性病人标本：取尿道口脓性分泌物男性病人标本：取尿道口脓性分泌物培养基预温培养基预温立即接种立即接种最好床边接种最好床边接种合适的培养基合适的培养基CO2培养培养淋球菌鉴定淋球菌鉴定分泌物分泌物直接涂片染色直接涂片染色 分离培养分离培养可疑菌落可疑菌落 涂片染色涂片染
9、色生化反应生化反应初步报告初步报告生长特性生长特性平板生长特性平板生长特性经经24h48h的培养后，可形成圆形、凸起的培养后，可形成圆形、凸起、湿润、光滑、半透明或灰白色菌落，似、湿润、光滑、半透明或灰白色菌落，似露水珠，易乳化，直径为露水珠，易乳化，直径为0.5mm 1.0mm。平板生长形态平板生长形态镜检形态镜检形态从菌落上取材作涂片，革兰染色后可见从菌落上取材作涂片，革兰染色后可见到菌的大小及染色的深度有差异，排列到菌的大小及染色的深度有差异，排列也不一致，呈典型革兰阴性双球菌。也不一致，呈典型革兰阴性双球菌。镜检形态镜检形态镜检形态镜检形态来自泌尿生殖道符合初步鉴定标准的分来自泌尿生殖
10、道符合初步鉴定标准的分离株，一般可诊断为淋球菌，准确率达离株，一般可诊断为淋球菌，准确率达98%。对于菌落形态不典型的分离株，来自咽对于菌落形态不典型的分离株，来自咽部、眼睛或其他泌尿生殖道外部位的分部、眼睛或其他泌尿生殖道外部位的分离株，应作确诊试验。离株，应作确诊试验。鉴定试验鉴定试验氧化酶试验氧化酶试验糖分解试验（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖）糖分解试验（葡萄糖、麦芽糖、蔗糖）30过氧化氢试验过氧化氢试验鉴定依据鉴定依据形态染色典型：革兰阴性球菌形态染色典型：革兰阴性球菌培养特性：光滑、湿润、易乳化菌落培养特性：光滑、湿润、易乳化菌落生化反应：氧化酶阳性、仅分解葡萄糖生化反应：氧化酶阳性、仅分解
11、葡萄糖（麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖均不分解（麦芽糖、乳糖、蔗糖、果糖均不分解）奈瑟菌属鉴定奈瑟菌属鉴定菌名菌名生长生长产酸产酸硝酸盐还硝酸盐还原原DNA酶酶巧克力平皿上特巧克力平皿上特点点巧克力或血琼脂(22)营养琼脂(35)葡萄糖麦芽糖乳糖蔗糖果糖淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌-+-光滑,灰白色,透明脑膜炎奈瑟脑膜炎奈瑟菌菌-+-光滑,灰,无色,透明,个别淡黄粘膜奈瑟菌粘膜奈瑟菌+-+-黄绿,光滑卡他布兰汉卡他布兰汉d+-+灰白棕色、易乳化分泌物分泌物男性确诊男性确诊女性（其女性（其他标本）他标本）直接涂片染色直接涂片染色 分泌物培养分泌物培养（巧克力色平板）巧克力色平板）可疑菌落（菌落形态、阴性双球菌、可疑菌落（菌落形态、阴性双球菌、氧化酶阳性）氧化酶阳性）涂片染色涂片染色生化反应生化反应革兰阴性细革兰阴性细胞内双球菌胞内双球菌未见革兰阴性未见革兰阴性细胞内双球菌细胞内双球菌DNA检测检测免疫荧光免疫荧光小结小结
