1、preMiD肿瘤（超）早期预警筛查肿瘤（超）早期预警筛查体检中的应用体检中的应用癌症分子解析癌症分子解析preMiD技术在肿瘤早期筛查中的应用技术在肿瘤早期筛查中的应用案例分享案例分享总结总结主要内容主要内容恶性肿瘤现状恶性肿瘤现状 恶性肿瘤已成为人类的“头号杀手”。全球每年新发肿瘤1400万人，死亡约820万人。预计2025年，因人口增加和老龄化等因素，每年新增超2000万病例。“2012年中国肿瘤登记年报”数据表明，中国每年新发肿瘤中国每年新发肿瘤约约310万人，死亡万人，死亡270万人万人（右（右上图）上图）。近60年来癌症致死率没有明显下降（右下图）（右下图）。世卫组织（世卫组织（WH
2、O）：早发现早发现 早诊断早诊断 早治疗早治疗“三早三早”是关键，是关键，“早发现早发现”是根本是根本!目前还无法攻克癌症（尤其是中晚期）目前还无法攻克癌症（尤其是中晚期）；癌症可防、可治：癌症可防、可治：癌前阶段：可实现近100%预防预防 早期癌症：可以实现80%治愈率 晚期癌症：仅30%人活过5年。按照平均寿命74岁计算，人一生中患癌几率是22%。从年龄看，45 岁以后发病率上升明显，应在应在40岁开始重视针对肿瘤的专项检查岁开始重视针对肿瘤的专项检查。2014世界癌症报告世界癌症报告“抗击癌症，重在预防抗击癌症，重在预防”癌症的分子解析癌症的分子解析ICGCICGC：癌症基因组学研究：癌
3、症基因组学研究国际癌症基因组联盟(International Cancer Genome Consortium，ICGC)2014年2月4日公布超过1万个癌症基因组的数据。2013年12月5日ICGC宣布：在原来白血病、膀胱癌、胃癌的基础上，中国又发起针对肠癌、食道癌、肝癌的驱动基因驱动基因检测项目。“眼下癌症诊治急需新的途径。如果能更好地从基因组来了解癌症，那么将更有利于癌症的预防和控癌症的预防和控制制。Tom Hudson安大略癌症研究所（OICR）所长、ICGC创始人之一www.icgc.org致癌突变（oncogenic mutations）到肿瘤形成需要10-20年；期间，涉及多基因
4、的异常发生，具有早期性和特异性：（早期性：（早期性：分子异常是癌症发生的早期事件；特异性：分子异常特异性：分子异常是癌症发生的特有标记）Alfred G.Knudson,Nature Rev.Cancer,1,157-162(2001)Carlo M.Croce,N.Engl.J.Med.358,502-511(2008)原癌基因是是细胞内与细胞增殖相关的高度保守的基因。原癌基因的结构或调控区发生变异，基因产物增多或活性增强时（此时转化为癌基因），使细胞过度增殖。抑癌基因一般调控DNA的修复和细胞凋亡。在被激活情况下它们具有抑制细胞增殖作用。抑癌基因突变能导致活性降低或消失，从而减弱甚至消除抑
5、癌作用。Emerging landscape of oncogenic signatures across human cancersNature Genetics 45,11271133(2013)http:/cancer.sanger.ac.uk/cancergenome/projects/cosmic/肠癌中基因异常发生率Gao H.et al,Cancer Res.,54,4342-4346(1994)Morgan C.et al,Br.J.Cancer,89,1314-1319(2003)preMiD技术技术在肿瘤早期筛查中的应用在肿瘤早期筛查中的应用传统检测传统检测突变检测突变检测
6、癌症的癌症的“冰山学说冰山学说”早期癌症几乎没有症状，极其容易被传统检测所忽视，一旦检出，则大部分为中晚期。preMiD超早期防癌检测，提前约3年预防发现潜伏体内的癌症或癌前病变。preMiD超早期防癌检测，提前临床症状超早期防癌检测，提前临床症状3-5年预警！年预警！突变preMiD技术检测的是来自于肿瘤相关的原癌基因和抑癌基因的异常突变。基因突变类型如下：基因突变类型如下：血液循环肿瘤血液循环肿瘤DNADNA（ctDNActDNA）来源）来源Nat Rev Cancer.2011 Jun;11(6):426-37ctDNA由癌变细胞死亡、凋亡或主动分泌进入循环系统cfDNA的长度一般为10
7、0-500碱基，携带有癌症细胞内部所含异常信息，如突变、copy数变化、甲基化、融合基因及染色体异常等。血液中含有驱动突变或致癌突变分子，意血液中含有驱动突变或致癌突变分子，意味身体内有癌变细胞。味身体内有癌变细胞。“ctDNA是最有希望发现早期癌症”美国约翰霍普金斯大学Luis Diaz博士Free-floating DNA from tumor could provide early warning！USA today分子癌变阶段（8-10年）细胞癌变阶段（3-5年）细胞簇形成组织形成早癌（1-3年）中晚期癌（？）1.不死2.无限增殖3.表型正常1.逃避免疫监视2.形成新血管3.异性增生常
8、规手段常规手段可以检测可以检测preMiD可以可以血浆突变检测技术血浆突变检测技术 -preMiDpreMiD挑战挑战血浆游离DNA含量极低突变DNA占比低于0.1%血浆成分复杂某些屏障存在应对应对preMiD检测基于PCR，扩增DNA融合Blocker、偏向扩增及熔点分析，极大提高灵敏度纳米技术提高核酸萃取效率新技术平台的融入preMiD =Blocker+ASA+MCA突变偏向扩增系统（ASA）PCR引物的3端位必须和突变扩增子匹配，而野生不匹配采用特异探针，实时PCR反应熔解曲线分析（Melting Curve Analysis）荧光vs温度作图得到DNA熔解曲线DNA溶解曲线是DNA序
9、列的“指纹”核酸blocker阻滞野生扩增设计野生匹配blocker（含PNA修饰）阻滞对野生片段扩增三种已有技术的有机结合成三种已有技术的有机结合成preMiD，灵敏度达到，灵敏度达到0.01%，特异性近，特异性近100%。美国斯坦福癌症研究院近30年调查研究发现：癌前阶段，癌症是可逆性可逆性“工程工程”。消除突变，抑制癌变消除突变，抑制癌变正常DNA DNA突变（肿瘤驱动基因）DNA修复抑癌基因诱导凋亡免疫监视 干预 （突变逆转）早发现与早预防早发现与早预防突变筛查突变筛查免疫力免疫力远离远离致癌物致癌物干预干预突变定量分析突变定量分析1.对于有基因突变的受检者，同时加做突变定量值，便于后
10、期干预有效性的对比；2.随着样本量的增加，跟踪后续发展变化，将给出突变风险提示。突变值检测突变值有效干预后突有效干预后突无效干预突变值检测项目检测项目相对信号差异相对信号差异突变比突变比率率干预1周血浆7.8421.6%干预1月血浆1.303.4%干预3月血浆0.030%结果判读胸腺肽干预后血浆中突变明显下降。突变比率突变比率相对信号差异值相对信号差异值0%0%0.005%5%1.4210%10%3.9012%12%4.6815%15%5.6520%20%7.3925%25%9.0530%30%10.54QRAM-qPCR相对定量检测肿瘤特异突变位点在血浆中含量在干预前后的变化，判断效果。干预
11、有效性判断干预有效性判断主要用途：主要用途：1.直观反应干预或治疗方案的有效性，避免无效治疗。2.评估手术后患者基本状态，如体内有无残留或转移。3.判断有无复发。preMiDpreMiD专业性专业性 preMiDpreMiD德国标准生产质控体系德国标准生产质控体系国际公认检测内容国际公认检测内容COSMIC数据库，包含突变基因及位点信息，属于国际最权威机构最新研究成果。国家批准专有检测试剂国家批准专有检测试剂美国美国Roche检测仪器检测仪器注册号:(进)字 2009 第3402689号preMiDpreMiD血浆突变技术验证：血浆突变技术验证：NSCLC组织和血浆中EGFR突变一致性研究肿瘤
12、组织-测序法Total突变野生血浆-preMiD突变34518363野生24825849Total3698431212试验单位：试验单位：北京协和医院、浙江大学附属第一医院、江苏省肿瘤医院、青岛大学附属医院 Sanger测序1212例非小细胞肺癌患者肿瘤组织EGFR突变；preMiD法检测对应1212例血浆EGFR突变。总体结果：总体结果：阳性符合率为80.49%，阴性符合率为94.66%，总符合率为90.35%（唯一完成临床试验研究，血浆-组织突变一致性最高的结果）（已完成CFDA批准临床实验，2011年12月28号-2013年12月28号）中国唯一入选国际肿瘤学术大会中国唯一入选国际肿瘤学
13、术大会ASCO会议的主讲报告会议的主讲报告中国医师协会中国医师协会preMiDpreMiD项目专家论证会项目专家论证会ctDNActDNA 在国际上的应用在国际上的应用NDRG4,BMP3NDRG4,BMP3,KRAS总灵敏度：92%sensitivity 早期肠癌灵敏度：94%特异性：87%ColonGuardColonGuard （EXACTEXACT）ColonVantageColonVantage(QUEST)(QUEST)ColoVantage 检测血浆中SEPTIN9的甲基化状态，达到检测和预警结直肠癌的目的。ColoVantage 是一种无创的检测方法灵敏度达到70%特异性达到8
14、9%适用于各个分期的结直肠癌ctDNActDNA在甲状腺癌检测中的应用在甲状腺癌检测中的应用基因检测对甲状腺肿瘤诊断的准确率在80%以上突变检测能够应对病理检测不能确定的情况Nikiforov YE et al,J Clin Endocrinol Metab.2011 Nov;96(11):3390-7案例分享案例分享preMiDpreMiD检测：检测：FLT3突变突变案例一：案例一：FLT3FLT3基因突变，基因突变，2 2年半后诊断大肠癌中晚期年半后诊断大肠癌中晚期个人不相信，不愿面对，个人不相信，不愿面对，没有采取必要干预措施没有采取必要干预措施案例二：案例二：KRAS突变检测者：男性，
15、35岁，重庆人家族史：其父患肺癌进行preMiD检测：KRAS基因突变KRAS突变报告解读：结合健康问卷及专家咨询1.其父患肺癌2.作息紊乱3.干咳、胸闷 近期没有体检资料结合该情况给出建议：进行胸部增强CT检查，判断突变在哪个阶段（临床前期或临床阶段）KRAS突变2014年5月8日右肺下叶斜裂旁小结节影肝左叶多发小囊肿KRAS突变 干预方案匹多莫德口服液匹多莫德口服液服用方法：1支（10ml）/次，2次/日（早晚空腹服用）3个月为一周期KRAS突变-跟踪随访2014年9月9日胸部CT增强未发现肿瘤干预后4 4个月进行突变复查及突变定量分析：复查结果，基因仍有突变，并对再次突变情况进行与第一次
16、的定量值分析，突变较之前下降。KRAS突变-复查及定量案例三：案例三：THR-基因突变检测者：男性，41岁，南京人进行preMiD检测：THR-基因突变THR-基因突变报告解读：结合健康专家咨询1.作息紊乱2.20年吸烟史，每日1包 近期没有体检资料THR-基因突变右颈部、颌下多发小淋巴结，部分淋巴结FDG代谢增高；甲状腺瘤可能THR-基因突变-干预方案胸腺肽a1方法：1支（1.6mg）/次，1次/周，皮下注射3个月为一周期干预后3 3个月进行突变复查及突变定量分析：复查结果：突变消失。THR-基因突变-干预方案病理：肺腺癌案例四：案例四：EGFREGFR突变确诊突变确诊6mm6mm早癌早癌检
17、测者男性，62岁，无锡人士，某医院院长，体检发现肺内有6mm孤立影，不能确定其性质，经preMiD检测发现EGFR突变。该检测者在上海肺科医院行胸腔镜手术，取出病理为肺腺癌。案例五：案例五：FHITFHIT突变确诊胃癌晚期突变确诊胃癌晚期检测者男性，62岁，机关干部，既往慢性胃病史，平时喜食蒜泥等刺激食物。经preMiD检测：FHIT突变，后追加蛋白标志物FMD1值异常升高。建议进一步胃镜检查，结果为低分化腺癌晚期，对化疗均不敏感。病理：低分化腺癌案例六：案例六：宫颈癌复发监控案例宫颈癌复发监控案例检测者女性，29岁，2012年12月确诊宫颈癌，术后、放、化疗后。2013年5月经perMiD检
18、测发现FHIT-exon8位点和HLA-A-c.835CT位点有突变，确诊为术后复发。案例七：案例七：鉴别：前列腺癌鉴别：前列腺癌oror前列腺增生（前列腺增生（BPHBPH）？）？PSA700,前列腺癌？！PSA=25，BPH？总总 结结突变 preMiD技术检测的是来 自于肿瘤相关的原癌基因和抑癌基因的异常突变。ctDNA由癌变细胞死亡、凋亡或主动分泌进入循环系统，携带有癌症细胞内部所含异常信息，如突变、copy数变化、甲基化、融合基因及染色体异常等。血液中含有驱动突变或致癌突变分子，意味身体内有癌变细胞。u 男性18肿瘤：肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、食道癌、肾癌、甲状腺癌、结直肠癌、膀胱癌、黑色素瘤、胆管癌、淋巴瘤、脑胶质瘤、胆囊癌、头颈癌、前列腺癌、急性髓性白血病、骨髓增生异常综合症u 女性18肿瘤：肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、食道癌、肾癌、甲状腺癌、结直肠癌、膀胱癌、黑色素瘤、胆管癌、淋巴瘤、脑胶质瘤、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、急性髓性白血病 遗传背景特种感染：病毒性肝炎、HIV、脓毒症等慢性炎症环境污染不良习惯免疫低下肿瘤个性：抑郁、躁狂等肿瘤体质：微生态失衡、免疫失衡、营养代谢失衡1.候诊2.采5ml血3.检测（7-10天）4.出具报告5、专家解读We Keep Life From Cancer谢谢！谢谢！
