1、一、衡量甲壳动物免疫机能的指标一、衡量甲壳动物免疫机能的指标二、甲壳动物免疫机能衡量指标的科学应二、甲壳动物免疫机能衡量指标的科学应用与评价用与评价第二节第二节 衡量甲壳动物免疫机能的指标衡量甲壳动物免疫机能的指标开展甲壳动物免疫系统和免疫机理研究目的之一:为开展甲壳动物免疫防病提供理论基础而选择一个合适的指标进行科学正确地评价甲壳动物免疫状况，则是有效开展免疫防病治病的前提迄今为止，报道用于衡量甲壳动物免疫机能的指标主要迄今为止，报道用于衡量甲壳动物免疫机能的指标主要可分四大类：可分四大类：(一一)、总总血淋巴细胞密度和分血淋巴细胞密度血淋巴细胞密度和分血淋巴细胞密度 (二二)、免疫相关酶的
2、活性及血淋巴细胞分泌物水平免疫相关酶的活性及血淋巴细胞分泌物水平(三三)、体外体外血细胞吞噬功能检测血细胞吞噬功能检测 (四四)、活体攻毒试验活体攻毒试验血淋巴细胞是甲壳动物的免疫系统的核心组分，血淋巴细胞是甲壳动物的免疫系统的核心组分，甲壳动物所具有的三种血淋巴细胞（透明细胞，小颗粒细胞，甲壳动物所具有的三种血淋巴细胞（透明细胞，小颗粒细胞，大颗粒细胞）在机体免疫防御中所起的作用不同大颗粒细胞）在机体免疫防御中所起的作用不同血淋巴中总淋巴细胞密度（血淋巴中总淋巴细胞密度（THCsTHCs）和分淋巴细胞的密度（）和分淋巴细胞的密度（DHCsDHCs）在一定程度上反映了机体的免疫应激能力或健康状
3、况在一定程度上反映了机体的免疫应激能力或健康状况THCsTHCs和和DHCsDHCs是近几年国外使用较多的一个衡量甲壳是近几年国外使用较多的一个衡量甲壳动物的免疫状况的指标动物的免疫状况的指标但研究也发现，但研究也发现，甲壳动物的甲壳动物的THCsTHCs和和DHCsDHCs水平容易受水平容易受正常蜕皮周期正常蜕皮周期，理化条件理化条件，营养水平营养水平等因素的影响等因素的影响而发生较大的变异而发生较大的变异 1、酚氧化酶活力（酚氧化酶活力（A APOPO）及酚氧化酶原（）及酚氧化酶原（AproPOAproPO）酚氧化酶原激活系统是甲壳动物体内重要的异物识别系统，系统组分具有抗微生物活性免疫调
4、理作用，促进血淋巴细胞的吞噬作用甲壳动物的酚氧化酶活性也因环境条件、生理状态和营养水平的不同而不同 SOD及POD都是机体内的抗氧化酶，过多的氧自由基能导致机体免疫力下降，因此，机体SOD及POD活力能反映机体的免疫机能甲壳动物的SOD或POD活性也受环境、营养等因素的影响而发生变化患病对虾血清和小颗粒细胞内ACP及ALP阳性反应的产物增多注射或投喂免疫多糖后，日本对虾和中国对虾体内的ACP和ALP活性在一定时间内也均较对照组高凝集素是甲壳动物体内又一重要的异物识别物质，血淋巴血凝效价的大小可反映机体对非己细胞的免疫灵敏性甲壳动物体内存在多种抗菌肽及其他抗甲壳动物体内存在多种抗菌肽及其他抗微生
5、物成分，这些物质的抗微生物作用微生物成分，这些物质的抗微生物作用可用抗菌活力或溶菌活力衡量可用抗菌活力或溶菌活力衡量有学者检测到对虾的血清中存在能够与人有学者检测到对虾的血清中存在能够与人的某些抗抗体发生作用后产生沉淀反应的的某些抗抗体发生作用后产生沉淀反应的物质，通常称之为物质，通常称之为类免疫球蛋白样物质类免疫球蛋白样物质 血淋巴蛋白含量血淋巴蛋白含量血蓝素含量血蓝素含量可凝固蛋白（可凝固蛋白（CP)CP)含量含量血细胞转移酶（血细胞转移酶（TgaseTgase）活力）活力血清溶血素血清溶血素血淋巴凝固时间血淋巴凝固时间等指标也被尝试用于描述对虾的免疫机能的状况 1 1、细胞毒活性氧、细胞
6、毒活性氧 细胞吞噬过程中伴随活性氧的产生，活性氧对异物细胞有杀伤作用2 2、离体血淋巴细胞的吞噬功能的检测、离体血淋巴细胞的吞噬功能的检测 丫啶橙检测法(杜爱芳,1997)，并以血淋巴细胞的吞噬率、吞噬指数、杀伤率和杀伤指数四指标衡量 TTC还原法(江晓路等1999)吞噬细胞花环试验(江晓路等1999)来衡量 活体攻毒实验是最能直观反映机体综合免疫机能的实验手段在致病原的人为攻击下，免疫水平高的动物表现为延迟死亡或低死亡率或高的半致死浓度但进行一次成功的攻毒实验相对较耗时尽管有多种指标已被用于衡量甲壳动物的免疫水平，但是，由于某些相关的基础研究还不十分完善，如何运用这些指标正确科学评价甲壳动物
7、的免疫状态，在实际评价中仍有待于进一步的提高。主要表现在如下方面：甲壳动物是较低等的无脊椎动物，种内个体的遗传差异很大，且属于变温动物，生长过程中又存在蜕皮等生理活动，过小的样本容量可能影响评价的准确性在数理统计中在数理统计中,当测量值的预设置信区间完全位于允许的测量误差范围之内当测量值的预设置信区间完全位于允许的测量误差范围之内,测量结果能够反映群体的真实水平测量结果能够反映群体的真实水平,即测量值具有代表性即测量值具有代表性黄嘌呤氧化法黄嘌呤氧化法(试剂盒试剂盒)测定超氧化物歧化酶测定超氧化物歧化酶(SOD)活性活性Hultmark 等人的改进方法测定溶菌酶等人的改进方法测定溶菌酶(LSZ
8、)活性活性,血球计数板法测定总血淋巴细胞密度血球计数板法测定总血淋巴细胞密度(THCs)离体淋巴细胞的培养技术的不成熟，在短时间内离体血淋巴细胞的生物学活性就会丧失，因此离体细离体细胞的吞噬功能检测及细胞毒活性氧的检测结果重复胞的吞噬功能检测及细胞毒活性氧的检测结果重复性差性差一些酶指标要能科学准确反映机体的免疫水平，仍存在两个重要的问题有待解决；正常机体的酶活力水平没有确定，客观上给机体免疫水平的评给机体免疫水平的评价带来盲目性价带来盲目性。在很多评价中，酶活力水平高被认为是机体免疫水平高。实际上，某些酶活力水平过高是机体非健康的生理表现在所采用的免疫水平评价指标中，很多指标（如酶）会随机体
9、正常生理活动（如：蜕皮）而发生变化，也给机体免疫水平的比较评价带来难度 主要病害的发生与机体免疫参数的实时变化特征性指标的筛选 溶菌酶活性可很好的表征中国对虾抗弧菌的能力免疫防病的根本途径是提高机体的免疫力，提高机体免疫力的本质不是单纯提高某个免疫指标的水平，而是提高机体免疫的灵敏提高机体免疫的灵敏性和平衡性性和平衡性，即机体对侵入体内的异物能够迅速产生充分的反应并在异物清除后能恢复正常状态因此，在如何准确科学评价甲壳动物的免疫水平，还有许多基础性的工作有待开展在甲壳动物的基础免疫水平尚未探明之前，攻毒试验仍是评价甲壳动物免疫力的最有说服力的方法1 1、衡量甲壳动物免疫机能的指标、衡量甲壳动物免疫机能的指标2 2、评价甲壳动物免疫机能的注意事项、评价甲壳动物免疫机能的注意事项
