1、2023-2-111高效液相色谱法及其在中药分析中的应用 2023-2-112慢慢中等中等快快Temporal course淋洗液淋洗液2023-2-113按溶质在分离过程中的原理：按溶质在分离过程中的原理：吸附色谱吸附色谱分配色谱分配色谱离子交换色谱离子交换色谱体积排阻色谱体积排阻色谱亲和色谱亲和色谱液相色谱的分类液相色谱的分类2023-2-114按色谱固定相的形式按色谱固定相的形式：平板色谱（平面色谱）平板色谱（平面色谱）柱色谱柱色谱按分离的压力按分离的压力高压液相色谱（高效液相色谱）高压液相色谱（高效液相色谱）中压液相色谱中压液相色谱常压液相色谱常压液相色谱液相色谱的分类液相色谱的分类H
2、dp关系图关系图2023-2-116一般也把吸附色谱法称为液固色谱法。液固色一般也把吸附色谱法称为液固色谱法。液固色谱法的固定相一般为固体吸附剂，常用的是：谱法的固定相一般为固体吸附剂，常用的是：碳酸钙、硅胶、氧化铝、氧化镁、活性炭等。碳酸钙、硅胶、氧化铝、氧化镁、活性炭等。其中硅胶最为常用。其中硅胶最为常用。吸附色谱对中等分子量的油溶性样品可获得最吸附色谱对中等分子量的油溶性样品可获得最佳的分离，而对强极性或离子型的样品，有时佳的分离，而对强极性或离子型的样品，有时会发生不可逆吸附，不能得到满意的结果。会发生不可逆吸附，不能得到满意的结果。液固色谱法液固色谱法2023-2-117吸附剂一般为
3、多孔性的物质，在它们的表明吸附剂一般为多孔性的物质，在它们的表明存在着分散的吸附中心，溶质分子和流动相存在着分散的吸附中心，溶质分子和流动相分子在吸附剂表面的活性中心上进行竞争，分子在吸附剂表面的活性中心上进行竞争，同时不同溶质之间和同一溶质的不同官能团同时不同溶质之间和同一溶质的不同官能团之间液也存在竞争。竞争的综合结果就是形之间液也存在竞争。竞争的综合结果就是形成不同溶质在吸附剂表面吸附、解吸平衡。成不同溶质在吸附剂表面吸附、解吸平衡。基本原理基本原理：2023-2-118吸附mssmnMXnMX解吸X表示溶质分子，下标m为流动相，s为固定相M表示流动相分子，下标m为流动相，s为固定相n为
4、被溶质分子取代的流动相分子数目用一个式子表示如下：用一个式子表示如下：2023-2-1110键合相固定相：在硅胶的表明用键合反应键合相固定相：在硅胶的表明用键合反应把官能基团键合到表面上，解决固定相流把官能基团键合到表面上，解决固定相流失的问题。失的问题。正相色谱：流动相极性比固定相极性小正相色谱：流动相极性比固定相极性小反相色谱：流动相极性比固定相极性大反相色谱：流动相极性比固定相极性大键合相液相色谱键合相液相色谱2023-2-1112高效液相色谱固定相 化学键合相硅胶 octadecyl Si-CHoctadecyl Si-CH2 2 1717-CH-CH3 3 C C1818 octyl
5、 Si-CH octyl Si-CH2 2 7 7-CH-CH3 3 C C8 8 cyanopropyl Si-CH cyanopropyl Si-CH2 2 3 3-CN CN -CN CN aminopropyl Si-CH aminopropyl Si-CH2 2 3 3-NH-NH2 2 NHNH2 2 2023-2-1113固定相的其他性能 载体的形状 球形 无定形 粒径 310m,1.72.5m 孔径 150 分析分子量300 分析分子量2000的化合物 表面积 键合基团的表面覆盖度 含碳量2023-2-1114一般认为键合相色谱的机理分配色谱机理，一般认为键合相色谱的机理分配色
6、谱机理，也有人认为它是吸附色谱机理，其实应该也有人认为它是吸附色谱机理，其实应该是有两种成分在里面，现在又有疏溶剂理是有两种成分在里面，现在又有疏溶剂理论等机理的提出。论等机理的提出。高效液相色谱仪器高效液相色谱仪器1.储存和输送液体设备储存和输送液体设备2.进样系统进样系统3.柱系统柱系统4.检测器检测器5.控制和数据处理系统控制和数据处理系统选择流动相的原则：选择流动相的原则：保持色谱柱的稳定性保持色谱柱的稳定性化学惰性化学惰性适合所用的检测器适合所用的检测器对样品有一定的溶解能力对样品有一定的溶解能力清洗、更换方便、毒性小清洗、更换方便、毒性小沸点、粘度等物理性质合适沸点、粘度等物理性质
7、合适反相色谱最常用的流动相：反相色谱最常用的流动相：水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、异丙醇等。水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、异丙醇等。水甲醇体系：大约水甲醇体系：大约5050水的时候粘度最大水的时候粘度最大水乙腈体系：水乙腈体系：3535水的时候粘度最大。水的时候粘度最大。存放流动相的容器一定要惰性的，并且存放流动相的容器一定要惰性的，并且有机溶剂要避光。有机溶剂要避光。输液泵要求流量平稳输液泵要求流量平稳,可以调节的流量可以调节的流量范围宽，耐高压。范围宽，耐高压。一般是柱塞往复泵。一般是柱塞往复泵。2023-2-11212023-2-1122流动相的混合输入和洗脱方式o 离线混合 配制 滤过 脱气
8、o 在线混合 低压在线混合 高压在线混合p 洗脱 等度洗脱 梯度洗脱2023-2-1123高效液相色谱仪器泵系统进样系统包括手动进样和自动进样进样系统包括手动进样和自动进样无论手动进样还是自动进样，都要通过无论手动进样还是自动进样，都要通过六通阀。六通阀进样是高压系统的需要，六通阀。六通阀进样是高压系统的需要，既不影响系统的正常运行又能够让样品既不影响系统的正常运行又能够让样品进到系统中去。进到系统中去。2023-2-11252023-2-1126高效液相色谱仪器进样器2023-2-1127反相键合相色谱柱最常用的就是反相键合相色谱柱最常用的就是ODS柱，柱，也就是也就是C18柱。柱。柱温箱的
9、温度控制要求比较精确，因为柱温箱的温度控制要求比较精确，因为流体的粘度受温度的影响较大。流体的粘度受温度的影响较大。柱系统包括色谱柱和柱温箱柱系统包括色谱柱和柱温箱2023-2-1128测量原理不同分类：测量原理不同分类：光学性质检测器光学性质检测器电学和电化学性质检测器电学和电化学性质检测器热学性质检测器热学性质检测器液相色谱检测器液相色谱检测器2023-2-1129紫外可见光检测器紫外可见光检测器示差折光检测器示差折光检测器荧光检测器荧光检测器蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器化学发光检测器化学发光检测器光学性质检测器：光学性质检测器：2023-2-1130高效液相色谱仪器检测器紫外吸收检测
10、器有三种类型：紫外吸收检测器有三种类型：固定波长紫外吸收检测器：低压汞灯提供固定固定波长紫外吸收检测器：低压汞灯提供固定254nm254nm或或280nm280nm紫外光。紫外光。可变多波长检测器：氘灯做光源，光栅分光可变多波长检测器：氘灯做光源，光栅分光光二极管阵列检测器光二极管阵列检测器photophotodiodediodearray array detectordetector（PDADPDAD，PDA,DADPDA,DAD）：钨灯和氘灯组合）：钨灯和氘灯组合光源，进入检测池的不是单色光，而是一段紫外光源，进入检测池的不是单色光，而是一段紫外波长上的光。波长上的光。PDA PDA 可以
11、辅助定性。可以辅助定性。DAD检测器3D图示差折光检测器（示差折光检测器（refractive index detector RID）：）：溶液的折射率等于溶剂及其中所含各组分溶液的折射率等于溶剂及其中所含各组分溶质的折射率与其各自的摩尔分数的乘积溶质的折射率与其各自的摩尔分数的乘积之和。之和。RIDRID是通用型的检测器，但是灵敏度不高。是通用型的检测器，但是灵敏度不高。RIDRID不能用于梯度洗脱。不能用于梯度洗脱。2023-2-1134蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器2023-2-1135安培检测器安培检测器电导检测器电导检测器库仑检测器库仑检测器介电常数检测器介电常数检测器极谱检测器极
12、谱检测器电学和电化学检测器：电学和电化学检测器：2023-2-1136完成数据采集和对仪器的控制。完成数据采集和对仪器的控制。工作站工作站：2023-2-1137超高效液相色谱仪（超高效液相色谱仪（UPLC）超高效液相色谱超高效液相色谱是分离科学中的一个全新类别，它给实验室带来了新奇而强大的能力。UPLC借助于HPLC的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。2023-2-1138高效液相色谱法在药典中的应用项目项目20002000版版20052005版版含量测定含量测定1091095275272023-2-1139HPLC与
13、TLC比较(2005版)含量测定TLC-SCHPLC药材和提取物 15175中成药353522023-2-1140HPLCHPLC在中药质量分析和检测中的应用在中药质量分析和检测中的应用o 有效成分、指标成分的检测；o 杂质或有关物质检查；o 添加物或有害残留物质的检测；o 中药指纹谱分析2023-2-1141有效成分、指标成分的检测 人参皂苷的检测2023-2-1142Flavones,Flavanones,and Flavanone Glycosides Peak Identification 1.Naringin 2.Neohesperidin 3.Myricetin 4.Quercet
14、in 5.Naringenin 6.KaempferolColumn:Alltima C18,3m,100 x4.6mm Mobile Phase:A:50mM Potassium Phosphate,pH 2.5 B:ACN Gradient:(Time,%B)(0,20)(15,40)Flow Rate:1.0mL/min Detector:UV at 280nm Ginkgolides Peak Identification 1.Ginkgolide J 2.Ginkgolide C 3.Ginkgolide A 4.Ginkgolide BColumn:Nucleosil C18,5m
15、,250 x 2.1mm Part No.C-6000B Mobile Phase:Water:Methanol:Tetrahydrofuran(70:20:10)Flow Rate:0.2mL/min Detector:500 ELSD 杂质或有关杂质或有关物质检查物质检查添加物或有害残留物质的检测 Organophosphate Pesticides Peak Identification 1.Methyl Parathion 2.Dichlorvos 3.Ethoprophos 4.Azinphos Column:Alltima HP EPS C18,5,150 x 4.6mm Mobi
16、le Phase:(40:60)methanol:water Flow Rate:1.0 mL/min Detector:UV at 214nm 添加物或有害残留物质的检测 Aflatoxin Standards Peak Identification 1.Aflatoxin G2 (0.06 g/mL)2.Aflatoxin G1 (0.20 g/mL)3.Aflatoxin B2 (0.06 g/mL)4.Aflatoxin B1 (0.20 g/mL)Column:Inertsil ODS-3V,5,150 x 4.6mm Mobile Phase:(50:50)Methanol:Wat
17、er Flow Rate:1.0mL/min Detector:UV at 365 2023-2-1147中药指纹谱分析2023-2-11492005版版HPLC方法应用方法应用o 有效成分有效成分特征成分含量测定特征成分含量测定o 多成分指标含量测定多成分指标含量测定o 多种检测器应用多种检测器应用2023-2-1150有效成分有效成分特征成分含量测定特征成分含量测定2023-2-1151有效成分有效成分特征成分含量测定特征成分含量测定多成分指标多成分指标含量测定含量测定2023-2-1153ELSD检测方法应用银杏叶提取物中银杏酸的限量检查含量含量样品样品以总酸计以总酸计ppm以银杏酸以银
18、杏酸13：0计计ppm样品样品10.40.4样品样品20.20.2样品样品30.40.4样品样品43.83.8样品样品52728样品样品616671662样品样品7524522样品样品823392333样品样品9392390样品样品103163152023-2-1156高效液相色谱法附录修订内容高效液相色谱法附录修订内容(2005(2005版版)修订内容和特点：修订内容和特点：p明确了明确了HPLCHPLC方法的几种分离机制，为分类应方法的几种分离机制，为分类应用提供了基础；用提供了基础；p明确了数据处理系统（色谱工作站）作为色明确了数据处理系统（色谱工作站）作为色谱信号记录谱信号记录;p以较
19、大篇幅增加了色谱柱、检测器、流动相以较大篇幅增加了色谱柱、检测器、流动相的内容，适应快速发展的、日趋成熟的的内容，适应快速发展的、日趋成熟的HPLCHPLC技术的要求。技术的要求。高效液相色谱法是用高压高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。录
20、仪或积分仪记录。高效液相色谱法系采用高高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测被分离，并依次进入检测器，由记录仪、积分仪或器，由记录仪、积分仪或数据处理系统数据处理系统记录色谱信记录色谱信号。号。高效液相色谱法的主要分高效液相色谱法的主要分离机制有吸附、分配、离离机制有吸附、分配、离子交换和排阻作用。子交换和排阻作用。20002000版版 20052005版版2023-
21、2-1158对仪器的一般要求对仪器的一般要求(2000(2000版版)p所用的仪器为高效液相色谱仪。色谱柱的填充剂和所用的仪器为高效液相色谱仪。色谱柱的填充剂和流动相的组分应按各品种项下的规定。常用的色谱流动相的组分应按各品种项下的规定。常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶，后者以十八烷基柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶，后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用。离子交换填充剂，氰基或氨基键合硅胶也有使用。离子交换填充剂，用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂，用用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂，用
22、于分子排阻色谱等。除另有规定外，柱温为室温，于分子排阻色谱等。除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。检测器为紫外吸收检测器。o在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法光光度法(附录附录 A)A)项下对溶剂的要求。项下对溶剂的要求。2023-2-1159对仪器的一般要求对仪器的一般要求(2005(2005版版)1 1 所用的仪器为高效液相色谱仪。仪器应定期检定所用的仪器为高效液相色谱仪。仪器应定期检定并符合有关规定。并符合有关规定。（1 1）色谱柱）色谱柱 最常用的色谱柱填充剂为化学键合最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。反相色
23、谱系统使用非极性填充剂，以十八烷硅胶。反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基硅烷键合相和氨基他类型的硅烷键合硅胶（如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等）也有使用。正相色谱系统使用极性硅烷键合相等）也有使用。正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换填充剂填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或高分子多孔微球等填充用于离子交换色谱；凝胶或高分子多孔微球等填充剂用于分子排阻色谱等；手性键合填充剂用于对映剂用于分子排阻色谱等；手性键合填充剂用于
24、对映异构体的拆分分析。异构体的拆分分析。2023-2-1160对仪器的一般要求对仪器的一般要求(2005(2005版版)2 2 填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响待测物的保留行为和分离效果。孔径在待测物的保留行为和分离效果。孔径在150150以下的填料适合于分析分子量小于以下的填料适合于分析分子量小于20002000的化的化合物，分子量大于合物，分子量大于20002000的化合物则应选择孔的化合物则
25、应选择孔径在径在300300以上的填料。以上的填料。2023-2-1161对仪器的一般要求对仪器的一般要求(2005(2005版版)3 3 以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用pH2pH28 8的的流动相。当流动相。当pHpH大于大于8 8时，可使载体硅胶溶解；当时，可使载体硅胶溶解；当pHpH小于小于2 2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用中需使用pHpH大于大于8 8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、如
26、采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包覆聚合物填充剂、有机包覆聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等；当需使用充剂等；当需使用pHpH小于小于2 2的流动相时，应选用耐酸的的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。无机杂化填充剂等。2023-2-1162对仪器的一般要求对仪器的一般要求(2005(2005版版)4 4 (2)(2)检测器检测器 最常用的检测
27、器为紫外吸收检测器，其他常最常用的检测器为紫外吸收检测器，其他常见的检测器有二极管阵列检测器（见的检测器有二极管阵列检测器（DADDAD）、荧光检测器、示）、荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器和质谱差折光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器和质谱检测器等。检测器等。紫外、二极管阵列、荧光、电化学检测器为选择性检测紫外、二极管阵列、荧光、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与待测物的质量有关，还与化合物的结器，其响应值不仅与待测物的质量有关，还与化合物的结构有关；示差折光检测器和蒸发光散射检测器为通用型检构有关；示差折光检测器和蒸发光散射检测器为通用型检测器，对所有
28、的化合物均有响应；蒸发光散射检测器属质测器，对所有的化合物均有响应；蒸发光散射检测器属质量型检测器，对结构类似的化合物，其响应值几乎仅与待量型检测器，对结构类似的化合物，其响应值几乎仅与待测物的质量有关；二极管阵列检测器可以同时记录待测物测物的质量有关；二极管阵列检测器可以同时记录待测物在规定波长范围内的吸收光谱，故可用于待测物的光谱测在规定波长范围内的吸收光谱，故可用于待测物的光谱测定和色谱峰纯度的检查。定和色谱峰纯度的检查。2023-2-1163对仪器的一般要求对仪器的一般要求(2005(2005版版)5 5o紫外、荧光、电化学和示差折光检测器的响应值与待紫外、荧光、电化学和示差折光检测器
29、的响应值与待测物的质量在一定范围内呈线性关系，但蒸发光散射测物的质量在一定范围内呈线性关系，但蒸发光散射检测器响应值与待测物的质量通常并不呈线性关系，检测器响应值与待测物的质量通常并不呈线性关系，必要时需对响应值进行数学转换后进行计算。必要时需对响应值进行数学转换后进行计算。o不同的检测器，对流动相的要求不同。如采用紫外检不同的检测器，对流动相的要求不同。如采用紫外检测器，所用流动相应至少符合紫外测器，所用流动相应至少符合紫外-可见分光光度法可见分光光度法（附录（附录 A A）项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，）项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机相中有机溶剂的截止使用波长，并选
30、用还应考虑有机相中有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器通色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器通常不允许使用含不挥发盐组分的流动相。常不允许使用含不挥发盐组分的流动相。2023-2-1164对仪器的一般要求对仪器的一般要求(2005(2005版版)5 5 （3 3）流动相）流动相 由于由于C C1818链在水相环境中不易链在水相环境中不易保持伸展状态，故对于十八烷基硅烷键合硅保持伸展状态，故对于十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的反相色谱系统，流动相中有机胶为固定相的反相色谱系统，流动相中有机溶剂的比例通常不应低于溶剂的比例通常不应低于5 5，否则，否则C
31、 C1818链的链的随机卷曲将导致组分保留值变化，造成色谱随机卷曲将导致组分保留值变化，造成色谱系统不稳定。系统不稳定。2023-2-1165梯度洗脱梯度洗脱 按设定的时间程序改变流动相系统溶剂按设定的时间程序改变流动相系统溶剂组成的比例的洗脱方法组成的比例的洗脱方法.例例:“以乙腈为流动相以乙腈为流动相A，以水为流动相，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱按下表进行梯度洗脱”(人参人参)2023-2-1167梯度洗脱梯度洗脱o 以有机溶剂相作为流动相A，以水相（含酸、盐等）为流动相B；o 使用混合流动相的，以含有机相比例较高的为流动相A，含水比例高的为流动相B。正文中各品种项下规定的条正文中各
32、品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验品种并达到系统适用性试验的要求。一般色谱图约于的要求。一般色谱图约于2020分钟内记录完毕。分钟内记录完毕。正文中各品种项下规定的条正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动
33、相组件除固定相种类、流动相组成、检测器类型不得改变外，成、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组动相流速、混合流动相各组成的比例、柱温、进样量、成的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体的色谱当改变，以适应具体的色谱系统并达到系统适用性试验系统并达到系统适用性试验的要求。的要求。但对某些品种，必但对某些品种，必须用特定适用牌号的填充剂须用特定适用牌号的填充剂方能满足分离要求者，可在方能满足分离要求者，可在该品种项下注明。该品种项下注明。按各品种
34、项下要求对仪按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。重复性和拖尾因子。色谱系统的适用性试验通色谱系统的适用性试验通常包括分离度、理论板数、常包括分离度、理论板数、重复性和拖尾因子等四个指重复性和拖尾因子等四个指标。其中，分离度和重复性标。其中，分离度和重复性是系统适用性试验中更具实是系统适用性试验中更具实用意义的参数。用意义的参数。按各品种项下要求对色谱按各品
35、种项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用系统进行适用性试验，即用规定的对照品对色谱系统进规定的对照品对色谱系统进行试验，应符合要求。行试验，应符合要求。如达如达不到要求，可对色谱分离条不到要求，可对色谱分离条件作适当的调整件作适当的调整。系统适用性试验系统适用性试验色谱柱的理论板数色谱柱的理论板数(n)(n)分离度（分离度（R R）无论是定性鉴别还是定量分）无论是定性鉴别还是定量分 析均要求待测峰与其他峰或内标峰之间析均要求待测峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。有较好的分离度。重复性重复性拖尾因子拖尾因子 2023-2-1171测定法测定法（1 1）内标法加校正因子测定供试品中某）内标法加
36、校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量个杂质或主成分含量（2 2）外标法测定供试品中某个杂质或主）外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量成分含量（3 3）加校正因子的主成分自身对照法）加校正因子的主成分自身对照法（4 4）不加校正因子的主成分自身对照法）不加校正因子的主成分自身对照法（5 5）面积归一化法）面积归一化法 2023-2-1172常规分析中应注意的问题 1 色谱柱与流动相 以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用pH28的流动相。当pH大于8时，可使载体硅胶溶解；当pH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用pH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯
37、硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包覆聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等；当需使用pH小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。2023-2-1173常规分析中应注意的问题 2 紫外、荧光、电化学和示差折光检测器的响应值与待测物的质量在一定范围内呈线性关系，但蒸发光散射检测器响应值与待测物的质量通常并不呈线性关系，必要时需对响应值进行数学转换后进行计算。3 不同的检测器，对流动相的要求不同。如采用紫外检测器，所用流动相应至少符合紫外-可见分光光度法（附录 A）项下对溶剂
38、的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机相中有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器通常不允许使用含不挥发盐组分的流动相。2023-2-1174 4 检验中各品种项下规定的条件除固定相固定相种类、流动相组成、检测器类型不得改变外，种类、流动相组成、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组成的体粒度、流动相流速、混合流动相各组成的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，均可适当改变，以适应具体的色谱系统并达到系统适用性试验的要求。但对某些品种，必须用特定适用牌号的填充剂方能满足分离要求者，可在该品种项下注明。常规分析中应注意的问题
