1、抗生素检验知识培训资料供参考（优选）抗生素检验知识培训资料供参考第一部分：抗生素定义与分类第一部分：抗生素定义与分类抗生素：抗生素（抗生素：抗生素（antibiotics）是某些细菌、放线菌和真菌）是某些细菌、放线菌和真菌等微生物的次级代谢产物，在低微浓度下对各种病原性微等微生物的次级代谢产物，在低微浓度下对各种病原性微生物具有杀灭或抑制作用的物质。主要是指通过传统发酵生物具有杀灭或抑制作用的物质。主要是指通过传统发酵工艺直接获得的抗生素和部分或完全由人工合成的与天然工艺直接获得的抗生素和部分或完全由人工合成的与天然抗生素具有同种作用的物质。抗生素具有同种作用的物质。初级代谢：微生物从外界吸收
2、各种营养物质，通过分解代谢初级代谢：微生物从外界吸收各种营养物质，通过分解代谢和合成代谢，生成维持生命活动所必需的物质和能量的过和合成代谢，生成维持生命活动所必需的物质和能量的过程，称为初级代谢。程，称为初级代谢。次级代谢：某些生物为了避免在初级代谢过程某种中间产物次级代谢：某些生物为了避免在初级代谢过程某种中间产物积累所造成的不利作用而产生的一类有利于生存的代谢类积累所造成的不利作用而产生的一类有利于生存的代谢类型。型。第一部分：抗生素定义与分类第一部分：抗生素定义与分类 随着抗生素研究工作的发展，发现抗生素的随着抗生素研究工作的发展，发现抗生素的来源更加广泛，其作用也更加广泛，来源更加广泛
3、，其作用也更加广泛，其来源包括包括微生物产生的物质、高等动植物产生的代谢物和微生物产生的物质、高等动植物产生的代谢物和用化学方法合成或半合成的化合物；用化学方法合成或半合成的化合物；其性能包括包括抗细菌的物质、抗病毒的物质、抗寄生虫的物质抗细菌的物质、抗病毒的物质、抗寄生虫的物质和抗原虫的物质等，甚至抗肿瘤的药物都属于抗和抗原虫的物质等，甚至抗肿瘤的药物都属于抗生素的范畴。生素的范畴。第一部分：抗生素定义与分类第一部分：抗生素定义与分类抗微生物药：抗微生物药：一、-内酰胺类：（一）青霉素类（一）青霉素类 包括青霉素钠、青霉素钾、氨苄西林、氨苄西林钠、包括青霉素钠、青霉素钾、氨苄西林、氨苄西林钠
4、、海他西林、阿莫西林、阿莫西林钠、苯唑西林钠、氯唑海他西林、阿莫西林、阿莫西林钠、苯唑西林钠、氯唑西林钠、苄星氯唑西林、普鲁卡因青霉素、苄星青霉素西林钠、苄星氯唑西林、普鲁卡因青霉素、苄星青霉素等。等。（二）（二）头孢菌素类头孢菌素类 包括包括 头孢噻呋、盐酸头孢噻呋、头孢噻呋钠、头孢头孢噻呋、盐酸头孢噻呋、头孢噻呋钠、头孢氨苄、头孢维星钠、硫酸头孢喹肟等。氨苄、头孢维星钠、硫酸头孢喹肟等。抗生素分类抗生素分类第一部分：抗生素定义与分类第一部分：抗生素定义与分类二、氨基糖苷类：包括：硫酸链霉素、硫酸双氢链霉素、硫酸卡那霉素、硫酸庆大霉素、硫酸新霉素、盐酸大观霉素、硫酸大观霉素、硫酸庆大小诺霉素
5、、硫酸安普霉素等。三三、四环素类：、四环素类：包括土霉素、盐酸土霉素、四环包括土霉素、盐酸土霉素、四环素、盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸素、盐酸四环素、盐酸金霉素、盐酸多西环素多西环素等。等。第一部分：抗生素定义与分类第一部分：抗生素定义与分类钢管内外壁要求清洁光滑，两端面应平坦光洁，管壁应厚薄一致，重量差异不超过0.1、重量单位：以抗生素中所含特定的抗菌活性部分的重量作为效价单位，一般以1mg相当于1000单位计算，但由于抗生素多以盐的成分存在。消毒（disinfection）：杀死物体上或者环境中病原微生物并不一定杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。一、抗蠕虫药（抗线虫药）4、钢管（牛津杯）抗
6、生素检验知识培训资料供参考（优选）抗生素检验知识培训资料供参考例如，季胺盐类化合物的戊二醛药物在碱性环境中杀灭微生物效果较好；该方法国外使用较为普遍，而且快速（3-4小时），中国兽药典（2010年版）收载了该方法，且有18个品种在含量测定中收载了浊度法。初级代谢：微生物从外界吸收各种营养物质，通过分解代谢和合成代谢，生成维持生命活动所必需的物质和能量的过程，称为初级代谢。第二部分：微生物试验相关知识第二部分：微生物试验相关知识清洁：能减少微生物附着在无机物体表面的数量的方法。第二部分：微生物试验相关知识烧灼 煮沸法供试品称取量若少于100 mg，称取方法同标准品；钢管内外壁要求清洁光滑，两端面
7、应平坦光洁，管壁应厚薄一致，重量差异不超过0.普通玻璃、纸张、尘埃等均可阻挡紫外线，因此它只适用于空气消毒或物体表面的消毒。制备底层缓冲液的pH值对样品液的稳定性、细菌生长速度和抑菌圈边缘清晰等有影响。四、大环内酯类：四、大环内酯类：包括包括红霉素、乳糖酸红霉素、硫氰酸红霉素、吉他霉素、酒石酸吉他霉素、泰乐菌素、酒石酸泰乐菌素、磷酸泰乐菌素、酒石酸泰万菌素、替米考星、泰拉霉素等。第一部分：抗生素定义与分类第一部分：抗生素定义与分类五、酰胺醇类 包括 甲砜霉素、氟苯尼考等。第一部分：抗生素定义与分类第一部分：抗生素定义与分类六、林可胺类 主要有盐酸林可霉素、盐酸吡利霉素等。第一部分：抗生素定义与
8、分类第一部分：抗生素定义与分类七、多肽类 包括硫酸黏菌素、杆菌肽锌、亚甲基水杨酸杆菌肽、恩拉霉素、维吉尼霉素、那西肽等。第一部分：抗生素定义与分类第一部分：抗生素定义与分类八、多糖类 包括阿维拉霉素、黄霉素等。第一部分：抗生素定义与分类第一部分：抗生素定义与分类九、其他：包括延胡索酸泰妙菌素、泰妙菌素、盐酸沃尼妙林、赛地卡霉素等。第一部分：抗生素定义与分类第一部分：抗生素定义与分类抗寄生虫药：一、抗蠕虫药（抗线虫药）包括 伊维菌素、阿维菌素、乙酰氨基阿维菌素、多拉菌素、越霉素A、潮霉素B等。二、抗原虫药（抗球虫药）包括 莫能菌素、莫能菌素钠、盐霉素钠、拉沙洛西钠、甲基盐霉素、马杜米星铵、海南霉
9、素钠、赛杜霉素钠等。第一部分：抗生素定义与分类第一部分：抗生素定义与分类第二部分：微生物试验相关知识第二部分：微生物试验相关知识一、名称解释 1.消毒（消毒（disinfection）：杀死物体上或者）：杀死物体上或者环境中病原微生物并不一定杀死细菌芽胞或环境中病原微生物并不一定杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。通常用化学的方法来非病原微生物的方法。通常用化学的方法来达到消毒的作用。达到消毒的作用。2.灭菌（灭菌（sterilization）：是指把物体上所）：是指把物体上所有的微生物（包括细菌芽孢在内）全部杀死有的微生物（包括细菌芽孢在内）全部杀死的方法。通常用物理方法来达到灭菌的目的。的方
10、法。通常用物理方法来达到灭菌的目的。3.3.抑菌（抑菌（bacteriostasisbacteriostasis）：抑制人体内部或外）：抑制人体内部或外部细菌生长繁殖的。部细菌生长繁殖的。4.4.防腐（防腐（antisepsisantisepsis）：是指防止或抑制微生物）：是指防止或抑制微生物生长繁殖的方法。生长繁殖的方法。5.5.无菌（无菌（asepsisasepsis）：不存在任何活菌。）：不存在任何活菌。第二部分：微生物试验相关知识第二部分：微生物试验相关知识6.6.无菌操作：防止细菌进入机体或其他物品无菌操作：防止细菌进入机体或其他物品的操作技术，称为无菌操作。的操作技术，称为无菌操
11、作。7.7.清洁：能减少微生物附着在无机物体表面清洁：能减少微生物附着在无机物体表面的数量的方法。的数量的方法。8.8.净化：能显著减少或破坏一定空间中微生净化：能显著减少或破坏一定空间中微生物数量和生物活性的方法。物数量和生物活性的方法。第二部分：微生物试验相关知识第二部分：微生物试验相关知识 二、消毒灭菌抑菌防腐方法：二、消毒灭菌抑菌防腐方法：1.物理法物理法 2.化学法化学法 3.生物学生物学第二部分：微生物试验相关知识第二部分：微生物试验相关知识第二部分：微生物试验相关知识常用的培养基有、VI号等培养基，用前应按使用说明书进行配制，注意调节培养基pH值。第三部分：抗生素微生物检定法第三
12、部分：抗生素微生物检定法包括青霉素钠、青霉素钾、氨苄西林、氨苄西林钠、海他西林、阿莫西林、阿莫西林钠、苯唑西林钠、氯唑西林钠、苄星氯唑西林、普鲁卡因青霉素、苄星青霉素等。缓冲液的pH值对样品液的稳定性、细菌生长速度和抑菌圈边缘清晰等有影响。第一部分：抗生素定义与分类二、管碟法材料、仪器及试剂的准备及基本要求第一部分：抗生素定义与分类第一部分：抗生素定义与分类标准品是指用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或者效价测定的标准物质，一般以效价单位标示，标准品应由国家法定的单位制备、标定和供应，一般常用的标准品来源于中国兽医药品监察所和中国药品生物制品检定所。抗生素检验知识培训资料供参考第二部分：微生
13、物试验相关知识若温度升高，则化学物质的活化分子增多，分子运动速度增加使化学反应加速，消毒所需要的时间可以缩短。每次使用后应置1：1000新洁尔灭溶液内浸泡2个小时以上，进行灭菌后再进行洗涤，在150-160 干热灭菌2小时备用。第三部分：抗生素微生物检定法稀释大肠埃希菌 CMCC（B）44 103或CVCC2801、第三部分：抗生素微生物检定法同一种消毒剂的浓度不同，其消毒效果也不一样。1、称量：标准品从冰箱内取出后，应放置至室温后称取。1.物理法物理法 1）热力灭菌法）热力灭菌法 干热灭菌法干热灭菌法 湿热灭菌法湿热灭菌法 焚烧焚烧 巴氏消毒法巴氏消毒法 烧灼烧灼 煮沸法煮沸法 干烤干烤 高
14、压蒸气灭菌法高压蒸气灭菌法 红外线红外线 第二部分：微生物试验相关知识第二部分：微生物试验相关知识 湿热灭菌效果好于干热灭菌，原因如下：湿热灭菌效果好于干热灭菌，原因如下：湿热情况下菌体蛋白容易凝固湿热情况下菌体蛋白容易凝固;湿热穿透力比干热大；湿热穿透力比干热大；湿热的蒸汽具有潜热。湿热的蒸汽具有潜热。第二部分：微生物试验相关知识第二部分：微生物试验相关知识 2）紫外线）紫外线 原理：利用适当波长的紫外线能够破坏微生物机原理：利用适当波长的紫外线能够破坏微生物机体细胞中的体细胞中的DNA（脱氧核糖核酸）或（脱氧核糖核酸）或RNA（核糖（核糖核酸）的分子结构，造成生长性细胞死亡和（或）核酸）的
15、分子结构，造成生长性细胞死亡和（或）再生性细胞死亡，达到杀菌消毒的效果。再生性细胞死亡，达到杀菌消毒的效果。特点：特点：穿透力比较差。普通玻璃、纸张、尘埃等均可穿透力比较差。普通玻璃、纸张、尘埃等均可阻挡紫外线，因此它只适用于空气消毒或物体表阻挡紫外线，因此它只适用于空气消毒或物体表面的消毒。面的消毒。紫外线可损伤皮肤、眼睛，使用时应注意防护。紫外线可损伤皮肤、眼睛，使用时应注意防护。第二部分：微生物试验相关知识第二部分：微生物试验相关知识 3）滤过除菌法）滤过除菌法 4）超声波杀菌法）超声波杀菌法 5）干燥与低温抑菌法）干燥与低温抑菌法第二部分：微生物试验相关知识第二部分：微生物试验相关知识
16、 2.化学法化学法 化学消毒剂：迅速杀灭病原微生物的化学药物。化学消毒剂：迅速杀灭病原微生物的化学药物。如：二氧化氯、戊二醛等。如：二氧化氯、戊二醛等。防腐剂：抑制病原微生物生长繁殖的化学药物。防腐剂：抑制病原微生物生长繁殖的化学药物。如：苯甲酸钠、山梨酸钾、脱氢乙酸钠等如：苯甲酸钠、山梨酸钾、脱氢乙酸钠等。化学治疗剂：用于治疗传染病的化学药物，可选化学治疗剂：用于治疗传染病的化学药物，可选择性地作用于细菌代谢不同环节，杀灭或抑制病择性地作用于细菌代谢不同环节，杀灭或抑制病原菌，对宿主无毒或很低，如异烟肼、无环鸟苷原菌，对宿主无毒或很低，如异烟肼、无环鸟苷等。等。第二部分：微生物试验相关知识第
17、二部分：微生物试验相关知识 3.生物学法生物学法 1）抗生素）抗生素 临床治疗临床治疗 2）细菌素）细菌素 为微生物代谢产物，破坏同源为微生物代谢产物，破坏同源性细菌。性细菌。3）噬菌体）噬菌体 感染细菌、真菌、放线菌、螺感染细菌、真菌、放线菌、螺旋体等微生物的病毒。旋体等微生物的病毒。4）中草药）中草药 第二部分：微生物试验相关知识第二部分：微生物试验相关知识三、影响消毒灭菌效果的因素三、影响消毒灭菌效果的因素1.消毒剂的性质、浓度与作用时间：各种消毒剂的理化性质不消毒剂的性质、浓度与作用时间：各种消毒剂的理化性质不同，对微生物的作用大小也差异。例如表面活性剂对革兰氏阳同，对微生物的作用大小
18、也差异。例如表面活性剂对革兰氏阳性菌的灭菌效果比对革兰氏阴性菌好，龙胆紫对葡萄球菌的效性菌的灭菌效果比对革兰氏阴性菌好，龙胆紫对葡萄球菌的效果特别强。果特别强。同一种消毒剂的浓度不同，其消毒效果也不一样。大多数同一种消毒剂的浓度不同，其消毒效果也不一样。大多数消毒剂在高浓度时起杀菌作用，低浓度时则只有抑菌作用。在消毒剂在高浓度时起杀菌作用，低浓度时则只有抑菌作用。在一定浓度下，消毒剂对某种细菌的作用时间越长，其效果也越一定浓度下，消毒剂对某种细菌的作用时间越长，其效果也越强。若温度升高，则化学物质的活化分子增多，分子运动速度强。若温度升高，则化学物质的活化分子增多，分子运动速度增加使化学反应加
19、速，消毒所需要的时间可以缩短。增加使化学反应加速，消毒所需要的时间可以缩短。2.微生物的污染程度：微生物污染程度越严重，消毒就越困难，微生物的污染程度：微生物污染程度越严重，消毒就越困难，因为微生物彼此重叠，加强了机械保护作用。所以在处理污染因为微生物彼此重叠，加强了机械保护作用。所以在处理污染严重的物品时，必须加大消毒剂浓度，或延长消毒作用的时间。严重的物品时，必须加大消毒剂浓度，或延长消毒作用的时间。第二部分：微生物试验相关知识第二部分：微生物试验相关知识3.微生物的种类和生活状态：不同的细菌对消毒剂的抵抗力微生物的种类和生活状态：不同的细菌对消毒剂的抵抗力不同，细菌芽胞的抵抗力最强，幼龄
20、菌比老龄菌敏感。不同，细菌芽胞的抵抗力最强，幼龄菌比老龄菌敏感。4.环境因素：当细菌和有机物特别是蛋白质混在一起时，某环境因素：当细菌和有机物特别是蛋白质混在一起时，某些消毒剂的杀菌效果可受到明显影响。些消毒剂的杀菌效果可受到明显影响。5.温度、湿度、酸碱度：消毒速度一般随温度的升高而加快，温度、湿度、酸碱度：消毒速度一般随温度的升高而加快，所以温度越高消毒效果越好。湿度对许多气体消毒剂有影响。所以温度越高消毒效果越好。湿度对许多气体消毒剂有影响。酸碱度的变化可影响剂杀灭微生物的作用。例如，季胺盐类酸碱度的变化可影响剂杀灭微生物的作用。例如，季胺盐类化合物的戊二醛药物在碱性环境中杀灭微生物效果
21、较好；酚化合物的戊二醛药物在碱性环境中杀灭微生物效果较好；酚类和次氯酸盐药剂则在酸性条件下杀灭微生物的作用较强。类和次氯酸盐药剂则在酸性条件下杀灭微生物的作用较强。6.化学拮抗物阴离子表面活性剂：可降低季胺盐类和洗比泰化学拮抗物阴离子表面活性剂：可降低季胺盐类和洗比泰的消毒作用，因此不能将新洁尔灭等消毒剂与肥皂、阴离子的消毒作用，因此不能将新洁尔灭等消毒剂与肥皂、阴离子洗涤剂合用。洗涤剂合用。第二部分：微生物试验相关知识第二部分：微生物试验相关知识第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法一、概述：抗生素微生物检定法是利用抗生素在低微浓度下有选择地抑制或杀死微生物的特点，以抗生素
22、的抗菌活性为指标，来衡量抗生素中的有效成分效力的方法。该方法是与临床要求相符，更能确定抗生素的临床医疗价值。抗生素微生物检定法分为稀释法、浊度法和琼脂扩散法（管碟法），每种方法的试验操作差别较大，但相同之处都是将标准和供试品两者的抗菌效力比较。稀释法：通过观察不同浓度的抗生素抑制试验菌的生长情况，从而测定抗生素最低抑菌浓度。常用于新药研制及临床药敏试验。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法第二部分：微生物试验相关知识包括 头孢噻呋、盐酸头孢噻呋、头孢噻呋钠、头孢氨苄、头孢维星钠、硫酸头孢喹肟等。第二部分：微生物试验相关知识初级代谢：微生物从外界吸收各种营养物质，通过分解代谢
23、和合成代谢，生成维持生命活动所必需的物质和能量的过程，称为初级代谢。一、抗生素含量表示方法应定期用75%酒精擦拭。酚类和次氯酸盐药剂则在酸性条件下杀灭微生物的作用较强。供试品取量若多于100 mg，可直接使用称量纸在万分之一的分析天平上精密称量。常用的培养基有、VI号等培养基，用前应按使用说明书进行配制，注意调节培养基pH值。第二部分：微生物试验相关知识第二部分：微生物试验相关知识第三部分：抗生素微生物检定法第二部分：微生物试验相关知识第一部分：抗生素定义与分类消毒（disinfection）：杀死物体上或者环境中病原微生物并不一定杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。湿度对许多气体消毒剂有影响。
24、缓冲液的pH值对样品液的稳定性、细菌生长速度和抑菌圈边缘清晰等有影响。灭菌（sterilization）：是指把物体上所有的微生物（包括细菌芽孢在内）全部杀死的方法。缓冲液的pH值对样品液的稳定性、细菌生长速度和抑菌圈边缘清晰等有影响。藤黄微球菌 CMCC（B）28 001或CVCC1600、同一种消毒剂的浓度不同，其消毒效果也不一样。第二部分：微生物试验相关知识第二部分：微生物试验相关知识第三部分：抗生素微生物检定法该方法是与临床要求相符，更能确定抗生素的临床医疗价值。三、影响消毒灭菌效果的因素湿度对许多气体消毒剂有影响。湿热灭菌效果好于干热灭菌，原因如下：3、陶瓦盖 内径约103mm，外径
25、108mm，平坦，吸水性强，应定期清洗、干燥。湿热穿透力比干热大；环境因素：当细菌和有机物特别是蛋白质混在一起时，某些消毒剂的杀菌效果可受到明显影响。采用胶头滴管或者定量加液器向钢管中加溶液。第二部分：微生物试验相关知识普通玻璃、纸张、尘埃等均可阻挡紫外线，因此它只适用于空气消毒或物体表面的消毒。包括 莫能菌素、莫能菌素钠、盐霉素钠、拉沙洛西钠、甲基盐霉素、马杜米星铵、海南霉素钠、赛杜霉素钠等。用灭菌的吸管吸取已融化的培养20ml注入培养皿中，稍后盖上陶瓦盖吸收水蒸汽，以免培养基温度过高，加盖陶瓦盖后冷凝水影响菌层的表面平整性（由于冷凝水的局部冷却和稀释作用，可使菌层培养基凝固后表面不平）。稀
26、释标准品和供试品所用的缓冲液应用同一瓶内或同一次制备和缓冲液几瓶混匀后使用。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法第二部分：微生物试验相关知识每次使用后应置1：1000新洁尔灭溶液内浸泡2个小时以上，进行灭菌后再进行洗涤，在150-160 干热灭菌2小时备用。浊度法：采用分光光度法测定不同浓度的抗生素抑制试验菌的生长情况（混浊程度），从而测定抗生素抑菌效力的方法。该方法国外使用较为普遍，而且快速（3-4小时），中国兽药典（2010年版）收载了该方法，且有18个品种在含量测定中收载了浊度法。如庆大霉素、链霉素、红霉素、大观霉素、安普霉素、泰乐菌素。第
27、三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法 琼脂扩散法(管碟法）：是使用固体培养基，在培养基凝固前，将试验菌混进去，采用一定的方法，将含有抗生素的物质与含菌的培养基表面接触。目前，国际上采用将抗生素加入到特定的小钢管中，使小钢管中的抗生素与培养基表面接触，此方法称为“管碟法”。经过培养后，由于抗生素不断向培养基中扩散，凡抑菌浓度能到达之处，试验菌不能生长，从而形成透明的抑菌范围，此范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法二、管碟法材料、仪器及试剂的准备及基本要求 1、操作间：要求净化级别达到万级，安装紫外线杀菌灯，安装空调设备，能控
28、制室温在20-25度之间。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法2、双碟 为硬质玻璃或塑料培养平皿，内径约90mm，高16-17mm，碟底厚度均匀一致。使用前应清洗干净后置150-160 干热灭菌2小时或者121 高压蒸汽灭菌30分钟。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法3、陶瓦盖 内径约103mm，外径108mm，平坦，吸水性强，应定期清洗、干燥。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法 4、钢管（牛津杯）每次使用后应置1：1000新洁尔灭溶液内浸泡2个小时以上，进行灭菌后再进行洗涤，在150-160 干热灭菌2小时备用。使用同一批次的钢
29、管。钢管内外壁要求清洁光滑，两端面应平坦光洁，管壁应厚薄一致，重量差异不超过0.05g 第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法5、钢管放置器：有全自动和半自动之分，一般为四孔，要求钢管下落时应垂直平稳、位置正确。应定期用75%酒精擦拭。如果没有钢管放置器，也可用干热灭菌过的镊子放置钢管。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法 6、恒温培养箱：有隔水式、电热式。要求温度控制在35-37，隔板要求水平，用于细菌培养。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法第三部分
30、：抗生素微生物检定法常用的菌种包括：第一部分：抗生素定义与分类如庆大霉素、链霉素、红霉素、大观霉素、安普霉素、泰乐菌素。常用的培养基有、VI号等培养基，用前应按使用说明书进行配制，注意调节培养基pH值。第三部分：抗生素微生物检定法消毒（disinfection）：杀死物体上或者环境中病原微生物并不一定杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。第三部分：抗生素微生物检定法常用的培养基有、VI号等培养基，用前应按使用说明书进行配制，注意调节培养基pH值。三、影响消毒灭菌效果的因素第三部分：抗生素微生物检定法应定期用75%酒精擦拭。浊度法：采用分光光度法测定不同浓度的抗生素抑制试验菌的生长情况（混浊程度），
31、从而测定抗生素抑菌效力的方法。用灭菌的吸管吸取已融化的培养20ml注入培养皿中，稍后盖上陶瓦盖吸收水蒸汽，以免培养基温度过高，加盖陶瓦盖后冷凝水影响菌层的表面平整性（由于冷凝水的局部冷却和稀释作用，可使菌层培养基凝固后表面不平）。（二）头孢菌素类主要有盐酸林可霉素、盐酸吡利霉素等。标准品的称取量往往少于100mg，需选用十万分之一的分析天平精密称量，称取量应大于10mg，并且为了减少实验误差，应使用小烧杯或特制的称量壶作为称量容器。第二部分：微生物试验相关知识稀释标准品和供试品所用的缓冲液应用同一瓶内或同一次制备和缓冲液几瓶混匀后使用。如：二氧化氯、戊二醛等。温度、湿度、酸碱度：消毒速度一般随
32、温度的升高而加快，所以温度越高消毒效果越好。应定期用75%酒精擦拭。琼脂扩散法(管碟法）：7、抑菌圈测定仪：用于测定细菌所致抑菌圈直径，也可以用游标卡尺进行测量直径。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法8、超净工作台：用于菌种的接种、传代和菌悬液的制备。超净台应放在洁净工作间或半无菌室内。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法 9、磷酸
33、盐缓冲液：根据兽药典附录或者品种项下要求的配方进行配制、分装、灭菌后备用。常用的缓冲液pH值有6.0、7.0、7.8等。缓冲液的pH值对样品液的稳定性、细菌生长速度和抑菌圈边缘清晰等有影响。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法10、培养基：尽量购置质量稳定的干粉培养基（如中国兽药药品监察所、中国药品生物制品监察所等生产的培养基）。常用的培养基有、VI号等培养基，用前应按使用说明书进行配制，注意调节培养基pH值。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法11、菌种：菌种应由中国兽医药品监察所和中国药品生物制品检定所等国家法定的菌种保藏中心提供。常用的菌种包括：枯
34、草芽孢杆菌CMCC（B）63 501或CVCC717、短小芽孢杆菌CMCC（B）63 202或CVCC709、黄色葡萄球菌CMCC（B）26 003或CVCC1882、藤黄微球菌 CMCC（B）28 001或CVCC1600、大肠埃希菌 CMCC（B）44 103或CVCC2801、肺炎克雷伯菌CMCC（B）46 117 等。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法12、标准品 标准品是指用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或者效价测定的标准物质，一般以效价单位标示，标准品应由国家法定的单位制备、标定和供应，一般常用的标准品来源于中国兽医药品监察所和中国药品生物制品检定所。第三
35、部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法三、管碟法操作步骤 1、称量：标准品从冰箱内取出后，应放置至室温后称取。标准品的称取量往往少于100mg，需选用十万分之一的分析天平精密称量，称取量应大于10mg，并且为了减少实验误差，应使用小烧杯或特制的称量壶作为称量容器。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法 供试品称取量若少于100 mg，称取方法同标准品；供试品取量若多于100 mg，可直接使用称量纸在万分之一的分析天平上精密称量。称量过程中，不能裸手接触称量纸或称量容器。液体制剂量取供试品体积的方法，粘稠的液体不便量取时，可采取称重，然后测定相对密度，折算称体积。
36、第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法2.稀释 稀释标准品和供试品所用的缓冲液应用同一瓶内或同一次制备和缓冲液几瓶混匀后使用。为避免抗生素被玻璃吸附，在量取溶液时，要用被量取的溶液流洗3次。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法3.制备底层 用灭菌的吸管吸取已融化的培养20ml注入培养皿中，稍后盖上陶瓦盖吸收水蒸汽，以免培养基温度过高，加盖陶瓦盖后冷凝水影响菌层的表面平整性（由于冷凝水的局部冷却和稀释作用，可使菌层培养基凝固后表面不平）。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法4.制备菌层 取出试验菌悬液，吸取已试验妥的菌量加入已融化并保温在
37、水浴中（一般细菌48，芽孢60），摇匀作为菌层培养基。然后吸取菌层培养基5ml，使其均匀摊在底层培养基上，置水平台上，用陶瓦盖覆盖，放置20-30分钟，备用。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法5.滴加抗生素溶液至小钢管 采用胶头滴管或者定量加液器向钢管中加溶液。由于滴加先后顺序及时间的不同，抗生素在培养基内扩散有差异。在滴加抗生素溶液时采用S2T2S1T1（标准品高浓度、样品高浓度、标准品低浓度、样品低浓度）的顺序滴加，以减少试验误差。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法 6.培养 加液完毕后，用陶瓦盖覆盖，平稳地移入培养箱中，至35-37 培养至所需
38、的时间。双碟在培养时，不易使双碟靠近培养箱热源较近处，以免造成培养温度不均匀，使同一双碟上细菌生长速度不一致，造成抑菌圈变小或抑菌圈不圆。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法7、抑菌圈测量 从培养箱中取出培养皿，将钢管倒入盛有1：1000新洁尔灭或其他消毒液内，盖上玻璃盖。用抑菌圈测量仪或者游标卡尺测量，然后按生物统计法测定其效价。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法 第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法 第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法相关知识相关知识一、抗生素含量表示方法 1、重量单位：以抗生素中所含特定的
39、抗菌活性部分的重量作为效价单位，一般以1mg相当于1000单位计算，但由于抗生素多以盐的成分存在。红霉素标准品的理论效价为1000单位/mg，但实际生产中红霉素效价不低于920红霉素单位/mg（p97）、硫氰酸红霉素效价不低于750红霉素单位/mg（p288）。4、钢管（牛津杯）普通玻璃、纸张、尘埃等均可阻挡紫外线，因此它只适用于空气消毒或物体表面的消毒。常用的培养基有、VI号等培养基，用前应按使用说明书进行配制，注意调节培养基pH值。有全自动和半自动之分，一般为四孔，要求钢管下落时应垂直平稳、位置正确。第三部分：抗生素微生物检定法第三部分：抗生素微生物检定法烧灼 煮沸法例如表面活性剂对革兰氏
40、阳性菌的灭菌效果比对革兰氏阴性菌好，龙胆紫对葡萄球菌的效果特别强。清洁：能减少微生物附着在无机物体表面的数量的方法。包括 莫能菌素、莫能菌素钠、盐霉素钠、拉沙洛西钠、甲基盐霉素、马杜米星铵、海南霉素钠、赛杜霉素钠等。钢管内外壁要求清洁光滑，两端面应平坦光洁，管壁应厚薄一致，重量差异不超过0.温度、湿度、酸碱度：消毒速度一般随温度的升高而加快，所以温度越高消毒效果越好。第二部分：微生物试验相关知识第三部分：抗生素微生物检定法（二）头孢菌素类第一部分：抗生素定义与分类标准品是指用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或者效价测定的标准物质，一般以效价单位标示，标准品应由国家法定的单位制备、标定和供应，一般常用的标准品来源于中国兽医药品监察所和中国药品生物制品检定所。液体制剂量取供试品体积的方法，粘稠的液体不便量取时，可采取称重，然后测定相对密度，折算称体积。第一部分：抗生素定义与分类如庆大霉素、链霉素、红霉素、大观霉素、安普霉素、泰乐菌素。第三部分：抗生素微生物检定法2、特定单位 如硫酸粘菌素理论值为每1mg相当于30000粘菌素单位，但实际生产中硫酸粘菌素效价不低于1900粘菌素单位/mg（p309）。杆菌肽锌原料效价要求每1mg不少于40杆菌肽单位（p103）。相关知识相关知识
