1、实验二 果蝇杂交试验目的 设计与创新性实验 掌握果蝇的杂交技术和统计处理方法 加深理解遗传的分离规律、自由组合规律及伴性遗传。掌握三点测验的实验方法与基因定位 培养运用所掌握的理论知识独立设计实验和完成实验的能力。突变性状基因符号染色体号性状特征棒眼B1复眼呈狭窄垂直棒形，小眼数少褐眼bw2眼呈褐色卷曲翅Cy2翅膀向上卷曲，纯合致死小翅小翅m1翅膀小，长度不超过身体翅膀小，长度不超过身体白眼白眼w1复眼白色复眼白色黑檀体e3身体呈乌木色，黑亮黑体b2体黑色，比黑檀体深黄体y1全身呈浅橙黄色残翅残翅vg2翅明显退化，部分残留，不翅明显退化，部分残留，不能飞能飞叉毛f1毛和刚毛分叉且弯曲猩红眼st
2、3复眼呈明亮猩红色墨色眼se3羽化时眼呈褐色并深化成墨色实验原理（1）果蝇的单因子杂交（2）果蝇的双因子杂交（3）果蝇的伴性遗传（4）三点测验 三点测验 三隐性亲本雌性与野生型杂交再与纯合隐性亲本测交1.11.1培养基的配制培养基的配制 果蝇培养基实验室内凡能发酵的基质，均果蝇培养基实验室内凡能发酵的基质，均可作为果蝇的饲料。实验室常用的培养基配可作为果蝇的饲料。实验室常用的培养基配制方法是：制方法是：玉米粉为主料：玉米粉为主料：300ml+3g agar+26g sucrose+20g maize powder+2.8g yeast extract防止培养基长霉，加防止培养基长霉，加2ml丙
3、酸作为防腐剂。丙酸作为防腐剂。1 果蝇的饲养果蝇的饲养1.2 配制方法配制方法用水将用水将琼脂琼脂加热溶解加热溶解 再溶入再溶入玉米粉玉米粉 然后加然后加蔗糖蔗糖，边加边搅拌，以防糊底结块。，边加边搅拌，以防糊底结块。煮成稀糊状，停火煮成稀糊状，停火 待待冷却至冷却至50左右左右加入加入酵母粉酵母粉 待冷却至待冷却至不烫手时不烫手时加入丙加入丙酸，搅拌均匀酸，搅拌均匀 分装于已灭菌的培养分装于已灭菌的培养瓶中，厚度瓶中，厚度2.0cm2.0cm即可，封口。即可，封口。1.3 1.3 注意事项注意事项分装前将饲养瓶、棉塞、吸水纸及其它用具和器皿高压分装前将饲养瓶、棉塞、吸水纸及其它用具和器皿高压
4、灭菌（灭菌（1515磅，磅，20min20min）。）。分装时，勿使饲料粘附瓶壁。分装时，勿使饲料粘附瓶壁。待饲料冷却后，待饲料冷却后，洒上一层酵母粉洒上一层酵母粉或滴几滴酵母液于饲料或滴几滴酵母液于饲料表面。用吸水纸擦净瓶壁上水汽，塞上棉塞。表面。用吸水纸擦净瓶壁上水汽，塞上棉塞。准备灭菌的棉塞准备灭菌的棉塞准备灭菌滤纸准备灭菌滤纸包好的棉塞包好的棉塞121灭菌灭菌20min 将果蝇转移到新配制的培养基中繁殖。注意将果蝇转移到新配制的培养基中繁殖。注意转移手法，防止果蝇从两瓶接口飞走。可用黑纸转移手法，防止果蝇从两瓶接口飞走。可用黑纸包住亲本果蝇瓶，让其飞入新培养基瓶。包住亲本果蝇瓶，让其飞
5、入新培养基瓶。转移的亲本及新培养基转移的亲本及新培养基果蝇的转移果蝇的转移1.4 果蝇继代转移培养果蝇继代转移培养1.5 果蝇继代培养果蝇继代培养2525培养培养7-107-10天，能见幼虫天，能见幼虫爬到瓶壁或滤爬到瓶壁或滤纸上化蛹时，纸上化蛹时，处死亲代果蝇。处死亲代果蝇。材材 料料野生型果蝇野生型果蝇突变型果蝇白眼突变型果蝇白眼突变型果蝇残翅突变型果蝇残翅 杂交亲本中所用的母本必须是处女蝇。杂交亲本中所用的母本必须是处女蝇。刚羽化的雌蝇在12 h内一般无交配能力内一般无交配能力。在杂交前35天放出亲本培养瓶中的所有成蝇，每隔1012 h收集一次羽化的成蝇，并将雌雄蝇分开饲养。处女蝇的收集
6、及交配组合处女蝇的收集及交配组合 果蝇雌体生殖器官有受精囊，可保留交配所得果蝇雌体生殖器官有受精囊，可保留交配所得的大量精子，能使日后产下的卵受精。的大量精子，能使日后产下的卵受精。因此在做杂交时，雌体必须选用处女蝇。因此在做杂交时，雌体必须选用处女蝇。雌蝇羽化出来雌蝇羽化出来12小时内一般不会交配。小时内一般不会交配。我们选择在这个时间段内所收集的雌体，均属我们选择在这个时间段内所收集的雌体，均属处女蝇，可放心做为杂交亲本用。处女蝇，可放心做为杂交亲本用。雄体可事先收集好，放在一个新的培养瓶中，雄体可事先收集好，放在一个新的培养瓶中，也可等收集到处女蝇后再收集雄蝇。也可等收集到处女蝇后再收集
7、雄蝇。杂交实验内容杂交实验内容1.果蝇的单因子实验杂交组合果蝇的单因子实验杂交组合长翅长翅 x 残翅残翅(正交）正交）残翅残翅 x 长翅长翅(反交反交)2.果蝇的双因子实验杂交组合果蝇的双因子实验杂交组合 长翅白眼长翅白眼 x 残翅红眼残翅红眼(反交反交)残翅红眼残翅红眼 x 长翅白眼长翅白眼(正交正交)3.果蝇的伴性遗传杂交组合果蝇的伴性遗传杂交组合红眼红眼 x 白眼白眼(正交正交)白眼白眼 x 红眼红眼(反交反交)每每4-5位同学一组，互相协作，共同完成以位同学一组，互相协作，共同完成以上实验上实验1.在杂交前在杂交前1920天按杂交组合数量，计划和培养好天按杂交组合数量，计划和培养好亲本
8、。亲本。2.收集处女蝇：一般选择在晚上收集处女蝇：一般选择在晚上7点钟把亲本点钟把亲本(种蝇种蝇)全全部活的成虫转出处死（一个都不能剩），第二天部活的成虫转出处死（一个都不能剩），第二天7点点钟（钟（12小时内，最好小时内，最好810小时内）把培养瓶里羽小时内）把培养瓶里羽化的成虫转出，并按、分开培养，所得的蝇化的成虫转出，并按、分开培养，所得的蝇即为处女蝇。即为处女蝇。做实验计划，并作记录。做实验计划，并作记录。实验步骤实验步骤3.按各杂交组合需选的果蝇品系，每瓶放入按各杂交组合需选的果蝇品系，每瓶放入34对，塞好瓶塞，贴好对，塞好瓶塞，贴好标签标签，置于室温培，置于室温培养。养。4.过过5
9、6天，可见到天，可见到F1幼虫出现，即除去亲幼虫出现，即除去亲本成虫（成虫一定要除干净）。本成虫（成虫一定要除干净）。5.再过再过45天，观察各杂交组合天，观察各杂交组合F1成蝇的性成蝇的性状，观察时要注意所有用具都要消毒（用状，观察时要注意所有用具都要消毒（用于培养于培养F2），并做好记录。），并做好记录。6.分别把各杂交组合分别把各杂交组合F1 果蝇适度麻醉，然后果蝇适度麻醉，然后选选56对移入新的培养基中继续培养（无对移入新的培养基中继续培养（无需挑处女蝇）。需挑处女蝇）。7、78天后，移去天后，移去F1亲本。再过亲本。再过45天，天，F2成蝇出现，开始观察性状。连续统计成蝇出现，开始观
10、察性状。连续统计78天天。转移出成虫转移出成虫 雄蝇收集雄蝇收集 12小时内，收集处女蝇小时内，收集处女蝇 雄蝇收集雄蝇收集 44，放入一个，放入一个新的培养瓶新的培养瓶中中 F1幼虫幼虫 蛹变黑时去除亲本蛹变黑时去除亲本 观察观察F1代性状，记录代性状，记录 选选5-6对果蝇转移入新的培养瓶对果蝇转移入新的培养瓶 有幼虫时有幼虫时移去移去F1成蝇成蝇 F2成蝇出现时，观察统计成蝇出现时，观察统计（四）配置组合（各配置正反交）（四）配置组合（各配置正反交）1 单因子 残翅 X 正常翅 正常翅 X 残翅每组合两瓶，每瓶2-3对 2.二因子 红眼残翅 X 白眼正常翅 每组合两瓶，每瓶2-3对3 伴
11、性遗传 白眼 X 红眼 红眼 X 白眼每组合两瓶，每瓶2-3对4 三因子杂交 白眼小翅焦刚毛X正常个体每组合两瓶，每瓶2-3对 收集处女蝇收集处女蝇 配制组合（配制组合（2-3对）对）7-8天天F1幼虫出现幼虫出现倒出成蝇倒出成蝇3-4天天F1成蝇成蝇出现出现观察记载统计数目观察记载统计数目 测交测交 自交自交隐性亲本隐性亲本X F1 F1 2-3对对（新培养瓶中）（新培养瓶中）6-7天天 测交后代测交后代 F2 幼虫出现幼虫出现 倒掉亲本蝇倒掉亲本蝇3-4天天 成蝇成蝇 成蝇成蝇 出现出现麻醉麻醉观察观察数量数量X2检验检验1.果蝇要适度麻醉，挑蝇果蝇要适度麻醉，挑蝇用毛笔，忌用镊子和其他工
12、用毛笔，忌用镊子和其他工具，以免影响果蝇生长繁育具，以免影响果蝇生长繁育注意事项注意事项2.挑处女蝇时，挑处女蝇时，每次只挑每次只挑12小时内羽化成小时内羽化成虫，超过虫，超过12小时的成虫已逐渐小时的成虫已逐渐有交配能力有交配能力,必须一只不留地倒必须一只不留地倒出处死出处死,才能进行第才能进行第二次挑选二次挑选3.刚羽化的果蝇色淡白，体软绵，刚羽化的果蝇色淡白，体软绵，难辨，务必小心区别难辨，务必小心区别 4.使用毛笔和瓷板，要用酒精棉球使用毛笔和瓷板，要用酒精棉球消毒，同时必须凉干才能使用。消毒，同时必须凉干才能使用。5.每个杂交组合放果蝇每个杂交组合放果蝇23对，用毛笔把果蝇扫进对，用
13、毛笔把果蝇扫进试管，试管要平放，待蝇醒后，试管，试管要平放，待蝇醒后，方能竖起，避免果蝇粘在培养方能竖起，避免果蝇粘在培养基上被闷死，杂交组合配基上被闷死，杂交组合配好后，放回培养箱。好后，放回培养箱。6、防止因果蝇混杂而导致、防止因果蝇混杂而导致实验失败。实验失败。观察结果统计日期 正 交 反 交红眼果蝇（雌：雄）白眼果蝇（雌：雄）红眼果蝇（雌：雄）白眼果蝇（雌：雄）合 计单因子杂交F1代的结果统计亲本1：亲本2：杂交日期：观察结果统计日期 正 交 反 交红眼果蝇（雌：雄）白眼果蝇（雌：雄）红眼果蝇（雌：雄）白眼果蝇（雌：雄）合 计单因子杂交自交F2代的结果统计 观察结果统计日期 正 交 反 交红眼果蝇（雌：雄）白眼果蝇（雌：雄）红眼果蝇（雌：雄）白眼果蝇（雌：雄）合 计单因子杂交测交的结果统计长翅殘翅合计实验观察数（O）理论数3:1（C）偏差（OC）(o-c)2/c实验结果卡方测验表作作 业业1、写出实验设计，逐步写出实验流程，用箭、写出实验设计，逐步写出实验流程，用箭头、短线示实验流程也可，注明每步骤所头、短线示实验流程也可，注明每步骤所需时间及注意事项。需时间及注意事项。2、参考实验指导书，自行设计实验记录表格、参考实验指导书，自行设计实验记录表格。3、如实记录实验结果，自行设计卡方检验表、如实记录实验结果，自行设计卡方检验表。
