1、 许文波许文波 国家脊灰和国家麻疹实验室国家脊灰和国家麻疹实验室 中国疾病预防控制中心中国疾病预防控制中心 病毒病预防控制所病毒病预防控制所 云南，云南，2011.05.252011.05.25人肠道病毒简介和分类人肠道病毒简介和分类人肠道病毒人肠道病毒 脊髓灰质炎病毒脊髓灰质炎病毒：通过将标本接种至猴子体内，1909年年首次鉴定出该病毒，1949年，利用细胞培养的方法增殖病毒，为疫苗的研制奠定了基础。柯萨奇病毒柯萨奇病毒：1948年年在美国纽约Coxsackie镇，将两名麻痹患儿的标本接种至乳鼠体内，分离出来的一组病毒定名为柯萨奇病毒。根据它们在乳鼠上产生的组织病理学变化和在细胞培养上的能力
2、，分为柯萨奇病毒A组和B组。埃可病毒埃可病毒：1951年年在一名无症状的儿童的粪便标本中分离到，在细胞培养上可以造成致细胞病变，但对乳鼠和灵长类动物不致病。新肠道病毒新肠道病毒：后来后来，新发现的病毒被按照序号命名（6971），最近，已经命名至111型人肠道病毒型别分类早期分类早期分类 现代分类现代分类 血清型血清型 种种speciesspecies 型型 脊灰病毒（脊灰病毒（PVPV）柯萨奇病毒柯萨奇病毒A A组组(CAV)(CAV)1-22,241-22,24 HEV-AHEV-A CAV2-8,10,12,14,16;CAV2-8,10,12,14,16;EV71,76,89EV71,7
3、6,899191 柯萨奇病毒柯萨奇病毒B B组组(CBV)(CBV)1-61-6 HEV-BHEV-B CBV1-6;CAV9;CBV1-6;CAV9;ECHO1-7,9,11-21,24-27ECHO1-7,9,11-21,24-27，29-33;29-33;EV69,73-75,77-EV69,73-75,77-88,93,97,100-11188,93,97,100-111埃柯病毒埃柯病毒(ECHO)(ECHO)1-7,9,11-21,1-7,9,11-21,24-27,29-3324-27,29-33 HEV-CHEV-C 脊灰病毒（PV）,CAV1,11,13,15,17-22,24
4、,CAV1,11,13,15,17-22,24,肠道病毒（肠道病毒（EVEV）68687171 HEV-DHEV-D EV68,70,94EV68,70,94 4 CoxA23与ECHO9为同一病毒，已归入ECHO9 CoxA15与与CoxA11为同一病毒，统一命名为CoxA11 CoxA18与与CoxA13为同一病毒，统一命名为CoxA13 ECHO8与ECHO1为同一病毒，统一命名为ECHO1 ECHO10已归入呼肠孤病毒1型（Reo 1）ECHO22和ECHO23被划分为新的病毒属副肠孤病毒属，分别重新命名为副肠孤病毒副肠孤病毒1型型和2型型 ECHO28归入鼻病毒鼻病毒1A型型 ECH
5、O34并入CoxA24，为CoxA24的变种 鼻病毒鼻病毒87型重新型重新划为肠道病毒肠道病毒68型型 肠道病毒肠道病毒72型型划为肝病毒属中的人甲型肝炎病毒人甲型肝炎病毒 猪水疱病病毒(SVDV)类似于Cox B5型Courtesy of Linda M.Stannard,University of Cape Town,S.A.hu30nmu二十面体对称u无包膜人肠道病毒的毒粒结构人肠道病毒的毒粒结构人肠道病毒的流行病学人肠道病毒的流行病学人人人人环境因素影响经水传播的病原体环境因素影响经水传播的病原体 河流海洋排毒排毒水海产品污水处理厂休闲、娱乐直接、间接接触灌溉盘子门把手洗针对针对 脊灰
6、病毒、脊灰病毒、NPEV、轮状病毒、诺如病毒，甲肝轮状病毒、诺如病毒，甲肝隐性感染多见，很少引起腹泻，婴幼儿、隐性感染多见，很少引起腹泻，婴幼儿、免疫力低下的成人易感。免疫力低下的成人易感。病毒在机体肠道中增殖病毒在机体肠道中增殖，很少引起肠道很少引起肠道症状，是以消化道为原发灶的全身感染。症状，是以消化道为原发灶的全身感染。不同人肠道病毒可引起相同症状，同一不同人肠道病毒可引起相同症状，同一种人肠道病毒可引起不同临床表现。种人肠道病毒可引起不同临床表现。感染过程中形成病毒血症。感染过程中形成病毒血症。致病特点致病特点与人肠道病毒感染相关的疾病与人肠道病毒感染相关的疾病临床特征 病毒由口进入胃
7、肠道，潜伏期为335天，一般714天。90的感染为隐性感染 约5出现流产感染 12为非麻痹性脊髓灰质炎或无菌性脑膜炎 仅约0.1%出现永久性弛缓性肢体麻痹 极少数发展为延髓麻痹与人肠道病毒感染相关的疾病与人肠道病毒感染相关的疾病症状症状 脊灰脊灰 Cox ACox A Cox BCox B EchoEcho麻痹性疾病麻痹性疾病+脑膜炎脑膜炎-脑炎脑炎+心肌炎心肌炎+新生儿疾病新生儿疾病-+胸膜痛胸膜痛-+-咽峡炎咽峡炎-+-发热性疾病发热性疾病-+出血性结膜炎出血性结膜炎.-+-呼吸系统感染呼吸系统感染+不明原因发热不明原因发热+糖尿病糖尿病/胰腺炎胰腺炎-+-引起的疾病引起的疾病麻痹性疾病麻
8、痹性疾病 脊灰病毒是最常见的引起麻痹性疾病的病原体，但脊灰病毒是最常见的引起麻痹性疾病的病原体，但 其它病毒有时也可引起，如肠道病毒其它病毒有时也可引起，如肠道病毒 71型（型（EV71）无菌性脑膜炎无菌性脑膜炎 所有人肠道病毒都可以引起所有人肠道病毒都可以引起,尤其常见于尤其常见于 5岁以下儿童；岁以下儿童；脑炎脑炎 典型或者不典型的脑炎可能伴有脑膜炎症状大典型或者不典型的脑炎可能伴有脑膜炎症状大 部部 分病例恢复后不留后遗症分病例恢复后不留后遗症；“不明原因不明原因”发热发热 由由A组柯萨奇病毒（组柯萨奇病毒（Cox A16）和）和EV71引起，但引起，但 B组柯萨奇病毒和某些埃可病毒也经
9、常造成暴发；组柯萨奇病毒和某些埃可病毒也经常造成暴发；咽峡炎咽峡炎 由由 A组柯萨奇病毒引起；组柯萨奇病毒引起；传染性传染性胸膜痛胸膜痛(博恩霍尔姆氏病博恩霍尔姆氏病，Bornholm disease)通常由通常由B组柯萨奇病毒引起；组柯萨奇病毒引起；手足口病手足口病 手足口病皮疹分布手足口病皮疹分布 1.颊粘膜和手指颊粘膜和手指;2.手掌手掌；3.足底足底；4.唇粘膜；唇粘膜；5.咽峡炎咽峡炎12345无皮疹的手足口病重症病例无皮疹的手足口病重症病例1 1HFMDHFMD引起关注的原因引起关注的原因2 2HFMDHFMD的定义和相关病毒病原的定义和相关病毒病原3 3HFMDHFMD的标本的采
10、集的标本的采集4 4中国中国HFMDHFMD实验室网络的初步建立和运转实验室网络的初步建立和运转5 5中国大陆中国大陆HFMDHFMD流行、现状和趋势流行、现状和趋势6 6中国大陆中国大陆20082008年年-2009-2009年年HFMD HFMD 的病原谱的病原谱7 7分子流行病和血清流行病分子流行病和血清流行病8 8HFMDHFMD病理特征病理特征9 9HFMDHFMD预防和治疗预防和治疗手足口病手足口病Hand-foot-mouth Disease,HFMD阜阳手足口病阜阳手足口病“阜阳阜阳1313例不明原因肺炎死亡病例例不明原因肺炎死亡病例”病例高度散发病例高度散发 不具有传染性，可
11、能为感染性疾病不具有传染性，可能为感染性疾病 只在一例中发现疹子只在一例中发现疹子 以以“重症肺炎重症肺炎”为主要临床表现为主要临床表现 病情进展迅速，病情进展迅速，大部分入院几小时大部分入院几小时-2-2天天 死亡死亡 病因不明病因不明“疫情概况疫情概况”图图3.2008 年年3月月1日至日至5月月9日阜阳市日阜阳市HFMD病例数病例数1.1.阜阳聚集死亡病例和较多重症病例的出现阜阳聚集死亡病例和较多重症病例的出现2.2.发病到死亡进展迅速，引起社会恐慌发病到死亡进展迅速，引起社会恐慌3.3.临床上无特效药物临床上无特效药物,重症的早期预警存在重症的早期预警存在一定难度一定难度4.4.对疫情
12、的扩散无有效的控制手段对疫情的扩散无有效的控制手段,无疫苗无疫苗5.5.第第3838种法定传染病种法定传染病 HFMD HFMD引起关注的原因引起关注的原因 阜阳不明原因肺炎死亡病原学鉴定阜阳不明原因肺炎死亡病原学鉴定4月18，中国CDC组织专家组流行病学临床资料实验室检测EV71是此次疾病的主要致病原是此次疾病的主要致病原证实证实4月月23日日分析判定病原和实验室检测方向为分析判定病原和实验室检测方向为=HEV71从从3月月 23至至4月月29阜阳市死亡病例阜阳市死亡病例(共共22例例)早期死亡病例15确认确认 EV71为致病原为致病原2715例死亡病例的临床症状例死亡病例的临床症状临床症状
13、临床症状病例数病例数比例（比例（%）发热发热15100呼吸急促呼吸急促1493.3口唇紫绀口唇紫绀1280.0粉红色泡沫痰粉红色泡沫痰960.0咳嗽咳嗽746.7呕吐呕吐853.3肌阵挛肌阵挛320.0手足部皮疹手足部皮疹640.0卡他性鼻炎卡他性鼻炎213.3颈项强直颈项强直213.3病例病例类型类型病例数病例数HFMDHFMD病例病例EV71EV71核酸检测核酸检测阳性数阳性数阴性数阴性数阳性率阳性率轻症轻症158158147147111193.04%93.04%重症重症161613133 381.25%81.25%阜阳重症和轻症病人的咽拭子阜阳重症和轻症病人的咽拭子EV71EV71核酸阳
14、性率核酸阳性率 阜阳阜阳2008年年3月月1至至5月月9日不同年龄组的日不同年龄组的HFMD病例病例u 90%以上病例为以上病例为5岁以下儿童岁以下儿童uEV71为阜阳为阜阳2008年年HFMD爆发的绝对优势血清型爆发的绝对优势血清型二二.HFMD.HFMD的定义和相关病毒病原的定义和相关病毒病原HFMDHFMD是由多种肠道病毒引起的一种儿童常见是由多种肠道病毒引起的一种儿童常见传染病，是我国法定报告管理的丙类传染病传染病，是我国法定报告管理的丙类传染病大多数患者症状轻微，以发热和手、足、口大多数患者症状轻微，以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要临床症状。腔等部位的皮疹或疱疹为主要临床
15、症状。少数患者可出现无菌性脑膜炎、脑炎、急性少数患者可出现无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、神经源性肺水肿和心肌炎等，弛缓性麻痹、神经源性肺水肿和心肌炎等，个别重症患儿病情进展快，可导致死亡。个别重症患儿病情进展快，可导致死亡。手足口病预防控制指南（手足口病预防控制指南（2009版）版）HFMDHFMD的定义的定义Courtesy of Linda M.Stannard,University of Cape Town,S.A.hu30nmu二十面体对称u无包膜人肠道病毒（人肠道病毒（HEV71）的毒粒结构）的毒粒结构u 病原病原:HFMD:HFMD可由可由2020多种肠道病毒所引起，其中包括
16、柯萨奇病毒、埃多种肠道病毒所引起，其中包括柯萨奇病毒、埃可可 病毒和肠道病毒新的血清型。病毒和肠道病毒新的血清型。CoxACoxA组的组的1616、4 4、5 5、7 7、9 9、1010等型等型,CoxBCoxB组的组的2 2、5 5等型等型,以以CoxA16 CoxA16 和和EV71EV71最为常见。最为常见。u 传播途径传播途径:粪粪-口途径传播口途径传播:唾液与粪便唾液与粪便;呼吸道传播呼吸道传播:空气飞沫空气飞沫;接触传播接触传播u 疱疹液中含大量病毒，疱疹破溃后病毒排出。疱疹液中含大量病毒，疱疹破溃后病毒排出。u HFMDHFMD为全球性传染病，多发生于为全球性传染病，多发生于5
17、 5岁以下的婴幼儿岁以下的婴幼儿,在全球广泛分在全球广泛分 布，无明显的地域分布布，无明显的地域分布,但近年但近年EV71EV71在东南亚几个国家或地区流行在东南亚几个国家或地区流行,引引起较多的重症和死亡病例。起较多的重症和死亡病例。HFMD的相关病毒病原的相关病毒病原CoxA16CoxA16 19571957年在加拿大首次报告，新西兰年在加拿大首次报告，新西兰SeddonSeddon于于19571957年最年最早加以描述，早加以描述，19581958年加拿大年加拿大RobinsonRobinson从患者粪便和咽从患者粪便和咽拭中分离出拭中分离出CoxA16CoxA16，同时患者血清抗体有四
18、倍增长，同时患者血清抗体有四倍增长,初初步查明步查明CoxA16CoxA16为本病病原；为本病病原；19591959年提出年提出HFMDHFMD命名，命名，HFMDHFMD在全球广泛流行，无明显在全球广泛流行，无明显的地域分布。的地域分布。发热发热,不适不适,咽喉肿痛咽喉肿痛,口腔、手、脚侧面及掌心、口腔、手、脚侧面及掌心、屁股屁股出现小泡出现小泡 传染性极高传染性极高 病程约病程约1 1周周19721972年年EV71EV71在美国被首次确认，在美国被首次确认，19741974年年SchmidtSchmidt等首次发表从美等首次发表从美国加利福尼亚州国加利福尼亚州2020例具有中枢神经系统症
19、状患者（例具有中枢神经系统症状患者（1969197319691973年年）中分离到）中分离到EV71EV71。随后，世界上众多国家都有随后，世界上众多国家都有EV71EV71流行的报道。流行的报道。EV71EV71感染可引起感染可引起HFMDHFMD、疱疹性咽峡炎、无菌性脑炎、脑干脑炎和脊髓灰质炎样、疱疹性咽峡炎、无菌性脑炎、脑干脑炎和脊髓灰质炎样麻痹，但更多情况下是产生隐性感染。同脊灰病毒相似，麻痹，但更多情况下是产生隐性感染。同脊灰病毒相似，EV71EV71对脊髓前角细胞具有一定的组织嗜性，是最常见的引起急性迟对脊髓前角细胞具有一定的组织嗜性，是最常见的引起急性迟缓性麻痹（缓性麻痹（acu
20、te flaccid paralysisacute flaccid paralysis，AFPAFP）的非脊灰肠道病）的非脊灰肠道病毒（毒（non-polio non-polio enterovirusenterovirus，NPEVNPEV）。）。EV71EV71潜伏期一般为潜伏期一般为3 37 7天天,感染感染EV71EV71后，患者发病后，患者发病1212周内可自周内可自咽部排出病毒，从粪便中排毒可持续至发病后咽部排出病毒，从粪便中排毒可持续至发病后3535周。周。疱疹液中含大量病毒，疱疹破溃后病毒排出。疱疹液中含大量病毒，疱疹破溃后病毒排出。肠道病毒肠道病毒7171型（型（entero
21、virusenterovirus 71 71，EV71EV71）三.标本采集尸检标本尸检标本肛拭子标本肛拭子标本疱疹液标本疱疹液标本血清标本血清标本咽拭子标本咽拭子标本粪便标本粪便标本脑脊液标本脑脊液标本36p 用于病毒分离的标本包括粪便、咽拭子和疱疹液用于病毒分离的标本包括粪便、咽拭子和疱疹液p 如果患者出现神经系统症状，应该采集脑脊液标本。如果患者出现神经系统症状，应该采集脑脊液标本。p 在手足口病的实验室诊断中，从疱疹液或脑脊液中分离在手足口病的实验室诊断中，从疱疹液或脑脊液中分离 病毒具有很高的诊断意义。病毒具有很高的诊断意义。p 用于采集咽拭子的无菌拭子要放在适当的保存液中，如用于采
22、集咽拭子的无菌拭子要放在适当的保存液中，如 病毒保存液。病毒保存液。p 为了保证检测结果的准确性和有效性，标本应在病例发为了保证检测结果的准确性和有效性，标本应在病例发 病后尽早采集，尽快检测。病后尽早采集，尽快检测。p 不能立即检测的标本应冷冻保存。不能立即检测的标本应冷冻保存。p 对于血清学诊断，急性期血清应该在发病后尽早采集，对于血清学诊断，急性期血清应该在发病后尽早采集，恢复期血清在发病恢复期血清在发病2-4周后采集。周后采集。标本采集注意事项标本采集注意事项细胞系细胞系 RD细胞，来源于人横纹肌肉瘤细胞细胞，来源于人横纹肌肉瘤细胞 HEp-2细胞，来源于人喉癌上皮细胞细胞，来源于人喉
23、癌上皮细胞 Vero细胞，来源于非洲绿猴肾细胞细胞，来源于非洲绿猴肾细胞 可联合使用可联合使用RD和和HEp-2，或者，或者RD和和Vero细胞系进行肠道病毒的分离。细胞系进行肠道病毒的分离。联合使用联合使用RD、HEp-2和和Vero细胞，有助细胞，有助于提高肠道病毒检出率。于提高肠道病毒检出率。HainanBeijingTianjingXinjiangGansuXizangQinghaiNeimengHeilongjiangJilinLiaoningHebeiGuangdongHunanHenanFujianZhejiangJiangsuShanghaiTaiwanShanxiNingxi
24、aShaanxiChongqingYunnanGuizhouSichuanGuangxiJiangxiHubeiAnhuiShandong四四.中国中国HFMD实验室网络的初步实验室网络的初步建立和运转建立和运转2131.国家实验室国家实验室2.31个省级实验室个省级实验室3.部分地市实验室部分地市实验室l HFMDHFMD实验室网络标准化技术的建立及应用实验室网络标准化技术的建立及应用l 操作规程的制定，包括：操作规程的制定，包括：u标本的采集和运输标本的采集和运输u从临床标本直接进行从临床标本直接进行EV71EV71和和CVA16V RT-PCRCVA16V RT-PCR鉴定鉴定uEV71
25、EV71和和CVA16 CVA16 的的Real-time PCRReal-time PCR鉴定鉴定uEV71EV71和和CVA16 VP1CVA16 VP1全长的全长的RT-PCRRT-PCR扩增扩增u用用RD/HEp-2RD/HEp-2细胞分离细胞分离EV71EV71和和CVA16CVA16uEV71-IgMEV71-IgM抗体的检测抗体的检测l 建立了中国建立了中国HFMDHFMD相关病原毒株库和数据库相关病原毒株库和数据库l 培训培训:2008:2008年年4 4月初在郑州，月初在郑州，1212月在杭州，月在杭州，20092009年年7 7月在青岛分别举办月在青岛分别举办 了了HFMD
26、HFMD实验室检测技术培训班；实验室检测技术培训班；20092009年年4 4月月7-107-10日在北京举办了发热出日在北京举办了发热出 疹症侯群检测和监测技术培训班，疹症侯群检测和监测技术培训班，20102010年深圳年深圳HFMDHFMD实验室网络培训班实验室网络培训班 31个省级实验室个省级实验室1国家实验室国家实验室部分地市级实验室部分地市级实验室l 肠道病毒分离物基因分型肠道病毒分离物基因分型,血清流行病学检测血清流行病学检测,诊诊 断方法建立断方法建立l 质量控制质量控制 l 对省级实验室提供技术支持对省级实验室提供技术支持 lRT-PCR,Real time PCR和和 IgM
27、检测。检测。l肠道病毒分离和鉴定肠道病毒分离和鉴定l对地级实验室的质量控制对地级实验室的质量控制l 对地级实验室提供技术支持对地级实验室提供技术支持l RT-PCR,Real time PCR和和 IgM检检 测。负责测。负责 采集标本采集标本，待检标本待检标本病毒分离病毒分离CPE阳性阳性RT-PCR基因定型基因定型肠道病毒肠道病毒非肠道病毒非肠道病毒EV71或或CA16-IgM或测双份血或测双份血清中和抗体滴度清中和抗体滴度RT-PCRReal time RT-PCR检测病毒核酸检测病毒核酸基因定型基因定型无无CPE常规实验常规实验补充实验补充实验中和定型中和定型手足口病的实验室检测流程见
28、下图：手足口病的实验室检测流程见下图：建立多种建立多种HFMDHFMD诊断方法诊断方法u 诊断诊断RT-PCR:RT-PCR:从临床标本直接进行检测从临床标本直接进行检测u 基因型鉴定基因型鉴定RT-PCRRT-PCR：VP1VP1全长全长u 用用RD/HeP2RD/HeP2细胞分离肠道病毒标准程序（细胞分离肠道病毒标准程序（SOPSOP）u 磁珠法自动化提取咽拭子和粪便标本中肠道病毒核酸磁珠法自动化提取咽拭子和粪便标本中肠道病毒核酸u 基于颜色的等温扩增技术（基于颜色的等温扩增技术（LAMPLAMP）检测）检测EV71EV71和和CA16CA16核酸核酸u nRTnRT-PCR-PCR自动化
29、工作站检测自动化工作站检测EV71EV71、CVA16CVA16和肠道病毒核酸和肠道病毒核酸u rRTrRT-PCR-PCR单通道快速检测肠道病毒单通道快速检测肠道病毒u rRTrRT-PCR-PCR单通道快速检测单通道快速检测EV71EV71病毒病毒u rRTrRT-PCR-PCR单通道快速检测单通道快速检测CA16CA16病毒病毒u rRTrRT-PCR-PCR双通道快速检测肠道病毒和双通道快速检测肠道病毒和EV71EV71病毒病毒u rRTrRT-PCR-PCR双通道快速检测双通道快速检测EV71EV71病毒和病毒和CA16CA16病毒病毒u rRTrRT-PCR-PCR三通道快速检测肠
30、道病毒、三通道快速检测肠道病毒、EV71EV71病毒和病毒和CA16CA16病毒病毒u EV71EV71和和CA16CA16血清中和抗体检测方法（微量细胞中和试验）血清中和抗体检测方法（微量细胞中和试验）u 环境污水中肠道病毒提取、纯化和检测技术环境污水中肠道病毒提取、纯化和检测技术相关检测方法应用于相关检测方法应用于HFMD爆发的诊断和鉴别爆发的诊断和鉴别诊断，满足了不同层次省、地市和县级医疗诊断，满足了不同层次省、地市和县级医疗卫生机构开展卫生机构开展HFMD实验室检测和监测的迫切实验室检测和监测的迫切需要需要HFMD检测、监测技术和标准的建立及应用检测、监测技术和标准的建立及应用待检标本
31、待检标本病毒分离病毒分离CPE阳性阳性RT-PCR基因定型基因定型肠道病毒肠道病毒非肠道病毒非肠道病毒测双份血清测双份血清中和抗体滴度中和抗体滴度RT-PCRReal time RT-PCR基因定型基因定型无无CPE常规实验常规实验补充实验补充实验中和定型中和定型贝尔公司使用我们研制的核心技术研制了贝尔公司使用我们研制的核心技术研制了ELISAELISA检测血清中检测血清中EV71-IgMEV71-IgM抗体试剂盒：第一个获得抗体试剂盒：第一个获得药监局文号药监局文号关键诊断技术和监测技术关键诊断技术和监测技术实验室诊断方法 病毒分离鉴定 病毒核酸的检测普通RT-PCR荧光定量RT-PCR 血
32、清学检测急性期/恢复期血清中和抗体滴定ELISA法检测血清IgM和IgG手足口病的诊断一般是通过采集适当的临床标本手足口病的诊断一般是通过采集适当的临床标本后进行基因检测、抗原检测、血清学抗体检测、病后进行基因检测、抗原检测、血清学抗体检测、病毒分离和病毒鉴定。毒分离和病毒鉴定。很多血清型的肠道病毒能引起手足口病，不同细很多血清型的肠道病毒能引起手足口病，不同细胞系对不同病毒的敏感性是有所不同的，而不同时胞系对不同病毒的敏感性是有所不同的，而不同时期肠道病毒的流行株也不同。期肠道病毒的流行株也不同。通常用于肠道病毒分离的细胞系为通常用于肠道病毒分离的细胞系为RD、HEp-2、Vero等，联合使
33、用上述的两种或更多细胞有助于分等，联合使用上述的两种或更多细胞有助于分离到更多的肠道病毒。离到更多的肠道病毒。手足口病的实验室检测手足口病的实验室检测质量控制质量控制q31个省级网络实验室骨干标准化操作技术培训个省级网络实验室骨干标准化操作技术培训q各网络实验室负责培训地市实验室骨干各网络实验室负责培训地市实验室骨干q标本采集的时间分布、数量和质量的定期核查标本采集的时间分布、数量和质量的定期核查q职能考核职能考核(血清、核酸）血清、核酸）q标本复核标本复核(血清、核酸）血清、核酸）q实验室现场督导和认证实验室现场督导和认证q临床、流行病和实验室信息管理临床、流行病和实验室信息管理q质量保证质
34、量保证质量保证质量保证 省级统一核酸检测方法省级统一核酸检测方法 统一病毒分离方法统一病毒分离方法 (提供用于病毒分离的细胞系提供用于病毒分离的细胞系RD,HeP2RD,HeP2等等)试剂盒（或方法学）的评价试剂盒（或方法学）的评价 使用组合标本或核酸评价所使用的试剂盒使用组合标本或核酸评价所使用的试剂盒 仪器校对仪器校对 生物安全柜：每年一次生物安全柜：每年一次 加样器：每加样器：每3 36 6个月一次个月一次 温度监测（培养箱）温度监测（培养箱）标准操作规程（标准操作规程（SOPSOP）：血清学血清学 细胞培养、病毒分离细胞培养、病毒分离 PCRPCR，RT-PCRRT-PCR，Real
35、time PCRReal time PCR 记录记录 电子版和实验记录本电子版和实验记录本 标本和病毒的储存标本和病毒的储存 专家组对本实验室的认证评估专家组对本实验室的认证评估 发热伴出疹，发热发热伴出疹，发热37.5，持续一天以上，持续一天以上，伴有全身或局部的皮肤或粘膜出疹。伴有全身或局部的皮肤或粘膜出疹。肠道病毒（肠道病毒（HEV71，CA16）登革热病毒登革热病毒麻疹、麻疹、风疹、风疹、B19 其它其它发热伴出疹症候群发热伴出疹症候群伤寒、副伤寒伤寒、副伤寒链球菌链球菌伯氏疏螺旋体（莱姆病）伯氏疏螺旋体（莱姆病）水痘水痘Relative levels of antibody IgM
36、sensitivity 70%071421283542-7-14-210246810RashonsetDays after rash onsetIgGIgMInfectionvirus excretion用于IgM抗体检测的血清标本要在初次接触病人时马上采集，以及出疹后28天内采集用于病毒分离的标本,需出疹天内采集咽拭子或尿液必要日期必要日期:最后接种日期最后接种日期出疹日期出疹日期出生日期出生日期五五.中国大陆中国大陆HFMDHFMD流行、现状和趋势流行、现状和趋势1981年，我国在上海首次报道了HFMD病例1987年在中国分离到EV71早期发现的手足口病的病原体主要为Cox A16型。此后
37、，EV 71感染与Cox A16感染交替出现，成为手足口病的主要病原体。我国80年代流行的手足口病病原以Cox A16为主；1998以来，各地报道的手足口病病原以EV71型和Cox A16交叉流行或同时流行为主。1995年以来，我国陆续在武汉、深圳、上海、重庆、山东和安徽等地的HFMD患者中分离到EV71病毒。2007年，山东发生了手足口病爆发流行，累计报告HFMD病例39，606例，其中14例病例死亡。实验室检测发现EV71是引起山东临沂HFMD的主要病原，同时还检测到Echo3 和/或 CVA16。2008年-2010年7月:中国大陆出现CoxA16 和EV71 共循环引起手足口病爆发,部
38、分地区以EV71为绝对优势型别,少数以CoxA16 为优势型别，同时还有其它肠道病毒循环引起的手足口病。AUSTRALIABaliINDONESIAJavaBorneoHalmaheraNew GuineaSumbaPHILIPPINESBruneiMALAYSIASINGAPOREVIETNAMTHAILANDCAMBODIALAOSBURMACHINAINDIAJAPANPalawanHong KongTaiwan亚太地区HFMD暴发1997Malaysia34 deaths1998Taiwan78 deathsVarious4 deaths1999Australia29 severe c
39、asesTaiwan9 deaths2000Singapore7 deathsTaiwan41 deathsMalaysia4 deaths JapanHFMD epidemicCanada City outbreaks2001Taiwan58 deathsAustralia44 severe cases2002Taiwan30 deaths2003MalaysiaHFMD epidemicTaiwan8 deathsChina(Macao)at least 1 deathChina(Beijing)5cases/day2004Taiwan5 deathsUSACity outbreak of
40、 HFMDUKSchools closed2005Singapore15247 HFMD cases2006MalaysiaSchools&Playgrounds closed for 2 weeksSingapore15000 cases with school closures2007China80,000 cases,17 deathsSingapore20,000 cases 2008Singapore17,000 cases to date with school closuresTaiwan200,000 cases,10 deaths confirmed(17)China175,
41、000 cases,44 deathsVietnam 2,000 cases?,11 deathsEV71毒株各个基因型/亚型流行的地理和年代分布基因型基因型流行地区流行地区流行时间流行时间A A美国美国19701970B1B1美国、澳大利亚、中国台湾、匈牙利、保加美国、澳大利亚、中国台湾、匈牙利、保加利亚、日本利亚、日本1972198719721987B2B2美国、美国、1981198719811987B3B3马来西亚、澳大利亚、新加坡马来西亚、澳大利亚、新加坡1997199919971999B4B4马来西亚、新加坡、中国台湾、日本马来西亚、新加坡、中国台湾、日本19972002199720
42、02B5B5马来西亚马来西亚20032003C1C1美国、澳大利亚、马来西亚、新加坡、越南美国、澳大利亚、马来西亚、新加坡、越南、泰国、日本、泰国、日本1986200519862005C2C2美国、澳大利亚、日本、中国台湾、美国、澳大利亚、日本、中国台湾、1995200219952002C3C3中国、韩国中国、韩国19971997、20032003C4C4中国、越南、日本、中国台湾中国、越南、日本、中国台湾1998200719982007C5C5越南越南20052005中国大陆手足口病报告人数中国大陆手足口病报告人数 2008年：报告年：报告489073例例 发病率为发病率为37.01/100
43、,000 重症病例重症病例1165例例，占报告病例数的，占报告病例数的 0.24%死亡死亡126例，病死率例，病死率 0.26传染病疫情网络数据库统计分析传染病疫情网络数据库统计分析 2008年全国各省手足口病病例数及发病率年全国各省手足口病病例数及发病率传染病疫情网络数据库统计分析传染病疫情网络数据库统计分析2008年全国手足口病病例发病及死亡时间分布年全国手足口病病例发病及死亡时间分布传染病疫情网络数据库统计分析传染病疫情网络数据库统计分析2010年手足口病地区分布 发病数 发病率2010年部分重症及死亡病例年龄、性别分布特点 重症病例重症病例死亡病例死亡病例病例数病例数229752297
44、5781781男女性别比男女性别比1.911.911.971.973 3岁及以下（岁及以下（%）82.0482.0488.9788.975 5岁及以下（岁及以下（%）96.6496.6498.5998.59最小年龄最小年龄不足不足1 1月月1 1个月个月最大年龄最大年龄3131岁岁1010岁岁六六.HFMD.HFMD 的病原谱的病原谱 中国大陆中国大陆20082008年年-2010-2010年年8 8月月1515日日 阐明了手足口病的病原构成比例（阐明了手足口病的病原构成比例（2008）n重症病例（重症病例（1165例）例）：EV71 占占 实验室确实验室确诊的严重病例的诊的严重病例的81.5
45、9 n死亡病例（死亡病例（126例）例）：EV71 占占 实验室确实验室确 诊的死亡病例的诊的死亡病例的 96.43 病原学病原学中国大陆中国大陆20082008年年HFMD HFMD 的的病原谱病原谱 Viral etiology of HFMD in China samples HEV71 CVA16 Others 4,769 790(16.6%)214(4.5%)75(1.6%)表表1.HFMD患者临床标本的肠道病毒分离率和构成患者临床标本的肠道病毒分离率和构成Table1A.Isolation rate of HEV from Clinical samples of HFMD Case
46、s samples HEV71 CVA16 Others18,153 4,636(25.5%)1,092(6.0%)1740(9.6%)表表2.HFMD患者临床标本的肠道病毒患者临床标本的肠道病毒PCR检出率和构成检出率和构成 Table1B.PCR positive rate of hev from Clinical samples of HFMD Cases阐明了中国大陆阐明了中国大陆HFMD病原谱构成病原谱构成类型类型病例数病例数实验室实验室确诊数确诊数实验室实验室确诊率确诊率（%）EV71(%)CoxA16（%）其它肠其它肠道病毒（道病毒（%）普通病例普通病例1775105636243
47、.5952.6627.8219.51重症病例重症病例279151328248.8481.63.7514.6死亡病例死亡病例90564571.2792.400.786.82类型类型病例数病例数实验室实验室确诊数确诊数实验室实验室确诊率确诊率（%）EV71(%)CoxA16（%）其它肠其它肠道病毒（道病毒（%）普通病例普通病例1141792193511.7040.6337.5521.82重症病例重症病例13811413329.9280.604.6114.80死亡病例死亡病例35422262.7292.801.365.862009年年2010年年发现绝大部分死亡病例和大部分重症病例是由发现绝大部分死
48、亡病例和大部分重症病例是由EV71引起引起病原学病原学64 2010年广西桂林全州县手足口病实验室监测结果年广西桂林全州县手足口病实验室监测结果全州县实验室确诊全州县实验室确诊HFMD106例，占报告病例总数的例，占报告病例总数的2.31%，其中，其中EV71阳性阳性77例，占实验室确诊病例的例，占实验室确诊病例的72.64%,其他其他EV阳性阳性29例，占实验室确诊病例的例，占实验室确诊病例的27.36%。重症病例中，。重症病例中，EV71阳性阳性62例，占实验室确诊重症病例的例，占实验室确诊重症病例的72.09%病例病例类型类型病例数病例数实验室确诊实验室确诊数数实验室确诊率实验室确诊率（
49、%）EV71构成比（构成比（%）其他其他EV构成比构成比（%）普通病例 4290200.477525重症病例 3028628.4872.0927.91死亡病例10101008020Group 1病毒引物名称扩增片段长度肠道通用引物153EV71-SA263CoxA 16-SA245CA12163CB4167CB5193CA16203CB1223CB2233CA6243CA9251CA10273CB3 282CA24296CA4256组合检测方法组合检测方法-单管检测单管检测HFMD病原的构成病原的构成发热伴出疹症候群病原谱构成及其流行规律发热伴出疹症候群病原谱构成及其流行规律病原谱病原谱年龄分
50、布年龄分布发热伴出疹症候群病毒病原原谱的时间趋势发热伴出疹症候群病毒病原原谱的时间趋势加强加强HFMDHFMD病原检测和监测的十分必要病原检测和监测的十分必要 掌握手足口病病原谱，特别是掌握手足口病病原谱，特别是EV71EV71感染所占的比例，对分析感染所占的比例，对分析 判断判断HFMDHFMD疫情导致重症和死亡的比例有重要的科学参考价值。疫情导致重症和死亡的比例有重要的科学参考价值。1.1.19981998年台湾手足口病暴发疫情中，在年台湾手足口病暴发疫情中，在48.7%48.7%轻症病例中、轻症病例中、7575住院病例中、住院病例中、9292死亡病例中均分离到死亡病例中均分离到HEV71
