1、第一讲 痰涂片镜检本节内容导航痰检工作的目的和意义国家结核病规划（NTP）与结核病细菌学实验室网络检查对象结核菌的形态和结构电子显微镜下的结核分枝杆菌染色特性萋萋尼氏染色镜下形态本节内容导航 痰涂片操作程序常见标本的收集及处理痰标本的采集容器痰标本的采集留取标本痰标本的运送标本的性状直接涂片的步骤染色的步骤痰检工作的目的和意义 在结核病控制工作中痰结核菌涂片镜检对于发现传染源、确定诊断和化疗方案、考核疗效、评价防治效果具有重要意义 是国家结核病控制规划(NTP)的重要组成部分，在现代结核病控制工作中起着不可缺少的重要作用1 2 国家结核病规划（NTP）与结核病细菌学实验室网络 结核病细菌学实验
2、室通过日常、有效的细菌学（病原学）诊断，发现传染源、决定化疗方案和评价治疗效果为实现NTP的重要目标服务 痰涂片镜检服务必需在健全的细菌学实验室网络中才能实现 1 2 国家结核病规划（NTP）与结核病细菌学实验室网络 结核病高负担国家NTP主要通过实施现代结核病控制策略（DOTS）来实现 痰涂片镜检是结核病细菌学实验室服务中最重要的内容之一。痰涂片镜检发现传染源是DOTS策略的重要组成部分 3 4 结核病症状体征咳血或伴有血痰发热或胸痛超过2周持续咳嗽咳痰超过3周 检查对象胸部X线异常凡因结核病症状求诊及转诊的可疑肺结核患者，均应进行痰直接涂片检查确定诊断确定诊断的涂片检查应采集3个合格的痰标
3、本就诊当时在门诊留一份“即时痰”标本，同时给患者2个痰盒，嘱患者留取“夜间痰”和“晨痰”，于次日交验检查对象 检查对象 治疗中或复诊随访病人按期每次送检两份痰(当 日即时痰、当日或次日晨痰）初治涂阳患者在疗程满2、5、6月时 复治涂阳患者在疗程满2、5、8月时疗效评价经萋尔-尼尔逊染色后在显微镜内蓝色背景下呈红色杆状宽度为0.30.6um，生长发育期间形成分枝光学显微镜下为细长稍弯曲，两端钝圆的杆菌，菌体长度多为1.53.5um结核菌的形态和结构结核分枝杆菌n细胞质n核物质n 细胞壁n细胞膜结核分枝杆菌结核菌的形态和结构电子显微镜下的结核分枝杆菌Gram-positiveS.aureus Gr
4、am-negative E.coli Acid fast M.tuberculosis 结核菌的形态和结构电子显微镜下的结核分枝杆菌 结核杆菌用革兰氏染色，着色较差但呈兰色，列为G菌 结核杆菌用普通的染色方法不易着色，在染液 中加入石炭酸后才可着色12结核菌的形态和结构染色特性 抗酸染色时，因结核杆菌菌体含有大量脂质，其脂质的含量占分枝杆菌之首，占菌体干重的40%，因脂质的含量大，所以不易着色，但经过加热或者提高石炭酸的浓度、延长染色时间等处理以后才能着色3结核菌的形态和结构染色特性 一旦着色，不易被盐酸酒精脱色，而其他细菌均被脱色，把不被盐酸酒精脱色的细菌称为抗酸菌，这种方法称为抗酸染色法4
5、结核菌的形态和结构染色特性结核菌的形态和结构萋萋尼氏染色镜下形态【胸腹水】【脑脊液】【尿标本】【脓液、病灶组织】【痰标本，肺部深咳的痰】痰涂片操作程序常见标本的收集及处理【胸腹水的采取】于试管中加20%的枸橼枸橼酸钠35滴，或10%的草酸钾 56滴，可防止1520ml 胸腹水凝固。无菌采取胸腹 水以后应立即送检。可采取离心集菌或漂浮集菌法检查痰涂片操作程序常见标本的收集及处理 【纤维支气管镜刷检物】可将毛刷直接进行抗酸染色,也可将刷检标本洗脱于装有无菌生理盐水的试管中,再涂片检查 痰涂片操作程序常见标本的收集及处理【脑脊液的采取】无菌手术取得脑脊液以后，3000转离心30分钟，取沉淀物涂片染色
6、检查 结核性的脑脊液放在冰箱中4过夜以后，会在液面形成一个倒漏斗状的薄膜，取此薄膜涂片染色镜检痰涂片操作程序常见标本的收集及处理 【尿标本的采取】通常留取清晨第一次全尿或中后段夜尿,也可留取24小时的尿液，放冰箱或阴凉处，静置，去上清，留沉淀部分5060ml送检，取此沉淀液，经3000转，离心30分钟，取沉淀部分2ml直接涂片，染色检查 痰涂片操作程序常见标本的收集及处理 脓液直接涂片染色镜检 病灶组织或干酪样组织需充分研碎后再涂片检查痰涂片操作程序常见标本的收集及处理 当前,贵州省疾病预防控制机构结核病实验室进行痰检 工作的耗材由项目统一提供：螺旋盖痰瓶 可密封的塑料盒 可密封的蜡纸盒痰涂片
7、操作程序痰标本的采集容器痰涂片操作程序痰标本的采集容器痰涂片操作程序痰盒图例痰涂片操作程序痰盒图例痰标本的采集痰容器应标明病人姓 名、编号（检查项目 和容器序号1、2、3 （1当日即时痰，2 夜间痰，3次日 晨痰）通用螺旋盖 痰瓶，或可 密封塑料盒 蜡纸盒收集 痰标本如：张三，涂片 581，582 58-3痰涂片操作程序痰标本的采集痰瓶上标明病人姓名，初诊门诊序号（或随访病人登记号）痰标本留取后，痰盒、严防痰液外溢，应立即送检进行细菌学检查时，应在登记本和检验报告单上留取标本痰涂片操作程序留痰时应嘱咐病人尽量深咳，留取痰量35毫升干酪痰、血痰、黏液痰为合格的标本唾液属不合 格痰标本留取标本 难
8、以获得合格标本时，也应进行细菌学检查，但 应注明标本性状，以供分析结果时参考 需送上一级实验室检查的痰标本应置4冰箱保存，外送前认真核对检验单与痰瓶上标注，放专用的冰 盒内运送，或用纸袋、塑料袋封装扎牢后顺序放入 包装盒，盒外注明请勿倒置标志 痰涂片操作程序痰标本的运送合格的痰标本应是患者深呼吸后，由肺部深处咳出的分泌物 核心是肺部坏死组织中间层是支气管分泌物外层是 口腔黏液痰涂片操作程序标本的性状 【干酪痰】标本外观以黄色(或奶酪色)、脓样、团块状的肺部 分泌物为主，粘度较粘液痰低，制片时较易涂抹涂片染色后镜检，可发现大量脓性炎症细胞、肺上 皮脱落细胞由于此类标本是由肺部深处咳出，对肺结核的
9、诊断 最有价值，故抗酸杆菌(以下简称AFB)的检出率较高痰涂片操作程序标本的性状 【血痰】此类标本是因粘液痰或干酪痰标本中混有血液而形成 颜色为褐色或深褐色、鲜红色或伴有血丝涂片染色后镜检除能够观察到粘液痰或干酪痰的细胞 特征外，含新鲜血液的标本中可见到被染色的血细胞由于含血标本易干扰AFB镜检的结果，故在制片时应尽 量避免挑取含血标本痰涂片操作程序标本的性状痰涂片操作程序【粘液痰】标本外观以白色、粘稠度较高的肺部和支 气管分泌物为主，制片时需仔细涂抹此类标本的AFB检出率较唾液高标本的性状痰涂片操作程序【粘液痰】涂片染色后镜检时，镜下可见支气管内膜纤毛柱状上皮细胞 (细胞较长且形态不规则、细
10、胞核和细胞质着色均较深，细胞 一端可见着色较浅的纤毛)，伴有少量肺上皮脱落细胞(多数 为圆形、细胞核较小且着色较细胞质深，核质比大于 1:3)、脓性炎症细胞(卵圆形、细胞核占细胞比例较大且着色较 深，核质比低于 1:1)、口腔脱落细胞及口腔寄生菌标本的性状【唾液】目视观察标本整体外观，以透明或半透明水样、粘度 较低的口腔分泌物为主，标本中有时伴有气泡涂片染色镜检时，镜下可见少量口腔上皮脱落细胞(形 态不规则、细胞核着色较细胞质深，核质比接近或大 于 1:2)和口腔内寄生菌，有时可见食物残渣由于此类标本进行AFB检查时的检出率很低，用于对患 者确定诊断时是不合格的标本痰涂片操作程序标本的性状 不
11、同痰液涂片阳性率表（仅供示例）性质例数阳性数阳性率干酪痰553665.5%血痰461634.8%粘液痰5295610.6%唾液92 77.6%痰涂片操作程序标本的性状细胞核质比，白细胞，说明痰的质量较好痰涂片操作程序标本的性状上皮细胞多，说明标本质量差痰涂片操作程序标本的性状【清洁无划痕的新玻片脱脂、干燥】编号无磨砂面的玻片，需用玻璃刻刀或用标签纸有磨砂面的玻片，可用铅笔编号痰涂片操作程序直接涂片的步骤【清洁无划痕的新玻片脱脂、干燥】使用折断的竹签茬端，取痰标本中干酪样或脓样 0.050.1毫升，涂于玻片右2/3处，均匀涂抹 10 x20毫米大小的椭圆形痰膜痰膜朝上，待自然干燥(一般20分钟)
12、痰涂片操作程序直接涂片的步骤1020mm20mm10mm痰涂片操作程序涂片面积复染(亚甲兰)脱色(盐酸酒精)初染(碱性复红)染色过程痰涂片操作程序染色步骤 【初染】将玻片放置染色架上，玻片间距保持10毫米以上距离 火焰（5秒钟将玻片过火4次）滴加石炭酸复红染液，火焰加热至出现蒸汽，勿使沸腾 脱离火焰，保持5分钟染色步骤痰涂片操作程序痰涂片操作程序【脱色】流水自玻片一端清 缓冲洗染色液，沥 去玻片上的水，滴 加脱色液，保持1 分钟染色步骤痰涂片操作程序【复染】滴加亚甲蓝复染 液，保持30秒钟流水冲洗，沥去 玻片上的水玻片干燥后镜检染色步骤将涂片排放在染色架上，注意间隔痰涂片操作程序染色步骤滴加碱
13、性复红痰涂片操作程序染色步骤加热痰涂片操作程序染色步骤流水冲洗洗痰涂片操作程序染色步骤脱色痰涂片操作程序染色步骤流水轻缓冲洗痰涂片操作程序染色步骤复染痰涂片操作程序染色步骤流水洗去复染液 痰涂片操作程序染色步骤在玻片架上自然干燥痰涂片操作程序染色步骤滴加亚甲兰复染液保持1分钟123 4 56 7将涂片排放在染色架上滴加碱性复红染色液加热出现蒸汽后，保持5分钟流水轻缓冲洗滴加脱色液，保持1分钟流水轻缓冲洗流水轻缓冲洗痰涂片操作程序染色过程太厚太大、不均匀太大、不均匀、脱色不佳涂片不佳、不均匀太小脱落脱落太薄不均匀、脱落、脱色不佳痰涂片操作程序染色过程痰涂片操作程序染色后外观本节小结v本讲课内容主要从痰涂片镜检的角度讲述了结核病防治实验室痰检工作中新的进展v本讲中的重点内容是痰涂片的操作程序，辅以开篇的背景知识帮助理解
