1、1 2第二章 杀虫剂室内生物测定n一、杀虫剂室内生物测定的一般原则n1、供试昆虫尽量一致n虫态、虫龄和生理上尽可能一致n2、控制环境因素尽量一致n温度、湿度、光照对杀虫剂和昆虫的生理状态都有影响3一、杀虫剂室内生物测定的原则n3、必须设立对照，一般至少设2种对照n空白对照(溶剂对照)n标准药剂对照4一、杀虫剂室内生物测定的原则n4、必须设重复n生物测定的测试的对象不是昆虫个体，而是群体。n一般重复至少4次，每个重复20-50头试虫。n(田间试验重复35次)。5二、影响杀虫剂毒力测定的因素n1、杀虫剂：n一般用原药，纯度95%以上，用丙酮配制。n许多杀虫剂都有同分异构体，测定时应用纯的化合物。n
2、避免农药加工中的助剂对生物测定的影响。6二、影响杀虫剂毒力测定的因素n2、昆虫n2-1、昆虫的发育阶段n一般杀虫剂对卵几乎都没有毒性：卵壳的特殊保护作用n蛹一般对杀虫剂也不太敏感n成虫的性别、营养及生理条件对其敏感性影响较大。n对幼虫而言，低龄幼虫对杀虫剂比较敏感。7二、影响杀虫剂毒力测定的因素n2-2、昆虫的性别与生殖状态n性别的影响主要表现在成虫期，在毒力测定中，对多数昆虫，一般都规定只用一个性别。n雌虫往往耐药性更强。n雌虫产卵后，对杀虫剂变得敏感些。这可能与体重、脂肪含量和代谢能力有关。8二、影响杀虫剂毒力测定的因素n2-3、昆虫的生理因素n越冬虫：耐药性较高n体内脂肪含量影响敏感性n
3、新陈代谢率越高，呼吸率越高，对杀虫剂的敏感性越大。9二、影响杀虫剂毒力测定的因素n2-4、昆虫的种群异质性nA、自然耐药力nB、健壮耐药力nC、杀虫剂的抗药性n在毒力测定中，应选择异质性小的种群。10二、影响杀虫剂毒力测定的因素n3、环境条件对毒力测定的影响n3-1、温度n正温度系数、负温度系数（2030）n温度的影响：穿透作用、解毒代谢n处理前低温处理果蝇、蜚蠊等，可提高对DDT的抗性，这与低温饲养中形成的不饱和脂肪有关。11二、影响杀虫剂毒力测定的因素n3、环境条件对毒力测定的影响n3-1、温度n处理后的低温可使死亡增加，但杀死昆虫的时间延长。30以上的高温也能使死亡率增加。12二、影响杀
4、虫剂毒力测定的因素n3、环境条件对毒力测定的影响n3-2、湿度与水分n相对湿度对熏蒸剂的影响较大n湿度对昆虫引诱剂及拒避剂有显著影响。13二、影响杀虫剂毒力测定的因素n3、环境条件对毒力测定的影响n3-3、光照n光照对毒力测定的影响是间接的。在光照条件下，家蝇对DDT药膜的死亡率较高，原因是光照增加了其活动性。14二、影响杀虫剂毒力测定的因素n3、环境条件对毒力测定的影响n3-4、营养与饥饿n有的营养物质可增加昆虫体内的解毒酶n对胃毒剂的测定，饥饿是必要的。n饥饿可增加敏感性。15三、供试昆虫的处理n室内毒力测定原则上用室内种群n对野外采集的种群，尽量选用一致的个体。(并在室内饲养1-2代)1
5、6三、供试昆虫的处理n1、一般移取法n对棉铃虫等大个体昆虫，可用镊子n对蚜虫、红蜘蛛等，可用毛笔，注意刺吸式口器的口针。17三、供试昆虫的处理n2、趋光法n家蝇、果蝇等都有趋光性。18三、供试昆虫的处理n3、麻醉法n3-1、二氧化碳法；n3-2、挥发蒸气法：乙醚、三氯甲烷与乙醚（1：1）等，家蝇的麻醉时间一般在4分钟以内。n3-3、冷冻法：适于家蝇、蜚蠊等试虫，一般分两步，先在5下冷冻10分钟，再在0 下冷冻2-3分钟。19三、供试昆虫的处理n4、吸虫法：n赤拟谷盗、米象等，用真空管等吸虫。20三、供试昆虫的处理n5、结果检查n需要数清活动力强试虫时，可把活虫烘死后再数。n对红蜘蛛等可采用下列
6、方法：n局部高温法。放与60W的灯罩下烘，使活虫爬走。2122232425卵形玻璃喷头卵形玻璃喷头 26 I-沉降喷雾塔；沉降喷雾塔；II-雾化器雾化器 27颇特喷雾塔的喷头颇特喷雾塔的喷头 28 29 一对钢质空气柜一对钢质空气柜（0.46m0.46m0.46m）和空气柜相连接的直径）和空气柜相连接的直径0.148m的铝质的铝质圆筒状风道圆筒状风道以及一个以及一个控制台控制台。底座左。底座左端有一调速鼓风机，右端封闭。鼓风机将空气吹到端有一调速鼓风机，右端封闭。鼓风机将空气吹到右边空气柜，经风道进入左边空气柜排出，而左边右边空气柜，经风道进入左边空气柜排出，而左边空气柜和实验室排风系统相连。
7、喷头安在风道的右空气柜和实验室排风系统相连。喷头安在风道的右边，喷头的喷嘴可以任意更换，喷嘴直径边，喷头的喷嘴可以任意更换，喷嘴直径0.045mm。装试虫的笼子放在风道左端。装试虫的笼子放在风道左端。气雾风道气雾风道 30313233四、杀虫剂毒力测定方法n1、胃毒剂毒力测定n基本原理：使杀虫剂随食物一起被目标昆虫吞食进入消化道而发挥毒杀作用。n根据取食量的差异分为无限取食法和定量取食法。34四、杀虫剂毒力测定方法n1-1 无限取食法n药量不易掌握，有拒食效应时更难获得满意结果n1-1-1饲料混药喂虫法n拟谷盗、米象和麦蛾等仓库害虫；以药剂与食物的比例作为含药浓度的表示方法，一般5-7天检查死
8、亡情况。35四、杀虫剂毒力测定方法n1-1 无限取食法n1-1-2 培养基混药法n人工含毒培养基，果蝇。n其它方法：种子拌药法、糖浆混药法、毒耳法。36四、杀虫剂毒力测定方法n1-2 定量取食法n能准确地测定吞食的剂量n1-2-1叶片夹毒法（sandwich method）n取食量大的咀嚼式口器昆虫n按取食多少排列，分为生存组、死亡组和中间组，按中间组计算；250BALD37四、杀虫剂毒力测定方法n1-2 定量取食法n1-2-2 液滴饲喂法（feeding of measured drop）n舐食性昆虫，如家蝇、果蝇、蜜蜂等，用微量注射器形成小的液滴(0.010.001ml)，直接饲喂昆虫。3
9、8The leaf sandwich test for insecticide stomach poisoning activityn1、适应昆虫n鳞翅目幼虫，一般三龄以上，饥饿48小时，选取50头，电子天平称重，计算平均体重。n2、药剂：n原药，水溶性原药先用蒸馏水溶解，再用丙酮等有机溶剂稀释；水不溶性原药选用丙酮（或乙醇，二甲基亚砜等）按等比（或等差）稀释成5-7个浓度。39The leaf sandwich test for insecticide stomach poisoning activityn3、夹毒叶片的制做n用直径1厘米的打孔器打叶碟，放入培养皿中，保湿。用点滴器从低浓度到
10、高浓度每叶点滴12L药液，溶剂挥发后，和另一片涂有淀粉糊的叶碟对合制成夹毒叶片，放入12孔培养板的孔内。每处理4个重复，每重复至少12个含毒叶片。40The leaf sandwich test for insecticide stomach poisoning activityn4、药剂处理n每孔接一头试虫，于正常条件下培养，接虫24小时后，待试虫取食完含毒叶片后，（未取食完含毒叶片的淘汰掉）。加入干净饲料继续观察。n5、调查：24小时 后（根据实验要求和目的可适当调节时间），调查死虫数和活虫数。41The leaf sandwich test for insecticide stomach
11、 poisoning activityn6、数据处理：可用SAS，DPS软件。记算毒力回归方程，LD50，95%置信限，相关系数等。剂量以 g（药剂）/g（虫）表示。42四、杀虫剂毒力测定方法n2 触杀剂毒力测定n用较高浓度（或剂量）的杀虫剂施于虫体的体表，使虫体充分接触药剂而发挥触杀作用。n2-1喷粉法及喷雾法nPotter喷雾塔n真空喷粉器n沉降喷雾塔43四、杀虫剂毒力测定方法n2 触杀剂毒力测定n2-2浸渍法n常用于有效化合物筛选试验（screen test），被联合国粮农组织（FAO）推荐为蚜虫抗药性的标准测定方法。n此法不是单纯的触杀毒力。44四、杀虫剂毒力测定方法n2 触杀剂毒力测
12、定n2-3玻片浸渍法（slide-dip method）n此法为FAO推荐为螨类抗药性的标准测定方法。45The Immersion test for insecticide activityn1、靶标昆虫n鳞翅目幼虫，同翅目的蚜虫类、叶蝉类、飞虱类，鞘翅目成虫如马铃薯瓢虫，缨翅目昆虫如蓟马等。n2、药剂n水溶性药剂直接用水溶解、稀释，其它药剂选用合适的有机溶剂（如丙酮、氯仿、乙醇等）溶解，再用含有适量表面活性如0.1%吐温80（或0.1%Triton-X100）的水溶液稀释。每浓度药液量不少于50mL。46The Immersion test for insecticide activity
13、n3、药剂处理n将靶标昆虫浸入药液中 510s后，用滤纸吸取多余药液，将试虫转移至正常条件下饲养，每处理4次重复，每重复1020头。并设不含药剂的相应的有机溶剂处理作为对照。47The Immersion test for insecticide activityn4、调查：24小时 后（根据实验要求和目的可适当调节时间），调查死虫数和活虫数。n5、数据处理：可用SAS，DPS软件。记算毒力回归方程，LD50，95%置信限，相关系数等。48四、杀虫剂毒力测定方法n2 触杀剂毒力测定n2-4药膜法（residual films）n将一定量的杀虫剂，采用浸渍、点滴、喷洒等方法施于物体表面，形成一个
14、均匀的药膜，然后放入一定量的供试目标昆虫，让其爬行接触一定时间后，再移到正常的环境条件下，于规定时间内观察试虫的中毒死亡反死，计算击倒率或死亡率。49四、杀虫剂毒力测定方法n2 触杀剂毒力测定n2-4药膜法（residual films）nA、滤纸药膜法nB、容器药膜法nC、蜡纸粉膜法50四、杀虫剂毒力测定方法n2 触杀剂毒力测定n2-5点滴法（topical application）n点滴法是将一定量的药液点滴到供试目标昆虫体壁的一定部位，来测定杀虫药剂穿透表皮而引起昆虫中毒致死的触杀毒力。n此法是杀虫剂触杀毒力测定中最准确的方法。51四、杀虫剂毒力测定方法n2 触杀剂毒力测定n2-5点滴法
15、（topical application）n点滴部位一般为胸部背板n家蝇成虫：1L/头n菜青虫、玉米螟、棉铃虫三龄虫0.1L/头n五龄虫0.51 L/头n蚜虫一般0.030.05 L/头.52四、杀虫剂毒力测定方法n2 触杀剂毒力测定nA、微量点滴仪53四、杀虫剂毒力测定方法n2 触杀剂毒力测定nB、电动微量点滴器54四、杀虫剂毒力测定方法n2 触杀剂毒力测定nC、毛细管微量点滴器55The topical application test(点滴法)for insecticide contact activityn1、靶标试虫：鳞翅目3-4龄幼虫，同翅目成虫或若虫，点滴时可用乙醚或CO2麻醉处
16、理。n2、杀虫剂：原药，水溶性原药先用蒸馏水溶解，再用丙酮等有机溶剂稀释；水不溶性原药选用丙酮（或乙醇，二甲基亚砜等）按等比（或等差）稀释成5-7个浓度。56The topical application test(点滴法)for insecticide contact activityn3、药剂处理：用毛笔挑取试虫于培养皿中，用（毛细管）点滴器逐头点滴，鳞翅目幼虫点前胸背板，药量一般0.51L；蚜虫、叶蝉等滴于腹部，药量一般0.020.1L。n点滴完后放正常条件下饲养。n重复：每处理4次重复，每重复至少15虫n对照：以对应的有机溶剂为对照。对照死亡率不得超过20%。57The topical
17、 application test(点滴法)for insecticide contact activityn4、结果检查：24（可根据情况调节）小时后检查死虫数和活虫数（死亡标准需注明）。n5、数据处理：可用SAS，DPS软件。记算毒力回归方程，LD50（LC50），95%置信限，相关系数等。58四、杀虫剂毒力测定方法n3 熏蒸剂毒力测定n熏蒸剂的药量计算以单位容积内的药剂用量来表示（mg/L 或 ml/L）n温度越高，杀虫剂对目标昆虫的熏蒸毒力越强，昆虫的呼吸作用也越强。n测定条件：一般25，相对湿度50%59四、杀虫剂毒力测定方法n3 熏蒸剂毒力测定nA、二重皿法60四、杀虫剂毒力测定方
18、法n3 熏蒸剂毒力测定nB、广口瓶法61四、杀虫剂毒力测定方法n3 熏蒸剂毒力测定n、药纸熏蒸法62四、杀虫剂毒力测定方法n3 熏蒸剂毒力测定n、三角瓶法63Erlenmeyer flask test(锥形瓶法)for insecticide fumigant activityn1、靶标昆虫n鳞翅目幼虫，同翅目的蚜虫类、叶蝉类、飞虱类、鞘翅目成虫（一般羽化2周后的成虫）如玉米象、赤拟谷盗等n2、药剂：熏蒸剂宜使用原药，浓度以mg/L计。64Erlenmeyer flask test(锥形瓶法)for insecticide fumigant activityn3、药剂处理：准备500mL的锥形
19、瓶，将试虫笼悬挂于瓶的中部，按预定的剂量加入供试药剂于瓶底，薰蒸处理1h后将试虫转移到正常条件下饲养。每处理4次重复，每重复不少于50头试虫，设不含药剂的处理作为对照。n4、调查：一般24（根据试验要求和药剂特点可适当调节）小时调查试虫死死情况。数据处理同其它方法。65四、杀虫剂毒力测定方法n4 内吸作用（systemic action）毒力测定nA、根系内吸法nB、叶部内吸法nC、茎部内吸法nD、种子内吸法66四、杀虫剂毒力测定方法n5、忌避剂毒力测定n将定量药剂均匀地施于植株上或部分植株上，再接入一定量的目标昆虫，置于正常环境中，定期观察目标昆虫的取食情况，用坐标纸法测量被昆虫取食面积。6
20、7四、杀虫剂毒力测定方法n5、忌避剂毒力测定%1001 对照叶被食面积处理叶被食面积忌避程度%的总取食量处理叶片及未处理叶片处理叶片的取食量拒食率 68四、杀虫剂毒力测定方法n6、杀卵活性测定：The dipping test for insecticide ovicidal activityn(1)靶标昆虫：一般为鳞翅目的初产卵n(2)药剂：水溶性药剂直接用水溶解、稀释，其它药剂选用合适的有机溶剂（如丙酮、氯仿、乙醇等）溶解，再用含有适量表面活性如0.1%吐温80（或0.1%Triton-X100）的水溶液稀释。每浓度药液量不少于50mL。69The dipping test for insecticide ovicidal activityn(3)卵卡制作：取长30mm宽20mm白色硬板，以双面胶粘贴初产卵，每卡卵量不低于30粒，对不适于制作卵卡的试虫，可直接剪取适宜大小的卵块或者对有靶标卵的基质直接进行处理。n(4)药剂处理：将卵卡浸入药液510s后，转移至正常条件下培养。每处理4次重复。n(5)数据处理，同上。70本章重点n一、杀虫剂毒力测定的一般原理n二、影响杀虫剂毒力测定的主要因子；n三、杀虫剂毒力测定的常用方法；
