1、第六章 典型药物分析技术典型药物分析技术学习目标1.掌握典型药物的鉴别和含量测定的方法原理2.熟悉典型药物中主要特殊杂质的来源及检查方法3.了解典型药物的结构特征和主要理化性质4.学会根据药品质量标准，对典型药物进行鉴别、检查和含量测定操作，学会正确计算和判断检查结果。导学情景情景描述：小王协助检查盐酸普鲁卡因的质量。老师要求他查阅该药物的药典相关内容，他清楚了如何分析盐酸普鲁卡因的质量。学前导语：分析依据是药典。通过本章学习，同学们学会如何进行检验药物的结构性质等基础知识。第一节第一节 水杨酸类药物的分析水杨酸类药物的分析一、典型药物的结构和性质药典2015年版收载的水杨酸类药物有消毒防腐药
2、水杨酸；解热镇痛非甾体抗炎药阿司匹林；抗结核药对氨基水杨酸钠。阿司匹林酯键 水解性羧基 酸性贝诺酯1.酯键 水解性2.酰胺键 水解后重氮化偶合反应3.苯环 紫外特征吸收对氨基水杨酸钠1.芳香第一胺 重氮化偶合反应2.酚羟基 三氯化铁反应3.钠盐的鉴别反应二、阿司匹林制剂的分析（一）性状 1.外观与臭味 白色结晶粉末，酸味2.溶解度 水中微融，在氢氧化钠中溶解，分解。（二）鉴别 1.三氯化铁反应 加三氯化铁，显示紫色阿司匹林，贝诺酯分子中无酚羟基，与三氯化铁试液不发生显色反应。但加热，加碱，产生酚羟基，发生反应。2.水解反应 阿司匹林有酯键，发生水解反应。3.红外分光光度法4.高效液相色谱法（三
3、）杂质检查1.溶液的澄清度 反应的过程中出现各种杂质，杂质的特点是不含羧基，利用药物与杂质在碳酸钠中溶解度的差异，来检查杂质。2.游离水杨酸 生产过程中乙酰化不完全等产生水杨酸，药典2015年版采用高效液相色谱法检查游离水杨酸。3.有关物质（四）含量测定1.（阿司匹林）的含量测定（1）原理：阿司匹林羧基和氢氧化钠发生中和反应（2）方法：直接酸碱滴定法，阿司匹林加中性乙醇，加酚酞，用氢氧化钠滴定。（3）注意：阿司匹林用中性乙醇溶解，选用酚酞作为指示剂，中性乙醇的配制。2.阿司匹林制剂的含量测定 采用高效液相色谱法NH2COOCH2CH2N(C2H5)2HCl H3C(H2C)3HNCOOCH2C
4、H2N(CH3)2HCl NH2COOCH2CH3R1HNCOOR2HONHCOCH3H3COCHNSNHCOCH3OONHCOCH2N(C2H5)2H3CCH3HCl H2ONHCOCH3CH3NC4H9HClR3R4R1NHCOR2二、盐酸普鲁卡因及其制剂的分析（一）性状1.外观和臭味2.溶解度 水中易溶解（二）鉴别1.芳香第一胺反应 又名重氮化偶合反应，盐酸普鲁卡因，加盐酸，加亚硝酸钠生成重氮盐，再加碱性萘酚，出现颜色。2.水解反应 加氢氧化钠，出现沉淀；加热变成油状物，出现的蒸汽使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；待油状物消失后，放冷，加盐酸，出现白色沉淀。3.红外分光光度法4.氯化物反应5
5、.高效液相色谱法 注射液采用此法进行鉴别。（三）杂质检查 1.杂质来源 酯键水解产生。最后可能出现苯胺，苯胺被氧化为有色物质，变黄，疗效下降，毒性增加。2.检查方法 药典2015年版规定，采用高效液相色谱法检查盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸。Ar-NHCOR+H2OH+Ar-NH2+RCOOHAr-NH2+NaNO2+2HClAr-N2+Cl-+NaCl+2H2O永停滴定法盐酸普鲁卡因的含量测定盐酸普鲁卡因含量=VTF10-3/m100%V:滴定液消耗的体积T：每毫升滴定液相当于待测物的质量F：矫正因子，溶液的真实浓度/溶液的理论浓度三、对乙酰氨基酚及其制剂的分析（一）性状 1.外观与臭味 白色结
6、晶粉末，无臭味2.溶解度 热水中易溶解，水中略溶解（二）鉴别1.三氯化铁反应 对乙酰氨基酚有酚羟基，发生三氯化铁反应。2.水解产物出现芳香第一胺反应 对乙酰氨基酚水解出现对氨基酚，因此与亚硝酸钠，碱性萘酚发生重氮化偶合反应。3.红外分光光度法进行鉴别4.高效液相色谱法 对乙酰氨基酚注射液、泡腾片等。5.紫外-可见分光光度法（三）杂质检查1.乙醇溶液的澄清度与颜色 2.对氨基酚及有关物质（1）杂质来源 ：对乙酰氨基酚中间产物，有毒变色，有害人体。（2）检查方法：高效液相色谱法3.对氯苯乙酰胺 高效液相色谱法检查杂质（四）含量测定1.对乙酰氨基酚的含量测定（1）原理 利用紫外吸收-分光光度法（2）
7、方法（3)计算 A/E/100VD/m2.对乙酰氨基酚制剂的含量测定 均采用高效液相色谱法OC4C6O1NHNH3H2C25CO(5-1)第三节第三节 巴比妥类药物分析巴比妥类药物分析一、典型药物结构与性质R1R2苯巴比妥：二酰亚胺基团 弱酸性 酰亚胺 水解性 丙二酰脲 与重金属离子反应 苯环 与苯环作用司可巴比妥 双键 还原性，被氧化硫喷妥钠 硫元素 与醋酸铅试液反应补充知识：1.PH=2的酸性溶液 不含硫的巴比妥药物无明显紫外吸收，而含硫的有。2.PH=10 硫喷妥钠有大峰和小峰。巴比妥药物最大吸收峰一般在240波长处3.PH=13 硫喷妥钠只有304大峰。巴比妥药物最大峰变为255nm处
8、。（二）鉴别1.丙二酰脲类的鉴别反应（1）银盐反应苯巴比妥在碳酸钠溶液中，加硝酸银，一银盐，可以溶解，再过量加硝酸银，最后不溶解。（2）铜盐反应供试品加吡啶-硫酸铜，出现紫色或者绿色。2.苯环的鉴别反应（1）硫酸-亚硝酸钠反应：显色（2）甲醛-硫酸：显色无苯环的无此反应，用来区别（三）杂质检查1.酸度 控制副产物苯基丙二酰脲2.乙醇溶液的澄清度3.有关物质 高效液相色谱法4.中性或碱性物质 控制副产物 比如酰胺类杂质，原理利用这类杂质不溶于氢氧化钠而溶于乙醚，而苯巴比妥溶于氢氧化钠，用乙醚提取杂质后称重，判断杂质是否超过限量。（四）含量测定1.苯巴比妥的含量测定 银量法（1）原理：苯巴比妥与硝
9、酸银反应生成银盐（2）方法（3）计算 VTF/m(4)注意：碳酸钠溶液必须新鲜配制，用电位法指示终点。2.苯巴比妥片的含量测定 采用高效液相色谱法第四节第四节 杂环类药物的分析杂环类药物的分析杂环化合物：指环状有机化合物的碳环中夹杂有非碳素原子杂环化合物：指环状有机化合物的碳环中夹杂有非碳素原子（如（如O O、S S、N N等）的化合物，主要包括以下两类等）的化合物，主要包括以下两类1 1、天然有活性的，例如生物碱、抗生素和维生素类、天然有活性的，例如生物碱、抗生素和维生素类2 2、化学合成的，含、化学合成的，含O O（呋喃），含（呋喃），含N N（吡啶、嘧啶），含（吡啶、嘧啶），含S S（吩
10、噻嗪）吩噻嗪）本章主要介绍含氮和含硫的杂环类药物本章主要介绍含氮和含硫的杂环类药物共性:(1)杂环类药物是合成药物中所占比例最多的一大类药物。(2)多为五元环或六元环，单环或并合环。(?)(3)杂环结构一般稳定，不易开环，其性质受杂原子种类、数目、位置影响。(4)杂环上取代基性质较活泼，常用于分析。(?)(5)含氮杂环，其碱性的强弱往往用于分析。结构与化学性质含有N原子的六元单环，例如：异烟肼、尼克刹米和硝苯地平NNNHNHNH2ONCH3CH3OH3COOCH3CH3COOCH3NO2异烟肼(isoniazid)尼克刹米(nikesethamide)硝苯地平(nifedipine)CClNC
11、NNHCH3OCH2123456789CClNCNCH2CH3O987654321 氯氮卓 地西泮 二二 、异烟肼制剂分析、异烟肼制剂分析（一）性状本品为无色结晶，白色或类白色的结晶性粉末；无臭，味微甜后苦；遇光渐变质。本品在水中易溶，在乙醇中微溶，在乙醚中极微溶解。鉴别（1）取本品约10mg，置试管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸银试液1ml，即发生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。（2）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。（3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（药品红外光谱集166图）一致。（三）杂质检查（三）杂质检查1.1.离肼离
12、肼取本品，加丙酮水（取本品，加丙酮水（1：1）溶解并稀释制成每）溶解并稀释制成每1ml中约含中约含100mg的溶液，作为供试品溶液；另取硫酸肼对照品，加丙的溶液，作为供试品溶液；另取硫酸肼对照品，加丙酮水（酮水（1：1）溶解并稀释制成每）溶解并稀释制成每1ml中约含中约含0.08mg（相当于游离肼（相当于游离肼20g）的溶液，作为对照品溶液；取异烟肼与硫酸）的溶液，作为对照品溶液；取异烟肼与硫酸肼各适量，加丙酮水（肼各适量，加丙酮水（1：1）溶解并稀释制成每）溶解并稀释制成每1ml中分别含异烟肼中分别含异烟肼100mg及硫酸肼及硫酸肼0.08mg的混合溶液，作为系统适的混合溶液，作为系统适用性
13、试验溶液。照薄层色谱法（用性试验溶液。照薄层色谱法（2010年版药典二部附录年版药典二部附录 B）试验，吸取上述三种溶液各）试验，吸取上述三种溶液各5l，分别点于同一硅胶，分别点于同一硅胶G薄层薄层板上，以异丙醇丙酮（板上，以异丙醇丙酮（3：2）为展开剂，展开，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，）为展开剂，展开，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15分钟后检视。系统适用分钟后检视。系统适用性试验溶液所显游离肼与异烟肼的斑点应完全分离，游离肼的性试验溶液所显游离肼与异烟肼的斑点应完全分离，游离肼的Rf值约为值约为0.75，异烟肼的，异烟肼的Rf值约为值约为0.56。在供试品溶液主。在供试
14、品溶液主斑点前方与对照品溶液主斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。斑点前方与对照品溶液主斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。2.2.有关物质有关物质取本品，加水溶解并稀释制成每取本品，加水溶解并稀释制成每1ml中约含中约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置，置100ml量瓶中，用水稀释量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液10l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的成分色谱峰的峰高约
15、为满量程的20%;再精密量取供试品溶液与对照溶液各再精密量取供试品溶液与对照溶液各10l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的成分峰保留时间的3.5倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.35倍（倍（0.35%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（1.0%）。）。（四）含量测定（高效液相色谱法）用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02mol/L磷酸氢二钠溶液（用磷酸调pH值至
16、6.0）甲醇（85：15）为流动相；检测波长为262nm。理论板数按异烟肼峰计算不低于4000。测定法取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，精密量取10l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取异烟肼对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。地西泮及其制剂的分析地西泮及其制剂的分析（一）性状1.外观 本品为白色或类白色的结晶性粉末；无臭2.溶解度 本品在丙酮或三氯甲烷中易溶，在乙醇中溶解，在水中几乎不溶。（二）鉴别1.硫酸-荧光反应 取本品约10mg,加硫酸3ml，振摇使溶解，在紫外光灯（365nm)下检视，显黄绿色荧光。2.紫外线分光光度法 取本品，加0.5硫酸
17、的甲醇溶液制成每1ml中含5g的溶液，照紫外线-可见分光光度法（通则0401）测定，在242nm、284nm与366nm波长处有最大吸收；在242nm波长处的吸光度约为0.51，在284nm波长处的吸光度约为0.23。3.红外分外分光光度法 本品的红外吸收图谱应与药品红外光谱集中相应的对照图谱（光谱集138图）一致。4.氯化物的鉴别 取本品20mg，用氧瓶燃烧法（通则0703）进行有机破坏，以5氢氧化钠5ml为吸收液，燃烧完全后，用稀硝酸酸化，并缓缓煮沸2分钟，溶液显氯化物鉴别（1）的反应（通则0301）地西泮结构中的氯原子以共价键与苯环相连，结合牢固，不能直接鉴别，须先用氧瓶燃烧法破坏，使有
18、机结合的氯转化为游离的CL，再行鉴别（三）杂质检查地西泮除需要检查“乙醇溶液的澄清度与颜色”、“氯化物”、“干燥失重”及炽灼残渣”等一般杂质外，还应作有关物质的检查中国药典2015年版用高效液相色谱法，采用不加校正因子的主要成分自身对照法检查地西泮原料药，片剂及注射中的有关物质。(四）含量测定1地西泮原料药的含量测定（1）原理：利用地西泮结构中二痰杂卓上的氮原子呈弱碱性，在非水介质中碱性增强，可被被高氯酸滴定液直接滴定，故药典2015年版采用非水溶液滴定法测定地西泮原料药的含量。（2）方法（3）含量计算：VTF/m2.地西泮制剂的含量测定 采用高效液相色谱法第五节 生物碱类药物分析一、典型药物
19、的结构与性质OHHHNHCH3CH3.HCLOHCH3HHNH CH3.HCL盐酸麻黄碱盐酸伪麻黄碱硫酸阿托品氢溴酸山莨菪碱硫酸奎宁盐酸吗啡盐酸小檗碱二、盐酸麻黄碱及其制剂的分析（一）性状1.白色结晶或粉末2.溶解度 水中易溶3.比旋度 左旋（二）鉴别 1.双缩脲反应 芳环侧链具有氨基醇结构的生物碱类药物的特征鉴别反应。2.红外分光光度法3.氯化物反应4.高效液相色谱法（三）杂质检查1.杂质来源 从药用植物提取比如盐酸伪麻黄碱、其他麻黄碱类物质。2.检查方法 高效液相色谱法（四）含量测定1.盐酸麻黄碱的含量测定（1）原理：非水溶液滴定法（2）方法 本法实际为置换反应（3）含量计算 盐酸麻黄碱=
20、（V-V0）TF/m2.盐酸麻黄碱注射液的含量测定采用高效液相色谱法。三、硫酸阿托品及其制剂的分析（一）性状1.外观与臭味 白色结晶粉末，无臭味。2.溶解度 水中极易溶解，乙醇中易溶(二）鉴别1.托烷生物碱类反应 vitali反应 2.硫酸盐反应 3.红外分光光度法（三）杂质检查1.莨菪碱（1）杂质来源 莨菪碱（2）检查方法：旋光度法2.有关物质（1）杂质来源 生产过程中引入莨菪碱，颠茄碱等生物碱杂质，中间体，副产物及分解产物等有关杂质。（2）检查方法：药典2015年版采用高效液相色谱法进行检查。（四）含量测定1.硫酸阿托品的含量测定（1）原理：非水溶液滴定法 一个高氯酸分子与一个硫酸阿托品发
21、生反应，被滴定到硫酸氢盐阶段。（2）方法（3）含量计算：=（V-V0）TF/m2.硫酸阿托品片的含量测定（1）硫酸盐阿托品在某pH下形成阳离子，而酸性染料为阴离子，结合生成有色的离子对。通过测定离子对的吸光度，来计算含量。（2）供试品溶液的制备（3）对照品溶液的制备（4）方法（5）含量计算：Ax/Ar*CR V*1.027*平均片重/(m*标示量）第六节第六节 糖类药物分析糖类药物分析一、典型药物的结构与性质蔗糖结构二、葡萄糖及其制剂的分析（一）性状1.外观与臭味 本品为无色结晶或白色结晶粉末，无臭味，微甜2.溶解度 水中易溶3.比旋度 比旋度为右旋（二）鉴别1.碱性酒石酸铜的试液反应（1）原
22、理 葡萄糖主要呈半缩醛的环状结构，可以开环形成具有醛基的链状结构，具有还原性。（2）鉴别方法：本品水溶液，加碱性酒石酸铜，出现氧化亚铜砖红色沉淀。2.红外分光光度法（三）杂质检查1.乙醇溶液的澄清度 主要控制糊精，葡萄糖溶于热乙醇，而糊精溶解度小。2.亚硫酸盐与可溶性淀粉3.蛋白质 蛋白质遇到酸变性，容易出现沉淀。4.5-羟甲基糠醛（1）杂质来源：葡萄糖缩水等出现，进一步聚合出现沉淀，或进一步分解，导致注射液变黄，产生沉淀，PH下降。（2）检查方法：供试品进行规定紫外分光光度法测定，吸光度不得大于0.32.（四）含量测定1.测定方法 葡萄糖加氨水，测定旋光度计算公式 C=*2.08522.注意
23、事项（1）测定前溶剂作空白试验校正（2）温度为20（3）均应充分溶解，供试液应该澄清（4）测定旋光度应该按照药典规定条件第七节第七节 维生素类药物分析维生素类药物分析一、水溶性维生素类药物分析（一）典型药物的结构与性质维生素B1维生素C（二）维生素B1及其制剂的分析1.性状（1）外观与臭味：本品为白色结晶或结晶粉末；有微弱的特臭，味苦。（2）溶解度：水中易溶（3）吸收系数：具有氨基嘧啶环和噻唑环等，具有紫外吸收。2.鉴别（1）硫色素反应：维生素B1在碱性溶液中，被铁氰化钾氧化成硫色素。硫色素能溶解于正丁醇中，使溶液显示蓝色荧光。(2)红外分光光度法（3）氯化物反应3.杂质检查（1）总氯量 20
24、15年药典采用银量法进行鉴别。（2）有关物质 维生素B1合成复杂，中间产物、副产物种类多，且结构性质均与主要成分维生素B接近。采用高效液相色谱法检查有关物质。（4）含量测定 对原料药采用非水溶液滴定法，对片剂和注射剂采用紫外分光光度法测定。（三）维生素C及其制剂的分析1.性状（1）外观与臭味 白色结晶粉末，无臭，味酸；久放颜色变黄；水溶液显酸性反应。（2）溶解度：水中易溶（3）熔点：190-192（4）比旋度：比旋度为右旋。2.鉴别（1）硝酸银试液反应：维生素C具有还原性，能被硝酸银氧化为去氢维生素C，产生黑色沉淀。（2）2,6-二氯靛酚反应：2,6-二氯靛酚，酸性中为玫瑰红色，碱性介质中为蓝
25、色。当发生氧化还原反应后，变为无色。（3）红外分光光度法（4）薄层色谱法 鉴别：维生素C片，维生素C注射液，维生素C颗粒等。3.杂质检查（1）溶液澄清度与颜色的检查1）杂质来源：维生素C易被氧化，变色。药典2015年版通过测定吸光度来控制有色杂质的限量。2）原料药检查方法 紫外分光光度法3）片剂检查方法：本片细粉，加水，取滤液按照紫外-可见分光光度法检测，测定吸收度，不得超过0.03.（2）草酸 控制草酸的限量（3）铁盐和铜盐的检查 原子分光光度法4.含量测定 （1）原理：维生素C具有强还原性，被氧化剂氧化。最常用的方法为碘量法。（2）测定方法：本品，加水，加稀醋酸，加淀粉指示剂，加碘试液溶液
26、显示蓝色。（3）注意事项1）稀醋酸介质2）新煮沸的蒸馏水3）应消除辅料的干扰二、脂溶性维生素类药物分析（一）典型药物的结构与性质维生素A维生素D2维生素D3维生素E（二）维生素E及其制剂的分析1.性状（1）外观与臭味：黄绿色澄清液体；几乎无臭，遇到光颜色变深。（2）溶解度：水中不溶解（3）比旋度：右旋（4）折光率：1.494-1.499（5）吸收系数：采用紫外分光光度法进行鉴别2.鉴别（1）硝酸反应：维生素E酸性下水解，生成生育酚，被硝酸氧化成生育红而显色。(2)红外分光光度法（3）气相色谱法：采用气相色谱法测定维生素E含量3.杂质检查（1）生育酚：通过限制硫酸铈滴定液消耗的体积，来控制游离生育酚的含量。（2）有关物质（合成型）：采用气相色谱法来检查有关物质。4.含量测定采用气相色谱法来测定含量。
