1、蔬菜中农药残留的测定蔬菜中农药残留的测定背景背景nGB 2763GB 2763食品中农药最大残留限量食品中农药最大残留限量中规定了中规定了3 38787种种农药的农药的38603860项最大残留限量。项最大残留限量。n目前在蔬菜上登记的农药种类有目前在蔬菜上登记的农药种类有376376种。种。n在实际生产中，在实际生产中，由于病虫害的不同，经常使用多种农由于病虫害的不同，经常使用多种农药复配和混配进行防治，往往不清楚到底使用那些农药复配和混配进行防治，往往不清楚到底使用那些农药。药。n突发事件的应急要求检测具有快速筛查的能力，由于突发事件的应急要求检测具有快速筛查的能力，由于分析对象是未知物，
2、因此检测范围应是广泛的。分析对象是未知物，因此检测范围应是广泛的。农药残留限量标准农药残留限量标准nGB 2763-2014版中：版中：n共涉及农药种类共涉及农药种类3 38787种。种。n限量值有限量值有36503650个个。nGB 2763-2015版中：版中：n共涉及农药种类共涉及农药种类444444种。种。n限量值有限量值有41404140个个。农药残留限量标准农药残留限量标准nGB 2763-2014标准中：标准中：n涉及蔬菜的农药共涉及蔬菜的农药共223223种；种；n涉及水果的农药共涉及水果的农药共209209种；种；n涉及粮食的农药共涉及粮食的农药共228228种；种；n涉及油
3、料及油脂的农药共涉及油料及油脂的农药共159159种；种；n涉及糖料的农药共涉及糖料的农药共6060种；种；n涉及饮料类的农药共涉及饮料类的农药共5050种；种；n涉及调味料的农药共涉及调味料的农药共3838种；种；n涉及坚果的农药共涉及坚果的农药共3434种；种；农药残留限量标准农药残留限量标准n涉及食用菌的农药共涉及食用菌的农药共1 19 9种；种；n涉及蛋类的农药共涉及蛋类的农药共9 9种；种；n涉及生乳的农药共涉及生乳的农药共7 7种种n涉及哺乳动物肉类（海洋哺乳动物除外）的农药共涉及哺乳动物肉类（海洋哺乳动物除外）的农药共6 6种；种；n涉及禽肉类的农药共涉及禽肉类的农药共5 5种；
4、种；n涉及水产品的农药共涉及水产品的农药共2 2种；种；n涉及可食用家禽内脏、奶类、药用植物、肾脏（牛、羊、猪）、涉及可食用家禽内脏、奶类、药用植物、肾脏（牛、羊、猪）、肝脏（牛、羊、猪）等各肝脏（牛、羊、猪）等各1 1种。种。农残检测方法标准农残检测方法标准n根据根据20092009年年6 6月月1 1日实施的日实施的中华人民共和国食品安全中华人民共和国食品安全法法第二十一条和第二十二条的规定，今后凡是涉及第二十一条和第二十二条的规定，今后凡是涉及食品安全的标准（八个方面的内容），统一由卫生行食品安全的标准（八个方面的内容），统一由卫生行政部门部制定和颁布，对现行的食用农产品质量安全政部门部
5、制定和颁布，对现行的食用农产品质量安全标准、食品卫生标准、食品质量标准和有关食品的行标准、食品卫生标准、食品质量标准和有关食品的行业标准中强制执行的标准予以整合，统一公布为食品业标准中强制执行的标准予以整合，统一公布为食品安全国家标准。农药残留检测方法标准全部统一为国安全国家标准。农药残留检测方法标准全部统一为国家标准。家标准。检测方法检测方法nGB/T 19648-2006GB/T 19648-2006n检测农药种类检测农药种类500500种种nGB/T 20769-2008GB/T 20769-2008n检测农药种类检测农药种类450450种种20g,加入40 mL乙腈15000r/m匀浆
6、1 min加入5g氯化钠，再匀浆1min2cm无水硫酸钠加于Envi-Carb和Sep-Pak氨丙基串接柱上Envi-1840水浴浓缩至1mL 3次2mL洗样液瓶2次5mL正己烷溶剂交换分取乙腈层20mL3000r/m离心5min乙腈+甲苯(31)40水浴浓缩至0.5mL样液约为1mL后加入内标氮气吹干GC/MSLC/MS/MS乙腈水(32)定容1mLE组农药（63种）4mL预淋25mL洗脱前处理过程农残检测方法标准农残检测方法标准 目前蔬菜和水果农药残留检测方法用的最为广目前蔬菜和水果农药残留检测方法用的最为广泛的是农业部的行业标准：泛的是农业部的行业标准：NY/T 761-2008 NY/
7、T 761-2008蔬菜和水果中有机磷、有机蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定测定农残检测方法标准农残检测方法标准 该方法使用气相色谱和液相色谱进行检测，一该方法使用气相色谱和液相色谱进行检测，一 次能检测次能检测105105种农药，其中：种农药，其中：有机磷类农药有机磷类农药5454种；种；有机氯和拟除虫菊酯类农药有机氯和拟除虫菊酯类农药4141种；种；氨基甲酸酯类农药及其代谢物氨基甲酸酯类农药及其代谢物1010种。种。依次依次5mL丙酮丙酮+正正己烷己烷(10+90),5mL正己烷预淋正己烷预淋4 mL甲醇二氯甲醇二
8、氯甲烷甲烷(1+99)预淋预淋前处理：前处理：QuEChERS方法简单介绍QuEChERS 方法早期是专门设计用于蔬菜、水果和其它低脂肪食品中的农药多残留分析。方法中使用Agilent散装PSA（乙二胺-N-丙基）吸附剂去除基质中的杂质，包括脂肪、糖类和其它一些带有氢键的基质共萃物。QuEChERS 方法与传统匀浆技术相比，具有很重要的优势，概括如下：Quick(1小时内可以萃取10个样品),Easy(减少样品转移)Cheap(成本低)Effective(对宽范围农药均可取得很好的回收率)Rugged(操作者经过加简单培训即可得到重复性结果)Safe（减少溶剂使用-节约90%溶剂）QuEChE
9、RS方法背景最早的最早的QuEChERS方法不含缓冲盐，于方法不含缓冲盐，于2003年开发。年开发。现在，有两种常用的缓冲盐方法：现在，有两种常用的缓冲盐方法：来自欧洲标准化委员会（来自欧洲标准化委员会（CEN）各成员国的欧盟标准（）各成员国的欧盟标准（EN 15662）；被美国官方分析化学师协会标准（被美国官方分析化学师协会标准（AOAC 2007.01）认可，在美国和其）认可，在美国和其它国家使用。它国家使用。QuEChERS的应用范围正逐步扩展到水果和蔬菜以外的样品，已经开发的应用范围正逐步扩展到水果和蔬菜以外的样品，已经开发了针对各种食品基质中丙烯酰胺的分析的了针对各种食品基质中丙烯酰
10、胺的分析的QuEChERS方法。方法。QuEChERS方法现状 n为现有前处理方法LLE,SPE,GPC提供更多选择 QuEChERS在世界范围内还是一个新方法，我国NY/T 1380-2007与之非常接近 对检测器的要求:MS/MS(高选择高灵敏).NPD等自动QuEChERS:ChemSpeed,Gerstel,and Anatune QuEChERS 很大程度上降低了每个样品的分析成本官方网站可获得更多农药回收率及方法验证信息Page 14Luke method,traditional SPE,or GPCQuEChERSQuEChERS Benefits!6个样品大概所花费时间(min
11、)120304x faster溶剂使用量(mL)90 mL10-15 mL9 x less solventChlorinated Waste(mL)30 mLnonesafer,greener,less costly 所需玻璃器材，专门的设备等漏斗，水浴，200mL 容器,旋转蒸发仪,etc.NoneNo additional supplies needed食品安全检测nQuEChERS n特点：允许同时测定多种类化合物 流程包括3个步骤:提取，d-SPE（分散固相萃取），分析测定大部分污染物/有害物质都已建立限量要求，如MRLs(最大残留量)通常样品前处理方法的设计需要考虑这些限量的要求。M
12、S and MS/MS检测的高选择性和高灵敏度使得简单快速的QuEChERS 方法能够成为很好的前处理方式QuEChERS 操作过程Bond Elut QuEChERS提取试剂盒Bond Elut QuEChERS Extraction Kit Packaging提取试剂盒包装其他公司的萃取包装其他公司的萃取包装安捷伦Bond Elut QuEChERS产品净化包Bond Elut 净化包为特定应用提供最多样的吸附剂选择多数蔬菜和水果多数蔬菜和水果:PSA+MgSO4 去除极性有机酸,一些糖和少量脂肪类 蔬菜和水果蔬菜和水果1%Fat,PSA+C18EC+MgSO4去除极性有机酸，糖类，脂肪,
13、和一些类固醇 带色素的蔬菜和水果：带色素的蔬菜和水果：PSA+GCB+MgSO4去除极性有机酸，糖类，少量类胡萝卜素和 叶绿素，不能用于平面结构农药含有高水平含有高水平 色素含量的水果和蔬菜色素含量的水果和蔬菜:PSA+GCB+MgSO4去除极性有机酸，糖类，类胡萝卜素和 叶绿素，不能用于平面结构农药带有色素和脂肪的蔬菜和水果带有色素和脂肪的蔬菜和水果:PSA+GCB+MgSO4+C18去除极性有机酸，糖类，脂肪，类胡萝卜素和叶绿素，不能用于平面结构农药 AOAC ONLY!Both AOAC and EN available!EN ONLY!订货指南-散装填料Bond Elut QuEChE
14、RS kit 特点提取步骤提取步骤AOAC/EN/原始方法灵活多样，萃取管可选陶瓷均质子缩短振摇时间至20秒避免盐类结块避免个人操作差异提高回收率及重现性独立盐类包装设计预先称量，具计量证书隔水、避光、充氮、洁净遵照标准操作流程，避免过度放热引起的损失，达到最大回收率净化步骤（净化步骤（d-SPE）全面、多样的净化方法，选择简单针对AOAC和EN的水果蔬菜分类，快速选择合适的净化试剂盒提供2ml及15ml两种净化规格，方便进一步浓缩，提高灵敏度针对Schenck的改进提供NH2或PSA以及双层柱的SPE解决方案，针对平面结构和极性农药，以及更加复杂的基质，提供了QuEChERS方法的净化步骤改
15、进。Non-buffered QuEChERS method(Original)(10 or 15 g sample)4 or 6 g MgSO4,1 or 1.5 g NaCl AOAC method 2007.01(AOAC)(15 g sample)6 g MgSO4,1.5 g Na Acetate EN method 15662(CEN)(10 g sample)4 g MgSO4,1 g NaCl,1 g NaCitrate,0.5 g disodium citrate sesquihydrate比较第一步中比较第一步中3种提取方法种提取方法第一步的目的是便于提取/分配:加入过量的
16、盐和无水硫酸镁三种方法如何选择？三种方法如何选择？在大多数情况下，三种方法均能得到良好的结果 特殊情况下，需要考虑化合物的稳定性，尤其是pH稳定性 净化程度略有不同QuEChERS提取方法选择吡蚜酮噻菌灵 l抑霉唑 Acetate buffer system resulted in“visibly worse cleanup results compared to the original QuEChERS method”-M.Anastassiades 50 mg PSA,50 mg C18,7.5 mg GCB,150 mg MgSO4(2 mL)*PN 5982-0028 400 mg
17、PSA,400 mg C18,45 mg GCB,1200 mg MgSO4 (15 mL)*PN 5982-0029 对所有基质都可以保证更干净的萃取效果，并不影响农药的回收率，即使共面结构的农药也没问题 *PSA=Primary Secondary Amines GCB=石墨化炭黑第二步分散固相萃取第二步分散固相萃取(d-SPE)选择选择:取决于基取决于基质和分析物质和分析物 MgSO4 在所有净化试剂盒中均含有，起到去除水分的作用 PSA*去除极性的有机酸，一些糖类和脂类 C18EC 去除脂类和固醇，类胡萝卜素等 GCB*去除色素，如叶绿素（对平面结构药物会有吸附）dispersive-
18、SPE(d-SPE)无论是EN 还是 AOAC 方法，C18对净化的影响大于PSA Universal d-SPE(dispersive-SPE)针对不同基质的通用净化包，兼顾净化效果与回收率Analytical Chemist have a common saying:“分析方法象牙刷，每个人只能使用自己的牙刷。”QuEChERS 方法很灵活 有可供修改的模版 依分析物性质而定 考虑基质的成分 仪器配置 分析技术 在修正操作过程之前，要确保遵循QuEChERS方法的流程 LCGC专栏作者Ron Major对QuEChERS发明者M.Anastassiades 和 S.J.Lehotay 的访
19、谈QuEChERS应用进展n-农药多残留分析的应用农药多残留分析的应用n-不稳定的农药及解决方法不稳定的农药及解决方法n-动物源食品中兽药残留动物源食品中兽药残留 分析中的应用分析中的应用n-食品中其它有机污染物的分析食品中其它有机污染物的分析生物毒素PAHs和PCB丙烯酰胺n-不同类型基质的处理方法不同类型基质的处理方法QuEChERS广泛适用于多种基质中的农药多种残留分析n食品中残留农药检验方法食品中残留农药检验方法-多重残留分析方法（台湾）多重残留分析方法（台湾）n-涵盖果蔬、谷类、干豆类、茶类、香辛植物及其他草本植物等食品中213项n 农药多重残留分析nAOAC official me
20、thod 2007.01n-涵盖葡萄、莴苣和柑橘中26种农药的多重残留分析nEN official method 15662*n-涵盖水果（含干燥水果）、蔬菜、谷物及其他加工食品中多农药残留n 分析nResults of interlaboratory method validation 136项nResults of single laboratory validations 235项NY/T 1380-2007-蔬菜、水果中51中农药的多残留测定*An updated version of validation data can be found on the website www.cr
21、l-pesticides-datapool.eu,which is run by the EU Community Reference Laboratories for Pesticides.229种农药种农药 GC-MS and LC-MS-MS分析分析0%10%20%30%40%50%60%70%80%90%120%RecoveryPercentage of Pesticides10 ng/g Lettuce10 ng/g Orange25 ng/g Orange50 ng/g Lettuce100 ng/g Lettuce100 ng/g Orange229种农药种农药 GC-MS an
22、d LC-MS-MS分析分析0%10%20%30%40%50%60%70%80%0-55-1010-1515-2020-3030%RSDPercentage of Pesticides10 ng/g Lettuce10 ng/g Orange25 ng/g Orange50 ng/g Lettuce100 ng/g Lettuce100 ng/g Orange Original QuEChERS method(unbuffered)4 or 6 g MgSO4,1 or 1.5 g NaCl AOAC method 2007.01(AOAC)6 g MgSO4,1.5 g Na Acetate
23、 EN method 15662(CEN)4 g MgSO4,1 g NaCl,1 g NaCitrate,0.5 g disodium citrate 缓冲体系保证农药的稳定性七叶苷 未缓冲的方法，起于2003年发表的文献 2 个修整过的版本 AOAC official method 2007.01 EN official method 15662（2008） 3种方法都可以给出很好的优秀的回收率结果:平均90%农药，RSDs，10%不缓冲的方法对pH 敏感的农药回收率不会太好 QuEChERS方法发展过程中，关于提取条件的优化AOACEN方法采用不同程度的缓冲体系来改善pH敏感农药的回收率
24、 AOAC buffered method 相对强的醋酸盐的缓冲体系(pH 4.8)*EN buffered method 弱的柠檬酸盐缓冲体系(pH 5-5.5)*两个版本均经过大量实验室间的测试，50,000 100,000 数据点 缓冲至pH 5的体系可以 提供最佳平衡，对pH 敏感的农药能获得可接受的高的回收率(70%)(例如吡蚜酮,抑霉唑,噻菌灵)*S.J.Lehotay,K.Mastovska,A.R.Lightfield,J.AOAC Int.88(2005),615-629&60A*M.Anastassiades,E.Scherbaum,B.Tasdelen,D.Stajnba
25、her,in:H.Ohkawa,H.Miyagawa,P.W.Lee(Eds.),Crop Protection,Public Health,Environmental Safety,Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2007,p.439.缓冲盐的缓冲能力影响农药回收率的因素pH敏感农药：提取液的酸碱度碱-不稳定农药酸-不稳定农药酸性农药热不稳定农药：萃取放热影响平面结构农药：石墨化炭黑的影响 碱-不稳定农药n如captan 克菌丹,folpet 灭菌丹,dichlofluanid 抑菌灵和其它在QuEChERS 提取之后的碱性PSA 净化步骤中不稳定的农药.考虑到这些农药
26、的稳定性，因此净化后的样品溶液可以使用甲酸/乙酸调节pH至5来保证这些化合物的回收率.酸-不稳定农药酸-不稳定农药如乙氧喹啉和吡蚜酮n 若回收率不理想可将提取盐中的0.5 g 柠檬酸二钠盐和1g的柠檬酸三钠盐换成 1.5 g柠檬酸三钠盐，同时控制较低的提取温度来提高回收率。尤其对于 乙氧喹啉在pH 5 的提取溶液中会降解,需要加快前处理的速度或者直接选用不缓冲的提取试剂盒。酸性农药n酸性农药净化时，可能发生损失。建议提取后，跳过PSA的净化步骤，直接进行分析。酸性农药酸性农药苯氧羧酸类吡啶类除草剂热不稳定农药nStep1提取盐类的加入顺序，直接影响到热不提取盐类的加入顺序，直接影响到热不稳定农
27、药的回收率稳定农药的回收率盐类独立包装，于乙腈之后加入，有效控制系统放热盐类置放于离心管中，与样品直接接触，剧烈放热！放热监测装置样品和缓冲盐样品和缓冲盐 50 mL 聚丙烯离心聚丙烯离心管，经过改进，使其能容纳热电偶。管，经过改进，使其能容纳热电偶。热电偶热电偶(Omega:HSTC-TT-K-24S-36-SMPW-CC)连接在数字温度计上连接在数字温度计上 (FLUKE 52 K/J温度计温度计)用于记录温度随时间的变化。用于记录温度随时间的变化。样品称量好，溶剂按照样品称量好，溶剂按照试验试验1 和实验和实验 2加入加入 50 mL PP 管中管中，用手或者用机械立式磨床剧烈振摇用手或
28、者用机械立式磨床剧烈振摇 50 mL PP离心管离心管 Geno/Grinder 在一段时间内记录温度变化在一段时间内记录温度变化，60 seconds 取几次试验的平均值作为实验结果，见图取几次试验的平均值作为实验结果，见图 1和图和图2 The Geno/Grinder is a registered trademark of SPEX Sample PrepAOAC 和 EN 两种方法不同盐类加入方式的温度曲线如图展现的温度数据在AOAC和EN方法萃取包基础上采集。将样品加入盛有萃取盐的50mLPP管中，与先称量样品，加萃取溶剂，然后将盐从无水包装中倒入萃取管中相比对，可以看到明显的温度
29、增高差异(AOAC大约25 C，EN方法大约 10 C )，2510温度对回收率的影响评价下面四个化合物用来评定先加盐和后加盐放热对回收率的影响 Fenthion倍硫磷Nicotine烟碱*Isofenphos甲基异柳磷Isocarbophos水胺硫磷 4 种农药的选择是基于他们的化学结构的不稳定性 使用 Agilent 6410 QQQLC/MS 和Zorbax Phenyl-Hexyl 柱 2.1 x 50 mm,3.5 m 明显提高热不稳定农药的回收率Represents the negative effect adding the produce matrix to the salt
30、has on recovery during the QuEChERS extraction step,AOAC method 后加盐先加盐平面结构农药平面结构农药Carbendazim多菌灵Thiabendazole噻菌灵Pymetrozine吡嗪酮Cyprodinil嘧菌环胺石墨化炭黑(GCB)在分散包中，是为了去除基质中高水平含量的色素，但同时会保留平面结构农药，导致差的回收率和分析精度。使用甲苯对菠菜中平面农药回收率的优化初始方法的Dispersive SPE 过程(w/o toluene)和 修正方法的Dispersive SPE 过程(w/toluene)甲苯被加入 dispers
31、ive SPE 净化管,8:3(乙腈(ACN)萃取物/甲苯),可以在很大程度上改善平面结构农药的萃取效率 2 mL 净化管，包含 50 mg GCB,15 mL 管包含400 mg GCB多菌灵吡嗪酮嘧菌环胺加入甲苯明显提高平面结构农药的回收率QuEChERS方法适用于低脂肪含量的高含水基质，如大部分水果蔬菜。应用在如下基质时，一般需要略作调整。低含水量基质 鱼，肉，谷物，大米，香辛料，油类，茶叶，中草药 在初始匀浆样品中加入水 提取时目标分析物进入乙腈层 油性基质 加正己烷去除脂肪，丢弃正己烷层 结合d-SPE 净化QuEChERS方法在非水果蔬菜基质中的应用常见食品基质的含水量及建议加水量
32、参考EN 方法葡萄柚柠檬汁柠檬/酸橙桔子桔子皮柑橘典型含水量10g样品中加入水的量 5g样品中加入水的量 加入600L 5mol NaOH溶液到缓冲盐中，见3.12,仅在柠檬和酸橙中加可以选择冷动操作去除蜡质见常见食品基质的含水量及建议加水量参考EN 方法谷物类 玉米，面粉咖啡豆茶叶干的中草药和香辛料蘑菇红酒可以选择冷动操作或者在每mL萃取物中加入25mg C18 吸附剂，在分散SPE中去除油脂参见针对发酵茶，在每mL萃取物中加入75mg PSA吸附剂，进行分散SPE操作，鳄梨中的农残鳄梨中的农残n鳄梨是一个高含脂量的含水基质，因此，在提取前需先加入一定量的水，并且采用冷冻的方式除酯；同时净化
33、时选择含有C18的净化包能够帮助去除脂肪。植物油植物油n用QuEChERS 方法处理植物油的时候，可直接在2g油中加入乙腈.只有非常弱极性的农药回收率会小于70%，比如HCB和DDT，但回收率很稳定可以通过因子校正结果。残余油脂可通过冷冻及加入C18去除。茶茶n茶是非常复杂的基质，存在许多共萃取物。通常需要额外的净化步骤。红茶用PSA净化结合CaCl2 的使用往往能达到更好的净化效果。GCB通常在一定用量内使用能有效去除色素并保证回收率。QuEChERS:不仅仅用于农药残留不仅仅用于农药残留分析分析 其他基质中的农药残留 PAHs PCBs 非法染料 生物毒素 兽药 抗生素 药物 生物流体中的
34、滥用药物 丙烯酰胺 And More to Come.中药材中的农药残留分析中药材中的农药残留分析n特点：n一般来源于种植及加工、储存过程中的施用及环境污染n基质非常复杂。来源不同的药材成份不同，多含有皂苷,多糖,黄酮,酚酸,脂肪酸n残留量低n有机氯检出率最高（与农药本身性质有关）食品基质中农药残留筛查食品基质中农药残留筛查QuEChERS前处理流程前处理流程Weigh of 2gsample to a 50mL Teflon tube;add 10 mL distilled water to thoroughly soak the sample and store the sample at
35、 ambient temperature for 2 hoursWeigh of 2gsample to a 50mL Teflon tube;add 10 mL distilled water to thoroughly soak the sample and store the sample at ambient temperature for 2 hours干性样品（谷物、粮食、茶叶、中草药、食用油）含水量比较高的样品（蔬菜水果）Add 10mL 0.1%HAc/acetonitrile,and shake vigorously for 1 minute,then add 5982-57
36、55CH,and shake vigorously for 1 minute.Centrifuge for 5 minutes at 4,000 rpm.Transfer an aliquot(6 mL)of the above extracts upper layer into the Dispersive Kits tube（5982-0029）and then centrifuge for 5 minute at 5,000 rpm.Transfer an aliquot(1.0 mL)of the extract into the sample vials,dilute or conc
37、entrate LC-QQ or LC-Q-TOF detectQuEChERS前处理流程前处理流程Weigh 1 g of TCM to a 50-mL Teflon tube;add 6 mL distilled water to thoroughly soak the sample and store the sample at ambient temperature for 2 hours.Add 4 mL 0.1%HAc/acetonitrile,and shake vigorously for 1 minute,then add 1.2 g MgSO4,0.6 g NaAc,and
38、 4 g NaCl,and shake vigorously for 1 minute.Centrifuge for 3 minutes at 4,000 rpm.Add 500 mg PSA(p/n 5982-5753),250 mg C18(p/n 5982-5752),and 250 mg MgSO4 in a 5-mL centrifuge tube.Transfer an aliquot(1.5 mL)of the above extracts upper layer into the tube and then centrifuge for 1 minute at 3,000 rp
39、m.Transfer an aliquot(1.0 mL)of the extract into the GC vials.中草药多为干燥样品，一般需要加水稀释基质并适当浸泡提取体系为弱酸性缓冲体系如果体系颜色过深，可加入GCB吸附色素（如叶绿素）Gas Chromatography and Mass Spectrometers ConditionsDB-5 MSUI 超高惰性气相管柱提供更加可靠地分析结果！混合中草药样品的在混合中草药样品的在rQuEChERS净化后的典型净化后的典型TIC谱谱图图:金银花金银花,黄芪黄芪,银杏叶银杏叶,人参人参,枸杞子枸杞子.结论结论n对于trace-lev
40、el的农残分析，最主要的挑战来自于TCM复杂基质的化学干扰。n简单、快速、适用性强的QuEChERS前处理方法配合Backflushing和DRS技术，能够大幅度减少基质干扰，从前处理到筛查报告生成仅需1小时即可。n由于样品复杂多样，某些情况下也可结合SPE进行净化富集配合SPE技术完成中草药复杂基质的前处理QuEChERS技术在非农药残留领域外应用技术在非农药残留领域外应用举例举例兽药残留领域应用举例兽药残留领域应用举例PAHs 和和PCB 分析分析在在毒素毒素分析领域中的应用分析领域中的应用丙烯酰胺分析丙烯酰胺分析奶粉中的双氰胺奶粉中的双氰胺腌肉食品中的亚硝胺腌肉食品中的亚硝胺土壤中有机污
41、染物分析土壤中有机污染物分析Bond Elut QuEChERS 在兽在兽药领域中的全新应用药领域中的全新应用高脂肪高蛋白兽药应用QuECHERS方法进行兽药残留检测的主要挑战兽药基质（组织，蛋，奶等）更加复杂。基质高脂肪，高蛋白质。n即使同类兽药性质（极性，酸碱性）存在巨大差异QuECHERSQuECHERS最新应用最新应用:动物组织中的兽动物组织中的兽药残留药残留牛肝脏中喹诺酮类药物测定方法牛肝脏中喹诺酮类药物测定方法:n提取步骤：采用SampliQ EN extraction kits n净化步骤：采用全新全新SampliQ dispersive SPE kits(25 mg C18*a
42、nd 150 mg MgSO4),用于动物组织中药物残留 (5982-4921,5982-4956)(5982-4921,5982-4956)n净化后的样品用于LC/MS/MS分析牛肝脏中喹诺酮牛肝脏中喹诺酮QuEChERsQuEChERs提取流程图提取流程图(5990-5085EN)(5990-5085EN)带缓冲盐的QuEChERS 萃取管，EN 15662 方法，5982-5650Bond Elut QuEChERS 动物组织中抗生素净化包,2ml,5982-4921,contains 25 mg C18 和150 mg MgSO4AB12IS34567891011LC/MS/MS Ch
43、romatograms of A)liver blank extract,and B)200ng/g fortified liver extract.Peaks identification:1.Pipemidic acid,2.Ofloxacin,3.Ciprofloxacin,4.Danofloxacin,5.Lomefloxacin,6.Enrofloxacin,7.Sarafloxacin,8.Cinoxacin,9.,Oxolinic acid,10.Nalidixic acid,11.Norfloxacin,Flumequine,IS(internal standard).牛肝脏空
44、白和 200 ng/g 加标提取MRM图0102030405060708090100110Pipemidic acidOfloxacinCiprofloxacinDanofloxacinLomefloxacinEnrofloxacinSarafloxacinCinoxacinOxolinic acidNalidixic acidFlumequine Recovery and ReproducibilityRecovery牛肝脏中喹诺酮回收率和重现性结果牛肝中的牛肝中的9种磺胺类药物分析种磺胺类药物分析带缓冲盐的QuEChERS 萃取管，EN 15662 方法，(PN.5982-5650)Bon
45、d Elut QuEChERS 脂肪基质净化包,15ml,(PN.5982-5156),contains 150 mg C18，150PSA 和900 mg MgSO4动物源性食品中喹诺酮类、磺胺类、大环内酯类和抗球虫类，常见四大类35种抗生素的同时测定QuEChERS兽药多残留提取包+净化包超高效快速液相色谱（RRLC）和三重串联四极杆质谱（QQQ）结合多重反应监控模式（DMRM）基于Zobax Eclipse Plus C18 3.0100mm,1.8m（部件号：959759-302），13分钟内快速分离本方法适合猪肉，牛奶，蜂蜜和鸡蛋的药物残留测定兽药多残留兽药多残留QuEChERS方法
46、方法称取2.0g样品于50ml离心管加入4ml水及10ml 1%乙酸的乙腈，涡旋30s加入兽药多兽药多残留测定提残留测定提取包取包，迅速涡旋1min离心5min5000rpm静置30minQuEChERS流程流程取上清液6ml,加入兽兽药多残留测药多残留测定净化管定净化管，涡旋1min离心5min5000rpm取上清液4ml，氮气吹干用乙腈-水（2:8）1ml复溶，离心5min12000rpm上清液进样LC/QQQ测定提取净化35种兽药（种兽药（10ppb）LC-MS/MS MRM优化后方法（方法优化后方法（方法4）平均回）平均回收率收率01020304050607080901001234回收
47、率表格回收率表格大环内酯磺胺类克球酚喹诺酮类关于关于QuEChERS应用于兽药多残留检测的应用于兽药多残留检测的其他文献参考其他文献参考水产中的残留污染物分析水产中的残留污染物分析n基质特点：n与植物样品相比，动物组织含有大量蛋白质和脂肪，去除这些干扰是关键。n应用参考：n5990-5441EN 鱼肉中的PAHn5990-6236EN 鱼肉中的PCBsn5990-6589EN 虾肉中的荷尔蒙激素n5990-7714EN 海鲜、贝壳类中的污染物使用安捷伦使用安捷伦 Bond Elut QuEChERSAOAC 试剂盒和试剂盒和 HPLC-FLD分析鱼类分析鱼类体内的多环芳烃体内的多环芳烃5-20
48、ppbAOAC fatty sample d-SPE(5982-5158)contains 400mg C18ECGC/MS SIM Chromatogram of 10 ppb PAHs spiked in fish matrix blank extractGC/MSD:7890/5975B with purged ultimate union Column:DB-5ms UI 20 m 0.18 mm 0.18 mRestrictor:Siltek 0.7m x 0.15mm ID(Col 2)MMInlet:0.5L,320C,splitless,purge flow 50mL/min
49、at 0.8min gas saver 30mL/min at 2minCarrier:Helium,1.7mL/min cnst flow col 1 PCM 1=3.8 psi cnst pressure,col 2=3.8ml/min flow 50C Oven:50C(0.4 min)to 195C(25C/min)hold 1.5 min,8C/min to 265C 20C/min to 315C(1.25 min)Postrun backflush 7 min 320C MSD:Transfer line 340C Source 340C Quad 150C 4.006.008.
50、0010.0012.0014.0016.0018.0020.0020040060080010001200140016001800200022002400TimeAbundance 1 2 3 4 5 6 7 89 1011 1312141615S/N=11.5141.Napthalene2.Acenaphthylene3.Acenaphthene4.Fluorene5.Phenanthrene6.Anthracene7.Fluoranthene8.Pyrene9.Benzaanthracene10.Chrysene11.Benzobfluoranthene12.Benzokfluoranthe
