1、OO生物碱生物碱*皂苷皂苷*黄酮黄酮*蒽醌蒽醌挥发油挥发油OO 一、概述一、概述 二、理化性质二、理化性质*三、供试品溶液制备（提取、净化）三、供试品溶液制备（提取、净化）*四、鉴别：理化鉴别、四、鉴别：理化鉴别、TLC*五、含量测定：总成分、单体成分五、含量测定：总成分、单体成分春花秋月何时了，春花秋月何时了，往事知多少！往事知多少！小楼昨夜又东风，小楼昨夜又东风，故国不堪回首月明中。故国不堪回首月明中。雕栏玉砌应犹在，雕栏玉砌应犹在，只是朱颜改。只是朱颜改。问君能有几多愁？问君能有几多愁？恰似一江春水向东流！恰似一江春水向东流！虞虞 美美 人人 李煜李煜马钱子马钱子腰直不起，头足相就，状如
2、腰直不起，头足相就，状如牵机而死牵机而死强直性惊厥强直性惊厥1988年奥运会年奥运会，卡尔卡尔刘易斯刘易斯，麻黄碱麻黄碱 1992年奥运会，年奥运会，巫丹，巫丹，士的宁士的宁1992年奥运会年奥运会，玛丽玛丽乔乔费尔南德斯费尔南德斯，伪麻黄碱伪麻黄碱 1994年世界杯，年世界杯，马拉多纳，马拉多纳，麻黄碱麻黄碱 2000年奥运会年奥运会，拉杜坎，拉杜坎，麻黄碱麻黄碱 生物碱与兴奋剂生物碱与兴奋剂生物碱与毒品生物碱与毒品NHNHOHNHOH伪麻黄碱伪麻黄碱麻黄碱麻黄碱冰毒冰毒一、概一、概 述述黄连：黄连：小檗碱、巴马汀、药根碱、表小檗碱小檗碱、巴马汀、药根碱、表小檗碱苦参苦参：苦参碱、氧化苦化碱
3、苦参碱、氧化苦化碱益母草、益母草、延胡索、黄柏、贝母延胡索、黄柏、贝母麻黄：麻黄：麻黄碱、伪麻黄碱麻黄碱、伪麻黄碱马钱子：马钱子：马钱子碱、士的宁马钱子碱、士的宁N+OOOCH3OCH3麻黄碱麻黄碱小檗碱小檗碱1、结构：、结构：C、H、O、N，碱碱性性二、理化性质二、理化性质NHOH2 2、溶解性、溶解性亲脂性：大多数，氯仿中溶解度最大亲脂性：大多数，氯仿中溶解度最大亲水性：少，季铵型亲水性：少，季铵型二、理化性质二、理化性质一般都易溶于酸水一般都易溶于酸水3、沉淀反应：、沉淀反应：1）碘化铋钾）碘化铋钾（BiI3KI）2）雷氏盐）雷氏盐 NH4Cr(NH3)2(SCN)4 3）苦味酸）苦味酸
4、干扰：干扰：蛋白质、多肽、鞣质蛋白质、多肽、鞣质NO2OHNO2O2N沉淀特点：沉淀特点：酸性水溶液酸性水溶液（苦味酸在中性）中（苦味酸在中性）中 沉淀常易溶于沉淀常易溶于有机溶剂有机溶剂 沉淀沉淀有颜色有颜色二、理化性质二、理化性质4、光谱特征、光谱特征小檗碱：小檗碱：225、270、331nm 366nm下下 有荧光有荧光麻黄碱：麻黄碱：210nm二、理化性质二、理化性质1、有机溶剂提取法：、有机溶剂提取法：碱化碱化+CHCl3士的宁的含量测定：士的宁的含量测定：P127 碱化碱化+CHCl3提取提取酸水酸水提提碱化碱化CHCl3萃取萃取三、供试品溶液的制备三、供试品溶液的制备2、氧化铝柱
5、色谱法：、氧化铝柱色谱法：益母草（药典益母草（药典P203）NOO水苏碱的薄层鉴别：水苏碱的薄层鉴别：取本品取本品3g 乙醇回流提取乙醇回流提取 上活上活性炭性炭-氧化铝柱氧化铝柱 乙醇洗脱乙醇洗脱收集收集三、供试品溶液的制备三、供试品溶液的制备3、离子交换树脂法：、离子交换树脂法：益母草流浸膏（药典益母草流浸膏（药典P280）水苏碱的含量测定：水苏碱的含量测定：取本品取本品5g 盐酸调盐酸调pH12 加置强酸型阳离子树脂柱加置强酸型阳离子树脂柱 水洗水洗脱（弃去）脱（弃去）氨水洗脱氨水洗脱 收集收集NOO三、供试品溶液的制备三、供试品溶液的制备（一）理化鉴别（一）理化鉴别 马钱子散：马钱子、
6、地龙马钱子散：马钱子、地龙 取马钱子散取马钱子散加加浓氨浓氨试液试液三氯甲烷三氯甲烷浸泡浸泡滤过滤过滤液蒸干滤液蒸干加加稀盐酸稀盐酸加加碘化铋钾试液碘化铋钾试液黄棕色沉淀黄棕色沉淀四、定性鉴别四、定性鉴别（二）薄层鉴别（二）薄层鉴别1 1、展开系统：、展开系统：乙二胺、氨水乙二胺、氨水 P122正丁醇正丁醇-盐酸盐酸-水（水（4:1:0.5）生物碱盐）生物碱盐四、定性鉴别四、定性鉴别2、对薄层板改性：、对薄层板改性：12%NaOH溶液溶液例：黄连中生物碱例：黄连中生物碱 苯苯-EtOAc-MeOH-异丙醇异丙醇-水水 （6:3:1.5:1.5:0.3）置氨水饱和的展开槽置氨水饱和的展开槽2）显
7、色剂：）显色剂：例：苦参：氧化苦参碱（药典例：苦参：氧化苦参碱（药典P141）3、检视：、检视：1）365nm下看荧光下看荧光 例：黄连：小檗碱例：黄连：小檗碱改良碘化铋钾改良碘化铋钾稀碘化铋钾稀碘化铋钾+亚硝酸钠乙醇液亚硝酸钠乙醇液四、定性鉴别四、定性鉴别（一）总生物碱（一）总生物碱1、酸碱滴定法：、酸碱滴定法：返滴法返滴法2、分光光度法、分光光度法直接测定法：直接测定法：小檗碱小檗碱比色法：比色法：苦味酸、雷氏盐苦味酸、雷氏盐 P125排除干扰：排除干扰：化学分离、柱色谱化学分离、柱色谱五、含量测定五、含量测定例：雷氏盐比色法例：雷氏盐比色法B+NH4Cr(NH3)2(SCN)4=BHCr
8、(NH3)2(SCN)4 1、在酸性介质中定量反应、在酸性介质中定量反应2、反应物有颜色，其吸光度取决、反应物有颜色，其吸光度取决于硫氰酸铬铵部分于硫氰酸铬铵部分3、反应物不溶于水，易溶于丙酮、反应物不溶于水，易溶于丙酮例：雷氏盐比色法例：雷氏盐比色法 P71益母草口服液中生物碱的含量测定益母草口服液中生物碱的含量测定测定方法：测定方法：1、沉淀过滤，溶于丙酮，直接测定、沉淀过滤，溶于丙酮，直接测定A2、滤除沉淀后，测定残存的过量雷氏盐，、滤除沉淀后，测定残存的过量雷氏盐，间接计算间接计算又如：产妇康颗粒又如：产妇康颗粒1、HPLC：离子抑制色谱：二乙胺、三乙胺离子抑制色谱：二乙胺、三乙胺 例
9、：浙贝母例：浙贝母 药典药典P205离子对色谱：离子对色谱：SDS、辛烷基磺酸钠、辛烷基磺酸钠 常加入缓冲盐常加入缓冲盐 例：例：HPLC测小檗碱测小檗碱（二）单体成分（二）单体成分五、含量测定五、含量测定 乙腈乙腈-水（水（50：50）每每100ml含含0.34g KH2PO4和和0.17g SDS牛黄千金散中盐酸小檗碱牛黄千金散中盐酸小檗碱乙腈乙腈-水水-二乙胺（二乙胺（70：30：0.03）浙贝母中贝母甲素和贝母乙素浙贝母中贝母甲素和贝母乙素小儿清热止咳口服液中盐酸麻黄碱小儿清热止咳口服液中盐酸麻黄碱乙腈乙腈-0.1%磷酸溶液（含磷酸溶液（含0.1%三乙胺）（三乙胺）（3:97）流动相缓
10、冲盐的流动相缓冲盐的pH值对药物的保留行为有影响，甚值对药物的保留行为有影响，甚至会显著改变某些碱性药物的保留行为如图所示。至会显著改变某些碱性药物的保留行为如图所示。流动相流动相pH值对保留时间的影响值对保留时间的影响色谱柱：色谱柱：Nucleodur C18 15cm 4mm流动相：乙腈流动相：乙腈-10mM 碳酸氢铵碳酸氢铵50：50,A：pH=3.0 B：pH=10.0检测波长：检测波长：240nmpH=3.0pH=10.0 流动相流动相pH值对保留时间的影响值对保留时间的影响色谱柱：色谱柱：Nucleodur C18 15cm 4mm流动相：梯度洗脱程序流动相：梯度洗脱程序 A 乙腈
11、乙腈-20mM 磷酸氢二铵磷酸氢二铵,pH=2.5 B 乙腈乙腈-20mM磷酸氢二铵磷酸氢二铵,pH=10.0检测波长：检测波长：254nmpH=2.5pH=10.0 流动相组成对药物保留行为的影响流动相组成对药物保留行为的影响组成：生物碱组成：生物碱1、2、3、4 检测波长：检测波长：280nm色谱柱：色谱柱：Kromasil 15cm 4.6mm流动相：流动相：A PiCB6流动相流动相-PICB7流动相流动相1：1 B PiCB6流动相流动相-PICB7流动相流动相4：6PICB6流动相：己烷磺酸钠流动相：己烷磺酸钠1.88g甲醇甲醇260ml置置1000ml量瓶中，用水稀释至刻度量瓶中
12、，用水稀释至刻度PICB7流动相：庚烷磺酸钠流动相：庚烷磺酸钠0.28g 甲醇甲醇260ml置置1000ml量瓶中，用水稀释至刻度量瓶中，用水稀释至刻度 流动相组成对药物保留行为的影响流动相组成对药物保留行为的影响色谱柱：色谱柱：Kromasil 15cm 4.6mm检测波长：检测波长：280nmPICB6：己烷磺酸钠：己烷磺酸钠1.88g 甲醇甲醇260ml置置1000ml量瓶中，用量瓶中，用1%的醋酸稀释至刻度。的醋酸稀释至刻度。PICB7：庚烷磺酸钠：庚烷磺酸钠0.28g 甲醇甲醇260ml置置1000ml量瓶中，用量瓶中，用1%的醋酸稀释至刻度。的醋酸稀释至刻度。C PiCB6流动相流
13、动相-PICB7流动相流动相1：1D PiCB6流动相流动相-PICB7流动相流动相9：1封尾技术：消除或屏蔽残留封尾技术：消除或屏蔽残留Si-OH技术技术1：小分子键合：小分子键合技术技术2：2、TLCS：五、含量测定五、含量测定益母草：益母草：药典药典P204黄连：黄连：药典药典P213 荧光扫描荧光扫描,激发波长激发波长=366nm显色，显色，=510nm测吸光度测吸光度士的宁：士的宁：药典药典P319 荧光淬灭扫描荧光淬灭扫描,s=254nm黄黄 连连3、高效毛细管电泳法（、高效毛细管电泳法（HPCE）原理：电场下溶液中不同荷电物质迁移速度不同原理：电场下溶液中不同荷电物质迁移速度不同五、含量测定五、含量测定原因：管内壁硅羟基解离释放原因：管内壁硅羟基解离释放H+使溶液带正电使溶液带正电五、含量测定五、含量测定迁移速度：迁移速度：阳离子阳离子 中性分子中性分子 阴离子阴离子五、含量测定五、含量测定电泳电泳：带电离子在电场作用下的定向运动带电离子在电场作用下的定向运动电渗：电渗：溶液在电场作用下整体向负极移动溶液在电场作用下整体向负极移动
