1、章基因克隆载体章基因克隆载体噬菌体的电子显微镜照片DNA+DNA+外壳蛋白外壳蛋白 1 1、DNA(48.5kb)DNA(48.5kb)噬菌体中：噬菌体中：线性线性 宿主细胞：宿主细胞：环状环状(cos(cos位点位点)（一）（一）噬菌体性质噬菌体性质迄今已经定位的迄今已经定位的噬菌体基因至少有噬菌体基因至少有6161个，其中有一半左个，其中有一半左右参与了噬菌体生命周期的调控（右参与了噬菌体生命周期的调控（必需基因必需基因）；）；另一部分基因则被称为另一部分基因则被称为非必需基因非必需基因；当它们被外源基因取；当它们被外源基因取代后，不影响噬菌体的生命周期。代后，不影响噬菌体的生命周期。由外
2、源基因取代非必需基因所形成的重组噬菌体由外源基因取代非必需基因所形成的重组噬菌体DNADNA，可，可以随寄主细胞一起被复制和增殖。以随寄主细胞一起被复制和增殖。（三）构建的基本策略与技术路线（三）构建的基本策略与技术路线 策略策略:切去部分非必需区切去部分非必需区删掉多余的限制性内切酶位点删掉多余的限制性内切酶位点插入选择性标记基因插入选择性标记基因建立体外包装系统建立体外包装系统uB B片段是片段是噬菌体生长非必需的；噬菌体生长非必需的；uC C片段缺失可阻断溶原生长途径，但不影响溶菌途径；片段缺失可阻断溶原生长途径，但不影响溶菌途径；uE E片段去掉片段去掉min5min5序列（序列（2.
3、6kb2.6kb）。）。两端两端EcoR IEcoR I别点经点突变或别点经点突变或甲基化处理，即得甲基化处理，即得gtWESgtWES：（：（48.5-5.5-2.6=40.4kb48.5-5.5-2.6=40.4kb）克隆能力：克隆能力：替换替换B B：最大：最大：51-(40.4-4.9)=15.5kb 51-(40.4-4.9)=15.5kb 最小：最小：36.4-(40.4-4.9)=0.9kb 36.4-(40.4-4.9)=0.9kb 实际应用时克隆能力略有出入（实际应用时克隆能力略有出入（p109,p109,表表3-53-5）4.9kb21.6kb5.5kb7.5kb5.9kb
4、3.3kb 2 2、在、在DNADNA的非必需区内插入选择标记基因的非必需区内插入选择标记基因（1 1）自然筛选）自然筛选（51kb51kb或或36.4kb36.4kb不能包装）不能包装）（2 2）插入选择标记基因）插入选择标记基因 取代取代redred和和gamgam基因基因野生型野生型噬菌体噬菌体(Spi+(Spi+表型表型)在在P2P2噬菌体溶原性细胞中噬菌体溶原性细胞中不能不能生长生长 （redred、gamgam基因基因）外源外源DNADNA取代取代 获获Spi-Spi-表型表型 在在P2P2噬菌体溶原性细胞中噬菌体溶原性细胞中能能生长生长 redred、gamgam基因基因 局限性
5、：局限性：只能以只能以P2P2噬菌体溶原细胞作为受体噬菌体溶原细胞作为受体 最常用的筛选标记：最常用的筛选标记：Lac ZLac Z基因基因3 3、建立重组、建立重组DNADNA分子体外包装系统分子体外包装系统体外重组体外重组DNADNA分子必须经分子必须经体外包装体外包装成噬菌体颗成噬菌体颗粒后，才能转导受体细胞。粒后，才能转导受体细胞。野生型野生型噬菌体感染的细胞中无多余的外壳蛋白。噬菌体感染的细胞中无多余的外壳蛋白。D D-（D D基因缺失噬菌体）基因缺失噬菌体）受体细胞受体细胞积累除积累除D D蛋白以蛋白以外所有蛋白质外所有蛋白质E E-（E E基因缺失噬菌体）基因缺失噬菌体）受体细胞
6、受体细胞积累除积累除E E蛋白以蛋白以外所有蛋白质外所有蛋白质混合混合 D D、E E互补互补 包装包装DNADNA分子分子 噬菌体噬菌体 如如:菌株菌株BHB2688(EBHB2688(E-)+BHB2690(D)+BHB2690(D-)（四）（四）噬菌体克隆载体的应用噬菌体克隆载体的应用 1 1、建立、建立c DNAc DNA基因文库基因文库 u转导转导(transduction)(transduction)由噬菌体和细胞病毒介由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息转移过程。导的遗传信息转移过程。效率高效率高。u转染转染(transfection)(transfection)指真核细胞主动或者指
7、真核细胞主动或者被动导入外源被动导入外源DNA DNA 片段而获得新表型的过程。片段而获得新表型的过程。2 2、克隆外源目的基因、克隆外源目的基因（五）重组（五）重组DNADNA分子的体外包装分子的体外包装（自学）（自学）1 1、溶原菌、溶原菌BHB2688(EBHB2688(E-)和和BHB2690(DBHB2690(D-)的检验的检验2 2、制备包装物、制备包装物3 3、体外包装、体外包装 4 4、cosmidcosmid较小，可承载更大的外源较小，可承载更大的外源DNA DNA 若若cosmidcosmid为为6.5kb6.5kb，则可承载，则可承载44.5(51-6.5)kb44.5(
8、51-6.5)kb外源外源DNADNA，且能被包装成具有感染能力的噬菌体，且能被包装成具有感染能力的噬菌体颗粒。颗粒。因此，因此，cosmidcosmid克隆广泛用于构建基因组文库。克隆广泛用于构建基因组文库。（三）柯斯克隆（三）柯斯克隆(Cosmid cloning)(Cosmid cloning)(1)(1)定义定义 应用柯斯质粒作载体，在大肠杆菌寄主细胞中克隆大应用柯斯质粒作载体，在大肠杆菌寄主细胞中克隆大片段的真核基因组片段的真核基因组DNADNA的技术，叫做柯斯克隆。的技术，叫做柯斯克隆。这个定义的三个要点是：这个定义的三个要点是：a.a.柯斯质粒作载体；柯斯质粒作载体；b.b.大肠
9、杆菌为寄主大肠杆菌为寄主;c.c.克隆大片段的真核基因组克隆大片段的真核基因组DNADNA。（2 2）理论依据）理论依据a.a.在在 phagephage线性线性DNADNA分子的每一端都具有彼此互补分子的每一端都具有彼此互补的单链突出序列，即所谓的的单链突出序列，即所谓的粘性末端粘性末端(cos(cos位点位点)b.b.phagephage的的多连体分子多连体分子是由是由coscos连接而成的。连接而成的。cos cos cos cos cos coscos cos cos cos cos cosc.c.末端酶末端酶(treminase)(treminase)或叫或叫TerTer体系体系即即
10、 phagephage具具有一种位点特异的切割体系有一种位点特异的切割体系(site-specific(site-specific cutting system).cutting system).A A蛋白蛋白*此系统能识别两个相距适宜的此系统能识别两个相距适宜的(36.436.451kb51kb)cos)cos位点，位点，并切割之。并切割之。*根据上述分析可知根据上述分析可知 phage DNAphage DNA包装的两个必要条包装的两个必要条件是：件是：coscos位点、位点、TerTer体系（体系（A A蛋白）蛋白）（3 3）柯斯质粒包装条件）柯斯质粒包装条件 由于只有在被作用的由于只有
11、在被作用的 DNADNA分子具有两个分子具有两个coscos位点，而且它们之间距离保持在位点，而且它们之间距离保持在36.436.451kb51kb的条的条件下，件下，TerTer体系才能对它发生作用。体系才能对它发生作用。据此推断：据此推断：柯斯质粒是不能作为包装体系的，因为它只柯斯质粒是不能作为包装体系的，因为它只有一个有一个coscos位点。位点。因此：柯斯质粒只有在同适当大小的外源因此：柯斯质粒只有在同适当大小的外源DNADNA片段重片段重组成具有组成具有两个两个coscos位点位点而且相距达而且相距达36.436.451kb51kb之之间时，才能被包装。间时，才能被包装。利用利用Co
12、s质粒进行克隆质粒进行克隆 含复制起始位含复制起始位点及可插入外点及可插入外源源DNADNA的位点的位点 HindBHHMCS连杆连杆历史岳麓版第13课交通与通讯的变化资料精品课件欢迎使用自读教材自读教材填要点填要点 一、铁路，更多的铁路一、铁路，更多的铁路 1地位地位 铁路是铁路是 建设的重点，便于国计民生，成为国民经济建设的重点，便于国计民生，成为国民经济发展的动脉。发展的动脉。2出现出现 1881年，中国自建的第一条铁路年，中国自建的第一条铁路唐山唐山 至胥各庄铁至胥各庄铁路建成通车。路建成通车。1888年，年，宫廷宫廷专用铁路落成。专用铁路落成。交通运输交通运输开平开平 3发展发展 (
13、1)原因：原因：甲午战争以后列强激烈争夺在华铁路的甲午战争以后列强激烈争夺在华铁路的 。修路成为中国人修路成为中国人 的强烈愿望。的强烈愿望。(2)成果：成果：1909年年 建成通车；民国以后，各条商路修筑建成通车；民国以后，各条商路修筑权收归国有。权收归国有。4制约因素制约因素 政潮迭起，军阀混战，社会经济凋敝，铁路建设始终未入政潮迭起，军阀混战，社会经济凋敝，铁路建设始终未入正轨。正轨。修筑权修筑权救亡图存救亡图存京张铁路京张铁路 二、水运与航空二、水运与航空 1水运水运 (1)1872年年,正式成立，标志着中国新式航运业的诞生。正式成立，标志着中国新式航运业的诞生。(2)1900年前后，
14、民间兴办的各种轮船航运公司近百家，几乎都是年前后，民间兴办的各种轮船航运公司近百家，几乎都是在列强排挤中艰难求生。在列强排挤中艰难求生。2航空航空 (1)起步：起步：1918年，附设在福建马尾造船厂的海军飞机工程处开始年，附设在福建马尾造船厂的海军飞机工程处开始研制研制 。(2)发展：发展：1918年，北洋政府在交通部下设年，北洋政府在交通部下设“”；此后十年间，航空事业获得较快发展。；此后十年间，航空事业获得较快发展。轮船招商局轮船招商局水上飞机水上飞机筹办航空事宜筹办航空事宜处处 三、从驿传到邮政三、从驿传到邮政 1邮政邮政 (1)初办邮政：初办邮政：1896年成立年成立“大清邮政局大清邮
15、政局”，此后又设，此后又设 ，邮传正式脱离海关。邮传正式脱离海关。(2)进一步发展：进一步发展：1913年，北洋政府宣布裁撤全部驿站；年，北洋政府宣布裁撤全部驿站；1920年，中国首次参加年，中国首次参加 。邮传部邮传部万国邮联大会万国邮联大会 2电讯电讯 (1)开端：开端：1877年，福建巡抚在年，福建巡抚在 架设第一条电报线，成为中国自架设第一条电报线，成为中国自办电报的开端。办电报的开端。(2)特点：进程曲折，发展缓慢，直到特点：进程曲折，发展缓慢，直到20世纪世纪30年代情况才发生变年代情况才发生变化。化。3交通通讯变化的影响交通通讯变化的影响 (1)新式交通促进了经济发展，改变了人们
16、的通讯手段和新式交通促进了经济发展，改变了人们的通讯手段和 ，转变了人们的思想观念。转变了人们的思想观念。(2)交通近代化使中国同世界的联系大大增强，使异地传输更为便交通近代化使中国同世界的联系大大增强，使异地传输更为便捷。捷。(3)促进了中国的经济与社会发展，也使人们的生活促进了中国的经济与社会发展，也使人们的生活 。台湾台湾出行出行方式方式多姿多彩多姿多彩合作探究合作探究提认知提认知 电视剧电视剧闯关东闯关东讲述了济南章丘朱家峪人朱开山一家，讲述了济南章丘朱家峪人朱开山一家，从清末到九一八事变爆发闯关东的前尘往事。下图是朱开山从清末到九一八事变爆发闯关东的前尘往事。下图是朱开山一家从山东辗
17、转逃亡到东北途中可能用到的四种交通工具。一家从山东辗转逃亡到东北途中可能用到的四种交通工具。依据材料概括晚清中国交通方式的特点，并分析其成因。依据材料概括晚清中国交通方式的特点，并分析其成因。提示：提示：特点：新旧交通工具并存特点：新旧交通工具并存(或：传统的帆船、独轮车，或：传统的帆船、独轮车，近代的小火轮、火车同时使用近代的小火轮、火车同时使用)。原因：近代西方列强的侵略加剧了中国的贫困，阻碍社会发原因：近代西方列强的侵略加剧了中国的贫困，阻碍社会发展；西方工业文明的冲击与示范；中国民族工业的兴起与发展；展；西方工业文明的冲击与示范；中国民族工业的兴起与发展；政府及各阶层人士的提倡与推动。
18、政府及各阶层人士的提倡与推动。串点成面串点成面握全局握全局 一、近代交通业发展的原因、特点及影响一、近代交通业发展的原因、特点及影响 1原因原因 (1)先进的中国人为救国救民，积极兴办近代交通业，促先进的中国人为救国救民，积极兴办近代交通业，促进中国社会发展。进中国社会发展。(2)列强侵华的需要。为扩大在华利益，加强控制、镇压列强侵华的需要。为扩大在华利益，加强控制、镇压中国人民的反抗，控制和操纵中国交通建设。中国人民的反抗，控制和操纵中国交通建设。(3)工业革命的成果传入中国，为近代交通业的发展提供工业革命的成果传入中国，为近代交通业的发展提供了物质条件。了物质条件。2特点特点 (1)近代中
19、国交通业逐渐开始近代化的进程，铁路、水运和近代中国交通业逐渐开始近代化的进程，铁路、水运和航空都获得了一定程度的发展。航空都获得了一定程度的发展。(2)近代中国交通业受到西方列强的控制和操纵。近代中国交通业受到西方列强的控制和操纵。(3)地域之间的发展不平衡。地域之间的发展不平衡。3影响影响 (1)积极影响：促进了经济发展，改变了人们的出行方式，积极影响：促进了经济发展，改变了人们的出行方式，一定程度上转变了人们的思想观念；加强了中国与世界各地的一定程度上转变了人们的思想观念；加强了中国与世界各地的联系，丰富了人们的生活。联系，丰富了人们的生活。(2)消极影响：有利于西方列强的政治侵略和经济掠
20、夺。消极影响：有利于西方列强的政治侵略和经济掠夺。1李鸿章李鸿章1872年在上海创办轮船招商局，年在上海创办轮船招商局，“前前10年盈和，成年盈和，成为长江上重要商局，招商局和英商太古、怡和三家呈鼎立为长江上重要商局，招商局和英商太古、怡和三家呈鼎立之势之势”。这说明该企业的创办。这说明该企业的创办()A打破了外商对中国航运业的垄断打破了外商对中国航运业的垄断B阻止了外国对中国的经济侵略阻止了外国对中国的经济侵略C标志着中国近代化的起步标志着中国近代化的起步D使李鸿章转变为民族资本家使李鸿章转变为民族资本家解析：解析：李鸿章是地主阶级的代表，并未转化为民族资本家；李鸿章是地主阶级的代表，并未转
21、化为民族资本家；洋务运动标志着中国近代化的开端，但不是具体以某个企业洋务运动标志着中国近代化的开端，但不是具体以某个企业的创办为标志；洋务运动中民用企业的创办在一定程度上抵的创办为标志；洋务运动中民用企业的创办在一定程度上抵制了列强的经济侵略，但是并未能阻止其侵略。故制了列强的经济侵略，但是并未能阻止其侵略。故B、C、D三项表述都有错误。三项表述都有错误。答案：答案：A 二、近代以来交通、通讯工具的进步对人们社会生活的影二、近代以来交通、通讯工具的进步对人们社会生活的影响响 (1)交通工具和交通事业的发展，不仅推动各地经济文化交交通工具和交通事业的发展，不仅推动各地经济文化交流和发展，而且也促
22、进信息的传播，开阔人们的视野，加快流和发展，而且也促进信息的传播，开阔人们的视野，加快生活的节奏，对人们的社会生活产生了深刻影响。生活的节奏，对人们的社会生活产生了深刻影响。(2)通讯工具的变迁和电讯事业的发展，使信息的传递变得通讯工具的变迁和电讯事业的发展，使信息的传递变得快捷简便，深刻地改变着人们的思想观念，影响着人们的社快捷简便，深刻地改变着人们的思想观念，影响着人们的社会生活。会生活。2清朝黄遵宪曾作诗曰：清朝黄遵宪曾作诗曰：“钟声一及时，顷刻不少留。虽钟声一及时，顷刻不少留。虽有万钧柁，动如绕指柔。有万钧柁，动如绕指柔。”这是在描写这是在描写 ()A电话电话 B汽车汽车C电报电报 D
23、火车火车解析：解析：从从“万钧柁万钧柁”“动如绕指柔动如绕指柔”可推断为火车。可推断为火车。答案：答案：D典题例析典题例析 例例1上海世博会曾吸引了大批海内外人士利用各种上海世博会曾吸引了大批海内外人士利用各种交通工具前往参观。然而在交通工具前往参观。然而在19世纪七十年代，江苏沿江世纪七十年代，江苏沿江居民到上海，最有可能乘坐的交通工具是居民到上海，最有可能乘坐的交通工具是()A江南制造总局的汽车江南制造总局的汽车 B洋人发明的火车洋人发明的火车 C轮船招商局的轮船轮船招商局的轮船 D福州船政局的军舰福州船政局的军舰 解析解析由材料信息由材料信息“19世纪七十年代，由江苏沿江居民世纪七十年代
24、，由江苏沿江居民到上海到上海”可判断最有可能是轮船招商局的轮船。可判断最有可能是轮船招商局的轮船。答案答案C题组冲关题组冲关1中国近代史上首次打破列强垄断局面的交通行业是中国近代史上首次打破列强垄断局面的交通行业是()A公路运输公路运输 B铁路运输铁路运输C轮船运输轮船运输 D航空运输航空运输解析：解析：根据所学根据所学1872年李鸿章创办轮船招商局，这是洋务年李鸿章创办轮船招商局，这是洋务运动中由军工企业转向兼办民用企业、由官办转向官督商运动中由军工企业转向兼办民用企业、由官办转向官督商办的第一个企业。具有打破外轮垄断中国航运业的积极意办的第一个企业。具有打破外轮垄断中国航运业的积极意义，这
25、在一定程度上保护了中国的权利。据此本题选义，这在一定程度上保护了中国的权利。据此本题选C项。项。答案：答案：C2.右图是右图是1909年年民呼日报民呼日报上登载的上登载的一幅漫画，其要表达的主题是一幅漫画，其要表达的主题是()A帝国主义掠夺中国铁路权益帝国主义掠夺中国铁路权益B西方国家学习中国文化西方国家学习中国文化C西方列强掀起瓜分中国狂潮西方列强掀起瓜分中国狂潮D西方八国组成联军侵略中国西方八国组成联军侵略中国解析：解析：从图片中可以了解到各国举的灯笼是火车形状，从图片中可以了解到各国举的灯笼是火车形状，20世纪初的这一幅漫画正反映了帝国主义掠夺中国铁路世纪初的这一幅漫画正反映了帝国主义掠
26、夺中国铁路权益。权益。B项说法错误，项说法错误，C项不能反映漫画的主题，项不能反映漫画的主题，D项时项时间上不一致。间上不一致。答案：答案：A典题例析典题例析 例例2(2010福建高考福建高考)上海是近代中国茶叶的一个外销上海是近代中国茶叶的一个外销中心。中心。1884年，福建茶叶市场出现了茶叶收购价格与上海出年，福建茶叶市场出现了茶叶收购价格与上海出口价格同步变动的现象。与这一现象直接相关的近代事业是口价格同步变动的现象。与这一现象直接相关的近代事业是 ()A电报业电报业 B大众报业大众报业 C铁路交通业铁路交通业 D轮船航运业轮船航运业 解析解析材料主要反映了信息交流的快捷，故选材料主要反
27、映了信息交流的快捷，故选A。答案答案A题组冲关题组冲关3假如某爱国实业家在假如某爱国实业家在20世纪初需要了解全国各地商业信世纪初需要了解全国各地商业信息，可采用的最快捷的方式是息，可采用的最快捷的方式是 ()A乘坐飞机赴各地了解乘坐飞机赴各地了解 B通过无线电报输送讯息通过无线电报输送讯息C通过互联网通过互联网 D乘坐火车赴各地了解乘坐火车赴各地了解解析：解析：本题考查中国近代物质生活的变迁。注意题干信本题考查中国近代物质生活的变迁。注意题干信息息“20世纪初世纪初”“最快捷的方式最快捷的方式”，因此应选，因此应选B，火车速度，火车速度远不及电报快。远不及电报快。20世纪世纪30年代民航飞机
28、才在中国出现，年代民航飞机才在中国出现，互联网出现在互联网出现在20世纪世纪90年代。年代。答案：答案：B4下列不属于通讯工具变迁和电讯事业发展影响的是下列不属于通讯工具变迁和电讯事业发展影响的是()A信息传递快捷简便信息传递快捷简便B改变着人们的思想观念改变着人们的思想观念C阻碍了人们的感情交流阻碍了人们的感情交流D影响着人们的社会生活影响着人们的社会生活解析：解析：新式通讯工具方便快捷，便于人们感情的沟通和交流。新式通讯工具方便快捷，便于人们感情的沟通和交流。答案：答案：C关键词关键词交通和通讯不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应交通和通讯不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应 时代潮流时代潮流
29、图说历史图说历史主旨句归纳主旨句归纳(1)近代交通由传统的人力工具逐渐演变为近代交通由传统的人力工具逐渐演变为 机械动力牵引的新式交通工具，火车、机械动力牵引的新式交通工具，火车、汽车、电车、轮船、飞机先后出现。汽车、电车、轮船、飞机先后出现。(2)通讯工具由传统的邮政通信发展为先进通讯工具由传统的邮政通信发展为先进 的电讯工具，有线电报、电话、无线电的电讯工具，有线电报、电话、无线电 报先后发明。报先后发明。(3)近代以来，交通、通讯工具的进步，推近代以来，交通、通讯工具的进步，推 动了经济与社会的发展。动了经济与社会的发展。关键词关键词交通和通讯不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应交通和通讯
30、不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应时时 代潮流代潮流图说历史图说历史主旨句归纳主旨句归纳(1)1911年，革命党人发动武昌起义，辛亥年，革命党人发动武昌起义，辛亥革命革命 爆发，随后建立了中华民国，颁布了爆发，随后建立了中华民国，颁布了中中华华 民国临时约法民国临时约法；辛亥革命是中国近代化；辛亥革命是中国近代化进进 程的里程碑。程的里程碑。(2)1924年国民党年国民党“一大一大”召开，标志着第召开，标志着第 一一次次 国共国共 合作正式实现，国民大革命兴起。合作正式实现，国民大革命兴起。(3)1926年国民革命军出师北伐，连克武昌、年国民革命军出师北伐，连克武昌、九九 江，直捣南京、上海，
31、取得巨大成功。江，直捣南京、上海，取得巨大成功。关键词关键词交通和通讯不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应交通和通讯不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应时时 代潮流代潮流图说历史图说历史主旨句归纳主旨句归纳(1)20世纪初，孙中山提出世纪初，孙中山提出“民族、民权、民族、民权、民生民生”三民主义，成为以后辛亥革命三民主义，成为以后辛亥革命的的 指导思想。指导思想。(2)三民主义没有明确提出反帝要求，也三民主义没有明确提出反帝要求，也没没 有提出废除封建土地制度，是一个不有提出废除封建土地制度，是一个不彻彻 底的资产阶级革命纲领。底的资产阶级革命纲领。(3)1924年，孙中山将三民主义发展为新年，孙中山将三民主义发展为新三三 民主义，明确提出了反帝要求，它成民主义，明确提出了反帝要求，它成为为 第一次国共合作的政治基础和国民大第一次国共合作的政治基础和国民大革革 命的旗帜。命的旗帜。
