1、学习和初步掌握玉米小斑病抗性鉴定技术。学习和初步掌握玉米小斑病抗性鉴定技术。1 1、玉米小斑病的主要症状特征观察。、玉米小斑病的主要症状特征观察。2 2、玉米小斑病的接种方法。、玉米小斑病的接种方法。3 3、玉米小斑病的病情与抗性级别鉴定。、玉米小斑病的病情与抗性级别鉴定。玉米小斑病（玉米小斑病（Helminthosporium maydis）是是温暧潮湿地区玉米产区广泛发生的一种病害，也是我温暧潮湿地区玉米产区广泛发生的一种病害，也是我国玉米生产上的主要病害之一，流行年份往往造成严国玉米生产上的主要病害之一，流行年份往往造成严重损失。选育抗病自交系和杂交种，是防治小斑病最重损失。选育抗病自交
2、系和杂交种，是防治小斑病最经济有效的措施。玉米从幼苗到成株均可发病，通常经济有效的措施。玉米从幼苗到成株均可发病，通常从下部叶片开始向上蔓延，先从叶面产生褐色小点，从下部叶片开始向上蔓延，先从叶面产生褐色小点，后扩大成后扩大成23mm的褐色病斑，病斑受叶脉限制，常的褐色病斑，病斑受叶脉限制，常常成不规则形。发病适温为常成不规则形。发病适温为2530。根据小斑病菌侵染特点的不同，可将小斑病菌划分为根据小斑病菌侵染特点的不同，可将小斑病菌划分为O小种和小种和T小种两个生理小种。小种两个生理小种。T小种对小种对T型细胞质有专化型细胞质有专化毒性，故育种上应尽量避免使用有专化性的细胞质类型。毒性，故育
3、种上应尽量避免使用有专化性的细胞质类型。玉米对小斑病抗性表现亦有两种，一是多基因控制，表玉米对小斑病抗性表现亦有两种，一是多基因控制，表现为病斑数量少，在保湿条件下，病斑形成的孢子少，现为病斑数量少，在保湿条件下，病斑形成的孢子少，孢子形成时间较长。二是由隐性单基因孢子形成时间较长。二是由隐性单基因rhm控制，表现控制，表现为小的褪绿病斑。为小的褪绿病斑。鉴定玉米育咱材料抗小斑病的方法有自然诱发鉴定，鉴定玉米育咱材料抗小斑病的方法有自然诱发鉴定，大田诱发鉴定和人工接种鉴定。但以人工接种鉴定较为大田诱发鉴定和人工接种鉴定。但以人工接种鉴定较为可靠。可靠。（一）所需用品（一）所需用品1、材料：供试
4、玉米材料、玉米抗病和感病对照材料。材料：供试玉米材料、玉米抗病和感病对照材料。玉米小斑病菌种，玉米小斑病菌种，T小种的培养物；上一季感染小种的培养物；上一季感染O小小种小斑病的玉米植株病叶。种小斑病的玉米植株病叶。2、仪器用具：高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接仪器用具：高压灭菌锅、超净工作台、酒精灯、接种环、恒温箱、烧杯、漏斗、试管、纱布、玻璃棒、种环、恒温箱、烧杯、漏斗、试管、纱布、玻璃棒、培养皿、显微镜、小喷雾器、保湿罩等。培养皿、显微镜、小喷雾器、保湿罩等。3、药品试剂：药品试剂：75%酒精、酒精、0.1%升汞溶液、葡萄糖、升汞溶液、葡萄糖、琼脂、马铃薯等。琼脂、马铃薯等。用具用具（二
5、）操作方法（二）操作方法1.苗期接种鉴定苗期接种鉴定（1）菌种的培养）菌种的培养病原菌的分离病原菌的分离选取新鲜病叶作为分离材料，在灭菌室内进行操作。先将选取新鲜病叶作为分离材料，在灭菌室内进行操作。先将病斑剪成病斑剪成45mm2大小，约大小，约3040块，然后分别将病组织小块置块，然后分别将病组织小块置于于0.1%升汞溶液中消毒升汞溶液中消毒1min，立即取出，按无菌操作方法投，立即取出，按无菌操作方法投入无菌水中清洗三次，每次入无菌水中清洗三次，每次23min。最后以无菌操作方法，。最后以无菌操作方法，将病斑组织按正方形四点排列，栽种在将病斑组织按正方形四点排列，栽种在PDA平板培养基（去
6、皮平板培养基（去皮马铃薯马铃薯20g，葡萄糖，葡萄糖1020g，琼脂，琼脂1720g，水，水100ml）上，置）上，置2530 温箱中培养约温箱中培养约7天。天。菌种的纯化菌种的纯化 选取培养性状典型的菌落，按无菌操作方法移植选取培养性状典型的菌落，按无菌操作方法移植到斜面培养基上（每个典型菌落移到斜面培养基上（每个典型菌落移3管），然后再放管），然后再放在在25 恒温下培养。待产生孢子后，选取菌落较一致恒温下培养。待产生孢子后，选取菌落较一致的斜面的斜面12管，挑取一点，观察孢子的形状、分隔数、管，挑取一点，观察孢子的形状、分隔数、脐点特点。然后计测孢子大小。确认纯种后，再用斜脐点特点。然后
7、计测孢子大小。确认纯种后，再用斜面培养基扩大培养，让其产生大量孢子后，置冰箱中面培养基扩大培养，让其产生大量孢子后，置冰箱中保存待用。保存待用。菌丝形态菌丝形态（2 2）孢子悬浮液的制备）孢子悬浮液的制备 用少量无菌水倒入已产孢子的斜面培养基试管中，用少量无菌水倒入已产孢子的斜面培养基试管中，猛力摇动冲洗孢子。也可辅以接种环表层刮除。最后猛力摇动冲洗孢子。也可辅以接种环表层刮除。最后将所有冲洗孢子液集中在洁净的三角瓶中。用纱布滤将所有冲洗孢子液集中在洁净的三角瓶中。用纱布滤去菌丝及培养基，滤液用蒸馏水稀释，调至在去菌丝及培养基，滤液用蒸馏水稀释，调至在100倍倍显微镜下每个视野有显微镜下每个视
8、野有5个孢子浓度的悬浮液待用。个孢子浓度的悬浮液待用。（3）接种病菌）接种病菌 接种小斑病的适宜时期是在玉米接种小斑病的适宜时期是在玉米6个叶片左右。个叶片左右。接种前在配制好的孢子液中加入接种前在配制好的孢子液中加入2%蔗糖，以促进病蔗糖，以促进病菌孢子萌发。接种菌液量是每株菌孢子萌发。接种菌液量是每株12ml。用微型喷雾。用微型喷雾器均匀喷雾，喷后立即以塑料袋套盆保温，置器均匀喷雾，喷后立即以塑料袋套盆保温，置25左左右温度下保湿右温度下保湿24小时。小时。（4）病情鉴定和分级标准）病情鉴定和分级标准 接种后接种后710天即可进行病情鉴定。鉴定应在同一天内完成。天即可进行病情鉴定。鉴定应在
9、同一天内完成。鉴定项目和标准如下：鉴定项目和标准如下：发病程度发病程度以叶片为单位进行鉴定。根据病斑占叶片面积的百分率，记载每以叶片为单位进行鉴定。根据病斑占叶片面积的百分率，记载每片叶的感病程度。发病程度分为片叶的感病程度。发病程度分为9级（级（表表1）。鉴定接种部位的）。鉴定接种部位的叶片，每株叶片，每株4片叶，每个供试材料片叶，每个供试材料10株共株共40片。片。以整株为单位，根据整株的发病情况，分为以整株为单位，根据整株的发病情况，分为7个等级（个等级（表表2）。而）。而后，以叶片为单位，后，以叶片为单位，计算病叶率和病情指数计算病叶率和病情指数。病情病情计算公式%100调查叶片总数发
10、病叶片数病叶率100最高一级代表数值调查总叶数该级的代表数值各级病叶数病情指数表表1 玉米小斑病叶片发病程度分级标准玉米小斑病叶片发病程度分级标准 等等 级级病斑占叶片面积病斑占叶片面积（%）01234567801256101120213031505170700级级1级级2级级3级级4级级5级级6级级7级级8级级表表2 玉米小斑病整株发病程度分级标准玉米小斑病整株发病程度分级标准 级别级别 全株叶片病斑占总叶面积（全株叶片病斑占总叶面积（%）0全株叶片无病全株叶片无病0.5植株下部叶片有零星病斑（占叶片面积植株下部叶片有零星病斑（占叶片面积10%以下）以下）1植株下部叶片有少量病斑（占叶片面积
11、植株下部叶片有少量病斑（占叶片面积11%25%）2植株下部叶片有中量病斑（占叶片面积植株下部叶片有中量病斑（占叶片面积26%50%）3植株下部叶片有多量病斑（占叶片面积植株下部叶片有多量病斑（占叶片面积51%以上），出现大片枯死以上），出现大片枯死现象，中上部叶片有中量病斑（占叶面积现象，中上部叶片有中量病斑（占叶面积26%50%），上部叶片），上部叶片有少量病斑（占叶面积有少量病斑（占叶面积1025%）4植株下部叶片基本枯死，中部叶片有多量病斑（占叶面积植株下部叶片基本枯死，中部叶片有多量病斑（占叶面积50%以以上），出现大片枯死现象，上部叶片有中量病斑（占叶面积上），出现大片枯死现象，上部
12、叶片有中量病斑（占叶面积2650%）。）。5全株基本枯死。全株基本枯死。0.5级级1级级2级级3级级4级级5级级0级级病情鉴定和分级标准病情鉴定和分级标准（续）（续）病斑长度病斑长度随机测量随机测量40个独立的病斑，每株个独立的病斑，每株4个，以个，以mm为单位。为单位。抗病性的反应型抗病性的反应型病斑反应型分为三级，分级标准见病斑反应型分为三级，分级标准见表表3。表表3 3 玉米小斑病抗性反应型分级标准玉米小斑病抗性反应型分级标准 病斑型病斑型病斑症状病斑症状坏死型坏死型 病斑中央的坏死部分为黄褐色，周围有深色的病斑中央的坏死部分为黄褐色，周围有深色的边缘，病斑周围和两端没有暗绿色的浸润区。
13、边缘，病斑周围和两端没有暗绿色的浸润区。萎蔫型萎蔫型 病斑中央的坏死部分为灰褐色至近似灰白色，病斑中央的坏死部分为灰褐色至近似灰白色，没有深色边缘，在坏死斑周围或两端有绿色的浸没有深色边缘，在坏死斑周围或两端有绿色的浸润区，在高温、潮湿、光照弱的条件下浸润区扩润区，在高温、潮湿、光照弱的条件下浸润区扩展快，并且叶片迅速呈暗绿色，萎蔫死亡。展快，并且叶片迅速呈暗绿色，萎蔫死亡。褪绿病斑型褪绿病斑型 病斑小，病斑中央为白色坏死，没有绿色边缘，病斑小，病斑中央为白色坏死，没有绿色边缘，病斑周围有褪绿晕圈。病斑周围有褪绿晕圈。坏死型坏死型萎蔫型萎蔫型褪绿病斑型褪绿病斑型2.2.成株期接种鉴定成株期接种
14、鉴定 接种接种：抽雄前将粉碎的头一年病叶撒入心叶喇叭口，：抽雄前将粉碎的头一年病叶撒入心叶喇叭口，接种应在下午或傍晚湿度较大时进行。天气干燥时，接种应在下午或傍晚湿度较大时进行。天气干燥时，接种后可在每株心叶喷水。接种后可在每株心叶喷水。病情鉴定和分级标准病情鉴定和分级标准：抽丝后：抽丝后15天左右进行病情天左右进行病情鉴定，鉴定应在同一天内完成。发病程度以整株为单鉴定，鉴定应在同一天内完成。发病程度以整株为单位，分位，分7个等级。分级标准见个等级。分级标准见表表2。一般用于苗期和成。一般用于苗期和成株期抗病性鉴定。整株调查中，植株上、中、下叶片株期抗病性鉴定。整株调查中，植株上、中、下叶片的
15、划分，以第一果穗上下两片叶为中部叶，其下为下的划分，以第一果穗上下两片叶为中部叶，其下为下部叶，其上为上部叶。部叶，其上为上部叶。表表2 玉米小斑病整株发病程度分级标准玉米小斑病整株发病程度分级标准 级别级别 全株叶片病斑占总叶面积（全株叶片病斑占总叶面积（%）0全株叶片无病全株叶片无病0.5植株下部叶片有零星病斑（占叶片面积植株下部叶片有零星病斑（占叶片面积10%以下）以下）1植株下部叶片有少量病斑（占叶片面积植株下部叶片有少量病斑（占叶片面积11%25%）2植株下部叶片有中量病斑（占叶片面积植株下部叶片有中量病斑（占叶片面积26%50%）3植株下部叶片有多量病斑（占叶片面积植株下部叶片有多
16、量病斑（占叶片面积51%以上），出现大片枯死以上），出现大片枯死现象，中上部叶片有中量病斑（占叶面积现象，中上部叶片有中量病斑（占叶面积26%50%），上部叶片），上部叶片有少量病斑（占叶面积有少量病斑（占叶面积1025%）4植株下部叶片基本枯死，中部叶片有多量病斑（占叶面积植株下部叶片基本枯死，中部叶片有多量病斑（占叶面积50%以以上），出现大片枯死现象，上部叶片有中量病斑（占叶面积上），出现大片枯死现象，上部叶片有中量病斑（占叶面积2650%）。）。5全株基本枯死。全株基本枯死。0.5级级1级级2级级3级级4级级5级级0级级病株率和病情指数计算病株率和病情指数计算 病株率和病情指数计算方法
17、是以整株为单位进行。病株率和病情指数计算方法是以整株为单位进行。%100调查总株数发病株数病株率100最高一级代表数值调查总株数该级的代表数值各级病株数病情指数1、玉米小斑病发病的适宜条件是什么？、玉米小斑病发病的适宜条件是什么？2、玉米小斑病的典型特征为何？、玉米小斑病的典型特征为何？3、玉米小斑病鉴定的基本环节有哪些？、玉米小斑病鉴定的基本环节有哪些？4、玉米小斑病接种的要点是什么？、玉米小斑病接种的要点是什么？5、玉米品种对小斑病抗性表现分几级？各级表、玉米品种对小斑病抗性表现分几级？各级表现如何？现如何？1 玉米遗传育种学编写组，玉米遗传育种学编写组，1979，玉米遗传育种学，玉米遗传育种学，230260，科学出版社。，科学出版社。2 方中达，方中达，1998，植病研究方法，植病研究方法，p373376，中国，中国农业出版社。农业出版社。
