1、科研选题与实验设计杨哲琼武汉大学基础医学院药理学系探索性实验与流程制定操作步骤实验准备掌握基本技能熟悉仪器操作查阅文献选择实验方法介绍选题及实验设计要求选题完成实验设计开题报告预备实验正式实验数据整理及统计撰写论文及论文答辩2科研选题3选题的基本原则“三性”科学性：选题应建立在前人的科学理论和实验研究基础之上，应符合科学规律，而不是毫无根据的胡思乱想。创新性：选题具有自己的独到之处，或提出新规律、新见解、新技术、新方法，或是对旧有的规律、技术、方法有所修改和补充。可行性：选题切合研究者的学术水平、技术水平和实验室条件，使实验能够顺利实施。4选题基本程序初始想法 发现问题，提出问题查阅文献 查阅
2、相关领域研究进展立题 提出科学假说书写标书 立题依据、研究意义、研究内容及实验方案、创新点与可行性分析、预期进展、经费预算等专家论证 请专家审阅，提出修改意见5科研选题与文献检索立题依据主要来源于：科学领域中存在的空白之处 文献检索给予的启发 文献报道中存在的矛盾与争议问题 前期研究中的新发现为了立题和提出立题依据，必须进行文献检索，包括本研究领域内的国内外研究状况、最新热点和前沿问题等。6文献检索7文献检索内容 研究领域的国内外研究状况（如综述、论文前言和讨论）最新热点和前沿问题（研究意义显著、近年内论文篇数）研究空白点（相关研究论文的篇数）研究内容（借鉴其他相似研究）技术路线 检测指标 研
3、究手段 统计方法 .8中国期刊网中文文献检索方法9101112英文文献检索方法1314151617实验设计18实验设计的“三要素”实验对象 处理因素 实验效应19实验对象1.分类 种属：人 动物 实验水平：整体动物：正常动物、疾病模型、转基因动物等 离体器官：子宫、心脏、小肠等 离体组织：肛尾肌、血管条等 细胞：肝细胞、心肌细胞等202.动物种属的选择常用小鼠、大鼠中枢神经猴 心血管猫 抗过敏豚鼠3.正常动物选择的一般原则年龄、体重 如小鼠1828 g,大鼠180280 g性别 药效多有差异生理与健康状况 需动物合格证214.常用实验动物模型1)肝损伤动物模型 四氯化碳所致动物肝损伤法 醋氨酚
4、所致动物肝损伤法2)肾损伤动物模型 阿霉素所致动物肾损伤法 甘油所致肾损伤法 庆大霉素所致肾损伤法3)哮喘动物模型 组胺和乙酰胆碱引喘法 血小板活化因子诱发哮喘法4)疼痛动物模型 化学刺激法 热板法 电刺激法225)炎症动物模型 耳肿胀法 棉球植入法 6)惊厥动物模型 化学物质惊厥法 电惊厥法7)心律失常动物模型 哇巴因诱发心律失常法 乌头碱诱发心律失常法 8)其它疾病动物模型 查阅文献和相关书籍23处理因素根据研究目的由研究者人为施加给受试对象的因素1.处理因素的标准化 有来源、批号、剂型、给药途径、给药剂量等2.处理因素的数量、水平与设计 分单/多因素设计、单/多水平设计等3.消除非处理因
5、素干扰 年龄、体重、性别等，注意构成比，要一致24实验效应（检测指标）计量指标及统计方法 计数指标及统计方法 等级指标及统计方法25计量资料（定量指标）定义：用定量方法测量每个观察单位的某项指标，所得的数值资料为计量资料，亦称数值变量资料。举例：调查7岁男童生长发育状况时，以人为观察单位，每个人的身高（cm）、体重（kg）和血压（kPa）等数值为计量资料。统计学方法：t 检验 完全随机化设计的两样本均数的t 检验 配对t 检验（配对设计和自身对照设计）方差分析 用于两组或多组样本均数间差别的显著性检验26计数资料（定性指标）定义：先将观察单位按某种属性或类别分组，然后清点各组的观察单位数，为计
6、数资料，亦称无序分类资料。举例：调查某人群的血型分布，按A、B、O、AB型分组得各血型的人数为计数资料。统计学方法：四格表法（22）2检验 行列表法（RC）2检验27等级资料（半定量指标）定义：将观察单位按某种属性的不同程度分组，所得各组的观察单位数为等级资料，亦称有序分类资料。举例：临床疗效按控制、显效、好转和无效分组所得各组人数。等级资料介于计量资料与计数资料之间。统计学方法：秩和检验 Ridit分析 等级相关分析（两事物关联性）28指标选择注意事项 特异性：反映某一特定现象，且不与其他现象相混淆 客观性：易于量化的、经过仪器测量和检验而获得的 重复性：在相同条件下指标变化可以重复出现 灵
7、敏性：由实验方法和仪器的灵敏度共同决定 可行性：既有文献依据，又符合本实验室条件和研究者实际水平29实验设计的“三要素”实例 巴比妥类药物的抗惊厥作用【目的】了解大剂量可拉明的中毒表现惊厥，观察巴比妥类药物的抗惊厥作用。【器材】250ml烧杯，铁丝笼，1ml注射器，注射针头。【药品】1%苯巴比妥钠，0.5%戊巴比妥钠，5%可拉明，生理盐水【方法】取体重相近的小白鼠3只，称重，编号。1号鼠腹腔注射生理盐水0.1 ml/10g，2 号鼠腹腔注射2%苯巴比妥钠溶液0.1 ml/10g，15 min后 3只鼠同时皮下注射5%可拉明0.1 ml/10g，待发生惊厥后(以后肢强直为惊厥指标)，3号鼠立即腹
8、腔注射0.5%戊巴比妥钠溶液0.1 ml/10g，1号鼠不再给药。观察3只鼠出现的症状。30实验设计的“三原则”随机原则 对照原则 重复原则31随机原则 在抽样或分组时必须做到使总体中任何一个个体都有同等的机会被抽取进入样本，以及样本中任何一个个体都有同等机会被分配到任何一个组中去 实现随机化的方法：抽签 查随机数字表或随机排列表 利用计算机产生的伪随机数 通过随机化，降低系统误差的影响32随机数字表33对照原则 目的：通过对照来鉴别处理因素与非处理因素之间的差异，抵消或减少试验误差（实验对象来源、种属、性别、年龄、体重、实验条件、实验方法等）分类：自身对照：是把实验动物本身在实验前、后两阶段
9、的各项相关数据，分别作为对照组和实验组的结果并进行统计学处理。平行对照34平行对照组：1.空白对照（正常对照，阴性对照）：使用不具致病或药理作用的物质作为对照（生理盐水、溶剂）2.标准对照（阳性对照)：用已证实有效、公认或已批准上市的药物作为对照3.相互对照：实验中各实验组之间互为对照（不同剂量组）4.模型对照：在某有关实验条件下所设对照（疾病模型对照、老年对照等）35重复原则（三层含义）1.对某样品进行观测时，为了减少方法和操作等带来的误差，将每一个样品分成n份，测出各份样品某指标的观测值，用它们的算术均数作为每个样品该指标的直接观测值2.在相同的试验条件下，独立重复地观测n个样品（或受试对
10、像），这就是通常所指的“重复试验”，其目的是为了降低以个体差异为主的各种试验误差3.在部分或全部试验条件有规律地变动时，从同一个样品（或受试对像）上重复测量到n个数值，称为具有重复测量的试验或设计36 计量资料的样本数每组不少于5例（10-20例）计数资料的样本数每组不少于10例（30例）37动 物计量资料计数资料小(小鼠、大鼠、蛙)1030中(兔、豚鼠)620大(犬、猫)510利弊 重复利于排除个体差异对观测结果的影响。样本含量n过大：人力不够，工作粗枝大叶，资料可靠度低）样本含量n过小：统计规律无法显露出来 针对具体情况，根据专业和统计学知识作出合理的估计38实验设计的“三原则”实例 阿魏
11、酸钠对雷公多藤甙所致小鼠急性肝损伤的影响【实验方法】取小鼠40只，随机分为5组，每组8只。模型对照组雷公藤多甙片悬液灌胃900 mg/kg每天2次，连续6天。阿魏酸钠小、中、大剂量组分别腹腔注射50、100、150 mg/kg 连续9天，于第4天起于注射阿魏酸钠1 h 后，灌胃雷公藤多甙片悬浊液900 mg/kg，4 h 后再重复灌胃雷公藤多甙片悬液一次。空白对照组给予等量的生理盐水。末次给药4 h后眼眶取血，放置1 h后制备血清，并剪开腹腔取出肝脏，测定肝脏指数。39实践题目：肝损伤对药物作用的影响参考资料：四氯化碳：一种良好的有机溶剂，典型的肝脏毒物 戊巴比妥钠镇静催眠药，主要经肝脏代谢 动物睡眠判断指标：翻正反射（指动物体处于异常体位时所产生的恢复正常体位的反射）40
