1、专题专题2:2:微生物的培养与应用微生物的培养与应用淮北市天一中学生物组 李伟课时纯化大肠杆菌1三、三、实验操作实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌用于培养细菌）课时纯化大肠杆菌21 1计算计算、称量称量操作步骤操作步骤课时纯化大肠杆菌32溶化溶化课时纯化大肠杆菌4 3调调pH：pH76 4过滤：这一步可以省去。过滤：这一步可以省去。课时纯化大肠杆菌5 5加塞加塞 6包扎包扎课时纯化大肠杆菌6 7 7灭菌灭菌:高压蒸气灭菌 8 8倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）近
2、倒平板。（倒平板操作见课本）2d2d后观察平后观察平板，无杂菌污染才可用来接种板，无杂菌污染才可用来接种.9 9无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培的温室中培养养24482448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。课时纯化大肠杆菌7（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法稀释涂布平板法课时纯化大肠杆菌8平板划线的操作平板划线的操作课时纯化大肠杆菌9课时纯化大肠杆菌10一旦划破，会造成划线不均匀，难一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法二是存留在划破处的单
3、个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。处生长，会形成一个条状的菌落。课时纯化大肠杆菌11课时纯化大肠杆菌12课时纯化大肠杆菌13稀释涂布平板法稀释涂布平板法课时纯化大肠杆菌14课时纯化大肠杆菌15课时纯化大肠杆菌16本课题知识小结本课题知识小结:课时纯化大肠杆菌17选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳
4、有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞 加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基苷的培养基:分离杂交瘤细胞分离杂交瘤细胞课时纯化大肠杆菌18问题讨论 若硝化细菌、圆褐固氮菌、不固氮的蓝藻混若硝化细菌、圆褐固氮菌、不固氮的蓝藻混合在一起，我们配置什么样的培养即可以将合在一起，我们配置什么样的培养即可以将三种微生物分离？三种微生物分离？碳源碳源氮源氮源能源能源硝化细菌硝化细菌CO2氨氨氨氨圆褐固氮菌圆褐固氮菌糖类等含糖类等含碳有机物碳有
5、机物N2有机物有机物不固氮的蓝藻不固氮的蓝藻CO2铵盐、硝酸盐铵盐、硝酸盐光光课时纯化大肠杆菌19课时纯化大肠杆菌20课时纯化大肠杆菌21 1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？温度？答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防
6、止瓶口的微生物答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。污染培养基。课时纯化大肠杆菌223.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？还能用来培养微生物吗？为什么？答：答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。培养微生物。课时纯化大肠杆菌23 平板划线的操作方法平板划线的操作方法交叉划线法交叉划线法连续划线法连续划线法 课时纯化大肠杆菌24
