1、第一节第一节 外源化学物的性质和来源外源化学物的性质和来源大气中的化学物大气中的化学物 食品添加剂与污染物食品添加剂与污染物职业性化学物职业性化学物 药物药物其其 它它 来来源源常见的外源化学物常见的外源化学物：农药及灭鼠药农药及灭鼠药金属及其化合物金属及其化合物急性气体中毒急性气体中毒有机溶剂有机溶剂苯的氨基及硝基化学物苯的氨基及硝基化学物第二节第二节 化学物中毒的临床特点化学物中毒的临床特点我国我国四咪唑四咪唑(驱虫净驱虫净tetramizole)导致迟发性导致迟发性脑炎，据推算约有脑炎，据推算约有2020万人万人 药物致聋哑：药物致聋哑：19901990年我国有聋哑儿童年我国有聋哑儿童1
2、80180余余万人，其中药物所致耳聋占万人，其中药物所致耳聋占6060，约，约100100余余万人，并且每年以万人，并且每年以2-42-4万人递增万人递增19991999年年5 5月在比利时发生的月在比利时发生的“二噁因二噁因污染食污染食品品”事件事件20012001年年1 1月，瘦肉精月，瘦肉精”(”(盐酸克伦特罗盐酸克伦特罗)中毒中毒事件事件 典型急性中毒事件典型急性中毒事件慢性中毒事件慢性中毒事件 19511951年以来日本的水俣病事件年以来日本的水俣病事件 19551955年以来日本的富山县痛痛病年以来日本的富山县痛痛病 19611961年以来四日市哮喘年以来四日市哮喘近年来日本慢性砷
3、中毒近年来日本慢性砷中毒 日本政府于日本政府于19741974年宣布水俣病、痛痛病和年宣布水俣病、痛痛病和四日市哮喘为公害病后，又宣布慢性砷中四日市哮喘为公害病后，又宣布慢性砷中毒为第四公害病毒为第四公害病 急性毒性试验急性毒性试验(acute toxicity test)是大剂量是大剂量高浓度一次给予试验动物，目的是了解外高浓度一次给予试验动物，目的是了解外源性化合物短期内的毒性作用，并对诊断、源性化合物短期内的毒性作用，并对诊断、预防和急救治疗提供科学依据预防和急救治疗提供科学依据。毒性效应的快慢和剧烈程度可因接触化合毒性效应的快慢和剧烈程度可因接触化合物的性质物的性质(主要是化学结构和理
4、化性质主要是化学结构和理化性质)和和染毒剂量不同而异染毒剂量不同而异。可大体分为两类：可大体分为两类：急性致死性毒性试验急性致死性毒性试验 急性非致死性毒性试验急性非致死性毒性试验 急性毒性试验的类型急性毒性试验的类型急性毒性急性毒性求出受试化合物对一种或几种试验动物的致死剂求出受试化合物对一种或几种试验动物的致死剂量量(通常以通常以LDLD5050为主要参数为主要参数)，确定有无毒性、毒，确定有无毒性、毒性大小、毒作用特点。性大小、毒作用特点。求出该化合物的求出该化合物的剂量反应关系剂量反应关系，为亚急性、慢，为亚急性、慢性毒性试验等的剂量选择、种属选择和观察指标性毒性试验等的剂量选择、种属
5、选择和观察指标的选择等提供依据。的选择等提供依据。确定环境中受试化合物侵入机体的确定环境中受试化合物侵入机体的途径途径，研究化，研究化合物在机体的合物在机体的生物转运生物转运和和生物转化生物转化过程及其毒代过程及其毒代动力学。动力学。研究化合物急性中毒诊断、预防和急救治疗措施。研究化合物急性中毒诊断、预防和急救治疗措施。急性毒性急性毒性二、急性毒性研究的目的二、急性毒性研究的目的 动物试验设计动物试验设计,应考虑的要素及其要求？应考虑的要素及其要求？实验动物的选择和分组实验动物的选择和分组 受试动物的染毒途径和方式的选择受试动物的染毒途径和方式的选择 剂量组设计剂量组设计毒性反应指标的选择毒性
6、反应指标的选择 选择实验动物的原则：选择实验动物的原则：要求在其接触化合物之后的毒性反应要求在其接触化合物之后的毒性反应应当与人接触该化合物的毒性反应基应当与人接触该化合物的毒性反应基本一致本一致 应选用两种以上试验动物，常选用大应选用两种以上试验动物，常选用大白鼠和小白鼠白鼠和小白鼠试验动物操作方便，易于饲养，价格试验动物操作方便，易于饲养，价格较低，易于获得。较低，易于获得。急性毒性急性毒性三、实验动物的选择三、实验动物的选择 研究内容研究内容 实验动物实验动物 急性毒性急性毒性免疫毒性免疫毒性放射病放射病过敏反应过敏反应呕吐呕吐致热反应致热反应气体毒物对粘膜的气体毒物对粘膜的 刺激作用刺
7、激作用吸入性粉尘吸入性粉尘药物对皮肤局部作用药物对皮肤局部作用实质性脏器的毒作用实质性脏器的毒作用迟发性神经毒性迟发性神经毒性血压变化血压变化动脉粥样硬化动脉粥样硬化慢性毒性慢性毒性致畸性致畸性致突变性、致癌性致突变性、致癌性大、小鼠大、小鼠大、小鼠、最常用大、小鼠、最常用C57BL/6狗、大、小鼠，不宜用兔狗、大、小鼠，不宜用兔豚鼠豚鼠(豚鼠豚鼠家兔家兔狗狗小鼠小鼠猫猫青青蛙蛙)狗、猫，不宜用草食动物狗、猫，不宜用草食动物兔兔 猫猫 不宜用大鼠小鼠和狗不宜用大鼠小鼠和狗(无汗腺无汗腺)猫猫大鼠大鼠兔、豚鼠兔、豚鼠小鼠小鼠来亨鸡来亨鸡狗、大鼠、兔狗、大鼠、兔兔、鸡、鸽、猴兔、鸡、鸽、猴 大鼠、
8、狗大鼠、狗大、小鼠、兔大、小鼠、兔小鼠、大鼠小鼠、大鼠实验动物的选择实验动物的选择 急性毒性急性毒性动物分组：动物分组：均衡性均衡性和和随机性随机性急性毒性急性毒性要求各组动物的平均体重及体重的要求各组动物的平均体重及体重的离散度尽可能一致。具体来说是：离散度尽可能一致。具体来说是：(1)实验动物的体重不应超过全体实实验动物的体重不应超过全体实 验动物平均体重的验动物平均体重的20%控制离控制离 散度散度;(2)每组之间的平均体重相差不应超每组之间的平均体重相差不应超 过过10%控制均衡性。控制均衡性。均衡性：均衡性：每只动物分散到各组去的机每只动物分散到各组去的机会是均等的，以避免成见或会是
9、均等的，以避免成见或系统误差。一般采用随机区系统误差。一般采用随机区组法。组法。急性毒性急性毒性随机化：随机化：四、受试物的来源及染毒途径四、受试物的来源及染毒途径 经口染毒经口染毒 经呼吸道染毒经呼吸道染毒 经皮肤染毒经皮肤染毒 经注射染毒经注射染毒急性毒性急性毒性灌胃灌胃喂食喂食吞咽胶囊吞咽胶囊空腹空腹给予给予23h后复食后复食灌胃的体积不超过体重的灌胃的体积不超过体重的 12%1.经口染毒经口染毒灌胃时灌胃时应注意应注意急性毒性急性毒性2.经呼吸道染毒经呼吸道染毒 吸入接触吸入接触 将受试化合物注入动物将受试化合物注入动物 气管肺内气管肺内吸入接触吸入接触 静式吸入静式吸入 动式吸入动式
10、吸入急性毒性急性毒性3.经皮肤染毒经皮肤染毒人和动物的皮肤厚度人和动物的皮肤厚度皮肤类型皮肤类型 角质层角质层(m)表皮层表皮层(m)完整皮肤完整皮肤(mm)人人猪猪大鼠大鼠无毛小鼠无毛小鼠小鼠小鼠 16.8 0.726.4 0.418.4 0.58.9 0.4 5.8 0.3 46.9 2.365.8 1.832.1 1.328.6 0.9 12.6 0.8 2.97 0.283.43 0.052.09 0.070.70 0.02 0.84 0.02 急性毒性急性毒性吸收速度：吸收速度：阴囊阴囊前额头皮前额头皮背部腹部背部腹部手掌及足掌手掌及足掌手背手背手掌手掌定性试验：定性试验：小鼠和大鼠
11、的浸尾试验是小鼠和大鼠的浸尾试验是 常用的定性试验方法。常用的定性试验方法。定量试验：定量试验：在试验动物一脱好毛的部位涂在试验动物一脱好毛的部位涂 布受试物，以求该化合物经皮布受试物，以求该化合物经皮 吸收的剂量反应关系，求经吸收的剂量反应关系，求经 皮皮LD50 急性毒性急性毒性观察项目观察项目 评分评分 红斑与焦痂形成红斑与焦痂形成 无红斑无红斑 很轻微红斑很轻微红斑 易于察觉红斑易于察觉红斑 中度至严重红斑中度至严重红斑 严重红斑至轻微焦痂形成严重红斑至轻微焦痂形成水肿形成水肿形成 无水肿无水肿 很轻微水肿很轻微水肿 轻度水肿轻度水肿(边缘隆起边缘隆起)中度水肿中度水肿(隆起约隆起约1
12、cm)重度水肿重度水肿(隆起隆起1cm)01234 012 3 4 皮肤反应评价标准皮肤反应评价标准 急性毒性急性毒性 不少外来化合物可引起皮不少外来化合物可引起皮肤接触部位的局部损伤，研究肤接触部位的局部损伤，研究化合物的局部毒性常用化合物的局部毒性常用皮肤斑皮肤斑贴法贴法或或兔耳法兔耳法及及兔结膜囊兔结膜囊刺激刺激试验。试验。急性毒性急性毒性局部作用试验局部作用试验：4.经注射染毒经注射染毒常用实验动物给予受试物的体积常用实验动物给予受试物的体积(ml)注射方式注射方式 小鼠小鼠 大鼠大鼠 豚鼠豚鼠 兔兔 狗狗 腹腔腹腔肌肉肌肉静脉静脉皮下皮下 0.2 1.00.1 0.20.2 0.50
13、.1 0.51 30.2 0.51 20.5 1 2 50.2 0.51 50.5 2 5 100.5 13 101 3 5 152 55 153 10 急性毒性急性毒性五、毒性反应的观察与检查五、毒性反应的观察与检查 气管或系统气管或系统 观察项目观察项目中毒后常见的表现中毒后常见的表现CNS和和神经肌肉系统神经肌肉系统 植物神经系统植物神经系统 呼吸系统呼吸系统 泌尿生殖系统泌尿生殖系统 皮肤和被毛皮肤和被毛眼睛眼睛 行为行为运动状态运动状态 对刺激反应性对刺激反应性 脑脊髓反射脑脊髓反射肌肉张力肌肉张力瞳孔大小瞳孔大小腺体分泌腺体分泌鼻鼻呼吸表现呼吸表现阴户阴户 乳腺乳腺阴茎阴茎颜色张力
14、颜色张力眼睑眼睑 眼球眼球 角膜角膜 体位异常体位异常 叫声异常叫声异常 活动异常活动异常 呆卧少动呆卧少动 痉挛痉挛 抽搐抽搐 震颤震颤 强强直直 麻痹麻痹 运动失调运动失调易兴奋易兴奋 感觉迟钝或过敏感觉迟钝或过敏 反应反应低下或过高低下或过高减弱或消失减弱或消失松驰或紧张松驰或紧张散大或缩小散大或缩小流涎流涎 流泪流泪鼻孔溢液鼻孔溢液 鼻翼扇动鼻翼扇动徐缓徐缓 过速过速 困难困难 衰竭衰竭肿胀肿胀 分泌物增多分泌物增多 会阴部污秽会阴部污秽脱出脱出皮肤充血皮肤充血 紫绀紫绀 被毛蓬松被毛蓬松 污秽污秽眼球突出，充血，角膜混浊，眼球突出，充血，角膜混浊，血性分泌物血性分泌物 急性毒性急性毒
15、性 受试动物给予受试物后，应密切受试动物给予受试物后，应密切注意各组动物的毒性反应情况。注意各组动物的毒性反应情况。观察时间：观察时间：一般为一般为2周周观察指标：观察指标：中毒症状中毒症状 死亡情况死亡情况 大体解剖大体解剖 急性毒性急性毒性 中毒症状中毒症状的观察是了解该化合物急的观察是了解该化合物急性毒性的十分重要的一环，是补充性毒性的十分重要的一环，是补充LDLD5050这个参数不足的重要方面。故应这个参数不足的重要方面。故应详细地观察动物的中毒症状、发生发详细地观察动物的中毒症状、发生发展过程及转归，死亡前症状特点，死展过程及转归，死亡前症状特点，死亡时间等。这有助于揭示化合物甚至亡
16、时间等。这有助于揭示化合物甚至同类化合物的不同衍生物的急性毒性同类化合物的不同衍生物的急性毒性特征。特征。急性毒性急性毒性第二节第二节 急性毒性的主要指标急性毒性的主要指标 一、致死性急性毒作用指标一、致死性急性毒作用指标 (一一)LD50及其相关指标及其相关指标绝对致死量绝对致死量(absalute lethal dose,LD100)是指引起一群机体全部死亡的最小剂量。是指引起一群机体全部死亡的最小剂量。一群是一个广泛的概念，可能包括一群是一个广泛的概念，可能包括10、50、100或更多。或更多。急性毒性急性毒性指引起一群个体指引起一群个体50%死亡所需的剂量，死亡所需的剂量，也称致死中量
17、。也称致死中量。LD50的数值越小，化合物的的数值越小，化合物的毒性越强，反之毒性越强，反之LD50的数值越大，则毒性越的数值越大，则毒性越低低.表示表示LD50的单位为的单位为mg/kg体重，如体重，如DDT的的LD50为为300mg/kg体重体重(大鼠大鼠,经口经口)。急性毒性急性毒性半数致死量半数致死量(median lethal dose,LD50)急性毒性急性毒性半数致死浓度半数致死浓度(LC50):引起一群个体引起一群个体50%死亡所需浓度，死亡所需浓度，一般以一般以mg/m3表示空气中外源化表示空气中外源化合物的浓度，以合物的浓度，以mg/L表示水中外表示水中外源化合物的浓度。源
18、化合物的浓度。最小致死剂量最小致死剂量(minimum lethal dose,MLD或或LD01)是指在一群机体中仅引起个别发是指在一群机体中仅引起个别发生死亡的最低剂量。低于此剂量即不能使生死亡的最低剂量。低于此剂量即不能使机体出现死亡。机体出现死亡。最大耐受剂量最大耐受剂量(maximal lethal dose,MTD或或LD0)是指在一群个体中不引起死亡的是指在一群个体中不引起死亡的最高剂量。接触此剂量的个体可以出现严最高剂量。接触此剂量的个体可以出现严重的毒性作用，但不发生死亡。重的毒性作用，但不发生死亡。急性毒性急性毒性(二二)LD50的测定的测定 预预 试试:求出求出LD0和和
19、 LD100急性毒性急性毒性正式试验正式试验：剂剂 量量 组：组：LD100之间安排之间安排5-7个剂量组，个剂量组，10只只/组组组组 距：距：0.65-0.85倍。倍。计算方法：寇氏法和概率单位法最常用计算方法：寇氏法和概率单位法最常用(三三)LD50应用中的注意问题应用中的注意问题 试验条件的同一性试验条件的同一性 不能反应这个化合物引起的中毒特征不能反应这个化合物引起的中毒特征 因此，有助于补充因此，有助于补充LD50参数不足的方参数不足的方法，除了中毒症状的描述之外，还有一法，除了中毒症状的描述之外，还有一个参数是求化合物的急性毒作用带个参数是求化合物的急性毒作用带(acute ef
20、fect zone)。急性毒性急性毒性为何常用为何常用LD50或作为表示或衡量或作为表示或衡量化合物急性毒性指标的理由化合物急性毒性指标的理由 代表性好代表性好：动物死亡数的频数分布情况，：动物死亡数的频数分布情况，60-70%的死亡动物集中在的死亡动物集中在LD50附近。附近。敏感性高敏感性高：典型的剂量反应曲线为：典型的剂量反应曲线为S 型，型，LD50斜度较大，斜度较大，50%剂量稍有变化，剂量稍有变化，即可引起死亡率的明显改变。即可引起死亡率的明显改变。重现性好重现性好：实验证明死亡率：实验证明死亡率50%处其致死处其致死 量非常一致，与量非常一致，与LD100 和和LD0等相比有更等
21、相比有更 高的重现性。高的重现性。急性毒性急性毒性不能反映非致死性中毒、形态和功能不能反映非致死性中毒、形态和功能 变化等；变化等；它是一系列实验动物的统计值；它是一系列实验动物的统计值；LD50仅能反映一个点的情况，而剂量仅能反映一个点的情况，而剂量 死亡曲线的斜度不同，即使死亡曲线的斜度不同，即使LD50相同，相同，其危险性也不同。其危险性也不同。急性急性LD50的观察时间短促，会漏失对的观察时间短促，会漏失对 动物双相死亡现象的认识。动物双相死亡现象的认识。急性毒性急性毒性LD50的缺点：的缺点：毒作用带毒作用带(acute effect aone)：是指化合是指化合物毒性上线和毒性下限
22、的比值，表示引物毒性上线和毒性下限的比值，表示引起试验动物死亡剂量和最低毒作用剂量起试验动物死亡剂量和最低毒作用剂量之间的剂量范围。急性毒作用带通常是之间的剂量范围。急性毒作用带通常是以以LD50值与急性阈剂量的比值表示，即值与急性阈剂量的比值表示，即ZacLD50/Limac急性毒性急性毒性 亦称最小有作用剂量亦称最小有作用剂量(minimal effect level)，使机体某项灵敏的观察指标发生异常变化使机体某项灵敏的观察指标发生异常变化或使机体出现损害作用所需的最低剂量。或使机体出现损害作用所需的最低剂量。或指在实验总体中的一组受试动物中个别或指在实验总体中的一组受试动物中个别动物出
23、现毒性效应的最低剂量，在该剂量动物出现毒性效应的最低剂量，在该剂量下的任何剂量均不应再出现毒性效应。这下的任何剂量均不应再出现毒性效应。这一比值的大小可以反应急性阈剂量与一比值的大小可以反应急性阈剂量与D50距离的宽窄。比值越大，表明化合物引起距离的宽窄。比值越大，表明化合物引起急性死亡的危险性越小，反之则越大。急性死亡的危险性越小，反之则越大。急性毒性急性毒性急性毒作用阈急性毒作用阈(acute threshold level,Limac)第三节第三节 急性毒性的评价急性毒性的评价 农药的急性毒性分级农药的急性毒性分级级级 别别 大鼠经口大鼠经口LD50(mg/kg)大鼠经皮大鼠经皮LD50
24、(mg/kg/4h)大鼠吸入大鼠吸入LD50(mg/m3)2h剧剧 毒毒高高 毒毒中等毒中等毒低低 毒毒 500 2000 2000 急性毒性急性毒性工业毒物急性毒性分级工业毒物急性毒性分级 毒性分级毒性分级 小鼠一次经口小鼠一次经口LD50(mg/kg)小鼠吸入小鼠吸入2hLD50(ppm)兔经皮兔经皮LD50(mg/kg)剧毒剧毒高毒高毒中等毒中等毒 低毒低毒 微毒微毒 10000 50000 5000 急性毒性急性毒性外源性化合物经口急性毒性分级标准外源性化合物经口急性毒性分级标准急性毒性分级急性毒性分级 大鼠经口大鼠经口LD50(mg/kg)大约相当体重大约相当体重70kg人的致死剂量
25、人的致死剂量 6级级(低毒低毒)5级级(剧毒剧毒)4级级(中等毒中等毒)3级级(低毒低毒)2级级(实际无毒实际无毒)1级级(无毒无毒)15000稍尝，稍尝，1050g急性毒性急性毒性外源化合物的急性毒性分级外源化合物的急性毒性分级(WHO)急性分级急性分级 大鼠经口大鼠经口LD50(mg/kg)6只大鼠吸入只大鼠吸入4h，死亡死亡2-4只浓度只浓度(ppm)兔经皮兔经皮LD50(mg/kg体重体重)对人可能致死的估计量对人可能致死的估计量 g/kg体重体重 g/60kg体重体重剧剧 毒毒 1 10 5 15 1000 急性毒性急性毒性第六章第六章 亚慢性和慢性毒性及其评价亚慢性和慢性毒性及其评
26、价 研究外来化合物的亚慢性和慢性毒性作研究外来化合物的亚慢性和慢性毒性作用是是全面评价外来化合物的安全性的主要用是是全面评价外来化合物的安全性的主要内容之一，而且也为制订卫生标准提供实验内容之一，而且也为制订卫生标准提供实验动物的试验依据。动物的试验依据。为查明化合物的慢性中毒往往进行蓄积为查明化合物的慢性中毒往往进行蓄积试验，以初步判断有无慢性中毒的可能，并试验，以初步判断有无慢性中毒的可能，并且也有必要进行亚急性或亚慢性毒性试验作且也有必要进行亚急性或亚慢性毒性试验作为筛选慢性毒性试验所需要观察的毒性效应为筛选慢性毒性试验所需要观察的毒性效应指标。指标。第一节第一节 蓄积效应及其评价蓄积效
27、应及其评价 蓄积毒性蓄积毒性(cumulative toxicity)是指低于是指低于一次中毒剂量的外源化学物质，反复地一次中毒剂量的外源化学物质，反复地与机体接触一定时间后指使机体出现的与机体接触一定时间后指使机体出现的中毒作用。用于观察研究上述致毒作用中毒作用。用于观察研究上述致毒作用过程的试验称为蓄积毒性试验过程的试验称为蓄积毒性试验(cumulative toxicity test)。一、基本概念一、基本概念 当外源性化学物连续、反复进入机当外源性化学物连续、反复进入机体，而且进入的速度体，而且进入的速度(或总量或总量)超过代谢转超过代谢转化和排出的速度化和排出的速度(或总量或总量)时
28、，该物质就又时，该物质就又可能在体内蓄积而产生蓄积毒性。可能在体内蓄积而产生蓄积毒性。物质蓄积物质蓄积:指外源性化学物反复地进入机体指外源性化学物反复地进入机体 内，在体内的吸收量大于排出量，内，在体内的吸收量大于排出量，并在体内逐步积累的过程。并在体内逐步积累的过程。功能蓄积功能蓄积:指不断进入机体的外源化学物，指不断进入机体的外源化学物，对机体反复作用并引起功能发生对机体反复作用并引起功能发生 的改变累积加重，最后导致出现的改变累积加重，最后导致出现 损害作用的过程。损害作用的过程。蓄积作用可分为蓄积作用可分为(一一)蓄积系数法蓄积系数法蓄积系数蓄积系数(cumulative coeffi
29、cient,Kcum)指多次染毒使半数动物出现毒性效应的总有效剂量指多次染毒使半数动物出现毒性效应的总有效剂量(ED50(n)与一次染毒半数有效量与一次染毒半数有效量(ED50(1)之比值，毒之比值，毒性效应包括死亡。性效应包括死亡。半数有效量半数有效量(median effective dose,ED50)指某一物质使指某一物质使50%试验动物产生效应的剂量。试验动物产生效应的剂量。Kcum=ED50(n)/ED50(1)或或:Kcum=LD50(n)/LD50(1)Kcum越小，蓄积毒作用越大。越小，蓄积毒作用越大。二、评价毒物蓄积性的方法二、评价毒物蓄积性的方法生物半减期生物半减期(bi
30、ological half time,简称简称T1/2)指进入机体的外源化学物质通过机体的指进入机体的外源化学物质通过机体的生物转运和生物转化作用过程而被消除生物转运和生物转化作用过程而被消除一半所需要的时间。外源化学物在体内一半所需要的时间。外源化学物在体内的生物半减期越长，在体内的蓄积毒性的生物半减期越长，在体内的蓄积毒性作用就越大。作用就越大。(二二)生物半减期法生物半减期法第二节第二节 亚慢性毒性及其评价亚慢性毒性及其评价 一、亚慢性毒性及其试验目的一、亚慢性毒性及其试验目的亚慢性毒性亚慢性毒性(subchronic toxicity)也称亚急性毒性，是指实验动物连续多日也称亚急性毒性
31、，是指实验动物连续多日接触较大剂量接触较大剂量(小于急性小于急性LD50的剂量的剂量)外来化外来化合物所出现的中毒效应。合物所出现的中毒效应。为慢性毒性研究作选择剂量的准备，为慢性毒性研究作选择剂量的准备，即求出亚慢性毒性的阈剂量或即求出亚慢性毒性的阈剂量或 NOAEL；为慢性毒性研究毒性反应观察指标作为慢性毒性研究毒性反应观察指标作 筛选；分析该化合物作用的可能靶部筛选；分析该化合物作用的可能靶部 位；位；亚慢性毒性试验的目的亚慢性毒性试验的目的环境与食品毒理学：环境与食品毒理学：36月月工业毒理学：工业毒理学：13月月现主张用现主张用90天喂养试验代替亚慢性天喂养试验代替亚慢性毒性试验。毒
32、性试验。二、亚慢性毒性的试验期限二、亚慢性毒性的试验期限(一一)试验动物的选择：试验动物的选择：应为急性毒性试验已证明对受试应为急性毒性试验已证明对受试物物敏感的物种与品系敏感的物种与品系。一般选择两种。一般选择两种试验动物，如啮齿类和非啮齿类，雌试验动物，如啮齿类和非啮齿类，雌雄兼用。雄兼用。三、试验动物的饲养环境及染毒途径三、试验动物的饲养环境及染毒途径(二二)试验动物的饲养环境试验动物的饲养环境(三三)染毒途径染毒途径亚慢性毒性试验染毒途径的选择应考虑两点：亚慢性毒性试验染毒途径的选择应考虑两点：人类实际接触该化合物的途径和方式；人类实际接触该化合物的途径和方式；预期进行慢性毒性试验的接
33、触途径和预期进行慢性毒性试验的接触途径和 方式一致。方式一致。具体有经口、经皮、经呼吸道具体有经口、经皮、经呼吸道亚慢性试验的亚慢性试验的上限剂量，上限剂量，需控制在试验动物接触受需控制在试验动物接触受试化合物的整个过程中，不发生死亡或仅有个别动试化合物的整个过程中，不发生死亡或仅有个别动物死亡，但有明显的中毒效应，或靶器官出现典型物死亡，但有明显的中毒效应，或靶器官出现典型的损伤。此剂量的确定可参考两个数值：一是急性的损伤。此剂量的确定可参考两个数值：一是急性毒性的阈剂量，二是以此化合物毒性的阈剂量，二是以此化合物LDLD5050值的值的1/20-1/51/20-1/5为最高剂量。为最高剂量
34、。最低剂量组动物应不出现毒性效应，接近亚慢性阈最低剂量组动物应不出现毒性效应，接近亚慢性阈剂量水平，中间设剂量水平，中间设1 12 2个剂量组，应出现轻微的中个剂量组，应出现轻微的中毒效应。各剂量组之间的组距至少应大于毒效应。各剂量组之间的组距至少应大于2 2倍。同倍。同时设正常对照组，便于排除实验动物在试验期间随时设正常对照组，便于排除实验动物在试验期间随着年龄增长而发生的某些生理生化变化以及与受试着年龄增长而发生的某些生理生化变化以及与受试物无关的疾病或死亡。物无关的疾病或死亡。四、剂量选择与剂量分组四、剂量选择与剂量分组五、观察指标五、观察指标(一一)一般性指标一般性指标1一般综合性观察
35、指标：为非特异性外一般综合性观察指标：为非特异性外 观指标，是外来化合物对具体毒性观指标，是外来化合物对具体毒性 作作 用的综合性的总体反映。用的综合性的总体反映。体重体重 食物利用率食物利用率 脏器系数或称脏脏器系数或称脏/体比值体比值 2一般生化指标：血象和肝、肾功能的检测一般生化指标：血象和肝、肾功能的检测(二二)病理学检查病理学检查 亚慢性毒性试验应重视病理学的检查亚慢性毒性试验应重视病理学的检查(三三)特异指标特异指标 分析急性毒性作用特征分析急性毒性作用特征 分析化合物的特殊基团分析化合物的特殊基团第三节第三节 慢性毒性及其评价慢性毒性及其评价 慢性毒性慢性毒性(chronic t
36、oxicity):指外源性化合物质长时间指外源性化合物质长时间(大于大于1/10生生命期命期)少量反复作用于机体后所引起的少量反复作用于机体后所引起的损害作用。研究受试动物长时间少量损害作用。研究受试动物长时间少量反复接触受试物，所致损害作用的试反复接触受试物，所致损害作用的试验称验称慢性毒性试验慢性毒性试验(chronic toxicity test).一、概念和目的一、概念和目的最大无作用剂量最大无作用剂量(maximal no effect level,MNEL)亦称未观察到作用的剂量，是指在一亦称未观察到作用的剂量，是指在一 定时间内一种外源化合物按一定方式或定时间内一种外源化合物按一
37、定方式或 途径与机体接触后，根据目前的认识水途径与机体接触后，根据目前的认识水 平，用最为灵敏的试验方法和观察指标，平，用最为灵敏的试验方法和观察指标，未能观察到对机体造成的任何损害作用未能观察到对机体造成的任何损害作用 或使机体出现异常反应的最高剂量。或使机体出现异常反应的最高剂量。最大无作用剂量最大无作用剂量的确定系根据亚慢性的确定系根据亚慢性 试验或慢性毒性试验的结果，是评定外来试验或慢性毒性试验的结果，是评定外来 化合物对机体损害作用的主要依据。以此化合物对机体损害作用的主要依据。以此 为基础可制订一种外来化合物的为基础可制订一种外来化合物的每日容许每日容许 摄入量摄入量(accept
38、able daily intake,ADI)和最和最 高容许浓度高容许浓度(maximal allowable concentration,MAC)。指在一定时间内一种外源化合物按一指在一定时间内一种外源化合物按一定方式或途径与机体接触后，能使某项观定方式或途径与机体接触后，能使某项观察指标开开始出现异常变化或使机体开始察指标开开始出现异常变化或使机体开始出现损害所需要的最大剂量，也称中毒阈出现损害所需要的最大剂量，也称中毒阈剂量或中毒阈值。剂量或中毒阈值。最小有作用剂量最小有作用剂量(minimal effect level)最小有作用浓度最小有作用浓度则表示环境中某种则表示环境中某种化合物
39、能引起机体开始出现某种损化合物能引起机体开始出现某种损害作用所必需的最低浓度。略高于害作用所必需的最低浓度。略高于最大无作用剂量或最大无作用浓度最大无作用剂量或最大无作用浓度的剂量或浓度，即为最小有作用剂的剂量或浓度，即为最小有作用剂量或最小有作用浓度。量或最小有作用浓度。确定外来化合物的毒性下限，即长期确定外来化合物的毒性下限，即长期 接触该化合物可以引起机体危害的阈接触该化合物可以引起机体危害的阈 剂量和无作用剂量。剂量和无作用剂量。为进行该化合物的危险性评价与制订为进行该化合物的危险性评价与制订 人接触该化合物的安全限量提供毒理人接触该化合物的安全限量提供毒理 学依据。如最高容许浓度，每
40、日容许学依据。如最高容许浓度，每日容许 摄入量摄入量(acceptable daily intake,简称简称 ADI,以以mg/kg体重体重/d表示表示)等。等。慢性毒性试验的目的慢性毒性试验的目的二、慢性毒性试验期限二、慢性毒性试验期限 慢性毒性试验实验动物接触外来化慢性毒性试验实验动物接触外来化合物的期限究竟多长为宜，应以实合物的期限究竟多长为宜，应以实验具体要求和所使用的动物物种而验具体要求和所使用的动物物种而定。一般认为工业毒理学大于定。一般认为工业毒理学大于6月，月，环境与食品毒理环境与食品毒理1年至年至2年。年。期限期限(月月)相当相当生命生命(%)相当相当于人于人(月月)相当相
41、当生命生命(%)相当相当于人于人(月月)相当相当生命生命(%)相当相当于人于人(月月)相当相当生命生命(%)相当相当于人于人(月月)123612 24 4.18.212254999 3467101202404808 1.53.04.59.018 36 12243672145 289 0.821.62.54.99.820 6.513.4204081162 0.551.11.63.36.613 4.59132753107 大鼠大鼠 兔兔 狗狗 猴猴接触接触4种试验动物不同接触期限折合生命周期种试验动物不同接触期限折合生命周期的百分数和相等人类寿命的期限的百分数和相等人类寿命的期限三、实验毒物与饲养
42、条件三、实验毒物与饲养条件 实验动物与亚慢性毒性试验相同实验动物与亚慢性毒性试验相同 实验动物的年龄大小鼠应为初断奶者实验动物的年龄大小鼠应为初断奶者四、接触途径四、接触途径 多为经口或经呼吸道，经呼吸道接触，多为经口或经呼吸道，经呼吸道接触，每日接触时间每日接触时间,工业毒物为工业毒物为46h/日日,环境毒环境毒物物8h/日或更长。日或更长。五、剂量的选择与分组五、剂量的选择与分组 一般设一般设3个染毒剂量组和一个对个染毒剂量组和一个对照组，必要时另设一个溶剂对照组。照组，必要时另设一个溶剂对照组。剂量分组剂量分组以亚慢性阈剂以亚慢性阈剂量为出发点量为出发点以急性毒性的以急性毒性的LD50为
43、出发点为出发点高高:发生比较轻微发生比较轻微 毒性效应剂量组毒性效应剂量组亚慢性阈剂量亚慢性阈剂量或其或其1/5 1/21/10中中:阈剂量组阈剂量组1/50 1/101/100低低:无作用剂量组无作用剂量组1/1001/1000六、观察指标六、观察指标 以亚慢性试验的观察指标为基础以亚慢性试验的观察指标为基础 重点观察在亚慢性试验中已显现阳性的指标重点观察在亚慢性试验中已显现阳性的指标但由于剂量较低，一些观察指标变化甚微，为此应注意：但由于剂量较低，一些观察指标变化甚微，为此应注意：对一些预计指标和重点测定的生化指标对一些预计指标和重点测定的生化指标 进行正常值测定，废弃差异较大的动物进行正常值测定，废弃差异较大的动物 动态观察的各项指标，应与对照组同步进行动态观察的各项指标，应与对照组同步进行 化验测定方法应准确可靠，且进行质量控制化验测定方法应准确可靠，且进行质量控制急性阈剂量与慢性阈剂量的比值，即急性阈剂量与慢性阈剂量的比值，即ZchLimac/Limch，为观察和表达慢为观察和表达慢性毒性的又一个参数。此比值越大，引性毒性的又一个参数。此比值越大，引起慢性中毒的剂量或浓度相对较小，表起慢性中毒的剂量或浓度相对较小，表明该化合物更易发生慢性中毒。明该化合物更易发生慢性中毒。慢性毒作用带慢性毒作用带(Zch)：谢 谢！
