1、蔬菜、水果中农药残留蔬菜、水果中农药残留 快速检测技术及应用快速检测技术及应用主要内容主要内容农药残留快速检测的标准目前常用农残检测方法目前常用的农药残留快速检测仪分类卡片法原理以及检测步骤酶抑制率法原理以及检测流程检测中注意事项及异常情况分析一、农药残留快速检测标准一、农药残留快速检测标准（1）国家标准：GB/T5009-2003蔬菜中有机磷和 氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测（2）行业标准：NY/T488-2001蔬菜中的有机磷和 氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法二、目前常用农残检测方法二、目前常用农残检测方法（1）速测卡法速测卡法：用对农药高度敏感的胆碱酯酶和显色剂做成的酶试纸。（2）酶
2、抑制率法酶抑制率法（分光光度法）：在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。（3）酶联免疫法酶联免疫法：是把抗原抗体的免疫反应和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的一种检测技术。（4）色谱法色谱法：利用不同物质在不同相态的选择性分配，以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，混合物中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。农药残留检测方法比较及优缺点农药残留检测方法比较及优缺点 农药残留检测方法比较及优缺点农药残留检测方
3、法比较及优缺点检测方法检测方法 应用范围应用范围方法精度方法精度检测速度检测速度操作难易操作难易速测卡法快速筛查低快易酶抑制率法快速筛查并有总量抑制数据中较快较易酶联免疫法已知单一品种农药的定量较高中中 色谱法对农药残留准确的定性定量高慢难快速检测方法的优缺点快速检测方法的优缺点缺点：缺点：无法对是哪种农药进行准确定性无法定量或定量准确性不高能够检测的农药种类范围窄有假阳性等结果优点：优点：检验分析周期短检测费用低无须消耗有机溶剂，无环境污染无须使用色谱仪等昂贵仪器设备对检测人员的化学分析能力要求不高检测过程简便，易于掌握7 对象：对象：（1）有机磷类农药：如甲拌磷、内吸磷、对硫磷、敌百虫、乐
4、果、马拉松、甲基对硫磷基、二甲硫吸磷、敌敌畏、氧化乐果、久效磷等。（2）氨基甲酸酯类农药：如混灭威、异丙威、克百威、速灭威、涕灭威、仲丁威、灭多威、甲萘威、抗蚜威等。以上两类农药的有毒代谢产物 8检测方法检测方法标准编号标准编号适用范围适用范围卡片法卡片法GB/T5009.199-2003蔬菜、水果酶抑制率法酶抑制率法NY/T448-2001蔬菜、水果GB/T5009.199-2003蔬菜、水果依据：依据：三、三、目前常用的农药残留快速检目前常用的农药残留快速检测仪分类测仪分类1、卡片法卡片法：普通卡片机和智能型卡片机2、分光光度法分光光度法：比色皿型和微孔板型11卡片法所用检测仪器及耗材：卡
5、片法所用检测仪器及耗材：1、固化胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的检测卡 2、农药残留快速检测仪，如下图酶抑制率法（分光光度法）酶抑制率法（分光光度法）按通道区分：按通道区分：1）使用比色皿的，日检测样品量不多或单次检测量不大的 a)四通道及四通道以下 b)五-六通道 c)八通道及以上通道2）使用微孔板的，日检测样品或一次检测样品量较多的 a)24通道 b)32通道 c)64及以上通道 具体选用哪类、多少通道仪器需使用单位根据检测的具体选用哪类、多少通道仪器需使用单位根据检测的实际情况确定实际情况确定 10四、四、卡片法原理卡片法原理及检测步骤及检测步骤121、选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪
6、成1cm左右见方碎片，取5g放入烧杯中，加入10mL缓冲溶液，振摇后静置2min以上。2、将速测卡沿中线对折，揭去速测卡保护膜，插入速测卡，此时红色药片向上，白色药片置于加热片上。然后在白色药片上滴两滴提取液，再按开始键，10分钟倒计时结束后，合盖开始第二次倒计时3分钟。3、当倒计时结束，也即本次操作结束，打开上盖测量试纸颜色变化。试纸显示蓝色为阴性(无毒)，浅蓝色为弱阳性，白色为阳性(有毒)(见下图)，测试完毕向上取下试纸，可以开始进行下一次测试。阳性结果：白色药片不变色阴性结果：白色药片显示蓝色 智能型卡片机智能型卡片机WT-R01装片要求：装片要求：取农残速测卡片，如图所示沿卡片中线对折
7、使之成约120角，再沿红色药片端上端的1/5处对折使之成约120角，卡片两端剪开，揭去速测卡保护膜，打开仪器仓门，将速测卡按从左到有的原则将白色药片部分插入仪器插卡槽，橙红色药片向上，如图中所示。加样：加样：在任意两个通道的白色药片上用移液器移取90ul水，作为对照检测（每次开机第一次检测必须做对照，第一次检测后仪器将自动保存对照检测值，所以直到再次重新启前的检测都不用再做对照检测。）在其他通道的白色药片用移液器移取90ul上述前处理中的提取的清液 检测：检测：关闭仪器仓门，按“确定”键检测开始，13min后仪器显示屏上显示检测结果，通过比较其抑制率判断出样品中农药的残留情况，检测结束。13五
8、、酶抑制率法原理及步骤五、酶抑制率法原理及步骤 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右 见方碎片，取2g放入烧杯或提取瓶中，加入10mL缓冲溶液浸没菜叶，提取3min后，将提取液转入试管,待测。测定：对照溶液测试：于比色皿中加入2.5mL缓冲溶液，再加入0.1mL酶液、0.1mL 显色剂，10分钟之后，加0.1mL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，于412nm波长下检测，仪器自动记录反应3min的吸光度变化值A0。样品测试：于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，仪器自动显示以抑制率表示的检测结果。15直观直观结果结果酶抑制率
9、法实验流程酶抑制率法实验流程判断标准：抑制率判断标准：抑制率50%50%为合格样品为合格样品 抑制率抑制率50%50%为超标样品为超标样品六、检测中注意事项及异常情况分六、检测中注意事项及异常情况分析析注意事项注意事项 检测的品种要求：葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄中含有影响酶的次生物质，容易产生假阳性，处理这类产品应采用整株浸提的方法。含泥土比较多的样品，应先擦去泥土，切忌缓冲液浸泡前用水冲洗，浸泡后用滤纸过滤后再进行检测。检测的环境要求：应避免在有其它异味，或刚喷洒有杀虫剂等的环境下检测；试剂保存条件要求：0-4保存，试剂配置好，应在一周内用完。卡片开封，应该在两天内用完。20检测中异常情况分析：检测中异常情况分析：从仪器分析从仪器分析：检查仪器电源是否正常连接，开机后自检是否正常，走板是否卡板，空板是不是数据正常。从从试剂试剂分析分析：看试剂保存条件对不对，是否过期，试剂形态是否正常，做出来的空白吸光度数据是不是在要求范围内。从人员操作分析从人员操作分析：上两项都正常，我们人员的操作就尤为重要了。主要从样品的前处理：提取是否有效？检测液的滴加是否规范？等这几方面着手分析考虑。尤其是人员操作的熟练程度，我们从国标GB/T5009.199-2003着手分析。感谢您的关注竭力为您服务
