1、临床基础检验学临床基础检验学重点：末梢血采集方法和血涂 片制备技术。难点：各种抗凝剂的优缺点和使用选择。内蒙古民族大学临床医学院赵文海 绪 论 一、临床检验（clinical laboratory technology or science）又称实验诊断学，就是通过实验室的各种检查方法，包括感官检查、理学检查、化学检查、显微镜检查以及自动化仪器检查等，对病人的血液、体液、分泌物和排泄物等标本进行检查、分析，以获得病原、病理变化及脏器功能状态等资料。二、临床检验在医学中的作用 1、为准确诊断、及时治疗提供依据临床检验的结果是支持诊断、鉴别诊断、甚至确定诊断的主要依据。例：anemia依据：血中红
2、细胞和血红蛋白量减少leukemia依据：血象和骨髓象肾脏有实质性损伤的依据尿液中出现蛋白、细胞管型问：tumor？2、为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据在疾病过程中，血液、体液、分泌物和排泄物也会随之发生相应的变化3、为预防疾病提供资料如血象和肿瘤细胞学的普查等三、临床检验的一般方法1、目视检查直接观察标本：颜色、透明度、性状，有无凝块或寄生虫2、理学检查液体的相对密度、血液比粘度、红细胞沉降率、红细胞比积等病理变化3、化学检查定性和定量检测标本化学成分的病理变化4、显微镜检查观察有型成分的数量和形态5、自动化仪器检查电子技术、程序控制的发展四、学习临床检验的目的和要求1、理论联系实践2
3、、操作要求3、检验结果必须和临床表现结合4、检验人员的医德第一章 一般性操作技术血液学检查 ：反应造血系统本身、机体全身或局部病变有助于疾病的诊断及疗效、预后的观察只能反应疾病某一方面的情况，不能认为是病程的全部反应；不同个体，对同一影响有不同的反应，或也可对不同影响产生相同的反应一、血液标本的采集1、毛细血管采血法部位：中指或无名指尖内侧，半岁以下拇指或 足部，特殊人员视情况而定。b.所用器材：采血针、吸管c.采血步骤及注意事项2、静脉采血法部位：主要是肘静脉。还可以在：手背部手腕部等 幼儿可采用颈外静脉采血。采血器材：一次性注射器，检验用真空定量采血装 置c.采血步骤及注意事项两种采血方法
4、的优缺点比较毛细血管静脉血缺点限制了重复实验和追加实验，标本量少，局部炎症可得假结果，组织液可混入不同抗凝剂的使用，改变血液性质，影响有形成分的形态优点价廉、快速、操作简便，标本可直接测定标本代表性大，无组织液影响，适于临床研究，可重复实验和追加其他实验二、常用血液标本抗凝剂及其使用选择 1、柠檬酸钠（枸橼酸钠）a.抗凝原理：螯合钙离子使用方法 配成109 mmol/L的浓度和血液1：9 106 mmol/L的浓度和血液1：4化学名：3-羟基-3-羧基戊二酸（三钠盐）c.适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）2.草酸钠（乙二酸的钠盐）a.抗凝原理：草酸钙沉淀b.使用方法 草酸钠0.1
5、mol/L 和血液1：9c.适用范围：止血学检验3.双草酸盐抗凝剂 a.抗凝原理：草酸钙沉淀使用方法：草酸钾0.8g,草酸铵1.2g（100ml）与血液 1：10 （80C以下烘干）适用范围：红细胞检验（红细胞比积、计数）不适于血小板计数和白细胞分类计数4.肝素 （含硫酸基团的粘多糖）抗凝原理：低浓度时抑制因子a、和PF3之 间的作用，加强抗凝血酶灭活丝 氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，还能抑制凝血酶的自我催化及抑制 因子的作用；高浓度时阻断凝血 酶和纤维蛋白的反应。b.适用方法：1g/L浓度的肝素钠与血液 1：10优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易 溶血、能耐高温。适用范围：红细胞检验
6、（红细胞计数、血红蛋白 测定、红细胞比积）和多种生化分析5.乙二胺四乙酸（EDTA）盐a.抗凝原理：螯合钙离子b.使用方法：15g/L浓度EDTA 和血液 1：10适用范围：对血细胞形态影响小-血小板计数；影响血小板聚集和白细胞吞噬功能 -不易做止血学检验及血小板功能 检验。物理方法抗凝：脱纤维蛋白：将血液注入有玻璃珠的器皿中，转动，纤维 蛋白缠绕凝固于玻璃球，从而防止血成凝块。适 用于免疫学检验和红斑性狼疮细胞检查。三、血涂片的制备技术血涂片的用途：血细胞形态学检验、网织红、异常 寄生虫检验。2.血涂片制备步骤：（手工推片法）将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推玻片的宽度后，以一定均匀的速
7、度向2的方向滑动。3.血涂片质量评价：均匀、厚薄、头体尾、边缘、两侧注意：血滴大，速度快、角度大-血膜厚四、细胞染色技术染料-生物学染色剂：将生物组织细胞和病原体染色，在显微镜 下观察结构。（一）、染料 （天然染料和人工染料）发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染组织亲合。碱性染料：为阳离子染料，能接受质子，染细胞核 的染料。如亚甲蓝、天青。酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧 烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合 细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分等。3.复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料（二）、细胞染色原理：一般以它们的物理现象和/或化学 现象为依
8、据1.物理作用：毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等化学作用：a.染料的化学成分：助色基团的存在，碱性染料 在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。b.蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸含有不同数量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同时还有其他活性基团。在游离状态时，-NH2获得一个H+变成带正电的-NH3+，而-COOH失去一个H+变成带负电的-COO-。分别与不同染料结合。c.周围环境的酸碱度：如环境pHpI（pI 为等电 点），则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之，pH pI，则结合碱性染料。（三）、细胞染色法
9、的类型 1.普通染色法：经物理和/或化学作用的吸附、结合 2.荧光染色法：荧光染料，荧光显微镜 3.细胞活体染色法：活体染料如灿烂甲酚蓝等 4.细胞化学染色法：用化学反应显示细胞内某种成分。细胞免疫化学染色法（应用单克隆抗体技术、酶标记技术）五、瑞氏染色法（一）、染色原理 分两相进行，第一相是酸性伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性染料天青 B与细胞中的酸性物质如核染色质、特异中性颗粒、血小板结合。第二相是天青B和伊红结合在适宜条件下 形成紫色的天青B-伊红复合物，结果使白细胞核染色质成紫色（疟原虫的染色质成红色），中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色。（二）、试剂 1.Wr
10、ight染液 瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml 甲醇：有强大的脱水力，可将细胞固定为一定 形态，并使蛋白质沉淀为颗粒状、网状等结构，增 加细胞与染料接触表面积，提高对染料的吸附作用，增强染色效果。磷酸盐缓冲液（PBS）：磷酸二氢钾（无水）0.3 g，磷酸氢二钠（无水）0.2g,蒸馏水加到1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口备用。染色方法：a.用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。b.加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。c.滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10分钟。d.用清水冲洗，待干后镜检。注意事项：a.血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落 b.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时间长些效果好。c.染液不能过少，以防蒸发沉淀。d.冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料沉着。冲洗时间也不能长。e.染色过淡，可复染。f.染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色六、姬姆萨染色法（一）、染色原理：基本成分仍然是伊红和亚甲蓝，改进了染料的质量，使细胞核着色好，结构显示更清晰，而胞浆和中性颗粒染色较差。（二）、试剂 Giemsa 甲醇 纯甘油（三）、染色方法 1.甲醇固定干燥血膜3-5min 2.将血膜在染液中浸染10-30min 3.流水冲洗,待干后镜检七、巴氏染色法 是脱落细胞染色法中较好的染色方法。
