1、鱼类急性毒性实验鱼类急性毒性实验实验简介实验简介鱼类是水生食物链的顶级生物，也是水体中最为重要的经济动物。鱼类是水生食物链的顶级生物，也是水体中最为重要的经济动物。在污染水体中，当污染物达到一定浓度时，就会引起鱼类各种中毒反应，在污染水体中，当污染物达到一定浓度时，就会引起鱼类各种中毒反应，例如行为失常，组织器官病变，生理功能紊乱乃至死亡。在人为控制条件例如行为失常，组织器官病变，生理功能紊乱乃至死亡。在人为控制条件下，进行各种鱼类毒性实验，不仅用于化学品毒性强度测定、水体污染程下，进行各种鱼类毒性实验，不仅用于化学品毒性强度测定、水体污染程度、废水及其处度、废水及其处 理效果检查，而且也为制
2、定水质标准、评价环境质量和理效果检查，而且也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供科学依据。因此，开展鱼类急性毒性实验的研究，对实管理废水排放提供科学依据。因此，开展鱼类急性毒性实验的研究，对实验结果给出正确合理的评价，对于我国水资源保护具有重要意义。验结果给出正确合理的评价，对于我国水资源保护具有重要意义。实验原理实验原理 o在规定条件下，使鱼类接触含不同浓度受试物的水在规定条件下，使鱼类接触含不同浓度受试物的水溶液，以溶液，以96h为一实验周为一实验周 期，在期，在24h、48h、72h和和96h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50%时的受时的受
3、试物浓度，半数致死浓度用试物浓度，半数致死浓度用24h LC50、48h LC50、72h LC50和和96h LC50表示，并记录无死亡的最大浓表示，并记录无死亡的最大浓度和导致鱼类全部死亡的最小实验浓度。度和导致鱼类全部死亡的最小实验浓度。实验材料实验材料1.实验常用仪器设备实验常用仪器设备o 温度控制仪；温度控制仪；o（溶氧仪）（溶氧仪）o pH试纸试纸o（分光光度计）（分光光度计）o 玻璃水槽玻璃水槽o 抄网：尼龙制，对照和实验容器分用。抄网：尼龙制，对照和实验容器分用。实验溶液的制备实验溶液的制备o 以重铬酸钾为实验毒物，实验溶液的母液由蒸馏水配制以重铬酸钾为实验毒物，实验溶液的母液
4、由蒸馏水配制而成。母液最好每日配各而成。母液最好每日配各1次，比较稳定的物质也可以次，比较稳定的物质也可以两日配制两日配制1次，配好后，次，配好后，最好低温保存。配制好的母最好低温保存。配制好的母液可以稀释为进行毒性实验的溶液，以等比或等对数液可以稀释为进行毒性实验的溶液，以等比或等对数 间距设置浓度系列，相临浓度比值不得超过间距设置浓度系列，相临浓度比值不得超过2.2。实验用鱼的选择实验用鱼的选择o 实验鱼类一般选择对污染物敏感，在生态类群中具实验鱼类一般选择对污染物敏感，在生态类群中具有有 代表性，经济价值比较高，来源丰富、取材方代表性，经济价值比较高，来源丰富、取材方便、遗传稳定，生物学
5、背景资料丰便、遗传稳定，生物学背景资料丰 富，大小适中，富，大小适中，在室内条件下易于饲养和繁殖的种类。在室内条件下易于饲养和繁殖的种类。o 斑马鱼是国际上通用的鱼类急性毒性实验鱼种。建斑马鱼是国际上通用的鱼类急性毒性实验鱼种。建议的实验温度议的实验温度21-25，建议实验鱼的全长建议实验鱼的全长2.0士士1cm。试验方法与步骤试验方法与步骤 1.实验条件实验条件 o(1)实验用水实验用水 使用高质量的自然水或标准稀释水使用高质量的自然水或标准稀释水(见本节附见本节附录录)，也可以使用饮用水，也可以使用饮用水(必要时应除氯必要时应除氯。水的总硬度为。水的总硬度为10-250mg/L(以以CaC
6、O3计计)，pH为为 6.0-8.5。o(2)实验周期实验周期 96h。o(3)实验负荷实验负荷 静态实验系统最大承载量为静态实验系统最大承载量为1.0 g鱼鱼/L。o(4)光照每天光照每天 12-16h.o(5)温度与实验鱼种相适宜，变化范围土温度与实验鱼种相适宜，变化范围土2。o(6)溶解氧不低于空气饱和值的溶解氧不低于空气饱和值的60%。曝气时不能使受试。曝气时不能使受试物明显受损。物明显受损。2.实验方法实验方法 o 正式实验前必须对实验用鱼进行驯养，然后根据预实验得正式实验前必须对实验用鱼进行驯养，然后根据预实验得出出 的结果的结果(以上部分内容可另行安排实验时间以上部分内容可另行安
7、排实验时间)，在包括，在包括使鱼全部死亡的最低浓度和使鱼全部死亡的最低浓度和96h鱼类全部存活的最高浓度鱼类全部存活的最高浓度之间至少应设置之间至少应设置5个浓度组。每个实验浓度组应至少设个浓度组。每个实验浓度组应至少设3个平行系列，每一系列设一个空白对照。如使用了助溶剂，个平行系列，每一系列设一个空白对照。如使用了助溶剂，应增设溶剂验量对照，其浓度与试液中的最高溶剂浓度相应增设溶剂验量对照，其浓度与试液中的最高溶剂浓度相同。每一浓度组及对照组至少使用同。每一浓度组及对照组至少使用7尾鱼。尾鱼。o 实验前鱼应驯养。用水需曝气。实验前鱼应驯养。用水需曝气。o 实验分组：实验分组：4 4组组o 浓
8、度系列：每组分别取浓度系列：每组分别取0 0，3535，7070，140140，280ml280ml母液加母液加入鱼缸水中，充分混匀，则得到实验浓度入鱼缸水中，充分混匀，则得到实验浓度0 0，0.250.25，0.50.5，1 1，2g/L2g/L重铬酸钾（母液重铬酸钾（母液3L 3L，50g/L50g/L重铬酸钾，重铬酸钾，每组每组600mL600mL）o 高浓度用小鱼缸，高浓度用小鱼缸，7L7L水，水，8 8条鱼（大小均匀）。空白用条鱼（大小均匀）。空白用大鱼缸，大鱼缸，14L14L水，水，1616条鱼条鱼o 实验控制温度实验控制温度1515C C。缓慢曝气。缓慢曝气。2.实验方法实验方法
9、 o 实验溶液调节至相应温度后，从驯养鱼群中随机取出鱼实验溶液调节至相应温度后，从驯养鱼群中随机取出鱼并随机迅速放入各实验容器中。转移期间处理不当的鱼并随机迅速放入各实验容器中。转移期间处理不当的鱼均应弃除。同一实验，所有实验用鱼应在均应弃除。同一实验，所有实验用鱼应在30min 内分内分组完毕。实验期间，不要对溶液强烈充气，溶解氧含量组完毕。实验期间，不要对溶液强烈充气，溶解氧含量应高于空气饱和值的应高于空气饱和值的 60%。同时避免产生对鱼类行。同时避免产生对鱼类行为的干扰。实验期间不投饵。为的干扰。实验期间不投饵。o 在实验开始后在实验开始后3h或或6h观察各处理组鱼的状况，并记录观察各
10、处理组鱼的状况，并记录实验鱼的异常行为实验鱼的异常行为如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力和呼吸功能减弱，色素沉积等和呼吸功能减弱，色素沉积等。o 至少在至少在24h、48h、72h和和96h后检查受试鱼的状况，后检查受试鱼的状况，并做记录。如果受试鱼没有任何肉眼可见的运动，如鳃并做记录。如果受试鱼没有任何肉眼可见的运动，如鳃的扇动、碰触尾柄后无反应，即可判断该鱼已死亡。观的扇动、碰触尾柄后无反应，即可判断该鱼已死亡。观察并记录死鱼数目后，将死鱼从容器中取出。察并记录死鱼数目后，将死鱼从容器中取出。o 每天至少测定一次每天至少测定一次pH、溶解氧和温度。实验开、溶解氧和
11、温度。实验开始和结束时亦要测定。至少在实验开始和结束始和结束时亦要测定。至少在实验开始和结束时，测定实验容器中实验液的受试物浓度。时，测定实验容器中实验液的受试物浓度。o pH：试纸：试纸o（溶解氧：溶氧仪）（溶解氧：溶氧仪）o 温度：温度计温度：温度计o（六价铬：二苯碳酰二肼分光光度法）（六价铬：二苯碳酰二肼分光光度法）3.数据处理数据处理o(1)在对数在对数-概率坐标纸上，绘制处理浓度对死亡率的曲概率坐标纸上，绘制处理浓度对死亡率的曲线。用直线内插法或常用统计程序计算出线。用直线内插法或常用统计程序计算出24h、48h、72h、96h的的LC50值，并用标准方法计算值，并用标准方法计算95
12、%的的 置信置信限。限。o(2)如果实验数据不适于用标淮方法计算如果实验数据不适于用标淮方法计算LC50，可用不，可用不引起死亡的最高浓度和引起引起死亡的最高浓度和引起100%死亡的最低死亡浓度死亡的最低死亡浓度估算估算LC50的近似值，即这两个浓度的几何平均值。的近似值，即这两个浓度的几何平均值。结果与评价结果与评价o 目前，根据鱼类急性毒性实验的目前，根据鱼类急性毒性实验的LCso值，评判毒物的危值，评判毒物的危害等级，在国内还没有统一的规范化标准。害等级，在国内还没有统一的规范化标准。1990年国家环年国家环保局的保局的环境监测技术规范环境监测技术规范中给出了污中给出了污 染物对鱼类急性
13、毒染物对鱼类急性毒性分级标准，见表性分级标准，见表5-4。1994年，针对新化学品管理，国年，针对新化学品管理，国家环保局又制定了家环保局又制定了新化学物质危害评估准则新化学物质危害评估准则，其中给出了，其中给出了新化学品对鱼类急性毒性的危害分级标准，参见表新化学品对鱼类急性毒性的危害分级标准，参见表5-5。根。根据下列标准，可以初步评判化学品或污染物据下列标准，可以初步评判化学品或污染物 的环境危害性。的环境危害性。附录标准稀释水的配制方法附录标准稀释水的配制方法 用于配制标准稀释水的试剂应为分析纯，去离子水或蒸馏用于配制标准稀释水的试剂应为分析纯，去离子水或蒸馏水的电导率应水的电导率应10
14、S/cm10S/cm。具体配制方法如下。具体配制方法如下:o 制备标准稀释水前先按照下列要求配制制备标准稀释水前先按照下列要求配制4 4种溶液种溶液 氯化钙溶液氯化钙溶液 将将11.76g CaC12 2H2O11.76g CaC12 2H2O溶解于水中，稀释至溶解于水中，稀释至1L1L。硫酸镁溶液硫酸镁溶液 将将4.93g MgSO4 7H2O4.93g MgSO4 7H2O溶解于水中，稀释至溶解于水中，稀释至1L1L。碳酸氢钠溶液碳酸氢钠溶液 将将2.59g NaHCO32.59g NaHCO3溶解于水中，稀释至溶解于水中，稀释至1L1L。氯化钾溶液氯化钾溶液 将将0.23g KCl0.23g KCl溶解于水中，稀释至溶解于水中，稀释至1L1L。o 将这将这4 4种溶液各种溶液各25mL25mL加以混合并用蒸馏水稀释至加以混合并用蒸馏水稀释至1L1L，即配成标准，即配成标准稀释用水。稀释用水。o 溶液中钙离子和镁离子的总和是溶液中钙离子和镁离子的总和是2.5mmol/L2.5mmol/L。Ca:MgCa:Mg的比例为的比例为4:4:1 1，Na:K Na:K 比为比为10:110:1。稀释用水需经曝气直到氧饱和为止，然。稀释用水需经曝气直到氧饱和为止，然后储存备用，在使用前不必再曝气。后储存备用，在使用前不必再曝气。
