1、（一）实验目的（一）实验目的（二）实验原理（二）实验原理（三）实验器材（三）实验器材（四）实验方法（四）实验方法（五）实验作业（五）实验作业（一）实验目的（一）实验目的1 1、明确培养基的配制原则；、明确培养基的配制原则；2 2、掌握配制培养基的一般方法和步骤；、掌握配制培养基的一般方法和步骤；3 3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围；、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围；4 4、掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌、掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌方法。方法。（二）实验原理（二）实验原理 培养基培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种
2、营养物质，用人工方法配制而成的一所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六类营养要素。由于不同微生物细胞无机盐和水六类营养要素。由于不同微生物细胞组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配制合适的培养基制合适的培养基.培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、
3、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基体培养基常用加热灭菌法常用加热灭菌法：1 1、干热灭菌：、干热灭菌：用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌2 2、湿热灭菌、湿热灭菌 高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法 间歇灭菌法间歇灭菌法 煮沸消毒法煮沸消毒法 灭菌灭菌是指应用物理或化学的方法，杀灭物是指应用物理或化学的方法，杀灭物体表面和内部一切微生物营养体、芽孢和孢体表面和内部一切微生物营养体、芽孢和孢子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、照子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、照射和化学药品法等。射和化学药品法等。（
4、三）实验器材（三）实验器材 1.药品和试剂：药品和试剂：牛肉膏、蛋白胨、牛肉膏、蛋白胨、NaClNaCl、5 5NaOHNaOH溶液、溶液、5 5盐酸溶液；生理生化培养基。盐酸溶液；生理生化培养基。2.器材：器材：天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、天平、药匙、瓷缸、玻璃棒、pHpH试纸、试纸、试管、三角瓶、牛皮纸、棉花、线绳、干燥箱、试管、三角瓶、牛皮纸、棉花、线绳、干燥箱、高压锅。高压锅。1.1.称量称量按照培养基配方，准确称量各成份放于瓷缸中。按照培养基配方，准确称量各成份放于瓷缸中。配方：牛肉膏配方：牛肉膏5.0g,5.0g,蛋白胨蛋白胨10.0g10.0g，NaClNaCl 5.0g,5.0g
5、,琼琼脂粉脂粉20.0g,20.0g,自来水水自来水水1000ml,pH7.01000ml,pH7.0。生理生化用培养基生理生化用培养基（四）实验方法（四）实验方法 培养基的制备过程培养基的制备过程称量称量-溶解溶解-调节调节pHpH值值-过滤过滤-分装及包扎分装及包扎-灭菌灭菌-灭菌后试管灭菌后试管摆放斜面摆放斜面 2.2.溶解溶解 加入所需要的水量，搅拌，使其溶解。加入所需要的水量，搅拌，使其溶解。3.3.调节调节pHpH值值 用玻璃棒沾少许液体，测量用玻璃棒沾少许液体，测量pHpH值。用氢氧化钠和值。用氢氧化钠和盐酸调节盐酸调节pHpH。4.4.过滤过滤用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要
6、求可省用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。去。5.5.分装及包扎分装及包扎 根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）口管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。6.6.灭菌：灭菌：高压蒸汽灭菌，高压蒸汽灭菌，1211210 0C C灭菌灭菌2020分钟。分钟。7.灭菌后试管摆放斜面灭菌后试管摆放斜面8.灭菌后倒平板灭菌后倒平板注注 意意 事事 项项1 1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙
7、称一种药品；2 2、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速；、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速；2 2、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免琼的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免琼脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢；脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢；4 4、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高的的1/51/5，液体培养基的装量约为管高的，液体培养基的装量约为管高的1/41/4，三角瓶的装量不超过瓶体，三角瓶的装量不超过瓶体的的1/2 1/2；5 5、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。而引起污染。返返 回回
