1、考试考试6 1.X1.X、射线的杀菌机理是什么？射线的杀菌机理是什么？2.2.氧化剂的杀菌机理是什么？氧化剂的杀菌机理是什么？3.3.福尔马林的主要成分是什么？福尔马林的主要成分是什么？4.4.乙醇杀菌机理是什么？其最佳杀菌浓乙醇杀菌机理是什么？其最佳杀菌浓度是多少？度是多少？5.5.青霉素的抗菌机理是什么？青霉素的抗菌机理是什么？6.6.直接计数法的特点是什么？有哪些具直接计数法的特点是什么？有哪些具体方法？体方法？4比浊计数法比浊计数法 浊浊细菌悬浮液的浊度细菌悬浮液的浊度 （1）制标准曲线（）制标准曲线（ODNo）（2）测菌液浊度，查图表得出细菌数量）测菌液浊度，查图表得出细菌数量 分光
2、光度法测分光光度法测 浊度浊度 1 2 3 4其他细菌计数法其他细菌计数法 细菌数量细菌数量 10 100 1000 10000 个个/mL 细菌数量细菌数量 制标准曲线制标准曲线 菌液浊度菌液浊度 （二）间接计数法（二）间接计数法(活菌计数法活菌计数法)提问：提问：前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？繁殖繁殖 提问：提问：细菌繁殖的可见现象是什么？细菌繁殖的可见现象是什么？产生菌落产生菌落（固体培养基培养）固体培养基培养）、菌液混浊、菌液混浊（液体培养基培养）液体培养基培养）计数原理计数原理：一个一个细菌细菌可繁殖成可繁殖成一个一个菌落菌落
3、或或一群细菌一群细菌.缺点：缺点：慢慢 分分固体培养法和液体培养法固体培养法和液体培养法 1mL 混合混合 1mL 混合混合 9mL 10mL 1 ：10-1 10-1 ：10-2 10-2 10-3 10-4 10-5得到不同得到不同稀释度稀释度 （10-x）菌液菌液 10-2 10-3 10-4 10-5 一般计数平板的细菌生长菌落数以一般计数平板的细菌生长菌落数以30300个为个为宜。宜。n细菌数量细菌数量=？n细菌数量细菌数量=数出的菌落数数出的菌落数/稀释度稀释度n例如：例如：10-5稀释度时菌落数为稀释度时菌落数为125个个n细菌数量细菌数量=125/10-5=1.25107个个/
4、mLn 平板计数法是采用最广的一种活菌计数法平板计数法是采用最广的一种活菌计数法n如国标法水中如国标法水中细菌总数细菌总数的测定的测定 。n注意：注意：作空白及取平行样（作空白及取平行样（2 23 3组）均值减小组）均值减小误差误差 2.稀释液体计数法稀释液体计数法 特点：特点：液体培养、统计学查表计数液体培养、统计学查表计数 又称又称MPN法法（或最可能数法）（或最可能数法）M Most ost P Probable robable N Numberumber 例如例如测定测定SRB（硫酸盐还原菌，硫酸盐还原菌，厌氧厌氧）的数量）的数量 提问：提问：能用稀释平板法计数吗？为什么？能用稀释平板
5、法计数吗？为什么？一般一般不能，厌氧菌暴露在空气中不能生长不能，厌氧菌暴露在空气中不能生长（除非厌氧（除非厌氧培养箱）培养箱）n对这类菌可以利用它们生长时产生的对这类菌可以利用它们生长时产生的硫化亚铁黑色特征硫化亚铁黑色特征进进行行深层隔氧液体培养深层隔氧液体培养，按，按MPNMPN法进行计数。法进行计数。3 3 2 010 -4 10-5 10-63 10-10-2 10-3 10-4 10-5在液体表面加一层无菌在液体表面加一层无菌液体石蜡隔绝氧气，液体石蜡隔绝氧气，恒温恒温37培养培养14天天记录变黑的试管情况记录变黑的试管情况(4)统计查表计算统计查表计算 根据根据不同稀释度变黑试管不
6、同稀释度变黑试管 统计出统计出数量指标数量指标 三三位数及其中位数及其中最低稀释度最低稀释度（取（取变黑的管数最多变黑的管数最多、稀释度又最低稀释度又最低的的生长管生长管数数，为，为第一位第一位数字，数字，后面两个稀释度的后面两个稀释度的生长管生长管数数后两位数）后两位数）提问：提问：上例情况而言统计数量是几？上例情况而言统计数量是几？查表查表 表表MPNMPN表表320 320 1010-4-4MPN三管法测数统计表三管法测数统计表数量数量 指标指标 细菌最细菌最 可能数可能数 数量数量 指标指标 细菌最细菌最 可能数可能数 数量数量 指标指标 细菌最细菌最 可能数可能数 数量数量 指标指标
7、 细菌最细菌最 可能数可能数 000 0.0 121 1.5 223 4.0 320 9.5 001 0.3 130 1.6 230 3.0 321 15.0 010 0.3 200 0.9 231 3.5 322 20.0 020 0.6 201 1.4 232 4.0 323 30.0 100 0.6 202 2.0 300 2.5 330 25.0 101 0.4 210 1.5 301 4.0 331 45.0 110 0.7 211 2.0 302 6.5 332 110.0 102 1.1 212 3.0 310 4.5 333 140.0 110 0.7 220 2.0 311
8、7.5 111 1.1 221 3.0 312 11.5 120 1.1 222 3.5 313 16.0 水中大肠菌群水中大肠菌群、铁细菌、硝化菌、亚硝化菌铁细菌、硝化菌、亚硝化菌也也用这种方法进行数量统计。用这种方法进行数量统计。3.薄膜计数法薄膜计数法 薄膜薄膜微孔滤膜微孔滤膜（0.45um）滤膜，细菌不能通过 支撑体，支撑滤膜 抽气抽气（3）统计计数）统计计数 提问：提问：假如假如 测出测出2 25050个菌落，抽滤了个菌落，抽滤了5050mlml自来水，自来水，自来水中菌浓度是多少呢？自来水中菌浓度是多少呢？25050ml=5个个/ml自来水自来水 样品中的细菌数量样品中的细菌数量=
9、菌落数抽滤样品的体积数菌落数抽滤样品的体积数(三三)重量法重量法 提问：已知什么条件提问：已知什么条件通过测定细菌群体重量知道其数量？通过测定细菌群体重量知道其数量？已知已知单个细菌的平均重量单个细菌的平均重量 除法计算除法计算 细菌的细菌的湿湿重量重量10-1510-11g/个细胞个细胞 干重约为干重约为湿重的湿重的1020。1.干重法干重法 悬浮物无机物悬浮物无机物+有机物（包括细菌）有机物（包括细菌）提问：提问：如何确定悬浮物中有机物与无机物的量？如何确定悬浮物中有机物与无机物的量？高温高温(550)灼烧灼烧 （1）悬浮物中绝大多数为细菌时）悬浮物中绝大多数为细菌时 细胞数目细胞数目=M
10、LSS个体细菌的平均干重量个体细菌的平均干重量离心沉淀离心沉淀 滤膜过滤滤膜过滤计算计算105110下进行干燥下进行干燥称重称重（2）除细菌外还有大量无机悬浮物时）除细菌外还有大量无机悬浮物时 W无无 MLVSS挥发性悬浮物挥发性悬浮物MLSS W无=细菌群体的干重量细菌群体的干重量 细胞数目细胞数目=MLVSS个体细菌的平均干重量个体细菌的平均干重量 550下灼烧下灼烧2h称重称重105110下进下进行干燥恒重行干燥恒重称重称重（3）有大量）有大量非细菌有机悬浮物非细菌有机悬浮物时时 提问：提问：如何测定呢？如何测定呢？不能用重量法，应改用其他方法。不能用重量法，应改用其他方法。总体来说总体
11、来说重量法重量法方法方法误差较大误差较大，一般只作为菌数粗略估算一般只作为菌数粗略估算 如如活性污泥测定活性污泥测定（以重量以重量MLSS、MLVSS间接表示细菌数量间接表示细菌数量）2.细胞含细胞含N量法量法 大多数生物包括细菌，细胞内的大多数生物包括细菌，细胞内的蛋白质氮含量蛋白质氮含量比较稳定，一般为蛋白质干重比较稳定，一般为蛋白质干重1516，平均平均为为16。还需要还需要测定哪些条件测定哪些条件可以由以上比例确可以由以上比例确定定菌样菌样中细菌浓度？中细菌浓度？如何试验操作如何试验操作及及计算计算呢？呢？3.DNA含量法含量法 同种细菌的同种细菌的DNA含量一致含量一致,可通过测定可
12、通过测定DNA的含量的含量来表示细菌的生长量来表示细菌的生长量n总污染物总污染物总污染物微生物利用速度；总污染物微生物利用速度；（)最大速度；最大速度；微生物浓度微生物浓度饱和常数饱和常数mKSVS KX (四四)其它生理生化其它生理生化指标指标法法 提问：提问：当你需要测定某水样中细菌数量时，你当你需要测定某水样中细菌数量时，你该如何选择方法？该如何选择方法？“生、老、病、死生、老、病、死”（根据投食方式（根据投食方式）分分间歇式培养间歇式培养（分批培养）（分批培养）、连续式培养连续式培养两种情况两种情况 1.间歇培养间歇培养 提问：提问：如何人工进行细菌间歇培养？如何人工进行细菌间歇培养？
13、只有开始时的只有开始时的一次性投料和接种细菌一次性投料和接种细菌（其余时间（其余时间细菌根据环境变化自行生灭）细菌根据环境变化自行生灭）二、细菌的生长特性二、细菌的生长特性（“坐吃山空型坐吃山空型”）（1）活细菌重量变化曲线）活细菌重量变化曲线 细菌细菌内源呼吸内源呼吸增长率增长率上上升升阶段阶段 及细菌大量及细菌大量死亡死亡阶段阶段 mg/L 活活细细菌菌重重量量t0 时间时间曲线曲线tt点切线斜率值点切线斜率值=?tt重量增长速率重量增长速率 增长率增长率下下降降阶段阶段增长速率上升阶段增长速率上升阶段 提问：提问：为什么培养初期细菌群体重量增长速率随时间不为什么培养初期细菌群体重量增长速
14、率随时间不断增大？断增大？A.营养物丰富营养物丰富，细菌增殖；，细菌增殖；B.细菌在细胞内以糖原、油细菌在细胞内以糖原、油滴等形式滴等形式储存营养物储存营养物，细菌，细菌个体重量增大个体重量增大 增长率增长率 生生上升阶段上升阶段 mg/mL 0 时间时间 t活活细细胞胞重重量量 增长速率下降阶段增长速率下降阶段 提问：提问：为什么增长速率为什么增长速率较前较前下降了？下降了？增长率增长率下下 降降阶段阶段 mg/mL 0 时间时间 t活活细细胞胞重重量量 内源呼吸及死亡阶段内源呼吸及死亡阶段 内源呼吸内源呼吸+毒物浓度更高毒物浓度更高 （个体）（个体）瘦瘦死死 （群体）（群体）死亡率大于出生率死亡率大于出生率 从曲线上反映为活细菌重量的进一步持续下降。从曲线上反映为活细菌重量的进一步持续下降。提问：提问：此时细菌的出生率是否为零呢？为什么？此时细菌的出生率是否为零呢？为什么？不是，利用死亡细菌的残体营养不是，利用死亡细菌的残体营养)
