1、热休克蛋白70与AS发生的相关性研究南京医科大学博士论文答辩南京医科大学博士论文答辩南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心材料和方法材料和方法 BCA Protein Assay Reagent Kit（Pierce）ECL发光试剂盒（Amersham Biosciences）鼠抗HSP70单克隆抗体（博士德）兔抗HSP70多克隆抗体（博士德）-actin单克隆抗体（sigma）HRP标记二抗（Santa Cruz）HSP70寡核苷酸探针原位杂交试剂盒（博士德）南京医科大学博士论文答辩南京医科大学博士论文答辩南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心051015
2、20253035400w10w20w造型时间血浆TC含量（mmol/L）正常组不敏感组敏感组复制动物模型血脂*南京医科大学博士论文答辩南京医科大学博士论文答辩*南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心*南京医科大学博士论文答辩南京医科大学博士论文答辩复制动物模型体重*南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心0102030405060正常组不敏感组敏感组mg脂质/g肝脏mgTC/g肝脏mgTG/g肝脏*南京医科大学博士论文答辩南京医科大学博士论文答辩复制动物模型肝脏脂质南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心 正常组正常组不敏感组不敏感组敏感组敏感
3、组造型动物胸主动脉造型动物胸主动脉南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心正常组正常组敏感组敏感组不敏感组不敏感组造型动物肝脏造型动物肝脏南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学博士论文答辩南京医科大学博士论文答辩a:高脂组F182扩增曲线；b:正常组F182扩增曲线；c:高脂组-actin扩增曲线；d:正常组-actin扩增曲线；e:阴性对照。Cta=14.82;CTb=20.58;CTc=22.15;CTd=24.24。高脂组比率=22.15/14.82=1.49;正常组比率=24.24/20.58=1.18。高脂组比率正常组比率,mRNA 表达
4、水平上,高脂组高于正常组。南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心HSP70原位杂交原位杂交 南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心HSP70原位杂交原位杂交 南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心ELISA南京医科大学博士论文答辩南京医科大学博士论文答辩南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学博士论文答辩南京医科大学博士论文答辩南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心Western检测造型动物肝脏HSP70表达南京医科大学博士论文答辩南京医科
5、大学博士论文答辩南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心Western检测LDL，oxLDL刺激HepG2细胞后HSP70表达南京医科大学博士论文答辩南京医科大学博士论文答辩南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心冠心病患者外周血抗HSP70抗体的存在提示它可能参与了AS的发生发展；但Pockley等的研究提示HSP70可以减轻AS病变。HSP70在AS的发生中究竟是起促进作用还是保护作用，目前尚有争议。最近的研究表明最近的研究表明高脂血症病人血清抗HSP70抗体滴度和饮食中的脂质含量相关。Dybdahl等发现了24名急性心肌梗塞患者血液HSP70水平均显著高于
6、对照组，其浓度与心肌损害程度相关。南京医科大学博士论文答辩南京医科大学博士论文答辩南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心Dutta等对LDLR-/-Apobec1-/-小鼠的研究显示，高脂饲料引起小鼠肝脏HSP70 mRNA表达明显增强。Laurent等用两种致AS饲料高胆固醇和高胆汁酸复制AS小鼠模型，研究其肝脏基因表达谱，发现食饵性高胆固醇血症会引起肝脏急性炎症；而高胆汁酸血症主要导致细胞外基质沉积，发生肝纤维化。本研究中复制的家兔AS模型也发现血清淀粉样蛋白都增高，与此结果一致。南京医科大学博士论文答辩南京医科大学博士论文答辩南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉
7、硬化研究中心我们的研究发现，高胆固醇血症引起的肝脏HSP70表达增强和血清HSP70含量增高与AS病变程度呈正相关。肝脏HSP70表达增强的可能机制：ox-LDL刺激肝细胞；脂质沉积引起的细胞缺氧。南京医科大学博士论文答辩南京医科大学博士论文答辩南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心本研究提示，肝细胞表达增强的HSP70可能会释放到循环血中，参与高胆固醇血症引起的全身性炎症反应和免疫应答，促进AS的发生。肝脏的应激反应和炎症反应释放的炎症因子也可能进入血液循环，参与全身性炎症反应，促进AS的发生发展。研究小结研究小结南京医科大学博士论文答辩南京医科大学博士论文答辩南京医科大学动脉硬化研究中心南京医科大学动脉硬化研究中心 喂饲高脂饮食后，高脂组家兔肝脏HSP70核酸和蛋白表达均明显增加，血清HSP70变化趋势相同。体外实验发现ox-LDL而非LDL可刺激HepG2 HSP70的蛋白表达增强。谢谢 谢谢！
