1、第八章第八章 酶制剂生产酶制剂生产前言前言n2020世纪世纪2020年代，年代，法国人法国人BiondinBiondin与与EffrontEffront 在在德国德国建厂生产建厂生产枯草枯草杆菌淀粉酶杆菌淀粉酶来代替麦芽淀粉酶，用于棉布褪浆，为微生物酶的来代替麦芽淀粉酶，用于棉布褪浆，为微生物酶的工业生产奠定了基础。工业生产奠定了基础。4040年代，抗生素工业兴起，年代，抗生素工业兴起，深层培养技深层培养技术术不久就被用于淀粉酶的制造，使酶制剂工业跨进了工业化生不久就被用于淀粉酶的制造，使酶制剂工业跨进了工业化生产的时代。产的时代。50 50 年代末，年代末，糖化酶糖化酶成功用于葡萄糖生产，革
2、除了沿成功用于葡萄糖生产，革除了沿用上百年的酸水解工艺。用上百年的酸水解工艺。6060年代中期，年代中期，加酶洗涤剂加酶洗涤剂大流行，进大流行，进一步促进了酶制剂工业的发展。一步促进了酶制剂工业的发展。7070年代初年代初固定化葡萄糖异构酶固定化葡萄糖异构酶用于生产果脯糖浆，大大推动了食品工业与酶制剂工业的发展。用于生产果脯糖浆，大大推动了食品工业与酶制剂工业的发展。随着酶制剂的普遍应用与固定化酶的广泛研究，促进了生物催随着酶制剂的普遍应用与固定化酶的广泛研究，促进了生物催化技术与化学工程密切结合，诞生了一门新学科化技术与化学工程密切结合，诞生了一门新学科酶工程酶工程n19711971年在美国
3、召开第一次国际酶工程会议，把大规模生产、分年在美国召开第一次国际酶工程会议，把大规模生产、分离提纯、固定化技术、酶反应器设计，以及酶的工业应用都纳离提纯、固定化技术、酶反应器设计，以及酶的工业应用都纳入了酶工程的范围，并成为当时（入了酶工程的范围，并成为当时（2020世纪世纪7070年代至年代至8080年代中期年代中期）初生物技术五大技术体系中最活跃、发展最快、成效最大的一初生物技术五大技术体系中最活跃、发展最快、成效最大的一个体系。个体系。第一节酶制剂的工业化生产第一节酶制剂的工业化生产n一、工业化酶制剂生产的优点一、工业化酶制剂生产的优点n自自1894 1894 年年米曲霉高峰淀粉酶米曲霉
4、高峰淀粉酶 问世，问世，19231923年枯年枯草杆菌草杆菌-淀粉酶工业化应用以来，微生物酶淀粉酶工业化应用以来，微生物酶制剂工业逐渐发展成为一个新兴的产业部门，制剂工业逐渐发展成为一个新兴的产业部门，发展势发展势 头方兴未艾。目前的头方兴未艾。目前的800800多种商品酶中，多种商品酶中，大多数是利用微生物生产的。大多数是利用微生物生产的。n利用微生物发酵法大规模生产酶制剂，具有以利用微生物发酵法大规模生产酶制剂，具有以下几个明显的优点。下几个明显的优点。优点优点n（一）酶的品种多，新酶种易得（一）酶的品种多，新酶种易得n微生物种类繁多，凡是动植物体内存在的酶，几乎都微生物种类繁多，凡是动植
5、物体内存在的酶，几乎都能从微生物中得到；倒是有许多酶目前还只在微生物能从微生物中得到；倒是有许多酶目前还只在微生物中发现，而未能从动植物中找到。中发现，而未能从动植物中找到。n（二）菌种易诱变，代谢易调控（二）菌种易诱变，代谢易调控n微生物代谢方式各种各样，又极易受外界因素的影响，微生物代谢方式各种各样，又极易受外界因素的影响，很容易通过诱变等简便的育种方法改变原来的代谢途很容易通过诱变等简便的育种方法改变原来的代谢途径，得到预想的代谢途径，实现代谢的人为调控。径，得到预想的代谢途径，实现代谢的人为调控。n（三）生产周期短，酶的产量大（三）生产周期短，酶的产量大n 微生物细胞构造简单，没有分化
6、的营养器官，而是以微生物细胞构造简单，没有分化的营养器官，而是以细胞表面直接与环境接触，所以代谢速度比高等生物细胞表面直接与环境接触，所以代谢速度比高等生物快得多，其繁殖速度快，生产效率高，生产周期短，快得多，其繁殖速度快，生产效率高，生产周期短，培养简便，并可通过控制培养条件提高酶的产量。相培养简便，并可通过控制培养条件提高酶的产量。相比动植物组织酶提取，不受动植物原料量和来源的约比动植物组织酶提取，不受动植物原料量和来源的约束，周期短，产酶量大束，周期短，产酶量大n（四）基因易操纵，优质种易得（四）基因易操纵，优质种易得n 基因工程技术中，以微生物为对象的研究水平远远领基因工程技术中，以微
7、生物为对象的研究水平远远领先于动植物，进行微生物的基因改造要比动植物方便先于动植物，进行微生物的基因改造要比动植物方便得多，技术水平也成熟得多。生物技术在酶工程中的得多，技术水平也成熟得多。生物技术在酶工程中的应用（如多拷贝酶基因的菌种）远远领先于其他工程应用（如多拷贝酶基因的菌种）远远领先于其他工程体系，早已产业化，并产生了巨大的经济效益和社会体系，早已产业化，并产生了巨大的经济效益和社会效益。效益。二、酶制剂生产的基本工艺流程二、酶制剂生产的基本工艺流程n（一）基本工艺流程图（一）基本工艺流程图n微生物发酵法生产酶制剂，分微生物发酵法生产酶制剂，分固态发酵法固态发酵法、液态发酵液态发酵法法
8、和和载体发酵法载体发酵法三大类。由于载体发酵法还没有用于三大类。由于载体发酵法还没有用于大规模生产，以介绍固态发酵和液态发酵为主。大规模生产，以介绍固态发酵和液态发酵为主。n虽然因为具体的生产菌不同、目的酶不同、生产设备虽然因为具体的生产菌不同、目的酶不同、生产设备不同、生产条件不同，采用的工艺有所不同，但酶制不同、生产条件不同，采用的工艺有所不同，但酶制剂生产基本工艺流程大致如图剂生产基本工艺流程大致如图8-18-1工艺要点工艺要点1.固态发酵法固态发酵法（1)原料处理碳源原料处理碳源,淀粉质淀粉质;氮源氮源,麸皮麸皮(2)菌种培育与接种：液体、固体等菌种培育与接种：液体、固体等(3)无菌要
9、求相对较低无菌要求相对较低(4)发酵工艺控制好温度和湿度，发酵工艺控制好温度和湿度，不需不需要调节要调节PH(5)提取纯化成熟曲烘干、粉碎、过筛，提取纯化成熟曲烘干、粉碎、过筛，得到粗酶粉。精制则加水抽提，分离得到粗酶粉。精制则加水抽提，分离去除固形物，浓缩，盐析或有机溶剂去除固形物，浓缩，盐析或有机溶剂沉淀，离子交换层析进一步纯化。沉淀，离子交换层析进一步纯化。2.液体发酵法液体发酵法（1)原料处理：葡萄糖等单糖为碳源原料处理：葡萄糖等单糖为碳源(2)菌种培育与接种：液体培养，几级罐菌种培育与接种：液体培养，几级罐(3)无菌要求要求较高无菌要求要求较高(4)发酵工艺控制发酵工艺控制PH、温度
10、、通风量、温度、通风量(5)提取纯化真空浓缩得酶液。精制则提取纯化真空浓缩得酶液。精制则加水抽提，分离去除固形物，浓缩，加水抽提，分离去除固形物，浓缩，盐析或有机溶剂沉淀，离子交换层析盐析或有机溶剂沉淀，离子交换层析进一步纯化进一步纯化第二节第二节 淀粉酶淀粉酶 n淀粉酶淀粉酶是水解淀粉物质的一类酶的总称，广泛存在于是水解淀粉物质的一类酶的总称，广泛存在于动植物和微生物中。它是最早实现工业化生产并且至动植物和微生物中。它是最早实现工业化生产并且至今为止应用最广、产量最大的一类酶制剂。今为止应用最广、产量最大的一类酶制剂。n按照水解淀粉方式不同，可将淀粉酶分为四大类：按照水解淀粉方式不同，可将淀
11、粉酶分为四大类：淀粉酶淀粉酶、淀粉酶淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和解枝酶和解枝酶（异淀粉（异淀粉酶）。酶）。n此外，还有一些与工业有关的淀粉酶如此外，还有一些与工业有关的淀粉酶如环化糊精生成环化糊精生成酶酶（这种酶可使（这种酶可使6 6、7 7个葡萄糖构成环化糊精）、个葡萄糖构成环化糊精）、G4G4、G6G6生成酶生成酶（可从淀粉非还原端切割下（可从淀粉非还原端切割下4-64-6个葡萄糖分子个葡萄糖分子构成寡糖），还有构成寡糖），还有-葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶，又称葡萄糖苷转移，又称葡萄糖苷转移酶（可将游离葡萄糖转移到其他葡萄糖基的酶（可将游离葡萄糖转移到其他葡萄糖基的-1,6-1,6 位位
12、上，生成含上，生成含-1,6-1,6糖苷键的寡糖）。糖苷键的寡糖）。一、一、-淀粉酶淀粉酶n工业上大规模生产和应用的工业上大规模生产和应用的-淀粉酶主要来自细菌和淀粉酶主要来自细菌和曲霉，特别是曲霉，特别是枯草杆菌枯草杆菌，我国淀粉糖化工业使用的液，我国淀粉糖化工业使用的液化酶化酶BF-7658 BF-7658、美国的、美国的enaseenase 等属于这一种等属于这一种 。n由由微生物制备酶制剂微生物制备酶制剂，产酶量高，易于分离和精制，产酶量高，易于分离和精制，适于大量生产。当然亦能从植物和动物适于大量生产。当然亦能从植物和动物 中提取中提取-淀淀粉酶，满足特殊的需要，但由于成本高，产量低
13、，目粉酶，满足特殊的需要，但由于成本高，产量低，目前还不能实现工前还不能实现工 业化生产。具有实用价值的业化生产。具有实用价值的-淀粉淀粉酶生产菌列于表酶生产菌列于表8-18-1n由于菌种不断的选育改良，现在工业生产上用的菌种由于菌种不断的选育改良，现在工业生产上用的菌种产生产生-淀粉酶的能力已是原始菌株的数倍乃至数十倍淀粉酶的能力已是原始菌株的数倍乃至数十倍n霉菌霉菌-淀粉酶淀粉酶大多采用固体曲法生产大多采用固体曲法生产:麸皮麸皮为主要原为主要原料，米糠或豆饼的料，米糠或豆饼的碱水浸出碱水浸出液，以补充氮源液，以补充氮源;32-35;32-35培养培养36-48h,40 36-48h,40
14、烘干或风干烘干或风干,粗酶粗酶n细菌淀粉酶细菌淀粉酶则以液体深层发酵为主则以液体深层发酵为主:以麸皮、玉米粉、以麸皮、玉米粉、豆饼粉、米糠、玉米浆等为豆饼粉、米糠、玉米浆等为原料原料，补充无机，补充无机氮源氮源,此外此外还需添加少量镁盐、磷酸盐、钙盐等。还需添加少量镁盐、磷酸盐、钙盐等。3737通风搅拌通风搅拌培养培养24-28h,24-28h,离心或以硅藻土作助滤剂除去菌体及不溶离心或以硅藻土作助滤剂除去菌体及不溶物。在钙离子存在下低温真空浓缩后，加入防腐剂、物。在钙离子存在下低温真空浓缩后，加入防腐剂、稳定剂以及缓冲剂后就成为成品。这种液体的细菌稳定剂以及缓冲剂后就成为成品。这种液体的细菌
15、-淀粉酶呈暗褐色，带不愉快的臭味，淀粉酶呈暗褐色，带不愉快的臭味，在室温下放置数在室温下放置数月而不失活。月而不失活。n为制备高活性的为制备高活性的-淀粉酶，并使贮运方便，淀粉酶，并使贮运方便，可把发酵滤液用硫酸铵盐析或有机溶剂沉淀制可把发酵滤液用硫酸铵盐析或有机溶剂沉淀制成成粉状酶制剂粉状酶制剂，最好贮存在，最好贮存在2525以下，较干燥、以下，较干燥、避光的地方避光的地方n枯草杆菌枯草杆菌BF-7658是我国产量最大、用途最广的一种是我国产量最大、用途最广的一种液化型液化型-淀粉酶，其最适淀粉酶，其最适pH6.5左右，左右，最适温度最适温度65n多次物理、化学诱变后获得一株多次物理、化学诱
16、变后获得一株11-12菌株菌株，酶活力，酶活力比原菌株提高比原菌株提高50%，在马铃薯培养基中生长良好，在马铃薯培养基中生长良好n孢子斜面培养孢子斜面培养：马铃薯培养基：马铃薯培养基50mL50mL，37,72h37,72hn种子培养种子培养：标准夹套罐（：标准夹套罐（500L500L，直径，直径70cm,70cm,高高160cm)160cm)，37371 1，罐压，罐压0.5-0.80.5-0.8大气压，通风量大气压，通风量0-10h0-10h，13.5m3/h;10-14h,17.5m3/h.13.5m3/h;10-14h,17.5m3/h.培养培养12-14h12-14hn大罐大罐：30
17、00L3000L标准罐，低浓度发酵，高浓度补料，标准罐，低浓度发酵，高浓度补料，基础料：补料体检：基础料：补料体检：3:13:1n工业上回收工业上回收-淀粉酶常用淀粉酶常用盐析盐析、有机溶剂沉有机溶剂沉淀淀和和淀粉吸附淀粉吸附三种方法。其中盐析法在工业中三种方法。其中盐析法在工业中用得比较普遍用得比较普遍n用于盐析用于盐析-淀粉酶的中性盐有淀粉酶的中性盐有硫酸铵硫酸铵、硫酸硫酸钠钠等。其中以硫酸铵最为常用，因为此盐的溶等。其中以硫酸铵最为常用，因为此盐的溶解度较大。解度较大。二、二、-淀粉酶淀粉酶n-淀粉酶过去主要是从麦芽、大麦、甘薯、大豆等高淀粉酶过去主要是从麦芽、大麦、甘薯、大豆等高等植物
18、中提取。近几年来，发现不少微生物能产等植物中提取。近几年来，发现不少微生物能产-淀粉酶，微生物的淀粉酶，微生物的-淀粉酶从其对淀粉的作用上来看，淀粉酶从其对淀粉的作用上来看，与高等植物的与高等植物的-淀粉酶是一致的，而在淀粉酶是一致的，而在耐热性耐热性等方面等方面都比高等植物更适合于工业化应用。都比高等植物更适合于工业化应用。n 目前，对产目前，对产-淀粉酶菌种研究较多的是淀粉酶菌种研究较多的是多黏芽孢杆多黏芽孢杆菌菌、巨大芽孢杆菌巨大芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蜡状芽孢杆菌、环状芽孢杆菌和、环状芽孢杆菌和链霉菌等。它们有可能发展成为微生物链霉菌等。它们有可能发展成为微生物-淀粉酶的生淀粉酶的生产菌
19、种。产菌种。n由于异淀粉酶和由于异淀粉酶和-淀粉酶可以相互配合使用，可以筛淀粉酶可以相互配合使用，可以筛选同时具有这两种酶的菌种。据报道，日本从土壤中选同时具有这两种酶的菌种。据报道，日本从土壤中分离到分离到蜡状芽孢杆菌蜡状芽孢杆菌蕈状变种，在所培养的条件下，蕈状变种，在所培养的条件下，可以同时产生可以同时产生-淀粉酶和异淀粉酶。淀粉酶和异淀粉酶。-淀粉酶生产过程淀粉酶生产过程n菌种菌种：巨大芽孢杆菌，耐热性：巨大芽孢杆菌，耐热性n发酵培养基发酵培养基：淀粉：淀粉3%3%，葡萄糖，葡萄糖0.5%0.5%，蛋白胨，蛋白胨1%1%，玉米浆，玉米浆1%1%，磷酸，磷酸氢二钾氢二钾0.5%0.5%n3
20、434搅拌培养搅拌培养48h48h，酶活：，酶活：25.5U/mL25.5U/mLn发酵液发酵液8000r/min 8000r/min 离心离心20min,20min,除菌体，加硫酸铵沉淀得除菌体，加硫酸铵沉淀得粗酶粗酶，n0.01moL/L0.01moL/L醋酸盐溶解，自来水透析醋酸盐溶解，自来水透析3d,3d,加加25%25%醋酸铅溶液，离心醋酸铅溶液，离心除去沉淀杂质，除去沉淀杂质，n硫酸铵盐析硫酸铵盐析较纯较纯-淀粉酶，淀粉酶，酶活：酶活：100U/mL100U/mLn总收率总收率50%50%n近十几年来，国内外的微生物工作者在菌种的诱近十几年来，国内外的微生物工作者在菌种的诱变和发酵
21、条件等方面都做了大量的研究工作。例变和发酵条件等方面都做了大量的研究工作。例如，如，日本人日本人新家龙把新家龙把蜡状芽孢杆菌蜡状芽孢杆菌Bg10Bg10 用紫外线用紫外线处理后，获得的变异株产处理后，获得的变异株产-淀粉酶的能力比亲株淀粉酶的能力比亲株提高约提高约25-3025-30倍。此菌株不需要淀粉诱导物，倍。此菌株不需要淀粉诱导物，在在不含碳源而含不含碳源而含0.5%0.5%牛肉膏的基础培养基中，也可牛肉膏的基础培养基中，也可以生成以生成-淀粉酶；钾离子可提高酶的生成量，淀粉酶；钾离子可提高酶的生成量，麦芽糖反而抑制麦芽糖反而抑制-淀粉酶的生成。淀粉酶的生成。n日本天野制药公司日本天野制
22、药公司采用采用多黏芽孢杆菌多黏芽孢杆菌ATCC8523ATCC8523生产生产-淀粉酶时，使用高浓度碳源的培养液，最初温度为淀粉酶时，使用高浓度碳源的培养液，最初温度为36-36-4040，等到对数生长期后，降温至，等到对数生长期后，降温至30-34 30-34，继续进继续进行发酵，行发酵，60h60h后后,淀粉酶的生成量为淀粉酶的生成量为105U/mL105U/mLn高浓度碳源培养液的配方为：薯淀粉高浓度碳源培养液的配方为：薯淀粉10%10%、硫酸铵、硫酸铵0.75%0.75%、玉米浆、玉米浆0.5%0.5%、酵母膏、酵母膏0.2%0.2%、磷酸氢二钾、磷酸氢二钾0.1%0.1%、硫酸镁硫酸
23、镁0.75%0.75%、水、水0.05%0.05%三三 糖化酶糖化酶n糖化酶的生产菌种各国不一。美国主要采用糖化酶的生产菌种各国不一。美国主要采用臭曲霉臭曲霉，丹麦主要采用丹麦主要采用黑曲霉黑曲霉，日本主要采用，日本主要采用拟内孢霉拟内孢霉和和根根霉，霉，前苏联则主要偏向研究拟内孢霉。我国糖化酶的生产前苏联则主要偏向研究拟内孢霉。我国糖化酶的生产也主要采用也主要采用黑曲霉黑曲霉作为菌种作为菌种黑曲霉液体深层通风培养法生产糖化酶黑曲霉液体深层通风培养法生产糖化酶n在用黑曲霉生产糖化酶的初期，产品主要应用于由淀在用黑曲霉生产糖化酶的初期，产品主要应用于由淀粉制取葡萄糖。糖化酶的工业生产虽始于粉制取
24、葡萄糖。糖化酶的工业生产虽始于1965 1965 年，但年，但当时菌种活性较低，发酵单位不高，因而成本过高，当时菌种活性较低，发酵单位不高，因而成本过高，不易开发应用。不易开发应用。19771977年中国科学研究所选育出年中国科学研究所选育出黑曲霉黑曲霉变异株变异株UV-11UV-11，但其深层发酵要求高速搅拌及需用玉米，但其深层发酵要求高速搅拌及需用玉米浆等条件，因而当时在生产中全面推广还有很大的困浆等条件，因而当时在生产中全面推广还有很大的困难。难。n19781978年年无锡轻工业学院无锡轻工业学院进一步选育菌种和研究培养条进一步选育菌种和研究培养条件，以提高糖化酶发酵的活性。经多年的努力
25、，完成件，以提高糖化酶发酵的活性。经多年的努力，完成中试并通过鉴定。中试并通过鉴定。19811981年起组织推广并开发应用于酒年起组织推广并开发应用于酒精、白酒工业生产中。由于该成果的经济效益显著，精、白酒工业生产中。由于该成果的经济效益显著，年获国家科技进步一等奖。年获国家科技进步一等奖。n斜面培养斜面培养：查式培养基，：查式培养基，3131培养培养6-7d,6-7d,n种子罐：种子罐：2m32m3不锈钢，配方：玉米浆不锈钢，配方：玉米浆4%4%，豆饼粉，豆饼粉3%3%，麸，麸皮皮1%1%，转速，转速320r/min,31-32 320r/min,31-32 培养，罐压培养，罐压0.50.5
26、大气压，大气压，通风量通风量0.5/min0.5/min（v/vv/v),),培养培养30-40h,30-40h,酶活：酶活：300-300-500U/mL500U/mLn发酵罐发酵罐：20m320m3，配方：玉米粉，配方：玉米粉10%10%，豆饼粉，豆饼粉4%4%，麸皮，麸皮1%1%，糠油糠油5L5L，PH4.0PH4.0，转速，转速180r/min 180r/min，30-32 30-32 培养，罐培养，罐压压0.50.5大气压，大气压，通风量通风量:0-12h,0.5/min:0-12h,0.5/min（v/vv/v),12-14h,0.8/min,),12-14h,0.8/min,24
27、-84h,1/min,84h24-84h,1/min,84h后后,0.8/min,0.8/min,发酵工艺控制发酵工艺控制nPH:PH:控制控制4.04.0，方法：，方法：磷酸盐、碳酸盐、醋酸磷酸盐、碳酸盐、醋酸盐、氢氧化铵，含氮有机物、碳水化合物等的盐、氢氧化铵，含氮有机物、碳水化合物等的比例来调节比例来调节n溶氧溶氧：中间补料，基础料：补料体积：中间补料，基础料：补料体积：3:1,2-3:1,2-3 3次补料，改善发酵通风比，需氧满足，酶活次补料，改善发酵通风比，需氧满足，酶活增长增长n发酵工程（大生产）操作是控制罐内培养液的体积发酵工程（大生产）操作是控制罐内培养液的体积（以调节培养基配
28、比）以及总残糖、（以调节培养基配比）以及总残糖、PHPH、镜检等一些、镜检等一些关键项目，所得结果如表关键项目，所得结果如表8-68-6四、异淀粉酶四、异淀粉酶n 异淀粉酶也称为异淀粉酶也称为淀粉淀粉-1,6-葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶、R-酶酶、茁霉茁霉多糖酶多糖酶等。异淀粉酶可以分解支链淀粉中的等。异淀粉酶可以分解支链淀粉中的-1,6-1,6葡葡萄糖苷键，生成直链淀粉。萄糖苷键，生成直链淀粉。n此酶最早由日本的西村资治于此酶最早由日本的西村资治于1930年在酵母抽出液中年在酵母抽出液中发现。此后又在发现。此后又在茁霉茁霉和和产气杆菌产气杆菌中发现。另外，此酶中发现。另外，此酶在马铃薯、蚕豆、麦芽
29、、稻米等在马铃薯、蚕豆、麦芽、稻米等高等植物高等植物中也有发现，中也有发现，但是不稳定，活性弱，不适于工业应用。但是不稳定，活性弱，不适于工业应用。n此酶的此酶的碘反应碘反应是由赤变蓝。不同来源的异淀粉酶酶学是由赤变蓝。不同来源的异淀粉酶酶学性质有一定的差异，如表性质有一定的差异，如表8-7所示：所示：n2020世纪世纪7070年代以后，美国年代以后，美国Staley Staley 对对产气杆菌产气杆菌生成异淀生成异淀粉酶的培养条件做了深入地研究。他们认为，培养基粉酶的培养条件做了深入地研究。他们认为，培养基的的PHPH应维持在应维持在6.0-8.16.0-8.1，若在，若在6 6以下或以下或
30、8.18.1以上，则酶产以上，则酶产量下降，即使调回量下降，即使调回PH PH，此酶也不能产生；必须用麦芽，此酶也不能产生；必须用麦芽糖、麦芽三糖或茁酶多糖糖、麦芽三糖或茁酶多糖诱导诱导；诱导的细胞可培养在；诱导的细胞可培养在含有含有适当适当碳水化合物和植酸盐滤物或玉米浆培养基中。碳水化合物和植酸盐滤物或玉米浆培养基中。只有保证以上只有保证以上3 3个条件才能生成异淀粉酶。个条件才能生成异淀粉酶。n日本的宫本武明等除用日本的宫本武明等除用10%10%可溶性淀粉可溶性淀粉外，还添加外，还添加0.5%0.5%谷氨酸钠谷氨酸钠使酶活力提高。再添加硫酸铵使酶活力提高。再添加硫酸铵0.5%0.5%、磷酸
31、氢、磷酸氢二钾二钾0.05%0.05%、七水硫酸镁、七水硫酸镁0.05%0.05%、七水硫酸亚铁、七水硫酸亚铁0.001%0.001%等无机盐，等无机盐，酶活力酶活力可达可达772U/Ml.772U/Ml.n n另外，据另外，据HarwathHarwath等报道等报道,麦芽糖醇麦芽糖醇可以促进微生物形可以促进微生物形成异淀粉酶。我国异淀粉酶的研究工作开始于成异淀粉酶。我国异淀粉酶的研究工作开始于19731973年。年。异淀粉酶生产举例异淀粉酶生产举例n菌种菌种：产气气杆菌：产气气杆菌n斜面培养基斜面培养基：葡萄糖：葡萄糖1%1%、牛肉膏、牛肉膏1%1%、蛋白胨、蛋白胨1%1%、氯化、氯化钠钠0
32、.05%0.05%、琼脂、琼脂2%2%，pH7.0-7.2pH7.0-7.2n摇瓶培养基摇瓶培养基：甘薯淀粉，豆饼粉，：甘薯淀粉，豆饼粉，pH6.8-7.0pH6.8-7.0，3030培养，通风量：培养，通风量：1:0.151:0.15，连续搅拌：，连续搅拌：270r/min,270r/min,罐压罐压0.50.5大气压，培养时间大气压，培养时间18-20h18-20h，酶活力：，酶活力：100U/mL100U/mLn发酵培养基发酵培养基：甘薯淀粉，豆饼粉，：甘薯淀粉，豆饼粉，pH6.8-7.0pH6.8-7.0，3030培养培养48h48h，通风量：微量，连续搅拌：，通风量：微量，连续搅拌：270r/min,270r/min,罐压罐压0.50.5大气压，大气压，0.01%0.01%泡敌泡敌酶制剂提取：酶制剂提取：n取发酵液按取发酵液按0.1%0.1%加入加入醋酸钙醋酸钙或或氯化钙氯化钙，使之溶，使之溶解，然后加入解，然后加入40%40%硫酸铵硫酸铵（按发酵液体积计）（按发酵液体积计）搅拌溶解搅拌溶解1h 1h，静置，静置24h24h左右，压滤得湿酶，经左右，压滤得湿酶，经4040以下干燥，粉碎得以下干燥，粉碎得粉状酶制剂粉状酶制剂。
