1、种子生活力测定种子生活力测定一、种子生活力测定的必要性一、种子生活力测定的必要性(一一)种子生活力种子生活力(Seed viability)Seed viability)的概念的概念 种子生活力指种子发芽的潜在能力或种种子生活力指种子发芽的潜在能力或种胚所具有的生命力。胚所具有的生命力。在一个种子样品中全部有生命力的种子，在一个种子样品中全部有生命力的种子，应包括能发芽的种子和暂时不能发芽而具有应包括能发芽的种子和暂时不能发芽而具有生命力的休眠种子。生命力的休眠种子。(二二)种子生活力测定的必要性种子生活力测定的必要性v 测定测定休眠种子休眠种子的生活力，有利于正确评定的生活力，有利于正确评定
2、种子品质。种子品质。v 处于休眠状态的种子，仅用发芽试验测处于休眠状态的种子，仅用发芽试验测定其发芽率，就不可能测出种子的最高发芽率。定其发芽率，就不可能测出种子的最高发芽率。v 快速快速预测种子的发芽能力，以便在短期内预测种子的发芽能力，以便在短期内了解种子发芽状况。了解种子发芽状况。（三）种子生活力测定的方法三）种子生活力测定的方法 根据测定原理，根据测定原理，种子生活力测定方法可分种子生活力测定方法可分为为生物化学法、组织化学法、软生物化学法、组织化学法、软X射线法和荧射线法和荧光分析法四类光分析法四类。具体的方法有四唑染色法、溴麝香草酚兰具体的方法有四唑染色法、溴麝香草酚兰法、中性红法
3、、二硝基苯法、红墨水染色法、法、中性红法、二硝基苯法、红墨水染色法、软软X射线法等。射线法等。正式列入国际种子检验规程和我国农作物正式列入国际种子检验规程和我国农作物种子检验规程的生活力测定方法是种子检验规程的生活力测定方法是生物化学生物化学(四四唑唑)染色法。染色法。二、四唑测定法二、四唑测定法(一一)四唑染色的测定原理四唑染色的测定原理 四唑（四唑（2 2，3 3，5-5-氯化三苯基四氮唑）是一种可渗氯化三苯基四氮唑）是一种可渗透进种子组织中的无色溶液。它在种子组织里参与活透进种子组织中的无色溶液。它在种子组织里参与活细胞的还原反应，从脱氢酶上接受氢离子，自身被还细胞的还原反应，从脱氢酶上
4、接受氢离子，自身被还原成红色、稳定、不扩散、不溶于水的三苯基甲替，原成红色、稳定、不扩散、不溶于水的三苯基甲替，沉积在活组织处使其沉积在活组织处使其显红色显红色，而死种子或种胚的某一，而死种子或种胚的某一部位无生活力时，则不显红色。部位无生活力时，则不显红色。DPNH2 +TTC DPN +TTCH +HCl (辅酶辅酶H2)()(四唑四唑)()(辅酶辅酶I)(I)(甲替甲替)()(氯化氢氯化氢)据此，可鉴别种子有无生活力及无生活力种子死据此，可鉴别种子有无生活力及无生活力种子死组织的部位。组织的部位。(二二)四唑测定的特点四唑测定的特点 四唑测定具有原理可靠、结果准确、四唑测定具有原理可靠、
5、结果准确、不受休眠限制、方法简便、省时快速、不受休眠限制、方法简便、省时快速、成本低廉等特点。所以四唑测定是世界成本低廉等特点。所以四唑测定是世界公认、广泛应用、实用方便、省时快速、公认、广泛应用、实用方便、省时快速、结果可靠、深受欢迎、最有发展前途的结果可靠、深受欢迎、最有发展前途的种子生活力测定方法之一。种子生活力测定方法之一。(三三)四唑测定的适用范围四唑测定的适用范围 根据根据1996国际种子检验规程规定，四唑测定可适国际种子检验规程规定，四唑测定可适用下列方面的快速测定种子生活力：用下列方面的快速测定种子生活力：测定休眠种子的发芽潜力；测定休眠种子的发芽潜力；测定收获后要马上播种种子
6、潜在发芽能力；测定收获后要马上播种种子潜在发芽能力；测定发芽缓慢种子的发芽潜力；测定发芽缓慢种子的发芽潜力；测定发芽末期未发芽种子的生活力；测定发芽末期未发芽种子的生活力；测定种子收获期间或加工损伤测定种子收获期间或加工损伤(如热伤、机械如热伤、机械损伤、虫蛀、化学伤害等因素损伤、虫蛀、化学伤害等因素)种子生活力，并按染种子生活力，并按染色局部解剖图形查明损伤原因；色局部解剖图形查明损伤原因；解决发芽试验中遇到的问题，查明不正常幼苗解决发芽试验中遇到的问题，查明不正常幼苗产生的原因和杀菌剂处理或种子包衣等的伤害；产生的原因和杀菌剂处理或种子包衣等的伤害；查明种子贮藏期间劣变衰老程度，按染色图形
7、查明种子贮藏期间劣变衰老程度，按染色图形分级，评定种子活力水平；分级，评定种子活力水平；时间紧迫，调种时快速测定种子生活力。时间紧迫，调种时快速测定种子生活力。（四）四唑测定程序四）四唑测定程序1.1.配制溶液配制溶液 常用的四唑溶液浓度为常用的四唑溶液浓度为0.1%1.0%。0.1%和和0.5%的溶液常用于切开种胚种子的测定，而的溶液常用于切开种胚种子的测定，而1%的的溶液常用于不切开种胚种子的测定。溶液常用于不切开种胚种子的测定。2.2.试验样品的数取试验样品的数取 每次至少测定每次至少测定200200粒种子，从经净度分析后并粒种子，从经净度分析后并充分混合的净种子中，随机数取，每重复充分
8、混合的净种子中，随机数取，每重复100100粒或粒或少于少于100100数的若干副重复。数的若干副重复。如是测定发芽末期休眠种子的生活力，则只如是测定发芽末期休眠种子的生活力，则只用试验末期的休眠种子。用试验末期的休眠种子。3.3.种子预措预湿种子预措预湿 种子预措预湿的目的是使种子加快和充分吸湿，种子预措预湿的目的是使种子加快和充分吸湿，软化种皮，方便样品准备，促进活组织酶系统的活化，软化种皮，方便样品准备，促进活组织酶系统的活化，以提高染色的均匀度、鉴定的可靠性和正确性。以提高染色的均匀度、鉴定的可靠性和正确性。(1)1)预措：预措：指在种子预湿前除去种子外部的附属物和指在种子预湿前除去种
9、子外部的附属物和在种子的非要害部位弄破种皮。在种子的非要害部位弄破种皮。(2)(2)预湿：预湿：方法有两种；一是缓慢吸湿，这种方法是方法有两种；一是缓慢吸湿，这种方法是将种子置于湿润的纸上或纸间吸湿，适用于直接浸在将种子置于湿润的纸上或纸间吸湿，适用于直接浸在水中会吸水过快而引起种皮破裂的种子水中会吸水过快而引起种皮破裂的种子,或过分干燥或过分干燥的种子及陈种子。二是水中浸种，让其充分吸胀。的种子及陈种子。二是水中浸种，让其充分吸胀。4.4.染色前的样品准备染色前的样品准备（1 1）目的：）目的：使四唑溶液快速和充分渗入种子使四唑溶液快速和充分渗入种子的全部活组织，加快染色反应和正确鉴定胚的全
10、部活组织，加快染色反应和正确鉴定胚的主要构造，必须按其胚的营养组织的位置的主要构造，必须按其胚的营养组织的位置和特性，采用适当的方法使胚的主要构造和和特性，采用适当的方法使胚的主要构造和活的营养组织暴露出来。活的营养组织暴露出来。（2 2）方法：）方法：准备方法因种子构造和胚的位置准备方法因种子构造和胚的位置不同而异（详见不同而异（详见农作物种子四唑染色技术农作物种子四唑染色技术规定规定）。）。5.5.四唑染色四唑染色 将将已已准备好的种子样品放入染色盘中，准备好的种子样品放入染色盘中，加入适宜浓度的四唑溶液以完全淹没种子，加入适宜浓度的四唑溶液以完全淹没种子，置于置于35恒温箱内进行染色反应
11、。所用染色恒温箱内进行染色反应。所用染色时间因四唑溶液浓度、温度、种子种类、样时间因四唑溶液浓度、温度、种子种类、样品准备方法等因素而异。到达规定时间或染品准备方法等因素而异。到达规定时间或染色已很明显时，倒去四唑溶液，用清水冲洗色已很明显时，倒去四唑溶液，用清水冲洗后即可鉴定。后即可鉴定。6.6.观察鉴定观察鉴定 肉眼，手持放大镜或肉眼，手持放大镜或1010100100倍的体视显倍的体视显微镜进行观察。微镜进行观察。观察鉴定时，确定种子是否具有生活力，观察鉴定时，确定种子是否具有生活力，必须根据胚的主要构造和有关活营养组织的染必须根据胚的主要构造和有关活营养组织的染色情况进行正确的判断。色情
12、况进行正确的判断。具体鉴定标准见具体鉴定标准见农作物种子四唑染色技农作物种子四唑染色技术规定术规定。依据鉴定标准，将各部分分开和计数。依据鉴定标准，将各部分分开和计数。7.7.结果表示与报告结果表示与报告 计算各个重复中有生活力的种子数，重复间最计算各个重复中有生活力的种子数，重复间最大容许差距不得超过大容许差距不得超过生活力测定重复间的最大容生活力测定重复间的最大容许差距许差距的规定，平均百分率计算到最近似的整数。的规定，平均百分率计算到最近似的整数。在在GB/T3543.1结果报告单结果报告单“其他测定项目其他测定项目”中要中要填报填报“四唑测定有生活力的种子四唑测定有生活力的种子%。对豆
13、类、棉籽和蕹菜等需增填对豆类、棉籽和蕹菜等需增填“试验中发现的试验中发现的硬实百分率硬实百分率”，硬实百分率应包括在所填报有生活，硬实百分率应包括在所填报有生活力种子百分率中。力种子百分率中。农业和园艺种子四唑准备示意图农业和园艺种子四唑准备示意图禾谷类四唑禾谷类四唑染色鉴定图谱染色鉴定图谱三、种子生活力测定的其它方法三、种子生活力测定的其它方法（二）中性红法（二）中性红法 中性红原呈红色，在碱性条件下呈淡黄中性红原呈红色，在碱性条件下呈淡黄色。测定时，将种子倒入中性红的碱性溶液色。测定时，将种子倒入中性红的碱性溶液淹没种子当活种子进行呼吸作用时，放出淹没种子当活种子进行呼吸作用时，放出CO2使碱性溶液趋于中性，中性红的红色即使碱性溶液趋于中性，中性红的红色即得以呈现出来。若溶液未变红则说明该粒种得以呈现出来。若溶液未变红则说明该粒种子为死种子。子为死种子。（三）二硝基苯法（三）二硝基苯法 二硝基苯渗入有生活力的细胞后，由于二硝基苯渗入有生活力的细胞后，由于细胞的呼吸作用，将间二硝基苯还原为硝基细胞的呼吸作用，将间二硝基苯还原为硝基苯羟氨，在氨的作用下，硝基苯羟氨显深红苯羟氨，在氨的作用下，硝基苯羟氨显深红色。而无生活力的种子胚不会被染色，因此，色。而无生活力的种子胚不会被染色，因此，可根据种胚染色情况鉴定种子有无生活力。可根据种胚染色情况鉴定种子有无生活力。
