1、总目录下页退出第十八章第十八章 真菌感染的实验室诊断真菌感染的实验室诊断总目录上页退出下页返回退出真菌概述真菌概述u定义定义真菌（fungus）是一类具有细胞壁和典型细胞核，不含叶绿素，不分根、茎、叶的真核细胞型微生物。总目录上页退出下页返回退出真菌概述真菌概述u特点特点1.细胞核高级分化，有核膜核仁，胞质内有完整细胞器，能进行有丝分裂。2.细胞壁由几丁质或纤维素组成，无肽聚糖。3.少数为单细胞，大部分为多细胞并有发达的菌丝体。4.不含叶绿素，不分根、茎、叶。以腐生或寄生的方式摄取养料。5.以无性和有性方式进行繁殖。6.种类繁多，数目大，分布极广。总目录上页退出下页返回退出原核细胞型微生物与真
2、核细胞型微生物比较 原核细胞型微生物 真核细胞型微生物 细胞核结构核膜无 有核仁无 有分裂方式 主要以二分裂 有丝分裂，减数分裂细胞质结构质膜 常缺乏固醇常有固醇 内膜 较简单，有中介体复杂，有内质网和高尔基体核糖体 70S 80S 呼吸系统 质膜或中介体线粒体 细胞壁组成 肽聚糖 几丁质或纤维素总目录上页退出下页返回退出第一节第一节 分类与命名分类与命名一、生物学分类与医学有关的真菌为真菌界真菌门中的四个亚门：接合亚门（Zygomycotina）：毛霉目 子囊菌亚门（Ascomycotina）：酵母属 担子菌亚门（Basidiomycotina）：新生线状黑粉菌 半知菌亚门（Deutermy
3、cotina）：多数致病性真菌 假丝酵母菌属（假丝酵母菌属（Candida）隐球菌属（隐球菌属（Cryptococcus）表皮癣菌属（表皮癣菌属（Epidermophton）球孢子菌属（球孢子菌属（Coccidioides）组织胞浆菌属（组织胞浆菌属（Histoplastoma）总目录上页退出下页返回退出二、临床分类 （按致病部位）（按致病部位）浅部感染真菌：浅部感染真菌：侵犯皮肤、毛发、指甲，为慢性，对治疗有顽固侵犯皮肤、毛发、指甲，为慢性，对治疗有顽固性，但影响身体较小。性，但影响身体较小。深部感染真菌：深部感染真菌：可侵犯全身内脏，严重的可引起死亡。可侵犯全身内脏，严重的可引起死亡。三、
4、三、形态学分类 单细胞真菌单细胞真菌 多细胞真菌多细胞真菌 四、命名四、命名 同细菌，采用国际植物命名法规同细菌，采用国际植物命名法规总目录上页退出下页返回退出第二节生物学性状第二节生物学性状u多数对人有益，仅少数导致人类疾病。医学（病原）真菌400种，常见的有50100种。u目前大多数真菌的鉴定，形态学（包括真 菌形态、菌落形态）检查仍有重要意义。总目录上页退出下页返回退出真菌大小不一，比细菌大几倍至几十倍，光镜可见，形态多样，按形态结构可分为：2单细胞真菌：呈圆形或椭圆形酵母菌酵母菌：孢子，无菌丝孢子，无菌丝。由母细胞。由母细胞芽生芽生方式繁殖，方式繁殖，芽体脱离母细胞，成为子细胞（新的繁
5、殖体），其菌落芽体脱离母细胞，成为子细胞（新的繁殖体），其菌落与与细菌菌落相似细菌菌落相似。类酵母菌类酵母菌：芽生孢子，假菌丝。芽生孢子，假菌丝。芽生方式繁殖，芽生方式繁殖，芽体不脱离母细胞并延长伸进培养基中芽体不脱离母细胞并延长伸进培养基中假菌丝假菌丝，菌落，菌落与前者相似，但在培养基内可见假菌丝体。与前者相似，但在培养基内可见假菌丝体。一、真菌形态特征总目录上页退出下页返回退出总目录上页退出下页返回退出类酵母菌类酵母菌白假丝酵母菌白假丝酵母菌孢子孢子假菌丝假菌丝总目录上页退出下页返回退出n多细胞真菌（丝状菌、霉菌（丝状菌、霉菌）：由菌丝和孢子组成，交织成团，菌落疏松呈丝状。孢子孢子菌丝菌丝
6、（hypha）：成熟孢子在适宜条件下长出芽管，逐渐延长呈丝状生出嫩芽生出嫩芽芽管芽管延长成丝状延长成丝状菌丝菌丝不断生长分支、交织不断生长分支、交织菌丝体菌丝体菌丝为管状结构，内充满细胞浆菌丝为管状结构，内充满细胞浆适宜温适宜温/湿度湿度总目录上页退出下页返回退出菌丝菌丝分类单纯菌丝球拍状菌丝梳状菌丝结节状菌丝鹿角状菌丝螺旋状菌丝按功能按功能营养菌丝：深入培养基营养菌丝：深入培养基气中菌丝气中菌丝/生殖菌丝：生殖菌丝：按结构按结构隔膜有无隔膜有无无隔菌丝无隔菌丝有隔菌丝（大多数病原性真菌）有隔菌丝（大多数病原性真菌）按形态按形态总目录上页退出下页返回退出真菌的菌丝真菌的菌丝 总目录上页退出下页
7、返回退出总目录上页退出下页返回退出总目录上页退出下页返回退出真菌菌丝形态真菌菌丝形态总目录上页退出下页返回退出总目录上页退出下页返回退出u孢子（spore）是真菌的生殖结构，通过产生孢子进行繁殖，孢子由特化的菌丝生殖菌丝产生。孢子也是其鉴定和分离的依据。分类：孢子孢子无性孢子：无性孢子：菌丝上细胞分化生成，不发生细菌丝上细胞分化生成，不发生细胞融合。胞融合。有性孢子：有性孢子：同一同一/不同菌体上两细胞融合减不同菌体上两细胞融合减数分裂而成。数分裂而成。大多真菌行有性大多真菌行有性/无性生殖，病原性真菌多以无性生殖为主。无性生殖，病原性真菌多以无性生殖为主。总目录上页退出下页返回退出真菌的形态
8、构成真菌的形态构成菌菌 丝丝营养菌丝营养菌丝气生菌丝气生菌丝 生殖菌丝生殖菌丝孢孢 子子有性有性孢子孢子由同一菌体或不同菌体上的二个细胞融合由同一菌体或不同菌体上的二个细胞融合形成形成 绝大多数属于非致病绝大多数属于非致病性真菌所具有性真菌所具有 无无 性性 孢孢 子子分生分生孢子孢子分生孢子梗的分生孢子梗的顶端或侧面顶端或侧面大分生孢子大分生孢子小孢子菌属、小孢子菌属、表皮癣菌属表皮癣菌属小分生孢子小分生孢子毛癣菌属毛癣菌属叶状叶状孢子孢子菌丝细胞直接菌丝细胞直接形成形成芽生孢子芽生孢子 隐球菌、念珠菌隐球菌、念珠菌 关节孢子关节孢子 厚膜孢子厚膜孢子 新型隐球菌新型隐球菌孢子囊孢子囊孢子孢
9、子菌丝末端形成膨大的囊状结构即菌丝末端形成膨大的囊状结构即孢子囊，内含很多孢子孢子囊，内含很多孢子 根霉菌根霉菌 总目录上页退出下页返回退出真菌的有性孢子（根霉菌的接合孢子）总目录上页退出下页返回退出真真 菌菌 无无 性性 孢孢 子子 形形 态态芽生孢子芽生孢子厚膜孢子厚膜孢子关节孢子关节孢子小分生孢子小分生孢子大分生孢子大分生孢子1叶状孢子2分生孢子总目录上页退出下页返回退出总目录上页退出下页返回退出芽生孢子芽生孢子总目录上页退出下页返回退出芽生孢子芽生孢子总目录上页退出下页返回退出假丝酵母菌厚膜孢子假丝酵母菌厚膜孢子总目录上页退出下页返回退出关节孢子关节孢子总目录上页退出下页返回退出3、孢
10、子囊孢子总目录上页退出下页返回退出孢子囊孢子总目录上页退出下页返回退出生殖菌丝末端细胞分裂或收缩形成；也可从菌丝侧面出芽形成大分生孢子的形态大分生孢子的形态总目录上页退出下页返回退出总目录上页退出下页返回退出分生孢子梗总目录上页退出下页返回退出真菌孢子和细菌芽胞的区别真菌孢子和细菌芽胞的区别真菌孢子真菌孢子细菌芽胞细菌芽胞抵抗力抵抗力不强，不强，60-70短时间短时间杀死杀死强，煮沸短时间不死强，煮沸短时间不死数目数目一条菌丝可产生多个一条菌丝可产生多个孢子孢子一个细菌体只形成一一个细菌体只形成一个芽孢个芽孢作用作用为繁殖方式之一为繁殖方式之一不是繁殖方式不是繁殖方式形成位置形成位置可在细胞内
11、外形成可在细胞内外形成只在细菌细胞内形成只在细菌细胞内形成形状形状形态、色泽多样形态、色泽多样圆形或椭圆形圆形或椭圆形总目录上页退出下页返回退出u二相型真菌:许多病原性真菌因生活的环境如营许多病原性真菌因生活的环境如营养、温度氧气等的改变，养、温度氧气等的改变，孢子与菌丝两种形态可孢子与菌丝两种形态可以互变以互变，这类真菌称为，这类真菌称为二相性真菌二相性真菌。机体内寄生机体内寄生37单细胞型：单细胞型：多细胞型：多细胞型：含含动物蛋白动物蛋白培养基培养基酵母菌酵母菌沙保氏培养基沙保氏培养基2525普通培养基普通培养基2525丝状菌丝状菌总目录上页退出下页返回退出二相性真菌二相性真菌 总目录上
12、页退出下页返回退出二、真菌的培养特性营养要求不高，常用营养要求不高，常用沙保氏沙保氏（Sabouraud）培养基培养基基本成分：基本成分：葡萄糖、蛋白胨、琼脂；葡萄糖、蛋白胨、琼脂；pH4.06.0 生长条件：生长条件：较高的湿度、较高的湿度、O2浅部真菌浅部真菌：2228，生长缓慢，大多于，生长缓慢，大多于12 周出现典周出现典型菌落。型菌落。深部感染真菌深部感染真菌：37长的最好，生长较快，长的最好，生长较快，34 天即长天即长出菌落。出菌落。培养时间：培养时间：病原性真菌多为病原性真菌多为1-4W。加抗生素（氯加抗生素（氯霉素）抑菌。霉素）抑菌。总目录上页退出下页返回退出（1）酵母型酵母
13、型/类酵母型类酵母型（单细胞真菌菌落形式）（单细胞真菌菌落形式）A、湿润、柔软而致密，形态似一般细菌菌落、湿润、柔软而致密，形态似一般细菌菌落B、镜下：酵母型镜下：酵母型 类酵母型类酵母型卵圆孢子、芽生孢子卵圆孢子、芽生孢子芽生孢子、假菌丝芽生孢子、假菌丝总目录上页退出下页返回退出酵母型酵母型菌落菌落总目录上页退出下页返回退出白假丝酵母菌菌落白假丝酵母菌菌落(类酵母型类酵母型)总目录上页退出下页返回退出（2）丝状菌落丝状菌落（多细胞真菌菌落形式）（多细胞真菌菌落形式）A、棉絮状、绒毛状、粉末状棉絮状、绒毛状、粉末状（气生菌丝体）（气生菌丝体）菌落正背面呈不同颜色（可为鉴定依据）菌落正背面呈不同
14、颜色（可为鉴定依据）B、玻片小培养玻片小培养乳酚棉蓝乳酚棉蓝镜下镜下孢子、菌丝及完整菌丝体孢子、菌丝及完整菌丝体总目录上页退出下页返回退出 曲霉菌曲霉菌总目录上页退出下页返回退出石膏样癣菌总目录上页退出下页返回退出青霉菌青霉菌总目录上页退出下页返回退出三、变异性和抵抗力u真菌易变异：经多次传代或培养时间过久，其形态、结构、菌落性状、色素及毒力等都可以发生改变。用不同的培养基和不同温度培养，其性状也可不同。u抵抗力 真菌真菌对干燥、阳光、紫外线及一般化学消毒剂抵抗力较强对干燥、阳光、紫外线及一般化学消毒剂抵抗力较强；对热敏感，一般对热敏感，一般60 70 1小时可杀死真菌菌丝和孢子小时可杀死真菌
15、菌丝和孢子。对对2.5%碘酒，碘酒，10%福尔马林都敏感，一般可用福尔马林薰蒸被真菌感福尔马林都敏感，一般可用福尔马林薰蒸被真菌感染的房间。染的房间。对抗细菌的抗生素不敏感对抗细菌的抗生素不敏感；灰黄霉素、制霉菌素、二性霉素；灰黄霉素、制霉菌素、二性霉素 克霉唑等克霉唑等对其有抑制作用。对其有抑制作用。总目录上页退出下页返回退出四、致病性与免疫性四、致病性与免疫性u对人致病的真菌分为四类：病原性真菌：浅部真菌、深部真菌病原性真菌：浅部真菌、深部真菌 条件致病性真菌条件致病性真菌 产毒真菌产毒真菌 致癌真菌致癌真菌u所致疾病：真菌性感染真菌性感染 真菌性超敏反应真菌性超敏反应 真菌毒素中毒真菌毒
16、素中毒 总目录上页退出下页返回退出u真菌性感染：引起真菌病（mycoses），由真菌引起的感染。1.原发性感染：球孢子菌（Coccidiodes）皮炎芽生菌（Blastomyoes dermatitidis）组织胞浆菌（Histoplasma）等2.继发性感染：机体免疫功能显著下降时发生。总目录上页退出下页返回退出u目前真菌症呈明显上升趋势的原因目前真菌症呈明显上升趋势的原因：1.抗生素、抗肿瘤药物、免疫抑制剂等的滥用抗生素、抗肿瘤药物、免疫抑制剂等的滥用 2.器官移植、介入性治疗等新技术的开展器官移植、介入性治疗等新技术的开展 3.艾滋病、糖尿病、恶性肿瘤等疾病造成宿主免艾滋病、糖尿病、恶性
17、肿瘤等疾病造成宿主免疫低下疫低下总目录上页退出下页返回退出真菌性超敏反应总目录上页退出下页返回退出总目录上页退出下页返回退出 免疫性由于皮肤癣真菌与腐生性真菌间有共同抗原，因此由于皮肤癣真菌与腐生性真菌间有共同抗原，因此一般不做血清学检查一般不做血清学检查Ab辅助诊断此类真菌感染。辅助诊断此类真菌感染。总目录上页退出下页返回退出真菌的常规检验法实验室检查：标本采集 分离培养 直接镜检 生化反应 染色镜检 免疫学试验以直接镜检和分离培养最重要。总目录上页退出下页返回退出第三节真菌感染的病原学诊断一、一、临床标本的采集种类（1）皮肤的角质性物质皮肤的角质性物质：毛发、指（趾）：毛发、指（趾）甲、皮
18、屑等。甲、皮屑等。（2）各种分泌物和排泄物各种分泌物和排泄物：生殖道分泌物、：生殖道分泌物、耳垢、痰、粪便、尿液等。耳垢、痰、粪便、尿液等。（3）血液和体液血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑：体液包括胸水、腹水、脑 脊液、淋巴穿刺液等。脊液、淋巴穿刺液等。（4）脓汁及渗出物脓汁及渗出物。总目录上页退出下页返回退出采集标本注意事项（1）采集的标本要适宜采集的标本要适宜 不同真菌感染应采取不同不同真菌感染应采取不同的临床标的临床标 本。怀疑为浅部真菌感染如体癣，应刮本。怀疑为浅部真菌感染如体癣，应刮取病变边缘的痂、皮屑，发癣应取折断了的病发。取病变边缘的痂、皮屑，发癣应取折断了的病发。怀疑为深部真
19、菌感染应取血液、脑脊液、痰、脓怀疑为深部真菌感染应取血液、脑脊液、痰、脓汁等。汁等。（2）在用药前采集标本在用药前采集标本一般真菌标本须在用药一般真菌标本须在用药前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。标本。总目录上页退出下页返回退出采集标本注意事项（3）采集的标本量要足采集的标本量要足 血液和脑脊液标本血液和脑脊液标本5ml，胸腔液胸腔液20ml，皮屑标本两块，活体组织两份（一，皮屑标本两块，活体组织两份（一份送病理科检查，一份作镜检和培养）。份送病理科检查，一份作镜检和培养）。（4）严格无菌操作严格无菌操作在采集标本时严格无菌操作，在采集标
20、本时严格无菌操作，并进行消毒处理，尤其是在采集血液和脑脊液标并进行消毒处理，尤其是在采集血液和脑脊液标本时，要避免污染杂菌。本时，要避免污染杂菌。（5）采集的标本立即送检采集的标本立即送检对采集的标本应立即对采集的标本应立即送检，特别是深部真菌标本采集后最长不超过送检，特别是深部真菌标本采集后最长不超过2h。总目录上页退出下页返回退出三、真菌的检验方法 1.镜检真菌形态：镜检真菌形态：标本直接检查标本直接检查2.真菌抗原检测真菌抗原检测3.真菌分离培养与鉴定真菌分离培养与鉴定4.真菌核酸检测真菌核酸检测5.真菌毒素检测真菌毒素检测 总目录上页退出下页返回退出 （一）真菌标本直接检查1.直接镜检
21、：方法简便，快速直接采取标本制片、显微镜下直接观察，若发现真菌菌丝或直接采取标本制片、显微镜下直接观察，若发现真菌菌丝或孢子存在时，即可初步判定为真菌感染。孢子存在时，即可初步判定为真菌感染。10%KOH微加热低倍/高倍镜检查有无菌丝/孢子角质标本（皮肤癣菌）直接观察直接观察/染色后观察染色后观察总目录上页退出下页返回退出u不染色标本检查不染色标本检查 标本制备：取标本加一滴固定液，如毛发标本可稍微加温。标本制备：取标本加一滴固定液，如毛发标本可稍微加温。检查方法：高低倍观测检查方法：高低倍观测 封固液：封固液：vKOH：促进角质蛋白溶解如皮屑10%，毛发20%。本液适于检查致密的难以透明的材
22、料、角质标本。（如毛发、指甲、鳞屑等）。v墨汁：主要用于检查有荚膜的真菌如新生隐球菌。用于检测病人脑检测病人脑脊液标本中新生隐球菌，需作墨汁负染色后检查，背景为黑色，新脊液标本中新生隐球菌，需作墨汁负染色后检查，背景为黑色，新生隐球菌和荚膜不着色生隐球菌和荚膜不着色v水合氯醛石炭酸乳酸封固液：此液透明力较强，只限于不透明的标本。v生理盐水：为观察真菌的出芽现象可用生理盐水代替氢氧化钾溶液。总目录上页退出下页返回退出总目录上页退出下页返回退出总目录上页退出下页返回退出KOH处理总目录上页退出下页返回退出 新新 型型 隐隐 球球 菌墨汁菌墨汁总目录上页退出下页返回退出u染色标本检查染色标本检查 革
23、兰染色：各种真菌均染成革兰染色：各种真菌均染成革兰阳性革兰阳性。如酵母菌和假如酵母菌和假丝酵母菌。丝酵母菌。乳酸酚棉蓝染色：适用于各种真菌的检查乳酸酚棉蓝染色：适用于各种真菌的检查 糖原染色（糖原染色（PAS）：又称过碘）：又称过碘Schiff（简称（简称PAS或或PASH）。真菌细胞壁由纤维素和几丁质组成，含有）。真菌细胞壁由纤维素和几丁质组成，含有多糖。过碘酸使糖氧化成醛，再与品红亚硫酸结合，多糖。过碘酸使糖氧化成醛，再与品红亚硫酸结合，成为红色，成为红色，故菌体均染成红色。故菌体均染成红色。为为真菌染色最常用的真菌染色最常用的方法之一。方法之一。嗜银染色（嗜银染色（GMS）：原理类似，用
24、铬酸代替过碘酸。：原理类似，用铬酸代替过碘酸。总目录上页退出下页返回退出革兰染色总目录上页退出下页返回退出嗜银染色（嗜银染色（GMSGMS）总目录上页退出下页返回退出u染色标本检查染色标本检查 粘蛋白卡红染色法（粘蛋白卡红染色法（MCS）：主要用于新生隐球菌主要用于新生隐球菌荚膜的染色。隐球菌荚膜和细胞壁呈红色，细胞核呈荚膜的染色。隐球菌荚膜和细胞壁呈红色，细胞核呈黑色。黑色。瑞氏染色：对检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌，瑞氏染色：对检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌，需作瑞氏染色或姬氏染色后镜检。需作瑞氏染色或姬氏染色后镜检。荣光染色：荣光染色：主要使用吖啶橙和氢氧化钾来染直接涂片、主要使
25、用吖啶橙和氢氧化钾来染直接涂片、培养涂片及组织切片。培养涂片及组织切片。总目录上页退出下页返回退出直接镜检意义阳性结果意义阳性结果意义1.有诊断意义，如浅部真菌病、隐球菌病、皮肤粘有诊断意义，如浅部真菌病、隐球菌病、皮肤粘膜假丝酵母菌病等。膜假丝酵母菌病等。2.代表组织相，直接镜检看到的真菌形态就是该真代表组织相，直接镜检看到的真菌形态就是该真菌的组织形态，如假丝酵母的菌丝、浅部真菌的菌的组织形态，如假丝酵母的菌丝、浅部真菌的厚膜孢子等；确定某些致病性真菌属或种，如皮厚膜孢子等；确定某些致病性真菌属或种，如皮肤癣菌、曲霉等。肤癣菌、曲霉等。3.判断某些真菌种的致病性等。判断某些真菌种的致病性等
26、。总目录上页退出下页返回退出直接镜检意义直接镜检局限性直接镜检局限性1.阴性结果不能排除真菌感染，直接镜检不如培养阴性结果不能排除真菌感染，直接镜检不如培养敏感，其敏感性随标本类型、数量、采集时间和敏感，其敏感性随标本类型、数量、采集时间和质量等而有所不同质量等而有所不同 2.有假阳性结果，如溶解的淋巴细胞在脑脊液印度有假阳性结果，如溶解的淋巴细胞在脑脊液印度墨汁湿片中易误认为新生隐球菌；脂肪微滴也可墨汁湿片中易误认为新生隐球菌；脂肪微滴也可与出芽酵母细胞混淆与出芽酵母细胞混淆 因此，对直接镜检可疑结果应作复查或用其他检验方法鉴定。总目录上页退出下页返回退出 真菌标本直接检查2.2.抗原检测抗
27、原检测:采用免疫学方法检测真菌抗原，常用的方法有胶采用免疫学方法检测真菌抗原，常用的方法有胶乳凝集试验、乳凝集试验、ELISAELISA、半定量放射免疫测定法、半定量放射免疫测定法。总目录上页退出下页返回退出（二）分 离 培 养u真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法。真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法。培养成功与否与采集的标本是否适当、是否新鲜、培养成功与否与采集的标本是否适当、是否新鲜、培养基的选择、培养温度与时间等有关。培养基的选择、培养温度与时间等有关。大多数真菌培养的温度为大多数真菌培养的温度为28，但深部真菌为，但深部真菌为37。对二相性真菌培养时，对二相性真菌培养时，28培养真菌呈菌丝相
28、（霉培养真菌呈菌丝相（霉菌型），菌型），37培养为组织相（酵母型）。培养为组织相（酵母型）。u培养基：培养基：沙保培养基沙保培养基玉米吐温琼脂培养基玉米吐温琼脂培养基总目录上页退出下页返回退出1 1、培养基、培养基常用真菌培养基及用途培培 养养 基基用用 途途沙保培养基沙保培养基 真菌的常规培养真菌的常规培养 放线菌酮氯霉素琼脂放线菌酮氯霉素琼脂 同上同上 玉米粉聚山梨酯玉米粉聚山梨酯80琼脂琼脂 观察白假丝酵母菌的厚膜孢子观察白假丝酵母菌的厚膜孢子马铃薯葡萄糖琼脂马铃薯葡萄糖琼脂 观察真菌菌落色素，用于鉴别观察真菌菌落色素，用于鉴别尿素琼脂尿素琼脂 用生化反应鉴别真菌用生化反应鉴别真菌 （红
29、色癣菌和石膏样癣菌）（红色癣菌和石膏样癣菌）心脑浸液葡萄糖血琼脂心脑浸液葡萄糖血琼脂 深部真菌培养深部真菌培养（二相性真菌）（二相性真菌）总目录上页退出下页返回退出总目录上页退出下页返回退出真菌培养方法 u大培养大培养：用平皿或培养瓶培养。用平皿或培养瓶培养。表面较大可使标本散布，便于观察菌落形态，但水分易蒸发，只能培表面较大可使标本散布，便于观察菌落形态，但水分易蒸发，只能培养生长繁殖较快的真菌，如假丝酵母菌、隐球菌。养生长繁殖较快的真菌，如假丝酵母菌、隐球菌。u试管培养：试管培养：水分不易蒸发，主要用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种水分不易蒸发，主要用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种传代接种与保存。传
30、代接种与保存。u玻片培养（微量培养、小培养）：玻片培养（微量培养、小培养）：可观察结构特征及发可观察结构特征及发育的全过程。育的全过程。可用于真菌菌种的鉴定。可用于真菌菌种的鉴定。将接种好的玻片，放在平皿内，并放湿纱布将接种好的玻片，放在平皿内，并放湿纱布以防干燥。逐日镜以防干燥。逐日镜 检，一般约检，一般约7即可长好。根据菌丝和孢子的结构即可长好。根据菌丝和孢子的结构特点进行真菌类别的鉴定。特点进行真菌类别的鉴定。总目录上页退出下页返回退出观察菌落形态时注意1.菌落性质，是酵母菌还是霉菌。菌落性质，是酵母菌还是霉菌。2.菌落大小，一般病原性真菌菌落小，而条件致病性菌落大小，一般病原性真菌菌落
31、小，而条件致病性真菌菌落大。真菌菌落大。3.菌落颜色，一般病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色菌落颜色，一般病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深。深。4.致病性真菌菌落下沉，污染性真菌菌落不下沉；致致病性真菌菌落下沉，污染性真菌菌落不下沉；致病性真菌有时使培养基开裂，但污染霉菌很少引起病性真菌有时使培养基开裂，但污染霉菌很少引起培养基开裂。培养基开裂。总目录上页退出下页返回退出（三）真 菌 鉴 定u菌种鉴定是一个复杂过程，仅观察菌落形态是远远不菌种鉴定是一个复杂过程，仅观察菌落形态是远远不够的，还需作够的，还需作生化反应，分子生物学生化反应，分子生物学鉴定，必要时将鉴定，必要时将菌种送有关单位鉴定。菌种
32、送有关单位鉴定。u检验真菌常用的生化反应：检验真菌常用的生化反应：糖糖(醇醇)类发酵试验、同化碳源试验、同化氮源试验或利用硝酸类发酵试验、同化碳源试验、同化氮源试验或利用硝酸钾试验、牛乳分解试验、酚氧化酶试验、明胶液化试验和脲钾试验、牛乳分解试验、酚氧化酶试验、明胶液化试验和脲酶试验等。酶试验等。试验方法同细菌试验，主要用于检验深部感染真菌如假丝酵试验方法同细菌试验，主要用于检验深部感染真菌如假丝酵母菌、隐球菌等。母菌、隐球菌等。总目录上页退出下页返回退出1.1.多烯类抗生素：如两性霉素多烯类抗生素：如两性霉素B B、制霉菌素、曲古霉、制霉菌素、曲古霉素等。素等。2.2.吡咯类：包括酮康唑、伊
33、曲康唑、氟康唑、伏立康吡咯类：包括酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、伏立康唑、克霉唑、益康唑等。唑、克霉唑、益康唑等。3.3.其他类：如氟胞嘧啶。其他类：如氟胞嘧啶。抗真菌药物分类-化学结构分类总目录上页退出下页返回退出1.作用于真菌细胞膜：两性霉素作用于真菌细胞膜：两性霉素B、制霉菌素、氟、制霉菌素、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、酮康唑及克霉唑等。康唑、伊曲康唑、伏立康唑、酮康唑及克霉唑等。2.作用于真菌细胞壁：尼可霉素作用于真菌细胞壁：尼可霉素Z、卡泊芬净及普拉、卡泊芬净及普拉米星（米星（pradimicin）等。）等。3.作用于真菌核酸：干扰真菌作用于真菌核酸：干扰真菌DNA合成，合成，5氟尿氟尿
34、嘧啶（嘧啶（5FC）等。）等。4.其他：大蒜新素（其他：大蒜新素（allitridum）及冰醋酸）及冰醋酸（glaciale acetic acid）等。）等。抗真菌药物分类-作用机理分类总目录上页退出下页返回退出1两性霉素两性霉素B 两性霉素对大多数深部致病真菌具有活性，两性霉素对大多数深部致病真菌具有活性，如念珠菌、新型隐球菌、曲菌、组织胞浆菌、双如念珠菌、新型隐球菌、曲菌、组织胞浆菌、双向真菌等均有较强的抑制作用。但对皮肤和毛发向真菌等均有较强的抑制作用。但对皮肤和毛发癣菌大多耐药。癣菌大多耐药。2酮康唑酮康唑(ketoconazole)对念珠菌、着色真菌对念珠菌、着色真菌 属、球孢子菌
35、属等有属、球孢子菌属等有抗菌活性，对毛发癣菌亦具抗菌活性。抗菌活性，对毛发癣菌亦具抗菌活性。临床常用抗真菌药物临床常用抗真菌药物 总目录上页退出下页返回退出3氟康唑氟康唑(fluconazole)对念珠菌、隐球菌对念珠菌、隐球菌 具有较高抗菌活性。具有较高抗菌活性。4氟胞嘧啶氟胞嘧啶 为窄谱抗生素，对念珠菌、新型隐球菌和为窄谱抗生素，对念珠菌、新型隐球菌和球拟酵母有较高抗菌活性，对其他真菌抗菌球拟酵母有较高抗菌活性，对其他真菌抗菌作用差，易产生耐药性，故常和两性霉素作用差，易产生耐药性，故常和两性霉素B联联合使用。合使用。总目录上页退出下页返回退出5伊曲康唑伊曲康唑(itraconazole)
36、伊曲康唑体外有广谱抗真菌活性。对念珠伊曲康唑体外有广谱抗真菌活性。对念珠菌、隐球菌、曲霉菌、组织胞浆菌、马内非菌、隐球菌、曲霉菌、组织胞浆菌、马内非青霉均有效。青霉均有效。6伏立康唑（伏立康唑（Voriconazole）伏立康唑适用于侵袭性曲霉病及严重真菌伏立康唑适用于侵袭性曲霉病及严重真菌感染不能耐受其他药物或经其他药物治疗无感染不能耐受其他药物或经其他药物治疗无效者，如足放线病菌属、镰刀菌属等感染。效者，如足放线病菌属、镰刀菌属等感染。临床常用抗真菌药物临床常用抗真菌药物 总目录上页退出下页返回退出抗真菌药物药敏试验原则1.提供两种以上有相当活性的抗真菌药物的可信测提供两种以上有相当活性的
37、抗真菌药物的可信测量方法和体内的活性具有相关性，可预测治疗的量方法和体内的活性具有相关性，可预测治疗的效果。效果。2.可用来监控敏感群体菌株的耐药性发生。可用来监控敏感群体菌株的耐药性发生。3.可预期研究新药的潜在治疗效能。可预期研究新药的潜在治疗效能。总目录上页退出下页返回退出真菌药物敏感试验过程u方法：肉汤稀释法，包括常量稀释法和微量稀释法。方法：肉汤稀释法，包括常量稀释法和微量稀释法。u培养基：含谷氨酰胺和培养基：含谷氨酰胺和pH指示剂，不含碳酸氢钠指示剂，不含碳酸氢钠RPMI 1640培养基。培养基。u程序：药物原液配制程序：药物原液配制 接种菌液制备接种菌液制备 药液药液稀释稀释 常
38、量稀法常量稀法 微量稀释法微量稀释法 结果判断结果判断 质量控制质量控制 总目录上页退出下页返回退出真菌非培养检测技术u动物试验：动物试验：分离病原性真菌、确定真菌菌种的致分离病原性真菌、确定真菌菌种的致病性、研究药物对真菌的作用等。病性、研究药物对真菌的作用等。u核酸检测：核酸检测：操作简便、省时省工、敏感性和特异操作简便、省时省工、敏感性和特异性高的优点，但要一定的实验条件，并大多仍处性高的优点，但要一定的实验条件，并大多仍处于实验研究阶段，故目前不可能完全替代常规鉴于实验研究阶段，故目前不可能完全替代常规鉴定方法定方法。u真菌毒素的检测：真菌毒素的检测：生物学方法、薄层层析法、高生物学方法、薄层层析法、高效液相色谱法和间接竞争效液相色谱法和间接竞争ELISA法等。法等。总目录上页退出下页返回退出
